CN104127486B - 独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用 - Google Patents
独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用,该独一味总环烯醚萜苷提取物是指独一味经回流提取并利用对环烯醚萜苷类成分具有选择性吸附作用的大孔树脂进行分离和富集所获得的提取物,其在按常规方法制备治疗便秘药物的各种剂型中至少包含有该独一味总环烯醚萜苷提取物。本发明所述的独一味总环烯醚萜苷提取物质量可控,制剂方法成熟,并经药效学动物实验和临床实验表明,具有显著的润肠通便能力,可以作为治疗便秘药物的有效活性成分用于制备润肠通便药物。
Description
技术领域
本发明涉及中药领域,尤其涉及独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用。
背景技术
独一味为藏、蒙、纳西等民族常用药材之一,其主要含有黄酮、苯乙醇苷和环烯醚萜苷类化合物。据2010版《中国药典》记载其功能与主治:活血止血、祛风止痛,用于跌打损伤、外伤出血、风湿痹痛、黄水病。近年来随着药物分离水平的不断提高和对独一味的深入研究,已获得相对纯度较高的独一味总环烯醚萜苷、总黄酮、大极性成份等各药用部位,并且已取得制备独一味总环烯醚萜苷工艺的国家发明专利(200410011679.0),其纯度可达50%~95%。
独一味中的环烯醚萜苷类化合物,以异戊二烯为基本单元,基本母核为环烯醚萜醇,具有半缩醛及环戊烷环的结构,是许多植物药材中苦味成分,传统中医理论认为:味苦微寒者具泻下作用。四川大学华西医院循证医学与临床流行病学教研室采用70例合格随机对照试验(RCT),文献对独一味临床疗效及安全性进行了META分析表明:以独一味水提取物为物质基础的独一味相关制剂具有良好的镇痛、止血及抗炎活性,治疗过程中部分患者伴有轻度腹泻、胃部不适等不良反应。同时在前期有关独一味总环烯醚萜苷提取物的研究中,也发现实验动物经长期灌胃给予独一味总环烯醚萜苷提取物后出现粪便颗粒湿润、颗粒相对变大变长,含水量提升等现象。综上所述,独一味总环烯醚萜苷提取物可能具有导泻作用。
而目前独一味的相关研究发现,国内外尚无关于独一味导泻作用的研究和专利报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用。
为解决上述问题,本发明所述的独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用,其特征在于:该独一味总环烯醚萜苷提取物是指独一味经回流提取并利用对环烯醚萜苷类成分具有选择性吸附作用的大孔树脂进行分离和富集所获得的提取物,其在按常规方法制备治疗便秘药物的各种剂型中至少包含有该独一味总环烯醚萜苷提取物。
所述剂型是指口服片剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、分散片、滴丸中的任意一种。
所述独一味总环烯醚萜苷提取物的纯度以8-乙酰氧基山栀子苷甲酯计为20.0~100 %。
本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明所述的独一味总环烯醚萜苷提取物质量可控,制剂方法成熟。
2、本发明经药效学动物实验和临床实验表明,独一味总环烯醚萜苷提取物具有显著的润肠通便能力,可以作为治疗便秘药物的有效活性成分,用于制备润肠通便药物。
⑴独一味总环烯醚萜苷提取物的制备,其制备方法参考国家发明专利(200410011679.0),具体操作如下:
a药材、试剂及仪器:独一味药材(购自玛曲县黄河首曲药源开发有限公司,批号:20030812),旋转蒸发仪(RE-52AA型,上海亚荣生化仪器厂),真空干燥箱(BPZ-6033LC型,上海一恒科学仪器有限公司),聚酰胺(20-40目,浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂,批号:20111228),大孔吸附脂(D-101净品型,天津市海光化工有限公司,批号:070305),95%乙醇(德州家益康消毒制品有限公司,批号:130302),水为蒸馏水。
b制备方法:
称取独一味药材10 kg,加20倍量蒸馏水煎煮3次,合并滤液冷却后,母液注入已预处理好的聚酰胺色谱柱中,蒸馏水洗脱。上述水洗脱液注入已处理好的大孔树脂柱中,并以蒸馏水洗至流出液为无色,改用70%乙醇继续洗脱,流出液每50 ml收集一份,监测至无环烯醚萜苷类成份流出,合并乙醇洗脱物50 ℃旋转蒸发浓缩,浓缩液放置于真空干燥箱内50℃减压干燥,得总环烯醚萜苷提取物(以8-乙酰氧基山栀子苷甲酯为对照品,在252 nm下采用一阶导数法测得总环烯醚萜苷含量为90.6%)。
⑵药效学实验(动物实验参考《中药药理试验方法学》“攻下药物药理学动物实验方法”):
①实验对象:BALB/c雌性小鼠104只,体重20±2 g,由兰州军区兰州总医院动物实验中心提供,合格证号:SYXK(军)2012-0029。
②药材及仪器:复方地芬诺酯片(新乡市常乐制药有限责任公司,批号:1305265),麻仁丸(湖北诺得胜制药有限公司,批号:120906),酚酞片(山东仁和堂药业有限公司,批号:130121),自制独一味总环烯醚萜苷,阿拉伯树胶粉(天津市光复精细化工研究所),活性炭细粉,BP210S电子天平(Sartorius AG,德国),带刻度卷尺,小鼠所用饮水瓶均采用高温煮沸灭菌处理,药物溶液现用现配,实验温度20~25 ℃, 空调恒温,相对湿度:40% ~70%。
③实验方法:
a墨汁配制:准确称量阿拉伯树胶10 g加水80 ml,煮沸至溶液透明,称取活性炭细粉5 g加至上述溶液中并煮沸3次,待溶液常温后加水定容至100 ml,备用(造模前一天配制,并放置于4℃冰箱冷藏备用)。
b独一味总环烯醚萜苷提取物对复方地芬诺酯便秘小鼠排便的影响:
BALB/c雌性小鼠48只,按体重随机分为6组,即空白组、阳性对照组、复方地芬诺酯便秘模型组、独一味总环烯醚萜苷高、中、低剂量组,实验采用灌胃法给予受试药物,灌胃量为0.5 mL /20 g.bw.d。空白对照组、复方地芬诺酯便秘模型组均给予灭菌注射用水灌胃;阳性对照组给予麻仁丸1.0 g/kg.bw; 独一味总环烯醚萜苷高、中、低剂量组分别给予0.3g/kg.bw、0.15 g/kg.bw、0.05 g/kg.bw的独一味总环烯醚萜苷提取物(总环烯醚萜苷含量为90.6%)。以上各组连续给药7 d,禁食20 h,空白对照组给予等容积蒸馏水,其余各组动物分别给予复方地芬诺酯(10 mg /kg) , 复制小鼠便秘模型,给药体积为 0.5 mL /20g.bw。造模30 min后,药物各剂量组与阳性对照组按相应剂量给予含相应药物的炭末混悬液(含炭末0.05 g/mL),空白对照组和模型组给予等容积墨汁(含炭末0.05 g/mL),灌胃体积均为0.5 mL/20 g.bw。各组小鼠给药后单笼饲养,禁食给水,观察并记录每只小鼠首次排黑便时间、6 h内排便粒数及排便时间点,并收集每组小鼠前20粒粪便。
c独一味总环烯醚萜苷提取物对小鼠小肠推进率的影响:
BALB/c雌性小鼠56只,按体重随机分为7组,即空白组、两组阳性对照(麻仁丸、酚酞)组、复方地芬诺酯便秘模型组、独一味总环烯醚萜苷提取物高、中、低剂量组,实验采用灌胃法给予受试物,灌胃量为0.5 mL /20 g.bw.d,结果见图2、表3。空白对照组、复方地芬诺酯便秘模型组, 给予灭菌注射用水灌胃; 阳性对照麻仁丸组给予1.0 g/kg.bw麻仁丸、酚酞组给予0.04 g/kg.bw酚酞片;独一味总环烯醚萜苷提取物高、中、低剂量组分别给予0.3 g/kg.bw、0.15 g/kg.bw、0.05 g/kg.bw的独一味总环烯醚萜苷提取物(总环烯醚萜苷含量为90.6%),以上各组连续给药7 d ,禁食20 h,空白对照组给予等容积蒸馏水,其余各组动物分别灌胃给予复方地芬诺酯(10 mg /kg),给药体积为 0.5 mL /20 g.bw。造模30min后,药物各剂量组与阳性对照组按相应剂量给予含相应药物的炭末混悬液(含炭末0.05 g/mL),空白对照组和模型组给予等容积墨汁(含炭末0.05 g /mL),灌胃体积均为0.5mL/20 g.bw。上述给药30 min后用颈椎脱臼法处死小鼠,剪取上端自幽门下端至回盲部的肠管,不加牵引并平铺成直线测量肠管长度为小肠总长度,从幽门至墨汁前沿为墨汁推进长度。
④实验结果:
a小鼠首次排黑便时间、6 h排便次数以t检验统计处理数据, 结果见表1。
表 1 小鼠首次排黑便时间、6 h排便次数
注:**表示模型与空白组相比 P<0.01;#表示模型与给药组相比P<0.05,# # P<0.01。
从表1可以得出,复方地芬诺酯模型组小鼠首次排黑便时间与空白组间存在显著性差异(P< 0.01),证明本实验采用复方地芬诺酯成功获得便秘小鼠模型;独一味总环烯醚萜苷剂量组及阳性组小鼠首次排黑便时间较模型组明显缩短,与复方地芬诺酯模型组相比均具有显著性差异(P< 0.01),且独一味总环烯醚萜苷剂量组与阳性组间不存在差异性。6h内复方地芬诺酯模型组小鼠排黑便次数较少,与空白组正常小鼠相比具有显著性差异(P<0.01),独一味总环烯醚萜苷给药组小鼠排黑便次数增加,高、低剂量与模型组相比均具有显著性差异(P< 0.01),且高剂量组(0.3 g/kg.bw)排黑便次数优于阳性药物组和空白组。
b收集得到的每组小鼠前20粒粪便置于100 ℃烘箱中干燥至恒重,并计算含水量,结果见表2。
表2 小鼠粪便含水量
为了确保实验结果的正确性,收集6 h内各组小鼠所有粪便则会因放置时间过长造成粪便水分不同程度的损耗,并且随着时间的推移,小鼠最终所排泄粪便难以成形且无法准确收集,因此本发明中小鼠粪便含水量测定时所收集的粪便为每组前20粒,并使用恒重称量瓶收集,配备磨口瓶塞防止水分流失,粪便基本形状完整。实验结果表明,复方地芬诺酯可使小鼠粪便含水量降低,麻仁丸及独一味总环烯醚萜苷提取物可以明显提高实验动物粪便含水量使粪便软化,利于排便,独一味总环烯醚萜苷高剂量(0.3 g/kg.bw)小鼠粪便含水量高于空白组正常小鼠(参见表2)。
为更好地反应各组小鼠排便情况及药物对复方地芬诺酯所致便秘的治疗作用,本发明采用以60 min为一个时间段,将观察并记录小鼠排便情况的6 h分为6个时间段,统计各时间段内每组小鼠的排便频率分布情况并绘制成“小鼠排便频率分布直方图”,结果见图1。
由小鼠排便频率分布直方图(图1)可以得出,空白组小鼠随着时间推移排便次数逐渐减少,并且在实验中观察到空白组小鼠粪便颗粒较大,符合正常排便的情况;模型组由于复方地芬诺酯的作用,240 min之前排便次数仅占总数的42.2%,181~300 min排便次数占总数的82.3%,并且300 min之前随着药效减弱排便次数逐渐增加,结果证实本实验采用的“小鼠排便频率分布直方图”统计方法可以作为润肠通便类药物药效学实验的参考方法。麻仁丸组药物对便秘模型小鼠排便起到了一定的疗效,小鼠排便频率集中趋势较模型组前移,240 min之前排便次数占总数的62.9%;独一味总环烯醚萜苷中剂量组6 h内排便频率分布类似于麻仁丸组;低剂量组小鼠排便次数较多,但排便频率分布较散,与麻仁丸组相比排便时间较为推后,说明低剂量(0.05 g/kg)独一味总环烯醚萜苷导泻作用较弱;高剂量组与阳性组相比,虽然首次黑便时间无差异,但每个时间间隔内小鼠排便次数均有不同程度增多、6 h内小鼠排便整体提前,作用强度大于麻仁丸阳性药物组,并且在240 min之前排便次数占总数的71.8%,结果如图1。结果表明独一味总环烯醚萜苷具有明显加快复方地芬诺酯所致便秘模型小鼠的排便时间和增加小鼠排便粒数的作用,且0.3 g/kg.bw独一味总环烯醚萜苷导泻作用优于麻仁丸(1.0 g/kg.bw);由“小鼠排便频率分布直方图”结果可知,独一味总环烯醚萜苷在0.05~0.3 g/kg.bw之间存在量效关系的趋势。
c按下式计算墨汁推进率:
墨汁推进率(%)=墨汁推进长度(cm)/小肠总长度(cm)×100%
表3 小鼠小肠炭末推进率结果表
注:**表示模型与空白组相比 P<0.01;#表示模型与给药组相比P<0.05,# # P<0.01。
独一味总环烯醚萜苷提取物对小鼠小肠推进率的影响实验结果如图2、表3,模型组小鼠小肠炭末推进率与空白组相比具有显著性差异(P< 0.01),证明本实验采用复方地芬诺酯成功获得便秘小鼠模型;麻仁丸组、酚酞组与复方地芬诺酯模型组相比,有显著性差异( P< 0.01);独一味总环烯醚萜苷提取物低剂量组(0.05 g/kg)与模型组相比无明显差异,结果符合“小鼠排便频率分布直方图”的统计结果;独一味总环烯醚萜苷提取物高、中剂量组与复方地芬诺酯模型组相比有显著性差异,并且独一味总环烯醚萜苷提取物高、中、低剂量组显示出一定的量效关系,独一味总环烯醚萜苷提取物中剂量可增加便秘小鼠小肠推进率,与复方地芬诺酯模型组相比有显著性差异(P< 0.05),独一味总环烯醚萜苷提取物高剂量组与模型组相比具有显著性差异(P< 0.01),并且推进率近似于阳性药物组。
⑤结论:
药物对复方地芬诺酯便秘小鼠排便的影响单纯考察一定时间段内小鼠排便次数、首次排便时间存在局限性,不能完全、可靠地反应治疗便秘药物的药效,本发明采用“小鼠排便频率分布直方图”的统计方法可直观反映小鼠排便分布、趋势等,独一味总环烯醚萜苷提取物具有改善因复方地芬诺酯所致便秘模型小鼠排便困难的功效,可作为纯天然治疗便秘药物的研究和开发。
⑶临床实验:
①药材及仪器:独一味药材(购自玛曲县黄河首曲药源开发有限公司,批号:20030812),聚酰胺(20~40目,浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂,批号:20111228),大孔吸附脂(D-101净品型,天津市海光化工有限公司,批号:070305),95%乙醇(德州家益康,批号:130302),蒸馏水。耐压玻璃柱(50*5.5,62*6),旋转蒸发仪(RE-52AA型,上海亚荣生化仪器厂。配SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵),冷冻干燥机(FD-27S,北京德天佑科技发展有限公司)。DXD铝塑复合袋包装机(广州市鑫友精密包装设备有限公司);JF-B胶囊分装机(浙江省龙泉市长城制药设备);MG12A真空灭菌干燥箱(江苏常熟中药制药机械总厂);30B-V粉碎机(常熟制药化工机械总厂);CH-150混合搅拌机(浙江温州云山制药设备厂)。
②独一味总环烯醚萜苷提取物同⑴。
③采用实施例1制备的独一味总环烯醚萜苷胶囊,对临床便秘病人进行临床试验。
a实验目的:观察独一味总环烯醚萜苷胶囊的确切疗效和毒副反应。
b实验对象及方法:从临床中筛选出60名便秘患者,随机分为3组,每组20人 (10名男性,10名女性),分别设为安慰剂组、麻仁丸组和环烯醚萜苷胶囊组。口服给药一周,每天3次,每次1粒。观察患者一周内大便次数,腹胀症状及排便困难情况,同时注意收集患者呕心呕吐、腹泻等不良反应。
c实验结果:
口服麻仁丸或环烯醚萜苷胶囊一周,每天3次,每次1粒后能显著增加患者排便次数。服用麻仁丸后一周内平均排便3.2±0.26次,服用环烯醚萜苷胶囊后一周内平均排便4.5±0.52次,与安慰剂组1.25±0.32次比具有显著改善。同时减轻腹胀症状,改善排便困难情况。
在整个临床实验过程中未出现患者呕心呕吐、腹泻等不良反应。
d实验结论:
通过临床实验证明,本发明制备的独一味环烯醚萜苷胶囊具有很好的润肠通便能力,对临床便秘患者具有良好促排便,减轻腹胀作用,同时未见明显的不良反应。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
图1为本发明小鼠排便频率分布直方图。
图2为本发明小鼠小肠炭末推进率结果图。其中**表示模型组与空白组相比P<0.01;#表示药物组与模型组相比P<0.05,# # P<0.01。
具体实施方式
独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用,该独一味总环烯醚萜苷提取物是指独一味经回流提取并利用对环烯醚萜苷类成分具有选择性吸附作用的大孔树脂进行分离和富集所获得的提取物,其在按常规方法制备治疗便秘药物的各种剂型中至少包含有该独一味总环烯醚萜苷提取物。
其中:
剂型是指口服片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊、分散片、滴丸中的任意一种。
独一味总环烯醚萜苷提取物的纯度以8-乙酰氧基山栀子苷甲酯计为20.0~100 %。
实施例1 独一味总环烯醚萜苷胶囊的制备:
取独一味总环烯醚萜苷提取物细粉250 g,加入微粉硅胶0.75 g,即加入微粉硅胶0.3%,搅拌混匀,在JF-B胶囊分装机上自动分装,0.3 g每粒,得830粒胶囊,进一步采用DXD铝塑复合袋包装机每12粒一板,每两板密封包装成1袋,共得34盒。
实施例2 独一味总环烯醚萜苷颗粒剂的制备:
取独一味总环烯醚萜苷提取物细粉250 g,加入淀粉25 g混合均匀,用淀粉浆8~10%作粘合剂,制成软材,过12~14目筛,60~70℃减压干燥,过筛整粒,5 g每袋密封包装,得52袋。
上述实施例是对本发明的进一步详细说明,但不意味着对本发明的任何限制。在不脱离本发明上述思想的情况下,根据本领域普通技术知识和常规手段做出的各种替换方式或变更,均包含在本发明之内。
Claims (3)
1.独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用,其特征在于:该独一味总环烯醚萜苷提取物是指独一味经回流提取并利用对环烯醚萜苷类成分具有选择性吸附作用的大孔树脂进行分离和富集所获得的提取物,其在按常规方法制备治疗便秘药物的各种剂型中至少包含有该独一味总环烯醚萜苷提取物;其中独一味总环烯醚萜苷提取物的获得方法是指独一味药材加20倍量蒸馏水煎煮3次,合并滤液冷却后,母液注入已预处理好的聚酰胺色谱柱中,蒸馏水洗脱;上述水洗脱液注入已处理好的D-101净品型大孔树脂柱中,并以蒸馏水洗至流出液为无色,改用70%乙醇继续洗脱,流出液每50 ml收集一份,监测至无环烯醚萜苷类成份流出,合并乙醇洗脱物50 ℃旋转蒸发浓缩,浓缩液放置于真空干燥箱内50℃减压干燥即得。
2.如权利要求1所述的独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用,其特征在于:所述剂型是指口服片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸中的任意一种。
3.如权利要求1所述的独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用,其特征在于:所述独一味总环烯醚萜苷提取物的纯度以8-乙酰氧基山栀子苷甲酯计为20.0~100 %。
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