CN103735621A - 一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物 - Google Patents

Abstract

本发明属于保健食品技术领域，涉及一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物及其制备方法，具体涉及一种由罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物、银杏叶提取物组成的中药组合物及其制备方法。本发明的中药组合物，由下述重量份配比的原料制成：罗布麻提取物85-105份、沙棘果提取物95-115份、丹参提取物100-120份、决明子提取物71-91份、银杏叶提取物26-46份。药理和试食试验研究结果，该中药组合物具有降血脂和增强免疫力的作用，临床用于辅助治疗高脂血症和免疫力低下。

Description

一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物

技术领域

本发明属于保健食品技术领域，涉及一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物及其制备方法，具体涉及一种由罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物、银杏叶提取物组成的中药组合物及其制备方法。

背景技术

高脂血症最危险的正是它不易为人们所觉察，临床表现隐匿，但后果严重，有“沉默杀手”之称。它的直接损害是加速全身动脉粥样硬化，因为全身的重要器官都要依靠动脉供血、供氧，一旦动脉被粥样斑块堵塞，就会导致严重后果。动脉硬化引起的肾功能衰竭等，都与高血脂症密切相关。专家建议：20岁以上成年人应每5年进行一次空腹血脂谱检查，包括总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯，以期早期发现、早期干预。

现代生活节奏快，很多人长期过度劳累包括脑力和体力疲劳律、饮食生活不规律、工作压力和心理压力过大等精神环境因素以及应激等造成的神精、内分泌、免疫、消化、循环、运动等系统的功能紊乱并导致抵抗力下降。传统医药认为：饮食生活不规律，长期的精神心理压力及劳累等是本病的关键，以肝气不舒、心情不畅为本、为实，以心、脾、肾诸脏气血阴阳不足为标、为虚。补虚泻实，补虚与祛邪并举。

现代生活倡导一珍惜健康，珍爱生命，追求美好生活。因此需要一种既可以降低高血脂，又可以增强免疫力，且服用和携带方便的保健食品。

罗布麻(Apocynum venetum L.)性甘、昧苦，凉，归肝经。据《本草纲目》、《救荒本草》记载，罗布麻有平心悸、止眩晕、消痰止咳、强心利尿之功能。《中华人民共和国药典》(2010年版)一部详细阐述其功能主治为“平肝安神，清热利水，用于肝阳眩晕，心悸失眠，浮肿尿少，高血压，神经衰弱，肾炎浮肿”。罗布麻叶，对预防和治疗高血压、高血脂、冠心病、哮喘病、气管炎等疾病有较好的效果。早在上个世纪80年代，临床研究已经证明按规定量服用罗布麻叶制剂3个月后，治疗组的血清胆固醇、甘油三酯大幅度降低，降脂有效率达75.91％，近年，英国也有研究报道：罗布麻叶水提物及其成分具有降胆固醇及抗脂质过氧化性。

沙棘(phae thamnoicies L)性味：酸、涩、温。是蒙古族、藏族的常用药材，我国藏医药经典著作《四部医典》收集记载了许多沙棘在医疗方面的应用资料。沙棘具有祛痰、利肺、化湿、健脾养胃、化瘀止血的作用。药理研究表明，沙棘粉能增加小鼠臣噬细胞的吞噬能力，其吞噬百分率明显高于对照组；能促进体液免疫，样品半数溶血值比对照组提高35％：能促进淋巴细胞转化，并降低血清胆固醇含量。

丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)别名血生根、赤参、血参、红根。味苦，性，微寒，归心、肝经。功效：活血调经，祛瘀止痛，凉血消痈，清心除烦，养血安神。传统医学文献记载丹参的药性：“……活血化淤，养血宁心，宽胸之痛药……”。古代有“一味丹参，功同四物”之说，四物(熟地黄、当归、白芍、川芎)乃传统补血之良方。丹参的作用包括扩张冠状动脉，预防血液郁积和心肌梗塞。它也影响脂质代谢，能使一些病人胆固醇(类固醇)下降。现代药理实验证明，丹参提取物可以降低胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白，升高高密度脂蛋白。

决叫子(Catsia tora Linn)为豆科一年生草本植物决明或小决明的干燥成熟种子。决明子也叫草决明、羊明、羊角、马蹄决明、还瞳子、狗屎豆、假绿豆、马蹄子、千里光、芹决、羊角豆、野青豆、猪骨明、猪屎蓝豆、细叶猪屎豆、羊尾豆。味苦、甘而性凉，具有清肝火、祛风湿、益肾明目等功能。现代药理研究表明：决明子煎剂或决明子散剂6g/只喂饲大鼠8周，对实验性高血脂症大鼠能降低血清胆固醇、甘油三酯，并降低肝中甘油三酯的含量。决明子对细胞免疫反应有一定的抑制作用，但对巨噬细胞功能却有增强作用，可使血清溶菌酶含量上升。目前认为血清溶菌酶含量与肌体巨噬细胞激活状态有关，可以反映巨噬细胞的功能。

银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶。别名飞蛾叶、鸭脚子。白果叶味微苦，性平。具有益心、活血止痛、敛肺平喘、化湿止泻的功效。银杏叶中含有天然活性黄酮及苦内酯等与人体健康有益的多种成份，具有溶解胆固醇，扩张血管的作用，对改善脑功能障碍、动脉硬化、高血压、眩晕、耳鸣、头痛、老年痴呆、记忆力减退等有明显效果。其防病、治病、健身的价值在明代李时珍的《本草纲目》中早有记载。经国家卫生部门检测证明：饮用银杏茶可明显降低血清胆固醇、甘油三脂和低密度血脂蛋白，减少体内贮存脂肪的作用。对于高血脂的调节、高血压和冠心病等心脑血管系统疾病患者辅助性防治以及肥胖型人群的减肥等有良好的功效，是预防治疗老年痴呆的理想食品。是目前世界公认的治、防心脑血管疾病最理想的药物成份。

目前，利用罗布麻、沙棘、丹参、决明子和银杏叶的相互作用，配伍组方，用于制备降血脂和增强免疫力的保健食品，还未见报道。

发明内容

为了满足临床需要，解决上述问题，本发明提供了主要由罗布麻提取物、沙棘提取物、丹参提取物、决明子提取物和银杏叶提取物组成的新的保健食品组合物及其制备方法。罗布麻、沙棘、丹参、决明子和银杏叶五药合用，协同发挥降血脂和增强免疫力的功效。

本发明是通过下述的技术方案来实现的：

一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物，由下述重量份配比的原料制成：

本发明的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物，各原料重量份配比优选为：

本发明的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物，各原料重量份配比最佳为：

以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为原料，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间重量配比的比例不变。

以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。

本发明的以上组成中，各味药的重量是以提取物计算的，如果以克为单位，如制成制剂，则因制剂的大小不同可制成100-1000剂。所述100-1000剂是指单位剂量的制剂形式，如片剂100-1000片，胶囊剂100-1000粒，颗粒剂100-1000g，口服液100-1000ml，膏剂100-1000g，丸剂100-1000丸等。

以上组成是按重量作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减少，如大规模生产可以以kg为单位，或以t(吨)为单位；小规模制剂也可以以g为单位。重量可以增大或者减小，但各组成之间的重量配比的比例不变。

本发明的中药组合物，可单独或根据需要可以加入一些药物可接受的载体，可以采用制剂学常规技术制备该药物制剂，如将药物活性物质与药物可接受的载体混合。在制成药物制剂时可以制成任何可药用的口服剂型，这些剂型选自：胶囊剂、片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、丸剂、散剂，优选的是胶囊剂。

所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。所述药物可接受的的载体选自：蜂蜜、炼蜜、甘露醇、山梨醇、山梨酸或钾盐、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素A、维生素C、维主素E、维生素D、氮酮、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、丙二醇、乙醇、吐温60-80、司班-80、蜂蜡、羊毛脂、液体石蜡、十六醇、没食子酸酯类、琼、三乙醇胺、碱性氨基酸、尿素、尿囊素、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

上述的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物中，

所述的罗布麻提取物的制备方法为：取罗布麻叶，清洗，晾干，粉碎，加水超声提取3次，第一次加6倍量水，第二、三次加4倍量水，每次提取30min，，提取温度为70℃，滤过，合并滤液；50℃减压浓缩至相对密度1.10-1.20的清膏；放冷，加入95％乙醇，使含醇量达到80％，搅匀，静置2小时，沉淀，过滤；沉淀物在80摄氏度干燥，即得；

通过该方法制备的罗布麻提取物，总黄酮含量不小于4g/100g，重金属小于10mg/100g，砷含量小于2mg/100g，铅含量小于2mg/100g，干燥失重不大于5.0％。

所述的沙棘果提取物的制备方法为：取新鲜的沙棘果，清洗，榨汁，放置2-3天，滤过分离，过滤液在喷雾干燥器进口温度为180-200℃，出口温度为70-90℃条件下进行喷雾干燥，即得；

通过该方法制备的沙棘果提取物，异鼠李素含量不小于10％，水分不大于3.5％，砷含量小于0.05mg/100g，铅含量小于0.1mg/100g，铜含量小于1.0mg/100g。

所述的丹参提取物的制备方法为：取丹参，洗净，晾干，粉碎，加75％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，60℃以下减压浓缩，浓缩至相对密度为1.20-1.30的清膏，清膏在喷雾干燥器进口温度为180-200℃，出口温度为70-90℃，水分8％以下条件下，进行喷雾干燥，喷雾干燥得到的颗粒粉碎，过80目筛，即得；

通过该方法制备的丹参提取物，丹参酮II含量不小于5％，重金属小于10mg/100g，砷含量小于2mg/100g，铅含量小于2mg/100g，水分不大于5.0％。

所述的决明子提取物的制备方法为：取决明子，洗净，晾干，粉碎，加50％乙醇回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，60℃以下减压浓缩，浓缩至相对密度为1.20-1.30的清膏，清膏在喷雾干燥器进口温度为180-200℃，出口温度为70-90℃，水分8％以下条件下，进行喷雾干燥，喷雾干燥得到的颗粒粉碎，过80目筛，即得；

通过该方法制备的决明子提取物，总蒽醌含量不小于1.0g/100g，，重金属小于10mg/100g，砷含量小于2mg/100g，铅含量小于2mg/100g，干燥失重不大于5.0％，灰分不大于5.0％。

所述的银杏叶提取物的制备方法为：取银杏叶，洗净，晾干，粉碎，加银杏叶10倍量的70％乙醇回流提取3次，每次45分钟，合并提取液，滤过，滤液真空减压浓缩至膏状，加入银杏叶3倍量的水溶解，静置48小时，抽取上清液反复加水沉降3次，弃去上清液，下层混悬物浓缩后加70％乙醇溶解，溶液加至聚酰胺柱，分别以水、95％乙醇依次洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩后在喷雾干燥器进口温度为160-180℃，出口温度为70-90℃，水分6％以下条件下进行喷雾干燥，干燥得到的颗粒粉碎，过80目筛，即得；

通过该方法制备的银杏叶提取物，总黄酮含量不小于24mg/g，总内酯含量不小于6mg/g，重金属小于10mg/100g，砷含量小于2mg/100g，铅含量小于2mg/100g，干燥失重不大于5.0％，灰分不大于5.0％。

本发明的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物，用于降血脂及增强免疫力的辅助治疗，每次1-2g主药，每日1-3次。

本发明的有益效果在于：

(1)本发明提供了一种新的具有降血脂和增强免疫力功效的药物组合物，满足了临床需要。

(2)本发明的药效学试验表明：罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物、银杏叶提取物五药合用，可协同发挥作用，其疗效均优于分别单用罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物、银杏叶提取物，表明五药联合应用，有协同作用。

(3)本发明针对亚健康状态的高血脂症和免疫力降低提供了一种符合传统中医方剂理论的中药复方，该药剂一方面保持较好的疗效和安全性，同时通过化学手段进行提取精制，富集各种有效成分，制成现代剂型，使其具备使用方便、携带方便的特点。

以下通过实验例进一步说明本发明。

对本发明实施例6制备的胶囊剂进行了药理实验和试食试验，详情如下。以下实验例中所用的罗布麻提取物取自实施例1，所用的沙棘果提取物取自实施例2，所用的丹参提取物取自实施例3，所用的决明子提取物取自实施例4，所用的银杏叶提取物取自实施例5.

实验例1本发明中药组合物的降血脂试验

实验动物：取SD大鼠90只，雌雄各半，体重200-300g，分成9组。

供试品剂量确定及溶液制备：本发明的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物胶囊内容物，人体口服推荐剂量为0.45g/粒*3粒/次*2次/天，以每人60Kg体重计算，折合剂量45mg/kg/天，取胶囊内容物备用。

低、中、高剂量分别为0.225、0.450、1.350g/kg.bw(分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍)，试液配制时分别称取4.5、9.0、27.0g本发明中药组合物胶囊内容物加蒸馏水定容至200ml，按1.0ml/100g.bw体积给大鼠灌胃，每日1次，连续30天。对照组灌胃给予等体积蒸馏水。

罗布麻提取物组：取罗布麻提取物27.0g加蒸馏水定容至200ml，按1.0ml/100g.bw体积给大鼠灌胃。

沙棘果提取物组：取沙棘果提取物27.0g加蒸馏水定容至200ml，按1.0ml/100g.bw体积给大鼠灌胃。

丹参提取物组：取丹参提取物27.0g加蒸馏水定容至200ml，按1.0ml/100g.bw体积给大鼠灌胃。

决明子提取物组：取决明子提取物27.0g加蒸馏水定容至200ml，按1.0ml/100g.bw体积给大鼠灌胃。

银杏叶提取物组：取决明子提取物27.0g加蒸馏水定容至200ml，按1.0ml/100g.bw体积给大鼠灌胃。

试验方法：取SD大鼠90只，以基础饲料喂饲大鼠一周后，禁食14小时，取尾血，测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，根据TC水平兼顾TG将动物随机分为9组：高脂对照组、本发明中药组合物高中低剂量组、罗布麻提取物组、沙棘果提取物组、丹参提取物组、决明子提取物组和银杏叶提取物组。自正式试验开始，各组动物换用高脂饲料(高脂饲料配方：基础饲料78.8％、胆固醇1％，蛋黄粉％、猪油10％、胆酸钠0.2％)，各给药组按照上述剂量设计灌胃给予不同剂量的药物，高脂对照组灌胃给予同体积的蒸馏水，连续30天后，禁食14小时，部动物眼眶采血，测血脂。结果见表1和表2。

表1本发明中药组合物对大鼠体重的影响(±s)

试验期间，各组动物生长正常，实验前后受试组动物的体重及增高与高脂对照组比较，无显著性差异(P＞0.05)

表2本发明中药组合物对高脂血症大鼠血脂各项指标的影响(x±SD，n＝10)

与模型对照组比较^*P＜0.05^**P＜0.01

本实验结果提示，与高脂对照组比较，罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物和银杏叶提取物均可以不同程度地降低试验大鼠的胆固醇水平和甘油三酯水平，但效果不显著(P＞0.05)。本发明中药组合物高、中、低三个剂量组均能显著降低高血脂大鼠的胆固醇水平(P＜0.05和P＜0.01)和甘油三酯的水平(P＜0.05和P＜0.01)。本发明中药组合物高、中、低三个剂量组疗效均优于高剂量单用罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物和银杏叶提取物，说明罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物和银杏叶提取物诸药合用，具有协同增效作用。

实验例2本发明中药组合物增强免疫力功能实验

1.材料与方法：

1.1样品：人体推荐量为2.4g/人/日。取本发明中药组合物的有效成分作为受试物供实验用，成人体重按60kg计。

1.2实验动物：

选用湖南农业大学动物科技学院实验动物养殖场(实验动物生产证号为SCXK(湘)-2003-003)提供的清洁级昆明种雌性小鼠，体重18-22g，雄性80只，雌性40只，分为三大组，免疫一组(雄)进行脏器/体重比值、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、迟发型变态反应、半数溶血值(HC₅₀)测定及抗体生成细胞检测；免疫二组(雄)进行碳廓清实验；免疫三组(雌)进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定实验。每大组40只小鼠随机分为4组，即对照组和本发明中药组合物高、中、低剂量组。

1.3剂量选择及样品处理：

本发明的中药组合物胶囊低、中、高剂量分别为0.225、0.450、1.350g/kg.bw(分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍)，试液配制时分别称取4.5、9.0、27.0g本发明中药组合物胶囊内容物加蒸馏水定容至200ml，按0.2ml/10g.bw体积给大鼠灌胃，每日1次，连续30天。对照组灌胃给予等体积蒸馏水。

1.4仪器与试剂：

紫外-可见分光光度计、电子天平、数显游标卡尺(精密度0.01mm)、微量注射器(50μl)、CO₂培养箱、恒温水浴箱、离心机、连续光谱酶标仪、显微镜、玻片架、200目筛网、手术器械、秒表、一次性定量取血管、24孔和96孔细胞培养板。

绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、小牛血清、Hanks液、青链霉素、ConA、1％冰醋酸、1mol/L HCL溶液、酸性异丙醇(96ml异丙醇加1mol/L盐酸4ml)、SA缓冲液、MTT液、PBS缓冲液、补体(豚鼠血清)、琼脂糖、都氏试剂、YAC-1细胞、乳酸钠、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲基硫酸盐、氯化型辅酶I、0.2mol/LTris-Hcl缓冲液、1％NP40、印度墨汁、1％碳酸钠溶液、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液等。

1.5实验方法：

1.5.1脏器/体重比值测定：称重后处死小鼠，取出脾脏和胸腺，在电子分析天平上称重，计算脏/体比值。

1.5.2迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法)

小鼠腹腔注射2％(V/V)SRBC(0.2ml/鼠)，致敏后4天测量左后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射20％(V/V)SRBC，每鼠注射20μl，注射后24小时测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取均值。以攻击前后足跖厚度差值＜足跖肿胀度)来表示DTH的程度。

1.5.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)

无菌取脾，制备脾细胞悬液，用Hanks液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，将细胞悬浮于2ml完全培养液中，用RPMI1640培养液调整细胞浓度为5×10⁶个/ml将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加入50μl ConA液，另一孔作为对照，置5％CO₂、37℃培养箱中培养72小时。培养结束前4小时，每孔吸取上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的R.PMI1640完全培养液，同时加入MTT50μl，继续培养4小时。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打均匀使紫色结晶完全溶解，在570nm波长处测定OD值，以加ConA孔的OD值减去不加ConA孔的OD值表示淋巴细胞增殖能力。

1.5.4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)

取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心(2000r/min)10min，将压积SRBC用生理盐水配成2％(v/v)的细胞悬液，每鼠富强注射0.2ml。将免疫后4天的小鼠处死，取脾，制成细胞悬液。将表层培养基加热溶解后与等量双倍Hanks液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加50μl 10％SRBC(v/v，用SA液配制)、25μl脾细胞悬液，迅速混匀后，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在玻片架上，CO₂培养箱温育1.5h，然后用SA液稀释的补体(1∶8)加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h后，计数溶血空斑数。

1.5.5小鼠脏器/体重比值及血清溶血素测定

小鼠腹腔注射SRBC五天后，摘眼球取血，离心取血清稀释150倍，进行半数溶血值测定。然后处死动物，取胸腺、脾脏称重，计算脏器/体重比值。同时制备脾细胞悬液，进行抗体生成细胞测定。

1.5.6小鼠碳廓清试验

小鼠尾静脉注射1∶4稀释的印度墨汁，每10g体重注射0.1ml，待墨汁注入立即计时，注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μl，并将其加到2ml Na₂CO₃溶液中，用紫外-可见分光光度计在600nm波长处以Na₂CO₃溶液作空白对照测光密度值(OD)。将小鼠处死，取肝和脾脏称重，计算吞噬指数。

吞噬指数a＝结束体重×K^1/3/(肝重+脾重)K＝(logOD₁-logOD₂)/(t₂-t₁)

1.5.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验

小鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1ml，间隔4小时处死，固定于鼠板上，剪开腹壁皮肤，注射生理盐水2ml，转动鼠板1分钟，吸出腹腔洗液1ml，分滴于2片玻片上，37℃温育30分钟，用生理盐水漂洗，晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，Giemsa染液染色10分钟，用蒸馏水漂洗晾干，用油镜镜检，计算吞噬率和吞噬指数。

吞噬百分率(％)＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数÷计数的巨噬细胞数×100％

吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数

1.5.8NK细胞活性测定

实验前24小时将靶细胞传代培养，应用前以Hanks液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为1×10⁵个/ml。小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，制备脾细胞悬液，用Hanks液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。弃上清液将细胞浆弹起，加入0.5ml灭菌水裂解红细胞，20秒后再加入0.5ml2倍Hanks液及8ml Hanks液，离心10min(1000r/min)，用1ml含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用1％冰醋酸稀释后计数，调整细胞浓度为2×10⁷个/mol将靶细胞加入96孔培养板，每孔100μl，试验孔加入100μl脾细胞(效靶比50∶1)，自然释放孔加入100μl培养液，最大释放孔加入100μl 1％NP40，370℃培养4小时，离心，取上清液100μl置96孔酶标板中，加入LDH基质液100μl，反应3分钟，以1mol/L的HCI终上反应，在酶标仪490nm处测定OD值。

NK细胞活性(％)＝(反应孔OD-自然释放孔OD)÷(最大释放孔OD-自然释放孔OD)×100％

1.6试验数据用Excel软件建立数据库，用stata软件进行统计分析。

2.结果

2.1本发明中药组合物对小鼠体重的影响

表3各组小鼠的初始体重

由表3可见，小鼠的初始体重在低、中、高剂量组和对照组之间比较均无显著性差异(p＞0.05)，即小鼠的初始体重在各组之间较为均衡。

表4各组小鼠的中期体重

表5各组小鼠的末期体重

表6各组小鼠体重增长

由表6可见，各组小鼠实验初、实验中期、实验末期小鼠体重及实验期间小鼠体重增长方差齐，单因素分析显示，各组小鼠的中期体重、末期体重和体重增加值与对照组比较均无显著性差异(p＞0.05)。

2.2本发明中药组合物对小鼠脏器/体重比值的影响

表7本发明中药组合物对小鼠脏器/体重比值的影响

由表3可见，本发明中药组合物高、中、低三个剂量组小鼠的脾脏/体重比值和和胸腺/体重比值与对照组比较均无显著性差异(p＞0.05)。

2.3本发明中药组合物对小鼠脏器/体重比值的影响

表8本发明中药组合物对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

由表8可见，低、中、高剂量组小鼠的足跖肿胀度与对照组比较有显著性差异(p＜0.01)。

2.4本发明中药组合物对小鼠淋巴细胞转化能力实验的的影响

表9本发明中药组合物对小鼠淋巴细胞转化能力实验的的影响

由表9可见，高、中、低剂量组小鼠的脾淋巴细胞增殖能力与对照组比较均无显著性差异(p＞0.05)。提示本发明中药组合物样品对小鼠淋巴细胞增殖能力无显著影响。

2.5本发明中药组合物对小鼠抗体生成细胞数的影响

表10本发明中药组合物对小鼠抗体生成细胞数的影响

由表10可见，本发明中药组合物高、中、低剂量组小鼠的抗体生成细胞数与对照组比较均有显著性差异(p＜0.01和＜0.05)。

2.6本发明中药组合物对小鼠半数溶血值(HC₅₀)的影响

表11本发明中药组合物对小鼠半数溶血值(HC₅₀)的影响

由表11可见，本发明中药组合物高、中、低剂量组的小鼠的半数溶血值(HC₅₀)与对照组比较均有显著性差异(p＜0.01和＜0.05)，即本发明中药组合物物高、中、低剂量组对小鼠血清溶血素水平与对照组均有显著性差异(p＜0.01和＜0.05)。

2.7本发明中药组合物对小鼠小鼠单核-巨噬细胞碳廓清吞噬指数的影响

表12本发明中药组合物对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清吞噬指数的影响

由表12可见，本发明中药组合物高、中剂量组可显著增强小鼠单核-巨噬细胞碳廓清吞噬指数(p＜0.05)，低剂量组对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清吞噬指数与对照组比较无显著性差异(p＜0.05)

2.8本发明中药组合物对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

表13本发明中药组合物对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

由表13可见，本发明中药组合物高、中、低三个剂量组的腹腔巨噬细胞吞噬百分率和巨噬细胞吞噬指数与对照组比较均无显著性差异(p＞0.05)。

2.9本发明中药组合物对小鼠NK细胞活性的影响

表14本发明中药组合物对小鼠NK细胞活性的影响

表14可见，本发明中药组合物高、中、低剂量组小鼠的NK细胞活性与对照组比较均无显著性差异(p＞0.05)。

3.小结

实验结果表明，经口服给予0.225、0.450、1.350g/kg.bw(分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍)本发明中药组合物胶囊剂内容物30天，能显著提高小鼠的迟发型变态反应、半数溶血值、抗体细胞生成数及单核-巨噬细胞廓清的能力。该样品对小鼠的体重增长、脾脏/体重比值、胸腺/体重比值、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数、ConA诱导的小鼠的脾淋巴细胞转化能力和NK细胞活性无明显影响。根据《保健食品检验与评价技术规范》判定标准，本发明中药组合物有增强免疫力作用。

实验例3：本发明中药组合物胶囊辅助降血脂功能作用人体试食实验报告

1材料和方法

1.1样品

样品和安慰剂由北京嘉康泰生物技术研究所有限公司提供，为胶囊剂型.内容物性状为黄色粉末。两者外观、口味基本相同，450mg/粒，常温保存，供试验用。人体口服推荐剂量为每日2次，每次3粒。

1.2受试者选择

1.2.1纳入标准：受试者选自湖南省长沙市岳麓区雅湾社区.性不限。年龄18-65岁，单纯血脂异常的人群，保持平常饮食，半年内采血2次，如两次血清总胆固醇(TC)≥5.2mmol/L或甘油三酯(TG)≥1.65mmol/L。无明显脑、心、肝、肺、肾、血液疾患，无长期服药史，志愿者受试保证配合。

1.2.2受试者排除标准：妊娠或哺乳期妇女，对保健食品过敏者，合并有心、肝、肾和造血系统等严重疾病患者；短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果判断者；不符合纳入标准，未按照规定食用受试样品，无法判断功效或资料不全影响功效或安全性判定者。

1.3实验设计与分组

采用自身和组间两种对照设计。按受试者血脂水平随即分为本发明中药组合物胶囊试食组和安慰剂对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。试食组52例，对照组52例，按盲法进行试食试验。

1.4试验方法

受试者于2004年2月16日第一次采学测血脂，血脂异常者2004年04月06日第二次采血测血脂，两次均异常者纳入试验，试验于2004年04月18日开始，受试者每天服用本发明中药组合物胶囊或安慰剂2次，每次3粒，连续服用45天。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。

2观察指标

各项观察指标于试食试验开始及结束时各测定一次。

2.1安全性指标

2.1.1一般体格植查：试食试验前后，受试者精神状况、睡眠情况、大小便情况未见异常。试食组：男/女为31/21，年龄为49.98±5.34；对照组：男/女为28/24，年龄为50.46±5.78。

2.1.2血常规：红细胞计数、白细胞计数及分类、血红蛋白含量测定等。

2.1.3尿常规：pH值、白细胞、尿糖等。

2.1.4粪便常规。

2.1.5肝功能检查：血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)，谷病转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)测定。

2.1.6肾功能检查：血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、血糖(GLU)测定。

2.2功效指标：胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C).

3.结果判定

3.1L TC降低＞10％，TG降低＞15％，HDL-C上升＞0.104mol/L；各功效观察指标试验前后自身比较和试食后组间比较均有统计学意义，方可判断该指标阳性。

3.1血清胆固醇、甘油三酯指标阳性，高密度脂蛋白胆固醇不显著低于对照组，可判定受试样品具有辅助降血脂功能；血清胆固醇、甘油三酯指标中一项阳性，高密度脂蛋白胆固醇不显著低于对照组，可判定受试样品具有辅助降低胆固醇或辅助降低甘油三酯功能。

3.2统训学处理

资料结果用均数±标准差表示，自身配比资料采用配对t检验，实验组和对照组之间在方差齐性的前提下，均势比较采用成组t检验，否则进行变量转化后满足方差齐性后采用t检验，如果方差仍然不齐，采用秩和检验。

5结果

51安全性观察

5.1.1试食试验前后血常规指标变化情况

表15试食试验前后血常规指标变化情况

由表15结果可知，试食样品前、后试食组及对照组血常规变化值均在正常范围内。

2.1.2试食试验前后肝功能指标变化情况

表16试食试验前后肝功能指标变化情况

由表16结果可知，试食样品前、后试食组及对照组血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)均在正常值范围内，表明每日2次，每次3粒，连续服用45天本发明中药组合物胶囊剂对肝功能没有影响。

2.1.3试食试验前后肾功能指标变化情况

表17试食试验前后肾功能指标变化情况

由表17结果可知，，试食样品前、后试食组及对照组血清肌酐(Cr)、血糖(GLU)、血清尿素氮(BUN)均在正常值范围内，表明每日2次，每次3粒，连续服用45天本发明中药组合物胶囊剂对肾功能没有影响。

2功效观察

试食试验前后血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)水平变化情况见表18、19和表20。实验前，对照组和试食组血清TC、TG、HDL-C水平比较，无统计学意义，提示两组之间具有可比性。试验后，自身比较，试食组试食后TC、TG与试食前比较，差异有显著性意义(P＜0.01)，对照组试食后TC、TG与试食前比较差异无显著性(P＞0.05)。试食后试食组TC、TG与对照组比较，差异有显著性意义(P＜0.01)。且试食后试食组HDL-C与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。提示本发明中药组合物受试样品具有辅助降血脂功效。

表18试食试验前血清TC、TG、HDL-C水平情况

表19试食试验后血清TC、TG、HDL-C水平变化情况

注：^*与试食前比较P＜0.01，^#与对照组比较P＜0.01

表20试食前后血清TC、TG、HDL-C水平变化率

指标	对照组	试食组
			TC(mmol/L)	4.07	17.28
TG(mmol/L)	-1.24	30.63
			HDL-C(mmol/L)	0.07	0.10

3、小结

采用自身对照法及组间对照法，选择身体健康状况良好的志愿受试者104例，随机分为本发明中药组合物胶囊试食组(52例)和安慰剂对照组(52例)，服用受试药物45天，结果表明，服用本发明中药组合物胶囊试食组自身配对比较，试验组试食后TC、TG与试食前比较，差异有显著性意义(P＜0.01)，对照组试食后TC、TG与试食前比较差异无显著性(P＞0.05)。试食后试食组TC、TG与对照组比较，差异有显著性意义(P＜0.01)。且试食后试食组HDL-C与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。提示本发明中药组合物受试样品具有辅助降血脂功效。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。实施例6～11所用的罗布麻提取物取自实施例1，沙棘果提取物取自实施例2，丹参提取物取自实施例3，决明子提取物取自实施例4，银杏叶提取物取自实施例5。

实施例1罗布麻提取物的制备

取罗布麻叶100kg，清洗，晾干，粉碎，加水超声提取3次，第一次加6倍量水，第二、三次加4倍量水，每次提取30min，提取温度为70℃，滤过，合并滤液；50℃减压浓缩至相对密度1.10-1.20的清膏；放冷，加入95％乙醇，使含醇量达到80％，搅匀，静置2小时，沉淀，过滤；沉淀物在80摄氏度干燥，即得；

共制备罗布麻提取物5.42kg，本实施例制备的罗布麻提取物，总黄酮为6.8g/100g，重金属小于10mg/100g，砷含量小于2mg/100g，铅含量小于2mg/100g，干燥失重为3.6％。

实施例2沙棘果提取物的制备

取新鲜的沙棘200kg，清洗，榨汁，放置2.5天，滤过分离，过滤液在喷雾干燥器进口温度为180-200℃，出口温度为70-90℃条件下进行喷雾干燥，即得；

共制备沙棘果提取物5.42kg，本实施例制备的沙棘果提取物，异鼠李素含量为12.8％，水分为2.82％，砷含量小于0.05mg/100g，铅含量小于0.1mg/100g，铜含量小于1.0mg/100g。

实施例3丹参提取物的制备

取丹参100kg，洗净，晾干，粉碎，加75％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，55℃减压浓缩，浓缩至相对密度为1.20-1.30的清膏，清膏在喷雾干燥器进口温度为180-200℃，出口温度为70-90℃，水分8％以下条件下，进行喷雾干燥，喷雾干燥得到的颗粒粉碎，过80目筛，即得；

共制备丹参提取物9.72kg，本实施例制备的丹参提取物，丹参酮II含量6.5％，重金属小于10mg/100g，砷含量小于2mg/100g，铅含量小于2mg/100g，水分4.4％。

实施例4决明子提取物的制备

取决明子100kg，洗净，晾干，粉碎，加50％乙醇回流提取3次，每次1小时，第一次加6倍50％乙醇，第二次、第三次分别加4倍量50％乙醇，合并提取液，滤过，55℃减压浓缩，浓缩至相对密度为1.20-1.30的清膏，清膏在喷雾干燥器进口温度为180-200℃，出口温度为70-90℃，水分8％以下条件下，进行喷雾干燥，喷雾干燥得到的颗粒粉碎，过80目筛，即得；

共制备决明子提取物8.93kg，本实施例制备的决明子提取物，总蒽醌为3.54g/100g，重金属小于10mg/100g，砷含量小于2mg/100g，铅含量小于2mg/100g，干燥失重为3.61％，灰分为2.95％。

实施例5

取银杏叶100kg，洗净，晾干，粉碎，加银杏叶10倍量的70％乙醇回流提取3次，每次45分钟，合并提取液，滤过，滤液真空减压浓缩至膏状，加入银杏叶3倍量的水溶解，静置48小时，抽取上清液反复加水沉降3次，弃去上清液，下层混悬物浓缩后加70％乙醇溶解，溶液加至聚酰胺柱，分别以水、95％乙醇依次洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩后在喷雾干燥器进口温度为160-180℃，出口温度为70-90℃，水分6％以下条件下进行喷雾干燥，干燥得到的颗粒粉碎，过80目筛，即得；

共制备银杏叶提取物4.67kg，总黄酮中为36.8mg/g，总内酯为7.5mg/g，重金属小于10mg/100g，砷含量小于2mg/100g，铅含量小于2mg/100g，干燥失重为3.62％，灰分为2.98％。

实施例6本发明中药组合物胶囊剂的制备

以上制备1000粒胶囊；

制备工艺：

1)按配方称取罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物、银杏叶提取物，粉碎，过80目筛；

2)按配方比例称取微粉硅胶、微晶纤维素、硬脂酸镁加入原料中，混合均匀，备用；

3)填充胶囊：全自动胶囊填充机填充0号胶囊，0.45g/粒。

实施例7本发明中药组合物片剂的制备

以上制备1000片；

制备工艺：

1)将罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物、银杏叶提取物分别粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原辅料。

3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。

4)将罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物、银杏叶提取物、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

5)过20目筛制颗粒。

6)颗粒在60℃的条件下烘干。

7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。

8)取样，半成品化验。

9)按照化验确定的片重压片。

10)成品全检，包装入库

实施例9本发明中药组合物颗粒剂的制备

以上制备1000包颗粒；

制备工艺：

1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物、银杏叶提取物分别粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原辅料。

3)将罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物、银杏叶提取物与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材，

4)过20目筛制颗粒。

5)颗粒在60℃的条件下烘干。

6)干颗粒过18目筛整粒。

7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。

8)包装，成品全检，包装入库。

实施例10本发明中药组合物胶囊剂的制备

以上制备1000粒胶囊；

制备工艺：

1)按配方称取罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物、银杏叶提取物，粉碎，过80目筛；

2)按配方比例称取微粉硅胶、微晶纤维素、硬脂酸镁加入原料中，混合均匀，备用；

3)填充胶囊：全自动胶囊填充机填充0号胶囊，0.45g/粒。

实施例11本发明中药组合物胶囊剂的制备

以上制备1000粒胶囊；

制备工艺：

1)按配方称取罗布麻提取物、沙棘果提取物、丹参提取物、决明子提取物、银杏叶提取物，粉碎，过80目筛；

2)按配方比例称取微粉硅胶、微晶纤维素、硬脂酸镁加入原料中，混合均匀，备用；

3)填充胶囊：全自动胶囊填充机填充0号胶囊，0.45g/粒。

Claims (10)

1.一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物，由下述重量份配比的原料制成：

2.根据权利要求1所述的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物，其特征在于，由下述重量份配比的原料制成：

3.根据权利要求2所述的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物，其特征在于，由下述重量份配比的原料制成：

4.根据权利要求1或2或3所述的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物的剂型为口服制剂。

5.根据权利要求1或2或3所述的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物的剂型为胶囊剂。

6.根据权利要求1或2或3所述的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物，其特征在于，

所述的罗布麻提取物的制备方法为：取罗布麻叶，清洗，晾干，粉碎，加水超声提取3次，第一次加6倍量水，第二、三次加4倍量水，每次提取30min，，提取温度为70℃，滤过，合并滤液；50℃减压浓缩至相对密度1.10-1.20的清膏；放冷，加入95％乙醇，使含醇量达到80％，搅匀，静置2小时，沉淀，过滤；沉淀物在80摄氏度干燥，即得；

通过该方法制备的罗布麻提取物，总黄酮含量不小于4g/100g，重金属小于10mg/100g，砷含量小于2mg/100g，铅含量小于2mg/100g，干燥失重不大于5.0％。

7.根据权利要求1或2或3所述的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物，其特征在于，

所述的沙棘果提取物的制备方法为：取新鲜的沙棘果，清洗，榨汁，放置2-3天，滤过分离，过滤液在喷雾干燥器进口温度为180-200℃，出口温度为70-90℃条件下进行喷雾干燥，即得；

通过该方法制备的沙棘果提取物，异鼠李素含量不小于10％，水分不大于3.5％，砷含量小于0.05mg/100g，铅含量小于0.1mg/100g，铜含量小于1.0mg/100g。

8.根据权利要求1或2或3所述的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物，其特征在于，

所述的丹参提取物的制备方法为：取丹参，洗净，晾干，粉碎，加75％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，60℃以下减压浓缩，浓缩至相对密度为1.20-1.30的清膏，清膏在喷雾干燥器进口温度为180-200℃，出口温度为70-90℃，水分8％以下条件下，进行喷雾干燥，喷雾干燥得到的颗粒粉碎，过80目筛，即得；

通过该方法制备的丹参提取物，丹参酮II含量不小于5％，重金属小于10mg/100g，砷含量小于2mg/100g，铅含量小于2mg/100g，水分不大于5.0％。

9.根据权利要求1或2或3所述的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物，其特征在于，

所述的决明子提取物的制备方法为：取决明子，洗净，晾干，粉碎，加50％乙醇回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，60℃以下减压浓缩，浓缩至相对密度为1.20-1.30的清膏，清膏在喷雾干燥器进口温度为180-200℃，出口温度为70-90℃，水分8％以下条件下，进行喷雾干燥，喷雾干燥得到的颗粒粉碎，过80目筛，即得；

通过该方法制备的决明子提取物，总蒽醌含量不小于1.0g/100g，，重金属小于10mg/100g，砷含量小于2mg/100g，铅含量小于2mg/100g，干燥失重不大于5.0％，灰分不大于5.0％。

10.根据权利要求1或2或3所述的一种具有降血脂和增强免疫力作用的中药组合物，其特征在于，

所述的银杏叶提取物的制备方法为：取银杏叶，洗净，晾干，粉碎，加银杏叶10倍量的70％乙醇回流提取3次，每次45分钟，合并提取液，滤过，滤液真空减压浓缩至膏状，加入银杏叶3倍量的水溶解，静置48小时，抽取上清液反复加水沉降3次，弃去上清液，下层混悬物浓缩后加70％乙醇溶解，溶液加至聚酰胺柱，分别以水、95％乙醇依次洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩后在喷雾干燥器进口温度为160-180℃，出口温度为70-90℃，水分6％以下条件下进行喷雾干燥，干燥得到的颗粒粉碎，过80目筛，即得；

通过该方法制备的银杏叶提取物，总黄酮含量不小于24mg/g，总内酯含量不小于6mg/g，重金属小于10mg/100g，砷含量小于2mg/100g，铅含量小于2mg/100g，干燥失重不大于5.0％，灰分不大于5.0％。