CN108041603A - 一种具有改善睡眠作用的保健食品及其制备方法和应用 - Google Patents
一种具有改善睡眠作用的保健食品及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种具有改善睡眠作用的保健食品及其制备方法和应用。所述的保健食品由以下重量份数的各原料制成:刺五加400‑200重量份,首乌藤150‑50重量份,柏子仁60‑30重量份,远志30‑10重量份,甜味剂1‑0.25重量份,山梨酸钾1‑0.15重量份。本发明采用卫生部公布的“食药”两用中药材刺五加、首乌藤、柏子仁、远志四味药材,采用超声波半仿生提取法、减压浓缩、醇沉提取法制备得到具有改善睡眠作用的保健食品——口服液,该制备工艺简便、易操作,制成口服液患者可直接服用。经中国疾病预防控制中心营养与食品安全所进行功能学试验结果表明,本发明的产品对改善睡眠作用疗效较好且无毒副作用,有效成分含量高且稳定。
Description
技术领域
本发明涉及一种营养组合物,特别涉及一种具有改善睡眠作用的保健食品及其制备方法和应用,属于保健食品技术领域。
背景技术
随着生活节奏的加快,工作压力的增大,以及夜生活频率增加,不规律的生活方式等多方面原因导致睡眠障碍的发病率也随之增加,失眠是其中最常见的一种。通常不能得到正常的睡眠,尤其是深度睡眠时间短不能消除疲劳,睡眠困难或夜间从睡眠中醒来,由于睡眠质量差,醒来后容易影响生活和工作。睡眠时间占有人类生命过程的三分之一,睡眠障碍已成为影响人类健康的重要因素之一,关注睡眠,提高睡眠质量,已成为生命科学中的重要组成部分。
睡眠障碍对人体健康的影响之大是大多数人难以想象的,据美国学者对7000人为期5年的研究表明,在影响人类寿命的7种因素中,睡眠是重要的一项,睡眠障碍可引起人体免疫功能低下,精神烦躁,同时容易引发高血压、神经衰弱、心脑血管意外及心理疾患等,甚至造成猝死。睡眠障碍造成了相当一部分人群处于“亚健康”状态。
人类在与睡眠障碍的抗争中作出了极大的努力,联合国卫生组织把每年的3月21日定为“世界睡眠日”就是要唤起人类对睡眠的高度重视,近年来我国出现了来自各个领域的关注睡眠和探索健康睡眠的群体,这对于提高睡眠质量具有极大地促进作用。
传统的中医药对改善睡眠障碍具有独特的理论和疗效,采用中医药食疗方法纠正睡眠障碍已具有悠远的历史,它克服了西药长期使用的耐药性和依赖性,可收到标本兼顾的效果。公开号为CN104013272A的专利申请公开了一种治疗失眠的中药枕,其枕芯中填充如下重量份数的中药粉末:决明子800-1200、合欢花80-120、夜交藤40-60、酸枣仁90-110、柏子仁40-60、远志40-60,具有养肝,宁心,安神,镇静催眠的功效,使人体的睡眠逐渐得到改善,使用方便,无毒副作用。该技术的缺点在于原料种类多,且是一种药用枕,在治疗睡眠只起到辅助作用,为外治疗法。公开号为CN107029125A的专利申请公开了一种安神改善睡眠的颗粒药物配方:酸枣仁20g-30g、灵芝10g-20g、首乌藤12g-20g、合欢皮10g-15g、远志20g-25g、柏子仁10g-14g、莲子40g-50g、丹参40g-60g、熟地黄10g-20g、五味子8g-20g、墨旱莲10g-20g、仙鹤草8g-16g、鸡血藤12g-15g、天麻30g-50g、百合20g-26g、刺五加10g-14g、龙胆8g-12g、茯苓25g-35g、栀子18g-26g、蜂王浆60g-80g。该技术的缺点在于所含药物品种繁多,且采用传统制备方法,制备时间长。
本发明依据现代药理药效的理论研究和各类原料的实际功效结合卫生部公布的“食药”两用中药材,精选具有改善睡眠功效的刺五加、首乌藤、柏子仁、远志为原料。本发明以改善人类睡眠质量为目的,经现代成产工艺加工处理制成的保健食品,具有改善人类睡眠的保健作用。
发明内容
本发明的目的在于提供可用一种具有改善睡眠作用的保健食品及其制备方法。
为了达到上述目的,本发明采用了以下技术手段:
本发明的一种具有改善睡眠作用的保健食品组合物,其由以下重量份数的各原料组成:刺五加200-400重量份,首乌藤50-150重量份,柏子仁30-60重量份,远志10-30重量份,甜味剂0.25-1重量份,山梨酸钾0.15-1重量份。
其中,优选的,所述的保健食品组合物,由以下重量份数的各原料组成:刺五加300重量份,首乌藤100重量份,柏子仁40重量份,远志20重量份,甜味剂0.5重量份,山梨酸钾0.3重量份。
其中,优选的,所述的甜味剂为甜菊糖甙。
本发明所用到的原料药均可符合保健食品质量标准要求。
进一步的,本发明还提出了所述的组合物在制备具有改善睡眠作用的保健食品中的用途。
其中,优选的,所述的保健食品为口服液。
一种具有改善睡眠作用的保健食品,其为口服液,是通过以下方法制备得到:将所述重量份的刺五加、首乌藤、柏子仁以及洗净,采用水超声辅助半仿生提取的方法提取2次,合并二次滤液,滤过,滤液浓缩得到相对密度为1.05-1.10的清膏,加乙醇使含醇量达55-65%v/v,搅匀,静止48小时,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,继续浓缩得到相对密度为1.15的清膏,加入甜味剂、山梨酸钾,再加纯化水,搅匀,静置,滤过,灌封,灭菌,即得。
具体的,一种制备所述的具有改善睡眠作用的保健食品的方法,包括以下步骤:
(1)将各原料先进行挑选并按所述的重量称取各原料成分;
(2)药材前处理
将刺五加、首乌藤、柏子仁、远志洗净后,碎断,备用;
(3)超声波辅助半仿生提取法提取
a、第一次提取:将处理好的刺五加、首乌藤、柏子仁、远志四味药材,放入提取罐内,其中柏子仁采用包煎处理,第一次加入药材重量8-12倍量的水,用1mol/L盐酸调节提取液pH值为2.0,超声10-50分钟,过滤,保留滤液,滤渣;
第二次提取:取滤渣加入其重量8-12倍量的水,用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液将提取液pH值调节为7.5,超声10-50分钟,过滤,保留滤液;
b、浓缩
将两次滤液合并,加入真空浓缩罐内,浓缩得到相对密度1.20±0.05的流浸膏;
c、醇沉
将流浸膏自然凉至室温,放入醇沉罐中,加乙醇使含醇量达到55%-65%v/v,乙醇完全加入后,充分搅拌,使乙醇分散均匀,静置48小时,用板框过滤器过滤,收集滤液;
d、回收乙醇、浓缩
将滤液打入真空浓缩罐中,回收乙醇至无醇味,继续减压浓缩至相对密度为1.15±0.01,获得清膏备用;
(4)制剂
先将配液罐中加入配制量3/5的纯化水,将上述清膏准确称量,加入配液罐中与水搅拌混合后,再将甜味剂、山梨酸钾溶解后加入配液罐中,加入适量纯化水至配制量的总体积,混合均匀,加热煮沸、过滤,灌封、灭菌制成口服液。
其中,优选的,第一次提取加入药材重量12倍量的水;第二次提取加入滤渣重量10倍量的水。
其中,优选的,两次超声时间均为30分钟。
相较于现有技术,本发明的有益效果是:
1、本发明根据中医传统理论和古代中医药史料的记载,采用卫生部公布的“食药”两用中药材刺五加、首乌藤、柏子仁、远志四味药材,制备得到保健食品组合物,经中国疾病预防控制中心营养与食品安全所进行功能学试验结果表明,本发明的组合物对改善睡眠作用疗效较好且无毒副作用。
2、本发明的制备工艺简便、易操作:1)本发明首次采用超声波辅助提取结合半仿生提取法对刺五加、首乌藤、柏子仁、远志进行提取,通过模拟人体生物环境,使活性成分得到充分溶出,有效成分提取完全,并且在提取率提高的前提下缩短了生产周期,降低了成本;2)浓缩时采用减压回收的方法,缩短了操作时间,且降低了有效成分的破坏与损失;3)采用醇沉法分离提取物浸膏,使有效成分完全溶于乙醇,而不溶于乙醇的杂质被沉淀出来,有效分离杂质,同时乙醇易挥发,加快了干燥速度。
具体实施方式
下面通过具体实施例来进一步描述本发明,本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1具有改善睡眠作用的保健口服液的制备
(1)将各原料先进行挑选并按下述重量称取各原料成分:
刺五加400g,首乌藤150g,柏子仁60g,远志30g,甜菊糖甙1.0g,山梨酸钾1.0g。
(2)药材前处理
将刺五加、首乌藤、柏子仁、远志洗净后,碎断,备用;
(3)超声波辅助半仿生提取法提取
a、第一次提取:将处理好的刺五加、首乌藤、柏子仁、远志四味药材,放入提取罐内,其中柏子仁采用包煎处理,第一次加入药材重量12倍量的水,用1mol/L盐酸调节提取液pH值为2.0(模拟人体胃pH值),超声30分钟,过滤,保留滤液,滤渣。
第二次提取:取滤渣加入其重量10倍量的水,用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液将提取液pH值调节为7.5(模拟人体小肠pH值),超声30分钟,过滤,保留滤液。
b、浓缩
将两次滤液合并,加入真空浓缩罐内,减压浓缩得到(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度60-80℃)相对密度1.20±0.05(60℃)的流浸膏。
c、醇沉
将流浸膏自然凉至室温,放入醇沉罐中,加乙醇使含醇量达到55%-65%(v/v,加乙醇时应慢加,并加速搅拌使加入的乙醇快速分散)乙醇完全加入后,充分搅拌,使乙醇分散均匀,静置48小时,用板框过滤器过滤,收集滤液。
d、回收乙醇、浓缩
将滤液打入真空浓缩罐中,回收乙醇(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度40-50℃)至无醇味,继续减压浓缩至相对密度为1.15±0.01,获得清膏备用;
(4)制剂
先将配液罐中加入配制量3/5的纯化水,将上述清膏准确称量,加入配液罐中与水搅拌混合后,再将甜菊糖甙、山梨酸钾溶解后加入配液罐中,加入适量纯化水至配制量的总体积,混合均匀,加热煮沸、过滤,灌封、灭菌制成口服液。
实施例2具有改善睡眠作用的保健口服液的制备
将各原料先进行挑选并按下述重量称取各原料成分:刺五加200g,首乌藤100g,柏子仁30g,远志10g,甜菊糖甙0.25g,山梨酸钾0.15g。
其余制备方法与实施例1相同。
实施例3具有改善睡眠作用的保健口服液的制备
将各原料先进行挑选并按下述重量称取各原料成分:刺五加300g,首乌藤100g,柏子仁40g,远志20g,甜菊糖甙0.5g,山梨酸钾0.3g。
其余制备方法与实施例1相同。
实施例4具有改善睡眠作用的保健口服液的制备
(1)将各原料先进行挑选并按下述重量称取各原料成分:
刺五加300g,首乌藤100g,柏子仁40g,远志20g,甜菊糖甙0.5g,山梨酸钾0.3g。
(2)药材前处理
将刺五加、首乌藤、柏子仁、远志洗净后,碎断,备用;
(3)提取
a、第一次提取:将处理好的刺五加、首乌藤、柏子仁、远志四味药材,放入提取罐内,其中柏子仁采用包煎处理,第一次加入药材重量10倍量的水,用1mol/L盐酸调节提取液pH值为2.0(模拟人体胃pH值),超声30分钟,过滤,保留滤液,滤渣。
第二次提取:取滤渣加入其重量10倍量的水,用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液将提取液pH值调节为7.5(模拟人体小肠pH值),超声30分钟,过滤,保留滤液。
b、浓缩
将两次滤液合并,加入真空浓缩罐内,减压浓缩得到(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度60-80℃)相对密度1.20±0.05(60℃)的流浸膏。
c、醇沉
将流浸膏自然凉至室温,放入醇沉罐中,加乙醇使含醇量达到55%-65%(v/v,加乙醇时应慢加,并加速搅拌使加入的乙醇快速分散)乙醇完全加入后,充分搅拌,使乙醇分散均匀,静置48小时,用板框过滤器过滤,收集滤液。
d、回收乙醇、浓缩
将滤液打入真空浓缩罐中,回收乙醇(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度40-50℃)至无醇味,继续减压浓缩至相对密度为1.15±0.01,获得清膏备用;
(4)制剂
先将配液罐中加入配制量3/5的纯化水,将上述清膏准确称量,加入配液罐中与水搅拌混合后,再将甜菊糖甙、山梨酸钾溶解后加入配液罐中,加入适量纯化水至配制量的总体积,混合均匀,加热煮沸、过滤,灌封、灭菌制成口服液。
实施例5具有改善睡眠作用的保健口服液的制备
(1)将各原料先进行挑选并按下述重量称取各原料成分:
刺五加300g,首乌藤100g,柏子仁40g,远志20g,甜菊糖甙0.5g,山梨酸钾0.3g。
(2)药材前处理
将刺五加、首乌藤、柏子仁、远志洗净后,碎断,备用。
(3)提取
a、第一次提取:将处理好的刺五加、首乌藤、柏子仁、远志四味药材,放入提取罐内,其中柏子仁采用包煎处理,第一次加入药材重量8倍量的水,用1mol/L盐酸调节提取液pH值为2.0(模拟人体胃pH值),超声30分钟,过滤,保留滤液,滤渣。
第二次提取:取滤渣加入其重量12倍量的水,用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液将提取液pH值调节为7.5(模拟人体小肠pH值),超声30分钟,过滤,保留滤液。
b、浓缩
将两次滤液合并,加入真空浓缩罐内,减压浓缩得到(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度60-80℃)相对密度1.20±0.05(60℃)的流浸膏。
c、醇沉
将流浸膏自然凉至室温,至醇沉罐中,加乙醇使含醇量达到55%-65%(v/v,加乙醇时应慢加,并加速搅拌使加入的乙醇快速分散)乙醇完全加入后,充分搅拌,使乙醇分散均匀,静置48小时,用板框过滤器过滤,收集滤液。
d、回收乙醇、浓缩
将滤液打入真空浓缩罐中,回收乙醇(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度40-50℃)至无醇味,继续减压浓缩至相对密度为1.15±0.01,获得清膏备用。
(4)制剂
先将配液罐中加入配制量3/5的纯化水,将上述清膏准确称量,加入配液罐中与水搅拌混合后,再将甜菊糖甙、山梨酸钾溶解后加入配液罐中,加入适量纯化水至配制量的总体积,混合均匀,加热煮沸、过滤,灌封、灭菌制成口服液。
实施例6具有改善睡眠作用的保健口服液的制备
(1)将各原料先进行挑选并按下述重量称取各原料成分:
刺五加300g,首乌藤100g,柏子仁40g,远志20g,甜菊糖甙0.5g份,山梨酸钾0.3g。
(2)药材前处理
将刺五加、首乌藤、柏子仁、远志洗净后,碎断,备用
(3)超声波辅助半仿生提取法提取
a、第一次提取:将处理好的刺五加、首乌藤、柏子仁、远志四味药材,放入提取罐内,其中柏子仁采用包煎处理,第一次加入药材重量12倍量的水,用1mol/L盐酸调节提取液pH值为2.0(模拟人体胃pH值),超声20分钟,过滤,保留滤液,滤渣。
第二次提取:取滤渣加入10倍量的水,用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液将提取液pH值调节为7.5(模拟人体小肠pH值),超声20分钟,过滤,保留滤液。
b、浓缩
将两次滤液合并,加入真空浓缩罐内,减压浓缩得到(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度60-80℃)相对密度1.20±0.05(60℃)的流浸膏。
c、醇沉
将浸膏自然凉至室温,至醇沉罐中,加乙醇使含醇量达到55%-65%(v/v,加乙醇时应慢加,并加速搅拌使加入的乙醇快速分散)乙醇完全加入后,充分搅拌,使乙醇分散均匀,静置48小时,用板框过滤器过滤,收集滤液。
d、回收乙醇、浓缩
将滤液打入真空浓缩罐中,回收乙醇(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度40-50℃)至无醇味,继续减压浓缩至相对密度为1.15±0.01,获得清膏备用。
(4)制剂
先将配液罐中加入配制量3/5的纯化水,将上述清膏准确称量,加入配液罐中与水搅拌混合后,再将甜菊糖甙、山梨酸钾溶解后加入配液罐中,加入适量纯化水至配制量的总体积,混合均匀,加热煮沸、过滤,灌封、灭菌制成口服液。
实施例7具有改善睡眠作用的保健口服液的制备
(1)将各原料先进行挑选并按下述重量称取各原料成分:
刺五加300g,首乌藤100g,柏子仁40g,远志20g,甜菊糖甙0.5g份,山梨酸钾0.3g。
(2)药材前处理
将刺五加、首乌藤、柏子仁、远志洗净后,碎断,备用;
(3)提取
a、第一次提取:将处理好的刺五加、首乌藤、柏子仁、远志四味药材,放入提取罐内,其中柏子仁采用包煎处理,第一次加入药材重量12倍量的水,用1mol/L盐酸调节提取液pH值为2.0(模拟人体胃pH值),超声45分钟,过滤,保留滤液,滤渣。
第二次提取:取滤渣加入其重量10倍量的水,用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液将提取液pH值调节为7.5(模拟人体小肠pH值),超声45分钟,过滤,保留滤液。
b、浓缩
将两次滤液合并,加入真空浓缩罐内,减压浓缩得到(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度60-80℃)相对密度1.20±0.05(60℃)的流浸膏。
c、醇沉
将流浸膏自然凉至室温,至醇沉罐中,加乙醇使含醇量达到55%-65%(v/v,加乙醇时应慢加,并加速搅拌使加入的乙醇快速分散)乙醇完全加入后,充分搅拌,使乙醇分散均匀,静置48小时,用板框过滤器过滤,收集滤液。
d、回收乙醇、浓缩
将滤液打入真空浓缩罐中,回收乙醇(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度40-50℃)至无醇味,继续减压浓缩至相对密度为1.15±0.01,获得清膏备用。
(4)制剂
先将配液罐中加入配制量3/5的纯化水,将上述清膏准确称量,加入配液罐中与水搅拌混合后,再将甜菊糖甙、山梨酸钾溶解后加入配液罐中,加入适量纯化水至配制量的总体积,混合均匀,加热煮沸、过滤,灌封、灭菌制成口服液。
实施例8具有改善睡眠作用的保健口服液的制备
(1)将各原料先进行挑选并按下述重量称取各原料成分:
刺五加300g,首乌藤100g,柏子仁40g,远志20g,甜菊糖甙0.5g,山梨酸钾0.3g。
(2)药材前处理
将刺五加、首乌藤、柏子仁、远志洗净后,碎断,备用。
(3)提取
a、第一次提取:将处理好的刺五加、首乌藤、柏子仁、远志四味药材,放入提取罐内,其中柏子仁采用包煎处理,第一次加入药材重量12倍量的水,用1mol/L盐酸调节提取液pH值为3.5,超声30分钟,过滤,保留滤液,滤渣。
第二次提取:取滤渣加入其重量10倍量的水,用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液将提取液pH值调节为7.5(模拟人体小肠pH值),超声30分钟,过滤,保留滤液。
b、浓缩
将两次滤液合并,加入真空浓缩罐内,减压浓缩得到(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度60-80℃)相对密度1.20±0.05(60℃)的流浸膏。
c、醇沉
将流浸膏自然凉至室温,至醇沉罐中,加乙醇使含醇量达到55%-65%(v/v,加乙醇时应慢加,并加速搅拌使加入的乙醇快速分散)乙醇完全加入后,充分搅拌,使乙醇分散均匀,静置48小时,用板框过滤器过滤,收集滤液。
d、回收乙醇、浓缩
将滤液打入真空浓缩罐中,回收乙醇(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度40-50℃)至无醇味,继续减压浓缩至相对密度为1.15±0.01,获得清膏备用。
(4)制剂
先将配液罐中加入配制量3/5的纯化水,将上述清膏准确称量,加入配液罐中与水搅拌混合后,再将甜菊糖甙、山梨酸钾溶解后加入配液罐中,加入适量纯化水至配制量的总体积,混合均匀,加热煮沸、过滤,灌封、灭菌制成口服液。
实施例9具有改善睡眠作用的保健口服液的制备
(1)将各原料先进行挑选并按下述重量称取各原料成分:
刺五加300g,首乌藤100g,柏子仁40g,远志20g,甜菊糖甙0.5g,山梨酸钾0.3g。
(2)药材前处理
将刺五加、首乌藤、柏子仁、远志洗净后,碎断,备用。
(3)提取
a、第一次提取:将处理好的刺五加、首乌藤、柏子仁、远志四味药材,放入提取罐内,其中柏子仁采用包煎处理,第一次加入药材重量12倍量的水,不调节PH值,超声30分钟,过滤,保留滤液,滤渣。
第二次提取:取滤渣加入其重量10倍量的水,超声30分钟,过滤,保留滤液。
b、浓缩
将两次滤液合并,加入真空浓缩罐内,减压浓缩得到(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度60-80℃)相对密度1.20±0.05(60℃)的流浸膏。
c、醇沉
将流浸膏自然凉至室温,至醇沉罐中,加乙醇使含醇量达到55%-65%(v/v加乙醇时应慢加,并加速搅拌使加入的乙醇快速分散)乙醇完全加入后,充分搅拌,使乙醇分散均匀,静置48小时,用板框过滤器过滤,收集滤液。
d、回收乙醇、浓缩
将滤液打入真空浓缩罐中,回收乙醇(真空度:0.07±0.01Mpa;蒸汽压力≤0.03Mpa;温度40-50℃)至无醇味,继续减压浓缩至相对密度为1.15±0.01,获得清膏备用。
(4)制剂
先将配液罐中加入配制量3/5的纯化水,将上述清膏准确称量,加入配液罐中与水搅拌混合后,再将甜菊糖甙、山梨酸钾溶解后加入配液罐中,加入适量纯化水至配制量的总体积,混合均匀,加热煮沸、过滤,灌封、灭菌制成口服液。
实验例1处方用量的确定
本发明分别筛选三种主要原料的用量,通过对实施例1、实施例2、实施例3的口服液的感官指标、pH值、功效成份含量的测定对不同用量进行比对,优选最佳组成分量。具体操作如下:
一、感官指标:
试验方法:采用目测、鼻嗅、口尝的方法检验。实验结果见表1。
二、pH的测定:选择电极(如玻璃电极)来测量出溶液的pH值
三、功效成分的测定(试验方法)
1.总黄酮的含量测定(总黄酮以芦丁C27H30O16)
1)对照品溶液的制备
取芦丁对照品适量,精密称定,加60%乙醇制成每1mL含芦丁60μg溶液,即得。
2)标准曲线的制备
精密量取对照品溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL与5.0mL,分别置10mL量瓶中,各加0.1mol/L三氯化铝溶液2mL、1mol/L醋酸钾溶液3mL,加60%乙醇至刻度,摇匀,放置30min;以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法(附录V A),在420nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标,绘制标准曲线。
3)测定方法
精密量取受试口服液1mL,置10mL量瓶中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加0.1mol/L三氯化铝溶液”起依法操作,制成供试品溶液。另精密量取受试口服液1mL,置10mL量瓶中,加60%乙醇至刻度,摇匀,作空白,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量,计算,即得。结果如表1所示。
2.紫丁香苷含量的测定
1)对照品溶液的制备
精密称取紫丁香苷对照品适量,加甲醇溶解制成每1mL含紫丁香苷100μg溶液,作为对照品溶液。
2)供试品溶液的制备
精密量取受试口服液1mL,置10mL量瓶中,加甲醇溶解至刻度,摇匀,作为供试品溶液。
3)测定方法
采用高效液相色谱法:色谱条件,乙腈:水;检测波长256nm,进样量20ul,按紫丁香苷峰面积计算,结果如表1所示。
表1对组分不同进行感官指标、pH、含量测试结果
通过对实施例1-3的口服液进行感官测试、pH测定及功效成份含量的测定结果对比,实施例3结果中pH值、功效成份含量优于实施例1、2。药物pH的大小决定药物解离度程度,从而影响药物的吸收,因此选取实例3中处方配比量。
实验例2稳定性试验考察
以功效成份含量为检测指标对实施例3的口服液进行稳定性试验考察。
一、总黄酮检测方法
(1)功效成分的检测方法
a、功效成分:总黄酮
b、每100ml口服液中含总黄酮以芦丁计。
c、检测方法:紫外分光光度法
(2)样品制备
1)对照品溶液的制备
取芦丁对照品适量,精密称定,加60%乙醇制成每1mL含芦丁60μg溶液,即得。
2)标准曲线的制备
精密量取对照品溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL与5.0mL,分别置10mL量瓶中,各加0.1mol/L三氯化铝溶液2mL、1mol/L醋酸钾溶液3mL,加60%乙醇至刻度,摇匀,放置30min;以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法(附录V A),在420nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标,绘制标准曲线。
3)测定方法
精密量取口服液1mL,置10mL量瓶中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加0.1mol/L三氯化铝溶液”起依法操作,制成供试品溶液。另精密量取口服液1mL,置10mL量瓶中,加60%乙醇至刻度,摇匀,作空白,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量,计算,即得。结果如表2所示。
二、紫丁香苷含量检测
1)对照品溶液的制备
精密称取紫丁香苷对照品适量,加甲醇溶解制成每1mL含紫丁香苷100μg溶液,作为对照品溶液。
2)供试品溶液的制备
精密量取口服液1mL,置10mL量瓶中,加甲醇溶解至刻度,摇匀,作为供试品溶液。
3)测定方法
采用高效液相色谱法:色谱条件,乙腈:水;检测波长256nm,进样量20ul,按紫丁香苷峰面积计算,结果如表2所示。
表2含量稳定性试验结果
结论:稳定性考察结果显示,36个月内稳定性良好。
实验例3提取工艺流程的确定
1.提取时间的确定
本发明分别采用了实施例3、实施例6、实施例7中三种不同超声提取时间,通过对感官指标、pH值、功效成份含量的测定对不同提取时间进行比对,优选最佳提取时间。检测方法同实验例1中检测方法。结果见表3。
表3对提取时间的不同进行感官指标、pH、含量测试结果
结果表明:实施例3结果优于其他。
2.提取液用量的确定
本发明分别采用了实施例3、实施例4、实施例5中三种不同提取液用量,通过对感官指标、pH值、功效成份含量的测定对不同提取时间进行比对,优选最佳提取液用量。检测方法同实验例1中检测方法。结果见表4。
表4对提取液用量对进行感官指标、pH、含量测试结果
结果表明:实施例3结果优于其他。
3.提取液pH值的确定
本发明分别采用了实施例3、实施例8、实施例9中三种不同pH值提取液,通过对感官指标、pH值、功效成份含量的测定对不同提取液pH值进行比对,优选最佳提取液pH值。检测方法同实验例1中检测方法。结果见表5。
表5对提取液pH值对进行感官指标、pH、含量测试结果
实验例4本发明的药物组合物对改善睡眠的药效学试验
本研究通过药物组合物对巴比妥钠、戊巴比妥诱导睡眠时间的试验观察,提供一种改善睡眠的保健食品组合物的治疗作用。
1.材料与方法
1.1实验动物选取体重16-18g的昆明种健康小鼠48只(二级),由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供
1.2受试物按实施例3制备的口服液样品,每支10ml,常温保存。
1.3试剂巴比妥钠、异戊巴比妥
1.4试验仪器:秒表、1ml注射器
1.5剂量:推荐剂量为每人(按成人体重60kg体重计)每日4支,每支10ml,相当于0.67ml/日/kg BW,实验设人体推荐剂量的10倍剂量组,即每日6.7ml/kgBW,上、下各设一个剂量组:3.4ml/kg BW组和20.0ml/kg BW组,分别相当于人体推荐剂量的5倍和30倍。受试物以蒸馏水配制,空白对照组(0ml/kg BW)以蒸馏水灌胃,小鼠灌胃量为20ml/kg BW。
2.方法
2.1实验分组
第一组:选取体重16-18g的昆明种健康小鼠48只,作为第一组,随机分为4个实验组(空白对照组和三个剂量组),每组12只,进行小鼠直接睡眠实验和巴比妥钠睡眠潜伏期实验。
第二组:选取体重16-18g的昆明种健康小鼠48只,作为第二组,随机分为4个实验组,每组12只,进行延长戊巴比妥钠睡眠时间实验。
第三组:选取体重16-18g的昆明种健康小鼠48只,作为第三组,随机分为4个实验组,每组12只,进行延长戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验。
2.2实验方法
2.2.1试剂配制:巴比妥钠溶液(29.0g/L)的配制:精密称取巴比妥钠1.450g,用蒸馏水定容至50ml,用前配制。
戊巴比妥钠溶液(5.0g/L)的配制:精密称取戊巴比妥钠0.250g,用蒸馏水定容至50ml,用前配制。
戊巴比妥钠溶液(3.0g/L)的配制:精密称取戊巴比妥钠0.150g,用蒸馏水定容至50ml,用前配制。
2.2.2小鼠直接睡眠试验
灌胃给予小鼠受试物30天,在末次灌胃后,以小鼠翻正反射消失60秒为失眠判定标准,观察各组小鼠在灌胃后30分钟内的睡眠发生数。
2.2.3巴比妥钠睡眠潜伏期试验
灌胃小鼠给予受试物30天。在末次灌胃20分钟后,各组小鼠均经腹腔注射29.0g/L巴比妥钠,注射量为10ml/kg.BW。以小鼠翻正反射消失60秒为失眠判定标准,观察并准确记录注射时间和小鼠发生睡眠时的开始时间。
2.2.4延长戊巴比妥钠睡眠时间试验
灌胃小鼠给予受试物30天。在末次灌胃20分钟后,各组小鼠均经腹腔注射5.0g/L戊巴比妥钠,注射量为10ml/kg.BW。以小鼠翻正反射消失60秒为失眠判定标准,观察并准确记录注射时间和小鼠发生睡眠时的开始时间和苏醒时的时间。
2.2.5戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验
灌胃小鼠给予受试物30天。在末次灌胃20分钟后,各组小鼠均经腹腔注射3.0g/L戊巴比妥钠,注射量为10ml/kg.BW。以小鼠翻正反射消失60秒为失眠判定标准,观察并准确记录注射后30分钟内各组小鼠发生睡眠的只数。
2.2.6实验数据的统计处理
用SPSS统计软件对实验数据进行统计处理。各剂量组和正常对照组间的比较,先经方差检验,满足要求后,在进行单因素方差分析和多个实验组和一个空白对照组间均数的两两比较进行统计处理。
戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验中的入睡动物为计数资料,用X2检验进行统计处理,当出现理论数等于或小于1时,改用确切概率法。
2.2.7结果判定
巴比妥钠睡眠潜伏实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验和戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验三项实验中二项阳性,且无直接睡眠作用,可判断受试样品具有改善睡眠作用。
2.3结果
2.3.1组合物对小鼠体重的影响
三个实验的各组小鼠初始体重经方差齐性检验后,符合方差齐的要求,用单因素方差分析方法和多个实验组与一个对照组间均数的两两比较进行统计处理。有表6可见,三个实验的各剂量组(3.4ml/kg BW组、6.7ml/kg BW组、20.0ml/kg BW组)小鼠的初始体重与空白对照组比较,均无显著性差异(P>0.05),即三个实验的各组小鼠初始体重在组间分布均衡。
表6各组小鼠的初始体重
按不同剂量给予小鼠灌胃给药30天后,各实验组小鼠末期体重和体重增长值经方差齐性检验后,符合方差齐性的要求,用单因素方差分析方法和多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法对各组动物的体重增长值进行统计处理。由表7可见,三个实验的各组剂量组小鼠的体重增长值与空白组间比较,差异无显著性(P>0.05)。
表7对小鼠体重的影响
2.3.2组合物对小鼠直接睡眠的作用
按不同剂量给予小鼠灌胃给药30天后,末次灌胃后,各实验组小鼠均为发生睡眠的现象,结果见表8。即各剂量样品对小鼠没有直接睡眠作用。
表8对小鼠直接睡眠的影响
2.3.3对小鼠睡眠潜伏期的影响
按不同剂量给予小鼠灌胃给药30天后,各组小鼠均用29.0g/L的巴比妥钠进行腹腔注射以诱导睡眠。小鼠睡眠潜伏期数据符合正态分布和方法齐性的要求,用单因素方差分析方法和多剂量组与一个对照组间均数的两两比较方法进行睡眠潜伏期的统计处理。由表9可见,6.7ml/kg BW、20.0ml/kg BW组小鼠的睡眠潜伏期与空白对照组间比较,有显著和极显著性缩短(P<0.05,P<0.01)。
表9不同剂量对小鼠睡眠潜伏期的影响
与0ml/kg BW组比较,*P<0.05,**P<0.01。
2.3.4对小鼠睡眠时间的影响
按不同剂量给予小鼠灌胃给药30天后,各小鼠均用5.0g/L的戊巴比妥钠进行腹腔注射以诱导睡眠。小鼠的睡眠时间数据符合正态方差齐的要求,用单因素方差分析方法和多剂量组与一个对照组间均数的两两比较方法进行睡眠时间的统计处理。由表10可见,20.0ml/kg BW组小鼠的睡眠潜伏期与空白对照组间比较,有显著和极显著性延长(P<0.01)。
表10不同剂量对小鼠睡眠潜伏期的影响
与0ml/kg BW组比较,**P<0.01。
2.3.5对阈下剂量的戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠的影响
按不同剂量给予小鼠灌胃给药30天后,各组小鼠均用3.0g/L的戊巴比妥钠进行腹腔注射以诱导睡眠。各实验组小鼠的睡眠发生率结果见表11,用卡方检验分析各组小鼠间的睡眠发生率差异。20.0ml/kg BW组小鼠的睡眠发生率与对照组比较,有显著增加(P<0.05)。
表11对阈下剂量的戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠的影响
与0ml/kg BW组比较,*P<0.05。
药效学实验结果表明,对小鼠进行30天灌胃给药后,6.7ml/kg BW和20.0ml/kg BW的剂量能缩短小鼠被巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期(P<0.05,P<0.01);20.0ml/kg BW的剂量能增加小鼠被阈下剂量戊巴比妥钠诱导的睡眠发生率(P<0.01);各剂量的组对小鼠无直接睡眠作用,且对小鼠的体重增长无明显影响,根据《保健食品功能学评价程序和检验方法》中的判定标准,本品对小鼠具有改善睡眠的作用。
实验例5本发明的药物组合物对改善睡眠的临床试验
1、临床资料与方法
临床表现入睡困难、早醒、入睡困难的患者100例(男50例,女50例),年龄25-65岁,随机分成2组为治疗组和对照组,治疗组50人(男25例,女25例),对照组50例(男25例,女25例),病程1-3年。
2、临床表现及诊断标准
临床表现:入睡困难、睡眠维持障碍、早醒、多梦、睡眠质量下降。
诊断标准:依据《中药新药治疗失眠临床研究指导原则》评判标准。临床治愈:经过药物治疗后无失眠症状,睡眠质量高。显效:明显改善失眠症状。有效:失眠症状减轻。无效:改善失眠症状不明显。
观察指标:治疗效果有效率比对有效率及匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评定2组治疗结果。
3、治疗方案和用药
根据病情的严重程度及药敏测定的结果选择治疗方案:治疗组:口服(实施例3的口服液),一次20ml,一日2次。疗程1个月。对照组1:安定片,每次1片,每日1次。疗程1个月。
对照组2:根据公开号为CN107029125A的专利申请制备方法制备获得样品颗粒,按每次3g,每日3次,疗程1个月。每周或每两周评估一次,直至睡眠质量改善后每月回访。
4、治疗结果:采用统计学进行分析比较结果。治愈、显效、有效、无效。见表12、13。
表12治疗效果有效率比对
表13治疗前后PSQI评分比对
5、结论:
通过对患者1个月的治疗,用诊断标准评定本组合物治疗有效率在96%高于对照组1及对照组2的治疗有效率,在治愈人数高于其他2组。同时在治疗期间通过测试记录1个月的睡眠质量用PSQI评分法进行比较本品组合物治疗前与治疗后的效果优于对照组。以上说明本品有改善睡眠的作用。
Claims (9)
1.一种具有改善睡眠作用的保健食品组合物,其特征在于,由以下重量份数的各原料组成:刺五加200-400重量份,首乌藤50-150重量份,柏子仁30-60重量份,远志10-30重量份,甜味剂0.25-1重量份,山梨酸钾0.15-1重量份。
2.如权利要求1所述的保健食品组合物,其特征在于,由以下重量份数的各原料组成:刺五加300重量份,首乌藤100重量份,柏子仁40重量份,远志20重量份,甜味剂0.5重量份,山梨酸钾0.3重量份。
3.如权利要求1或2所述的保健食品组合物,其特征在于,所述的甜味剂为甜菊糖甙。
4.权利要求1-3任一项所述的组合物在制备具有改善睡眠作用的保健食品中的用途。
5.如权利要求4所述的用途,其特征在于,所述的保健食品为口服液。
6.一种具有改善睡眠作用的保健食品,其特征在于,所述的保健食品为口服液,通过以下方法制备得到:将权利要求1或2所述重量份的刺五加、首乌藤、柏子仁以及洗净,采用水超声辅助半仿生提取的方法提取2次,合并二次滤液,滤过,滤液浓缩得到相对密度为1.05-1.10的清膏,加乙醇使含醇量达55-65%v/v,搅匀,静止48小时,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,继续浓缩得到相对密度为1.15的清膏,加入甜味剂、山梨酸钾,再加纯化水,搅匀,静置,滤过,灌封,灭菌,即得。
7.一种制备权利要求6所述的具有改善睡眠作用的保健食品的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将各原料先进行挑选并按权利要求1或2所述的重量称取各原料成分;
(2)药材前处理
将刺五加、首乌藤、柏子仁、远志洗净后,碎断,备用;
(3)超声波辅助半仿生提取法提取
a、第一次提取:将处理好的刺五加、首乌藤、柏子仁、远志四味药材,放入提取罐内,其中柏子仁采用包煎处理,第一次加入药材重量8-12倍量的水,用1mol/L盐酸调节提取液pH值为2.0,超声10-50分钟,过滤,保留滤液,滤渣;
第二次提取:取滤渣加入其重量8-12倍量的水,用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液将提取液pH值调节为7.5,超声10-50分钟,过滤,保留滤液;
b、浓缩
将两次滤液合并,加入真空浓缩罐内,浓缩得到相对密度1.20±0.05的流浸膏;
c、醇沉
将流浸膏自然凉至室温,放入醇沉罐中,加乙醇使含醇量达到55%-65%v/v,乙醇完全加入后,充分搅拌,使乙醇分散均匀,静置48小时,用板框过滤器过滤,收集滤液;
d、回收乙醇、浓缩
将滤液打入真空浓缩罐中,回收乙醇至无醇味,继续减压浓缩至相对密度为1.15±0.01,获得清膏备用;
(4)制剂
先将配液罐中加入配制量3/5的纯化水,将上述清膏准确称量,加入配液罐中与水搅拌混合后,再将甜味剂、山梨酸钾溶解后加入配液罐中,加入适量纯化水至配制量的总体积,混合均匀,加热煮沸、过滤,灌封、灭菌制成口服液。
8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,第一次提取加入药材重量12倍量的水;第二次提取加入滤渣重量10倍量的水。
9.如权利要求7所述的方法,其特征在于,两次超声时间均为30分钟。
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