CN102138947B

CN102138947B - 一种蜂胶中药组合物

Info

Publication number: CN102138947B
Application number: CN2011100751929A
Authority: CN
Inventors: 戴关海; 童晔玲; 杨锋; 竹剑平; 邱汝民
Original assignee: Zhejiang Traditional Chinese Medicine Research Institute
Current assignee: Zhejiang Traditional Chinese Medicine Research Institute; Zhejiang Academy of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2011-03-28
Filing date: 2011-03-28
Publication date: 2012-07-04
Anticipated expiration: 2031-03-28
Also published as: CN102138947A

Abstract

本发明公开了一种蜂胶中药组合物，由蜂胶、西洋参提取物和三七提取物组成；其中，蜂胶、西洋参提取物和三七提取物的质量比为5∶1-5∶1-5。本发明还公开了一种蜂胶中药组合物软胶囊，由蜂胶、西洋参提取物、三七提取物和大豆油组成；其中，蜂胶、西洋参提取物、三七提取物和大豆油的质量比为5∶1-5∶1-5∶10-20。该中药组合物利用蜂胶、西洋参提取物和三七提取物三者的协同作用，能有效降低血脂并提高人体免疫功能。

Description

一种蜂胶中药组合物

技术领域

本发明涉及药物组合物领域，具体涉及一种蜂胶中药组合物。

背景技术

高脂血症系指血浆中脂质浓度超过正常范围。由于血浆中脂质大部分与血浆中蛋白质结合，因此本病又称为高脂蛋白血症，俗称高血脂。血脂包括类脂质及脂肪，类脂质主要是磷脂、糖脂、固醇及类固醇；脂肪主要是甘油三酯。高血脂是引起人类动脉粥样性疾病的主要危险因素。近年来，随着人们生活水平的日渐提高，饮食结构及生活方式的变化，人群的血脂水平总体上在逐年升高。血脂过高，容易引起冠心病、脑中风、高血压、糖尿病、肝硬化等多种疾病。因此，减低血脂浓度对于人体的健康是非常重要的。

目前，临床上应用较多的降脂药物主要包括以下种类：(1)他汀类：洛伐他汀、辛伐他汀等；(2)酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶抑制剂：阿伐麦步；(3)贝特类：非诺贝特、吉非贝齐；(4)烟酸及其衍生物：烟酸、阿西莫司；(5)阻止胆固醇吸收的药物：多为阴离子交换树脂。这些药物多存在价格较高、毒副反应明显以及停药后容易反弹的缺点。

蜂胶为蜜蜂科昆虫意大利蜂Apis mellifera L.的干燥分泌物，临床上具有较好的降血脂及提高人体免疫功能的作用，现广泛被用于制备各种保健品和中药制剂。如中国专利ZL200610096429.0中公开了一种含蜂胶的药物组合物，主要由下列重量份的原料组成：蜂胶5～60，当归5～60，川芎5～60；以及这种药物组合物的一种制备方法，步骤包括：先取当归5～60重量份，川芎5～60重量份，提取挥发油，挥发油备用；再取提取挥发油后的药渣，加水提取，提取液离心、浓缩，得浓缩液；干燥得干燥物，备用；取蜂胶、挥发油和干燥物经后处理，得组合物的成品制剂。该药物组合物具有祛邪、化瘀，而且又可以调整体内正气的作用，从而达到提高机体免疫力的作用。

发明内容

本发明提供了一种蜂胶中药组合物，利用蜂胶、西洋参提取物和三七提取物的协同增效作用，能有效降低血脂并提高人体免疫功能。

一种蜂胶中药组合物，由蜂胶、西洋参提取物和三七提取物组成；其中，蜂胶、西洋参提取物和三七提取物的质量比为5∶1-5∶1-5，优选为5∶1∶1。

所述的蜂胶中药组合物配以药学上可接受的药用辅料后可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂等中的任何一种剂型。

所述的蜂胶中药组合物可用于制备降血脂和/或增加免疫力的保健品或药物。

所述的蜂胶中药组合物的制备方法，包括步骤：

将蜂胶粉碎，得到蜂胶粉末；将蜂胶粉末、西洋参提取物和三七提取物混合均匀，得到蜂胶中药组合物。

一种蜂胶中药组合物软胶囊，由蜂胶、西洋参提取物、三七提取物和大豆油组成；其中，蜂胶、西洋参提取物、三七提取物和大豆油的质量比为5∶1-5∶1-5∶10-20，优选为5∶1∶1∶13。

所述的大豆油中还可添加适量的起酥油和维生素E。

所述的起酥油在蜂胶中药组合物软胶囊中作为助悬剂，有助于中药与大豆油的混悬；起酥油添加的量一般为大豆油质量的3％-12％。

所述的维生素E有抗氧化作用，有利于提高蜂胶中药组合物软胶囊制剂的质量稳定性；维生素E添加的量一般为大豆油质量的0.1％-0.5％。

所述的蜂胶中药组合物软胶囊的制备方法，具体可包括以下步骤：

(1)将蜂胶粉碎，得到粒径小于80目的蜂胶粉末；

(2)将酥油和维生素E加入大豆油中加热至熔融，再加入步骤(1)中的蜂胶粉末、西洋参提取物和三七提取物，混合均匀，所得混合液经研磨后过80目筛，再采用现有技术进行压丸，洗丸，干燥，即制成蜂胶中药组合物软胶囊。

步骤(2)中，所述的加热温度一般为30℃-40℃。

所述的蜂胶中药组合物软胶囊可作为用于降血脂和/或增加免疫力的药物或保健品。

所述的西洋参提取物可采用市售产品，也可自行制备，其制备方法可参照《中草药成分化学》中记载的方法进行，具体包括步骤：将西洋参粉碎、乙醇回流提取、冷藏、过滤、滤液浓缩、真空干燥，即得西洋参提取物。本发明所述的西洋参提取物中总皂苷的质量百分含量优选为30％～50％；如果西洋参提取物中总皂苷的含量偏低可适当增加西洋参提取物的用量，如果西洋参提取物中总皂苷的含量偏高可适当减少西洋参提取物的用量。

所述的三七提取物可采用市售产品，也可自行制备，其制备方法可参照《中草药成分化学》中记载的方法进行，具体包括步骤：将三七粉碎、乙醇回流提取、冷藏、过滤、滤液浓缩、真空干燥，即得三七提取物。本发明所述的三七提取物中总皂苷的质量百分含量优选为10％～30％；如果三七提取物中总皂苷的含量偏低可适当增加三七提取物的用量，如果三七提取物中总皂苷的含量偏高可适当减少三七提取物的用量。

所述的蜂胶、西洋参和三七药材均符合《中华人民共和国药典》中蜂胶、西洋参和三七的质量标准。蜂胶为蜜蜂科昆虫意大利蜂Apis melliferaL.的干燥分泌物。西洋参为五加科植物西洋参Panax quinquefolium L.的干燥根，具有滋补强壮、养血养阴、健脾益气亡功效，并具有抗应激，抗休克和改善心血管系统作用。三七为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根茎，具有散瘀止血，消肿定痛，补血活血的作用。

本发明具有如下有益效果：

现有的降血脂、增强免疫力药物相比，本发明的中药组合物大大提高了增强免疫、降血脂、改善血液循环、抗动脉粥样硬化的作用、抗疲痨的作用等，对中老年人具有很好的保健作用和治疗作用，目前国内外尚无该组方的产品，本发明填补了这一空白。与相同剂量的单味蜂胶、单味西洋参提取物及单味三七提取物相比，本发明的中药组合物利用蜂胶、西洋参提取物和三七提取物三者的协同增效作用，也具有更好的增强免疫力功能的作用以及降血脂功能。

本发明的中药组合物成本较低，且制备工艺简单，适于工业化生产。

具体实施方式

所用原料：西洋参提取物购于吉林省宏久生物科技股份有限公司，总皂苷质量百分含量为30％，粒度≥30％，干燥失重≤5.0％。

三七提取物购于吉林省宏久生物科技股份有限公司，总皂苷质量百分含量为20％，粒度≥30％，干燥失重≤5.0％。

实施例1

将蜂胶粉碎，得到粒径小于80目的蜂胶粉末。

将50g西洋参提取物、50g三七提取物和250g蜂胶粉末混合均匀，制得蜂胶中药组合物，为褐色油膏状物。

实施例2

将蜂胶粉碎，得到粒径小于80目的蜂胶粉末；

将100g西洋参提取物、100g三七提取物和250g蜂胶粉末混合均匀，制得蜂胶中药组合物，为褐色油膏状物。

实施例3

将蜂胶粉碎，得到粒径小于80目的蜂胶粉末；

将150g西洋参提取物、150g三七提取物和250g蜂胶粉末混合均匀，制得蜂胶中药组合物，为褐色油膏状物。

实施例4

将蜂胶粉碎，得到粒径小于80目的蜂胶粉末；

将200g西洋参提取物、200g三七提取物和250g蜂胶粉末混合均匀，制得蜂胶中药组合物，为褐色油膏状物。

实施例5

将蜂胶粉碎，得到粒径小于80目的蜂胶粉末；

将250g西洋参提取物、250g三七提取物和250g蜂胶粉末混合均匀，制得蜂胶中药组合物，为褐色油膏状物。

实施例6

(1)将蜂胶粉碎，得到粒径小于80目的蜂胶粉末；

(2)将19.5g起酥油和3.25g维生素E加入650g大豆油中于30℃加热至熔融，再加入250g步骤(1)中的蜂胶粉末、50g西洋参提取物和50g三七提取物，混合均匀，所得混合液经研磨后过80目筛，再以明胶和甘油的软胶片为囊材进行压丸，洗丸，干燥，制成蜂胶中药组合物软胶囊。

实施例7

(1)将蜂胶粉碎，得到粒径小于80目的蜂胶粉末；

(2)将120g起酥油和1g维生素E加入1000g大豆油中于40℃加热至熔融，再加入250g步骤(1)中的蜂胶粉末、100g西洋参提取物和100g三七提取物，混合均匀，所得混合液经研磨后过80目筛，再以明胶和甘油的软胶片为囊材进行压丸，洗丸，干燥，制成蜂胶中药组合物软胶囊。

实施例8

(1)将蜂胶粉碎，得到粒径小于80目的蜂胶粉末；

(2)将40g起酥油和1.5g维生素E加入500g大豆油中于35℃加热至熔融，再加入250g步骤(1)中的蜂胶粉末、250g西洋参提取物和250g三七提取物，混合均匀，所得混合液经研磨后过80目筛，再以明胶和甘油的软胶片为囊材进行压丸，洗丸，干燥，制成蜂胶中药组合物软胶囊。

动物实验显示实施例1-5制备的蜂胶中药组合物有明显的免疫增加功能和降血脂功能。下面以实施例1制备的蜂胶中药组合物为例，进行详细的说明。

蜂胶中药组合物与单味药对小鼠免疫功能影响比较

蜂胶中药组合物主要由蜂胶、西洋参提取物及三七提取物等组成，通过蜂胶中药组合物与单味蜂胶、西洋参提取物及三七提取物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验比较，观察蜂胶中药组合物作用效果，现将试验结果报告如下：

1、材料

1.1实施例1制备的蜂胶中药组合物，为褐色油膏状物，本实验以大豆油为溶媒将实施例1制备的蜂胶中药组合物配制成各剂量供试。

1.2实验动物和检测条件：实验动物使用许可证号为：SYXK(浙)2005-0059。实验用ICR小鼠由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，实验动物生产许可证为：SCXK(沪)2007-2005，清洁级，雌性，体重20±2g。饲料由浙江省实验动物中心提供，执行标准GB14924-2001。检测环境条件，温度范围20℃-24℃，相对湿度范围40％-70％。动物于试验前在动物房环境中适应3天。

1.3剂量设计：实施例1制备的蜂胶中药组合物人推荐量为2.0g/日/60kg体重，本次实验设蜂胶中药组合物高剂量组1.0g/kg(相当于人推荐量30倍)，蜂胶组0.71g/kg、西洋参提取物组0.14g/kg及三七提取物组0.14g/kg，单味蜂胶、西洋参提取物及三七提取物剂量与蜂胶中药组合物高剂量组中相应药物剂量相同，实验另设阴性对照组：使用蒸馏水、溶剂对照组：使用大豆油。

1.4主要仪器：二氧化碳培养箱、离心机、可调移液器、电热不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器、医用净化台、显微镜、液体闪烁计数仪、细胞收集仪、干燥箱及酶标分析仪等。

2、实验方法：

2.1ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验：各组灌胃给受试物，每天一次，连续30天。在试验第30天，每鼠无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用镊子轻轻撕碎，制成单细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤，计数，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为3×10⁶个/ml。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75ulConA液(相当于7.5ul/ml)，另一孔作为对照，置换37℃、5％(体积百分比)CO₂培养箱中培养72小时。培养结束前4小时，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入噻唑蓝(MTT)，培养4小时后加入DMSO，使紫色结晶完全溶解。在570nm波长处测定光密度值(OD)。最后用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力。

2.2数据处理：采用SPSS11.5统计软件分析。

3、实验结果

蜂胶中药组合物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增值能力的影响：结果见表1。原始数据符合方差齐性要求(P＞0.05)，分别与阴性对照组(蒸馏水)和溶剂对照组(大豆油)比较，蜂胶中药组合物能明显提高ConA诱导小鼠脾淋巴细胞的增值能力，差异均有显著性(P＜0.05)。

表1.蜂胶中药组合物与单味药对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响

注：与阴性对照组(蒸馏水)比较，△P＜0.05与溶剂对照组(大豆油)比较#P＜0.05

4、小结：

实验结果表明：蜂胶中药组合物与阴性对照组(蒸馏水)、溶剂对照组(大豆油)比较，能提高ConA诱导小鼠脾淋巴细胞增殖功能，差异均有显著性(P＜0.05)；而相同剂量的单味蜂胶、单味西洋参提取物及单味三七提取物虽然对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞增殖功能有一定的提高作用，但差异无显著性(P＞0.05)。说明本发明蜂胶中药组合物与相同剂量的单味蜂胶、单味西洋参提取物及单味三七提取物相比，本发明蜂胶中药组合物具有较好增强免疫力功能的作用。

蜂胶中药组合物主要药效学研究

蜂胶中药组合物主要由蜂胶、西洋参提取物及三七提取物等组成，通过对动物降血脂及免疫功能实验研究，观察蜂胶中药组合物的药效作用。

现将其主要药效学试验结果报告如下。

一、蜂胶中药组合物辅助降血脂功能实验

1、材料

1.1样品性状：供试样品为实施例1制备的褐色油膏状物，即实施例1制备的蜂胶中药组合物，本实验以大豆油为溶媒将实施例1制备的蜂胶中药组合物配制成各剂量供试。

1.2实验动物和检测条件：实验用SD大鼠由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，生产许可证为：SCXK(沪)2007-2005，清洁级，体重160g-180g。实验动物饲料由浙江省实验动物中心提供，执行标准GB14924-2001。检测环境条件，实验动物房许可证号为SCXK(沪)2009-0059，温度范围20-24℃，相对湿度范围40％-70％。

1.3剂量及仪器：试剂：胆固醇测定试剂盒、酶法甘油三酯测定试剂盒、HDL测定试剂盒由上海复星长征医学科学有限公司生产。仪器：东芝全自动升化分析仪，型号：TBA-40FR。

1.4高脂饲料：78.8％市售基础饲料、1％胆固醇、10％蛋白粉、10％猪油和0.2％胆盐。

2、方法

2.1剂量设计：实施例1制备的蜂胶中药组合物人推荐量为2g/日/60kg体重。本次实验设低、中、高三个剂量组：0.17g/Kg、0.33g/Kg、1.00g/Kg，分别相当于人实际摄入量的5、10、30倍。另设高脂水对照组：使用水，以及高脂油对照组：使用大豆油。

2.2受试动物处理：分别称取受试物3.33g、6.67g、20.00g，加大豆油至200ml，配成1.70g/100ml、3.33g/100ml、10.00g/100ml三个浓度，分别为低、中、高三个剂量组供试液。

2.3给受试动物方式：灌胃，灌胃容积为1ml/100g体重。

2.4实验方法：采用预防性给受试样品。在实验环境下大鼠喂饲基础饲料观察8d，眼眶静脉丛采血，测定血清总胆固醇(TC)、血清甘油三脂(TG)、血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。根据血清总胆固醇(TC)水平，随机分为5组，每组10只，分别为高脂水对照组、高脂油对照组和受试物的三个剂量组。各实验组均给予高脂饲料，受试物各剂量组经口灌胃给受试液，高脂水对照组和高脂油对照组经口灌胃给同体积的水和大豆油，并定期称量体重，于30d时禁食16h，眼眶静脉丛采血，测定血清TC、TG、HDL-C水平。

2.5观察指标：TC，TG，HDL-C。

2.6数据处理：采用方差分析。但前提是需经方差齐或进行适当的数据转换后方差齐。若经数据转换后仍未达到正态或方差齐要求，则改用秩和检验进行统计。实验结果用SPSS11.5统计软件统计。

3、结果

3.1受试物对高脂血症大鼠体重的影响：结果见表2，原始数据符合方差齐性要求(P＞0.05)。给受试物前与受试物过程中，低、中、高三个剂量组大鼠体重与高脂水对照组和高脂油对照组比较，差异均无统计学意义(方差分析，P＞0.05)。

表2.蜂胶中药组合物对高脂血症大鼠体重的影响

3.2受试物对血清TC的影响：给受试物30d后，测定血清TC值，结果见表3，原始数据符合方差齐性要求(P＞0.05)。喂饲高脂饲料30d后，高脂油对照组大鼠血清TC值与高脂水对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。高、中剂量组血清TC值与高脂水对照组和高脂油对照组比较均有明显降低，差异均有统计学意义(方差分析，P＜0.05)。结果表明受试物对血清总胆固醇的指标为阳性结果。

表3.蜂胶中药组合物对高脂血症大鼠血清TC含量的影响

q检验：与高脂水对照组比较#P＜0.05；与高脂油对照组比较△P＜0.05；

3.3受试物对血清TG的影响：给受试物30d后，测定血清TG值，结果见表4，原始数据符合方差齐性要求(P＞0.05)。喂高脂饲料30d后，高脂油对照组大鼠血清TG与高脂水对照组大鼠比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。三个剂量组大鼠血清TG值与高脂水对照组和高脂油对照组比较均有明显降低，差异均有统计学意义(方差分析，P＜0.05)。结果表明受试物为蜂胶中药组合物时对血清甘油三脂指标的影响力为阳性结果。

表4.蜂胶中药组合物对高脂血症大鼠血清TG的影响

3.4受试物对血清HDL-C的影响：给受试物30d后，测定血清HDL-C值，结果见表5，原始数据符合方差齐性要求(P＞0.05)。喂饲高脂饲料30d后，高脂油对照组大鼠血清HDL-C与高脂水对照组和大鼠比较差异无统计学意义(P＞0.05)。低、中、高剂量组高脂血症大鼠血清HDL-C值与高脂水对照组和高脂油对照组比较差异无统计学意义(方差分析，P＞0.05)。

表5.蜂胶中药组合物对高脂血症大鼠血清HDL-C含量的影响

4结论

与高脂水对照组、高脂油组对照组比较，本发明蜂胶中药组合物中、高剂量组均能明显降低高脂血症大鼠血清总胆固醇(TC)含量，本发明蜂胶中药组合物低、中、高三个剂量组均能明显降低高血脂症大鼠血清甘油三脂(TG)含量，差异有统计学意义。本发明蜂胶中药组合物各剂量组大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量和高脂水对照组、高脂油组对照组大鼠相比，差异均无统计学意义。

可见，在本实验条件下，本发明蜂胶中药组合物具有辅助降血脂功能。

二、蜂胶中药组合物增强免疫力功能实验

1、材料

1.1样品处理：供试样品为实施例1制备的蜂胶中药组合物，褐色油膏状。试验前将供试样品以大豆油为溶媒配制成各剂量，混匀供试。

1.3剂量设计：实验设蜂胶中药组合物三个剂量组和阴性对照组(使用蒸馏水)、溶剂对照组(使用大豆油)。蜂胶中药组合物低、中、高三个剂量组分别为0.17g/Kg体重、0.33g/Kg体重、1.00g/Kg体重，相当于人推荐量的5、10和30倍(人推荐量为2.0g/60Kg/日)。三个剂量组分别称取供试样品1.0g、2.0g和6.0g加大豆油至60ml，配制成浓度为0.017g/ml、0.033g/ml和0.100g/ml样品，灌胃给样品，灌胃容量按0.1ml/10g体重计。

2、实验方法：

2.1ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验：各组灌胃给样品或水或大豆油，每天一次，连续30天。在试验第30天，每鼠无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用镊子轻轻撕碎，制成单细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤，计数，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为3×10⁶个/ml。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75ulConA液(相当于7.5ul/ml)，另一孔作为对照，置换37℃、5％(体积百分比)CO₂培养箱中培养72小时。培养结束前4小时，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入噻唑蓝(MTT)，继续培养4小时，加入DMSO，使紫色结晶完全溶解。在570nm波长处测定光密度值(OD)。最后用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力。

2.2绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠DTH(足趾增厚法)：各组灌胃给样品或水或大豆油，每天一次，连续30天。在试验第25天，每只鼠腹腔注射0.2ml 2％(v/v)压积绵羊红细胞(SRBC)悬液，进行免疫。免疫后4天测量足趾部厚度，然后在测量部位皮下注射20％(v/v)SRBC，每只鼠20ul(约1×10⁸个SRBC)注射后于24小时测量左后足趾部厚度，同一部位测量三次，取平均值。

2.3小鼠血清溶血素测定(血凝法)：各组灌胃给样品或水或大豆油，每天一次，连续30天。在试验第25天，每只鼠腹腔注射0.2ml 2％(v/v)压积绵羊红细胞(SRBC)悬液，进行免疫。5天后，取血离心，收集血清，用生理盐水将血清倍比稀释，37℃温箱孵育3小时，观察血球凝集程度，计算抗体积数。

2.4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)：各组灌胃给样品或水或大豆油，每天一次，连续30天。在试验第25天，每只鼠腹腔注射0.2ml 2％(v/v)压积绵羊红细胞(SRBC)悬液，进行免疫。5天后，每鼠无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用镊子轻轻撕碎，制成单细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤，计数，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为5×10⁶个/ml。将表层培养基(1g琼脂糖加双蒸水至100ml)加热溶解后，放45℃水浴保温，与等量pH7.2～7.4、2倍浓度的Hanks液混合，分装小试管，每管0.5ml再向管内加50ul10％SRBC(v/v，用SA液配制)，20ul脾细胞悬液(5×10⁶个/ml)，迅速混匀，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1～1.5小时，然后用生理盐水稀释的补体(1∶8)加入到玻片架凹槽内，继续温育1～1.5小时后，计数溶血空斑数。

2.5小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法)：各组灌胃给样品或水或大豆油，每天一次，连续30天。动物处死前30分钟，每鼠腹腔注射0.2ml 2％(v/v)压积绵羊红细胞(SRBC)悬液1ml，处死后再注入2ml生理盐水，取腹腔液滴片，38℃温箱孵育30分钟，固定，染色，镜检，计数100个巨噬细胞，计算噬率和吞噬指数。

2.6小鼠碳廓清试验：各组灌胃给样品或水或大豆油，每天一次，连续30天。动物处死前30分钟，每鼠尾静脉注入用生理盐水稀释3-4倍的印度墨汁，按每10g体重0.1ml计算，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10分钟分别从内眦静脉从取血20ul，并将其加入到2ml 0.1％Na₂CO₃溶液中，用721分光光度计在600nm波长处测光密度值(OD)，以Na₂CO₃溶液为空白对照。第二次采血结束后，立即处死小鼠，取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，称重。计算吞噬指数。

2.7NK细胞活性测定(LDH测定法)：各组灌胃给样品或水或大豆油，每天一次，连续30天。在试验第30天，每鼠无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用镊子轻轻撕碎，制成单细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤，计数，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×10⁷个/ml。试验前24小时将YAC-1细胞(靶细胞)传代培养，应用前用Hanks液洗3次，用RPMT1640完全培养液调整细胞浓度为4×10⁵个/ml。取靶细胞和脾细胞悬液(效应细胞)各100μl(效靶比50∶1)，加入U型96孔培养板中，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5％Triton(聚乙二醇)各100μl；上述各项均设三个复孔，于37℃、5％CO₂(体积百分比)培养箱中培养4小时，离心，每孔吸取上清100μl置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μl，反应7分钟，每孔加入1mol/L的HCl 30μl，在490nm波长处测光密度(OD)值，计算NK细胞活性。

2.8脏器/体重比值：各组灌胃给样品或水或大豆油，每天一次，连续30天。处死动物，取其胸腺及脾脏，称重，计算胸腺/体重和脾脏/体重比值。

2.9数据处理：采用SPSS11.5统计软件分析。

3、实验结果

3.1蜂胶中药组合物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增值能力的影响：结果见表6。原始数据符合方差齐性要求(P＞0.05)，分别与阴性对照组(蒸馏水)和溶剂对照组(大豆油)比较，中、高剂量均能提高ConA诱导小鼠脾淋巴细胞的增值能力，差异均有显著性(q检验P＜0.05)。

表6.蜂胶中药组合物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响

q检验：与阴性对照(蒸馏水)比较，△P＜0.05与溶剂对照(大豆油)比较#P＜0.05；

3.2蜂胶中药组合物对绵羊红细胞诱导小鼠DTH的影响：结果见表7。原始数据符合方差齐性要求(P＞0.05)，分别与阴性对照组(蒸馏水)比较，高剂量组能提高小鼠左后足趾部24小时与此同0小时厚度测量值差值，差异有显著性(q检验，P＜0.05)。

表7.蜂胶中药组合物对绵羊红细胞诱导小鼠DTH的影响

3.3蜂胶中药组合物对小鼠血清溶血素的影响：结果见表8。原始数据符合方差齐性要求(P＞0.05)，分别与阴性对照组(蒸馏水)和溶剂对照组(大豆油)比较，中剂量组能提高小鼠血清溶血素抗体积数值，差异均有显著性(q检验，P＜0.05)。

表8.蜂胶中药组合物对小鼠血清溶血素的影响

q检验：与阴性对照(蒸馏水)比较，△P＜0.05与溶剂对照(大豆油)比较#P＜0.05

3.4蜂胶中药组合物对小鼠抗体生成细胞的影响：结果见表9。原始数据符合方差齐性要求(P＞0.05)，与阴性对照组(蒸馏水)比较，三剂量组均能提高小鼠溶血空斑数，差异均有显著性(q检验，P＜0.05)；与溶剂对照组(大豆油)比较，中剂量组能提高小鼠溶血空斑数，差异有显著性(q检验，P＜0.05)。

表9.蜂胶中药组合物对小鼠抗体生成细胞的影响

q检验：与阴性对照(蒸馏水)比较，△P＜0.05，与溶剂对照(大豆油)比较#P＜0.05；

3.5蜂胶中药组合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响：结果见表10。吞噬百分率通过X＝Sin^-1P^1/2进行数据转换，转换后的数据符合方差齐性要求(P＞0.05)，吞噬指数的原始数据符合方差齐性要求(P＞0.05)，与阴性对照组(蒸馏水)比较，三剂量组均能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数，差异均有显著性(q检验，P＜0.05)。

表10.蜂胶中药组合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响

q检验：与阴性对照(蒸馏水)比较，△P＜0.05

3.6蜂胶中药组合物对小鼠碳廓清试验吞噬指数的影响：结果见表11。原始数据符合方差齐性要求(P＞0.05)，三剂量组小鼠吞噬碳末的吞噬指数和阴性对照组(蒸馏水)和溶剂对照组(大豆油)比较，差异无显著性(方差分析，P＞0.05)。

表11.蜂胶中药组合物对小鼠碳廓清试验吞噬指数的影响

3.7蜂胶中药组合物对小鼠NK细胞活性的影响：结果见表12。NK细胞活性通过X＝Sin^-1P^1/2进行数据转换，转换后的数据符合方差齐性要求(P＞0.05)，三剂量组小鼠NK细胞活性和阴性对照组(蒸馏水)、溶剂对照组(大豆油)比较，差异无显著性(方差分析，P＞0.05)。

表12.蜂胶中药组合物对小鼠NK细胞活性的影响

3.8蜂胶中药组合物对小鼠脏器/体重比值的影响：结果见表13。原始数据符合方差齐性要求(P＞0.05)，三剂量组小鼠胸腺/体重和比值和阴性对照组(蒸馏水)、溶剂对照组(大豆油)比较，差异均无显著性(方差分析，P＞0.05)。

表13.蜂胶中药组合物对小鼠脏器/体重比值的影响

3.9蜂胶中药组合物对小鼠体重的影响：结果见表14-17。原始数据符合方差齐性要求(P＞0.05)，三剂量组小鼠体重在试验初期、中期及终期和阴性对照组(蒸馏水)、溶剂对照组(大豆油)比较，差异均无显著性(方差分析，P＞0.05)

表14.蜂胶中药组合物对小鼠体重的影响(淋巴细胞转化试验)

表15.蜂胶中药组合物对小鼠体重的影响(溶血素测定)

表16.蜂胶中药组合物对小鼠体重的影响(巨噬细胞吞噬试验)

表17.蜂胶中药组合物对小鼠体重的影响(碳廓清试验)

4、小结：

实验结果表明：分别与阴性对照组(蒸馏水)、溶剂对照组(大豆油)比较，受试样品蜂胶中药组合物中、高剂量组均能提高ConA诱导小鼠脾淋巴细胞增殖功能，差异均有显著性；中剂量组能提高小鼠溶血空斑数和小鼠血清溶血素抗体积数值，差异均有显著性。与阴性对照组(蒸馏水)比较，高剂量组能提高小鼠左右后足趾部24小时与0小时厚度测量值差值，差异有显著性；三剂量组均能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数，差异均有显著性；三剂量组均能提高小鼠溶血空斑数，差异均有显著性。

结论：本发明蜂胶中药组合物具有增强免疫力功能。

Claims

1.一种蜂胶中药组合物，其特征在于，由蜂胶、西洋参提取物和三七提取物组成；其中，蜂胶、西洋参提取物和三七提取物的质量比为5∶1-5∶1-5。

2.根据权利要求1所述的蜂胶中药组合物，其特征在于，所述的蜂胶、西洋参提取物和三七提取物的质量比为5∶1∶1。

3.根据权利要求1所述的蜂胶中药组合物，其特征在于，所述的西洋参提取物中总皂苷的质量百分含量为30％～50％；

所述的三七提取物中总皂苷的质量百分含量为10％～30％。

4.根据权利要求1、2或3所述的蜂胶中药组合物在制备用于降血脂和/或增加免疫力的保健品或药物中的应用。

5.一种蜂胶中药组合物软胶囊，其特征在于，活性成分由蜂胶、西洋参提取物、三七提取物和大豆油组成；其中，蜂胶、西洋参提取物、三七提取物和大豆油的质量比为5∶1-5∶1-5∶10-20。

6.根据权利要求5所述的蜂胶中药组合物软胶囊，其特征在于，所述的蜂胶、西洋参提取物、三七提取物和大豆油的质量比为5∶1∶1∶13。

7.根据权利要求5所述的蜂胶中药组合物软胶囊，其特征在于，所述的大豆油中添加有酥油和维生素E。

8.根据权利要求7所述的蜂胶中药组合物软胶囊的制备方法，包括以下步骤：

(1)将蜂胶粉碎，得到粒径小于80目的蜂胶粉末；

(2)将酥油和维生素E加入大豆油中加热至熔融，再加入步骤(1)中的蜂胶粉末、西洋参提取物和三七提取物，混合均匀，所得混合液经研磨后过80目筛，再压丸，洗丸，干燥，即制成蜂胶中药组合物软胶囊。

9.根据权利要求8所述的蜂胶中药组合物软胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的加热温度为30℃-40℃。

10.根据权利要求5或6所述的蜂胶中药组合物软胶囊在制备用于降血脂和/或增加免疫力的保健品或药物中的应用。