CN109106760A - 肉苁蓉苯乙醇苷改善睡眠的新用途及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药肉苁蓉中活性成分苯乙醇苷抗失眠的药理作用及其应用，尤其涉及苯乙醇苷的制备及在治疗失眠的药物和保健食品方面的应用。本发明通过药理实验表明苯乙醇苷具有较强的改善睡眠功能的作用。本发明中的苯乙醇苷在改善睡眠功能方面有较好的活性，副作用小，价格便宜，具有较好的成药性，可单独或与其它药物组合用于制备改善睡眠功能的药物。可与药学或食品方面可接受的载体或赋形剂制成颗粒剂、胶囊和片剂等剂型。

Description

肉苁蓉苯乙醇苷改善睡眠的新用途及其应用

技术领域

本发明涉及中药肉苁蓉中活性成分苯乙醇苷的药理作用及其应用，具体涉及到肉苁蓉苯乙醇苷的制备及以肉苁蓉苯乙醇苷为活性成分在改善睡眠功能药物和保健食品中的用途。

背景技术

失眠是临床最为常见的睡眠障碍类型，通常指患者对睡眠时间和（或）质量不满足并影响日间社会功能的一种主观体验（中国成人失眠诊断与治疗指南［J］．中华神经科杂志，2012，45(5)：534-540．）。由于社会生活节奏的加快和工作压力的不断增大，失眠成为困扰人们生活的最常见的疾病之一。现代医学治疗失眠常以镇静催眠药物为主，由于镇静催眠类药物诱导产生非生理性睡眠，故长期服用所伴随产生的毒副作用反而对患者的身心健康造成了极大危害。因此，利用中药具有疗效好、毒副作用小的优势进行药补是我国传统医学的宝贵经验。亟需研究开发一种针对性强，副作用低，并且适用于制备改善睡眠功能的药物和保健食品的中药有效成分。

肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉CistanchedeserticolaY. C. Ma或管花肉苁蓉Cistanchetubulosa(Schenk) Wight 的干燥带鳞叶的肉质茎。前者亦称为荒漠肉苁蓉。性甘、咸，温。归肾、大肠经。具有补肾阳，益精血，润肠通便。用于肾阳不足，精血亏虛，阳痿不孕，腰膝酸软，筋骨无力，肠燥便秘的治疗（国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部.北京：人民卫生出版社，2015.）。现代药理研究证明肉苁蓉具有抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤、增强机体免疫力等药理作用（陈飞，陈卓，邢雪飞，刘素香，张铁军，陈常青. 肉苁蓉的研究进展[J]. 药物评价研究，2013，36(06)：469-475.）。肉苁蓉中主要有效化学成分为苯乙醇苷类，如松果菊苷、毛蕊花糖苷等；另外，尚含有木脂素及其苷类，如丁香树脂酚葡萄糖苷；苯甲醇苷类，如盐生肉苁蓉苷A、B、C以及单糖和多糖类成分。此外，还含有β-谷甾醇、胡萝卜苷、丁二酸、十三烷醇、咖啡酸糖脂、甜菜碱等（俞培忠. 肉苁蓉化学成分及其生物活性研究 [D].复旦大学，2008.）。其中补肾阳作用的有效成分为松果菊苷和毛蕊花糖苷等苯乙醇苷类成分（宋志宏，雷丽，屠鹏飞.肉苁蓉属植物的药理活性研究进展[J].中草药，2003(09)：113-115.）；润肠通便的主要有效成分为半乳糖醇（张百舜，赵学文，陈双厚，刘瑞华，程慧平.肉苁蓉分离部位通便作用的实验研究[J].中国中医药信息杂志，2003(11)：31-32.）。

根据相关规定可知有助于改善睡眠的常用中药及成分，如大枣（酸枣、黑枣）、酸枣仁、天麻、五味子、生地黄（熟地黄）、丹参、百合、栀子、柏子仁、首乌藤等中药可用于改善睡眠的保健食品（梁艺英.保健食品研发审评[M].北京：中国医药科技出版社，2012：595-597.）。其中酸枣仁、五味子、茯苓、天麻、灵芝、刺五加、远志、珍珠、百合等中药使用较多（雷蕾，欧阳亚楠，杨硕，等.国内改善睡眠类保健食品现状分析[J].中国现代中药，2015，17(10)：1091-1095.）。通过对文献图书进行检索，均未发现有对肉苁蓉及其有效成分对改善睡眠功能的报道。本发明对肉苁蓉中苯乙醇苷进行大量制备，首次探究肉苁蓉中苯乙醇苷是否具有改善睡眠功能，经过大量实验研究发现肉苁蓉苯乙醇苷具有较好的抗失眠作用。

发明内容

针对现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提供一种肉苁蓉中提取的苯乙醇苷的新用途，即肉苁蓉苯乙醇苷具有改善睡眠的功能，可用于制备抗失眠药物和保健品，对失眠疾病具有显著的治疗效果。研究结果表明苯乙醇苷为肉苁蓉中的主要活性成分，通过药理实验发现口服苯乙醇苷显示其具有较强抗失眠的作用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案。

1.肉苁蓉苯乙醇苷提取物的制备方法如下。

1）提取工艺：荒漠肉苁蓉饮片，粉碎成20-40目粗粉，称取1 kg，以12 L 70%乙醇，80℃回流浸提2次，每次2h；合并提取液，50 ℃减压浓缩至膏状，加少量水制成混悬液1 L，即得肉苁蓉提取溶液。

2）纯化工艺：取肉苁蓉提取溶液上三菱大孔树脂DIAION HP2MGL柱，树脂与生药量的体积比为1：1，大孔吸附树脂柱的径高比为 1∶9，先用 3 BV的水除杂，再用4 BV 的 60%乙醇洗脱，洗脱液50 ℃减压浓缩，在60 ℃和0.1 MPa的条件下真空干燥，即得肉苁蓉苯乙醇苷提取物151.6 g。经多次实验制得的肉苁蓉苯乙醇苷提取物，通过HPLC含量测定，提取物中松果菊苷和毛蕊花糖苷的质量分数均大于64.0%和18.0%，即肉苁蓉苯乙醇苷提取物中苯乙醇苷的质量分数以松果菊苷和毛蕊花糖苷计均大于82.0%。

2. 采用跑台力竭训练结合腹腔注射PCPA造成虚劳失眠模型，证明肉苁蓉苯乙醇苷具有抗失眠的生物活性。

3. 采用改善睡眠功能检验方法，利用肉苁蓉苯乙醇苷进行改善睡眠功能研究，证明肉苁蓉苯乙醇苷具有抗失眠的生物活性。

所述的苯乙醇苷纯度大于82%时，可用于制备治疗抗失眠的药物或保健食品。肉苁蓉苯乙醇苷可应用在制备改善睡眠功能药物和保健食品中，可单独或与其他药物组合治疗失眠，也可与药学或食品方面可接受的载体或赋形剂制成颗粒剂、胶囊和片剂等剂型。

与现有技术比，本发明的有益效果。

1.本发明制备肉苁蓉苯乙醇苷提取物中提取纯化方法跟现有技术比的优势，在制备过程中考察筛选出了最优参数数据，采用进口大孔吸附树脂柱（三菱大孔树脂DIAIONHP2MGL的小粒径产品SP2MGS。多次实验，通过HPLC含量测定，肉苁蓉苯乙醇苷提取物中苯乙醇苷的质量分数以松果菊苷和毛蕊花糖苷计均大于82.0%，得到高收率、高质量分数的肉苁蓉苯乙醇苷提取物。

2.本发明首次探究并发现了肉苁蓉新的药理作用，即肉苁蓉苯乙醇苷能够抗失眠，改善睡眠的新用途。

3.本发明首次将肉苁蓉苯乙醇苷应用于制备改善睡眠功能的药物和保健食品中，可单独或与其他药物组合治疗失眠，也可与药学或食品方面可接受的载体或赋形剂制成颗粒剂、胶囊和片剂等剂型。

附图说明

图1 小鼠血清5-HT含量比较。

图2 小鼠血清DA含量比较。

图3 小鼠血清ACTH含量比较。

图4 对戊巴比妥钠睡眠时间的影响。

图5 对戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响。

图6 对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施详细描述本发明。

实施例1 肉苁蓉中苯乙醇苷的制备和含量测定。

1.提取工艺：荒漠肉苁蓉饮片（批号：C170160，大连权健中药饮片有限公司），粉碎成20-40目粗粉，称取1 kg，以12 L 70%乙醇（体积比），80℃回流浸提2次，每次2h；合并提取液，50℃减压浓缩至膏状，加少量水制成混悬液1 L，即得肉苁蓉提取溶液。

2. 纯化工艺：取肉苁蓉提取溶液上D101大孔吸附树脂柱，树脂与生药量的体积比为1：1，大孔吸附树脂柱的径高比为 1∶9，先用 3 BV的水除杂，再用4 BV 的 60%乙醇洗脱，洗脱液50℃减压浓缩，在60 ℃和0.1 MPa条件下真空干燥，即得肉苁蓉苯乙醇苷提取物151.6 g，收率为15.16%。

3.肉苁蓉苯乙醇苷提取物的含量测定。

3.1 仪器与材料：高效液相色谱仪（Agilent HPLC 1260，安捷伦科技有限公司）；电子天平（SCP225D，artorius公司）；数控超声波清洗器（KQ-250 DE型，昆山市超声仪器有限公司）；松果菊苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号 111670-201706）、毛蕊花糖苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号 111530-201713）；肉苁蓉药材购于大连权健中药饮片有限公司，经辽宁中医药大学药学院康廷国教授鉴定为列当科植物荒漠肉苁蓉CistanchedeserticolaY. C. Ma的干燥带鳞叶的肉质茎。甲醇、甲酸，分析纯（天津市大茂化学试剂厂）。

3.2 色谱条件：ODS-2 HYPERSIL（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为甲醇（A）-0.1%甲酸水溶液（B）；梯度洗脱（0～17min：26.5:73.5，17～20min：29.5:70.5，20～27min：29.5:70.5）；检测波长330 nm，柱温30 ℃。在此色谱条件下待测组分可达到基线分离，理论塔板数以松果菊苷、毛蕊花糖苷计算均大于5000。

3.3对照品溶液的制备：取松果菊苷对照品、毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加50% 甲醇制成每1mL各含0.2mg的混合溶液，即得。

3.4供试品溶液的制备：取肉苁蓉苯乙醇苷提取物约1g ，精密称定，置100mL棕色量瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，摇匀，称定重量，浸泡30 min，超声处理40 min（功率250W，频率 35kHz)，放冷至室温，再称定重量，加 50% 甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。

3.5测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µL，注入液相色谱仪，测定，即得。

3.6结果：提取物中松果菊苷和毛蕊花糖苷的质量分数分别为67.2%和20.1%，则肉苁蓉苯乙醇苷提取物中苯乙醇苷（以松果菊苷和毛蕊花糖苷计）的质量分数为87.3%。

实施例2肉苁蓉苯乙醇苷改善虚劳失眠模型小鼠睡眠功能研究。

1. 实验材料。

1.1 动物。

ICR小鼠60只，雄性，体质量20～22g，6-8周龄，由辽宁长生生物技术有限公司提供（许可证号：SCXK(辽)2015-0001），动物置于室温（22±1）℃，相对湿度65%及正常昼夜节律调节光照时间环境下，食用标准饲料，自由饮水。

1.2 主要试剂及器材。

生理盐水（批号：1607211208，吉林省都邦药业股份有限公司）；对氯苯丙氨酸（美国 Sigma公司）；5-HT、DA、ACTH试剂盒（批号：201807，上海优选生物科技有限公司）；地西泮片（批号：20171005，济宁市安康制药有限责任公司）；肉苁蓉苯乙醇苷提取物（由实施例1制备）；TDZ4-WS低速台式离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；HH-S型电热恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）；KC-100型酶标分析仪（深圳凯特生物医疗电子科技有限公司）；FA-1004电子天平（上海精科天平厂）；SA101八跑道小动物跑台（江苏赛昂斯生物科技有限公司）。

2. 实验方法。

2.1建立虚劳失眠小鼠模型。

设计和选择良好的动物模型是催眠药物从临床前基础研究过渡到临床研究的关键环节之一。本实验模型采用跑台力竭训练结合腹腔注射PCPA造成虚劳失眠模型，探究肉苁蓉苯乙醇苷改善虚劳失眠模型小鼠的睡眠功能。

除空白组外，其他组小鼠进行30 min的小鼠跑台力竭训练(30 m/min)，每天1次，连续7 d。第8天腹腔注射PCPA (300 mg/kg) 混悬液，注射药物后，小鼠出现挛缩疼痛，持续30～60 min后症状缓解。依据小鼠体征变化和测定指标评价模型成功与否。

2.2实验分组及给药。

将60只小鼠，按随机原则，分为六组，每组10只，即空白组、模型组、苯乙醇苷低剂量组、苯乙醇苷中剂量组、苯乙醇苷高剂量组、阳性对照组。低剂量组（30 mg/kg），中剂量组（60 mg/kg），高剂量组（120 mg/kg）分别灌胃，以临床给药剂量的0.3、0.6、1.2倍作为实验动物的给药剂量（肉苁蓉药典用量6-10g，以低剂量6 g计算，人体重60 kg，人与小鼠给药剂量换算系数9.01，则小鼠给药剂量:100mg.kg（即1倍给药剂量）。空白组、模型组分别以相同体积蒸馏水灌胃，阳性对照药为地西泮，小鼠给药剂量为0.75 mg/kg。以上各组灌胃，每日1次，连续15d。

2.3标本采集及处理。

每组小鼠观察进食量/d、体重、精神、活动、体态、毛发及检测血清5-HT、DA和ACTH含量。治疗第15 d，各组小鼠禁食12h，断头取血。血液 4℃放置90min，以3500r/min转速离心10min，取血清，-20℃冰箱保存，待测。采用血清用酶联免疫分析法(ELISA)，按照试剂盒说明的操作程序测定血清 5-HT、DA和ACTH含量。

2.4统计学处理。

采用 SPSS 23.0统计软件进行分析处理，各项指标结果采用(x±SD)表示，组间比较采用单因素方差分析，以P < 0.05有统计学意义。

3. 实验结果。

3.1 小鼠体征变化。

造模2天后，小鼠出现易惊觉，食量减少，体重变轻，行动迟缓，身体蜷缩，毛色无光泽，皮肤黏膜苍白而凉，大鼠出现睡眠节律紊乱，表明虚劳失眠模型复制成功。然后开始给药治疗，经给药组灌胃后小鼠食量开始恢复正常，体重增加，行动正常，身体舒展，毛色有光泽，皮肤黏膜粉红，与正常小鼠比较无差别，小鼠睡眠节律恢复正常。

3.2 对血清5-HT、DA和ACTH水平的影响。

由图1-3可知，与空白组比较，模型组小鼠血清5-HT、DA和ACTH水平显著性降低(P<0.01)，表明造模成功；与模型组比较，苯乙醇苷低剂量组、苯乙醇苷中剂量组、苯乙醇苷高剂量组、阳性对照组均能显著升高5-HT和DA(P<0.01)。与模型组相比ACTH的含量都升高，其中阳性对照组和苯乙醇苷高剂量组与模型组比较有显著统计学意义(P<0.01)，苯乙醇苷低剂量组、苯乙醇苷中剂量组与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。苯乙醇苷高剂量组与阳性对照组比较，升高5-HT、DA和ACTH无显著性差异(P>0.05)。注：1：空白组；2：模型组；3：苯乙醇苷低剂量组；4：苯乙醇苷中剂量组；5：苯乙醇苷高剂量组；6：阳性对照组。与空白组比较，^△P<0.05，^△△P<0.01；与模型组比较*P<0.05，**P<0.01。

实施例3 采用改善睡眠功能检验方法评价肉苁蓉苯乙醇苷改善睡眠功能研究。

1. 实验材料。

1.1 动物。

ICR小鼠120只，雄性，体质量20～22g，6-8周龄，由辽宁长生生物技术有限公司提供（许可证号：SCXK(辽)2015-0001），动物置于室温（22±1）℃，相对湿度65%及正常昼夜节律调节光照时间环境下，食用标准饲料，自由饮水。

1.2 主要试剂。

肉苁蓉苯乙醇苷提取物（由实施例1制备），戊巴比妥钠（美国 Sigma公司），巴比妥钠（美国 Sigma公司）。

1.3 分组与剂量选择。

将120只小鼠，分 3 批用于实验，第 1 批动物用于直接睡眠实验和延长戊巴比妥钠睡眠时间实验，第 2 批动物用于戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验，第 3 批动物用于巴比妥钠睡眠潜伏期实验。每批动物按体重随机分为苯乙醇苷低剂量组、苯乙醇苷中剂量组、苯乙醇苷高剂量组和阴性对照组，每组 10 只动物。低剂量组（30 mg/kg），中剂量组（60 mg/kg），高剂量组（120 mg/kg）。按0.2 mL/10 g BW 经口灌胃，阴性对照组给予等量蒸馏水，每日灌胃 1 次，连续 30 d。

2. 实验方法。

按照卫生部《保健食品检验与评价技术规范》方法进行。改善睡眠功能检验包括：直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、巴比妥钠阈下剂量催眠实验和巴比妥钠睡眠潜伏期实验。

2.1 直接睡眠实验：观察给药组动物给予受试样品后，阴性对照组给予同体积蒸馏水后，是否出现睡眠现象。睡眠以翻正反射消失为指标。如超过(30～60)s不能翻正者，既认为翻正反射消失，进入睡眠。翻正反射恢复即为觉醒，翻正反射消失至恢复这段时间为动物睡眠时间。记录阴性对照组与给药组入睡动物数及睡眠时间。

2.2 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验：在直接睡眠实验的基础上进行，如直接睡眠实验为阴性，则进行延长戊巴比妥钠睡眠时间实验。做正式实验前先进行预实验，确定使动物100%入睡，但又不使睡眠时间过长的戊巴比妥钠剂量，用此剂量做正式实验。动物末次给药15min后，给各组动物腹腔注射戊巴比妥钠(本实验剂量为：44 mg/kgBW)，注射量为 0.1mL/10 g BW，以翻正反射消失为指标，观察受试样品能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。

2.3 戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验：做正式实验前先进行预实验，确定戊巴比妥钠阈下催眠剂量(该实验剂量为：59 mg/kgBW)，即90%左右小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥钠最大阈下剂量。动物末次给药15min后给各组动物腹腔注射戊巴比妥钠最大阈下催眠剂量，以小鼠翻正反射消失达 1 min以上作为入睡判断标准，记录各组入睡动物数和入睡动物发生率。

2.4 巴比妥钠睡眠潜伏期实验：做正式实验前先进行预实验，确定使动物 100%入睡，但又不使睡眠时间过长的巴比妥钠的剂量，用此剂量正式实验。动物末次给药15min后，给各组动物腹腔注射巴比妥钠(该实验剂量为：300mg/kgBW)，注射量为0.1 mL/10g BW，以翻正反射消失为指标，观察受试样品对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响。

2.5 统计学方法。

采用 SPSS 23.0统计软件进行方差分析和卡方检验分析处理，以P < 0.05有统计学意义。

2.6 结果判定。

如延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验三项实验中二项阳性，且无明显直接睡眠作用，可判定受试物具有改善睡眠功能作用。

3. 结果。

3.1 对小鼠体重的影响。

实验期间，各组小鼠生长良好活动正常。实验前后各剂量组体重与阴性对照组比较无差异(P>0.05)。表明该样品对小鼠的体重增长无明显影响。

3.2直接睡眠作用。

给药后，动物表现出了安静、自主活动减少等症状。但整个过程中各组小鼠灌胃后均未出现睡眠现象，入睡动物数和睡眠时间均为0，表明无直接催眠作用。

3.3 对戊巴比妥钠睡眠时间的影响。

在戊巴比妥钠的催眠作用下，各剂量组小鼠的睡眠时间均比阴性对照组延长，其中的中、高剂量组与阴性对照组的差异具有显著性(分别P<0.01和P<0.05)，提示该样品具有延长戊巴比妥钠睡眠时间的作用（图4）。注：1：阴性对照组；2：低剂量组；3：中剂量组；4：高剂量组。与阴性对照组比较 *P<0.05，**P<0.01。

3.4 对戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响。

各剂量组的动物入睡率高于阴性对照组，其中高剂量组与阴性对照组的差异具有显著性(P<0.05)，提示该样品与阈下剂量的戊巴比妥钠有协同催眠作用（图5）。注：1：阴性对照组；2：低剂量组；3：中剂量组；4：高剂量组。与阴性对照组比较 *P<0.05。

3.5 对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响。

各剂量组小鼠的睡眠潜伏期均比阴性对照组的缩短，且各剂量组与阴性对照组的差异均具有显著性差异(P<0.01和P<0.05)，提示该样品具有缩短巴比妥钠睡眠潜伏期的作用（图6）。注：1：阴性对照组；2：低剂量组；3：中剂量组；4：高剂量组。与阴性对照组比较 *P<0.05，**P<0.01。

实施例4 含肉苁蓉苯乙醇苷制剂的研究。

1 仪器和试剂：仪器有TDP-5T单冲压片机（上海冠联制药装备有限公司）；FA-1004型电子天平（上海精科天平厂）；水浴锅（巩义市予化仪器有限责任公司）；DHG-9146A型电热恒温鼓风干燥箱。实验中所用试剂均为分析纯，购于禹王试剂公司。

2 片剂制备：取实施例1所得肉苁蓉苯乙醇苷10 g，可压淀粉30g，用7mL 80%乙醇制成软材，以捏之成团，搓之即散做为成型标准成型，将制好的颗粒于60℃烘干处理12 h，过10目筛，筛选出颗粒，备用；将制好的颗粒称重，按照颗粒重量0.5%的量加入硬脂酸镁，以不同规格的压片机压片，分别制备片重为400mg/片、200mg/片和100mg/片的片剂，压力在16-18kg/片；片剂中每400mg含苯乙醇苷100mg。结合患者具体症状给药，建议每次3片（400mg/片），每日2次。

3 胶囊剂的制备：以上述制备好的颗粒，采用胶囊机装胶囊，制备400mg/囊的胶囊剂。结合患者具体症状给药，建议服用剂量为每次3粒，每日2次。

4 口服液的制备：取实施例1所得的肉苁蓉苯乙醇苷20g，加水 300mL溶解，加橙皮苷4mL，加单糖浆至1000mL得糖浆剂。结合患者具体症状给药，建议服用剂量每次15mL，每日2次。

实施例5苁蓉苯乙醇苷制剂具体临床案例。

下面通过具体临床案例对本发明的疗效进一步进行验证。

案例1：朱某，男，26岁。朱某为一名在读博士研究生。由于实验压力较大，常出现入睡困难，夜不能寐等症状。于是服用本专利片剂，感觉上述症状消除明显，且白天工作学习精力充沛。一般每次3片（400mg/片），每日2次，3-5天左右即可恢复正常，效果明显。

案例2：陈某，女，50岁。陈某为一名个体经营户同时抚养子女若干，由于生意繁忙使得睡眠时间较少，再加上生活琐事与孩子学业扰心，陈某常伴有心烦意乱，入睡困难，多梦等症状。于是服用本专利口服液，上述症状消除，睡眠质量明显提高。一般服用剂量每次15mL，每日2次，3-5天左右即可恢复正常，效果明显。

案例3：王某，男，71岁。王某已退休，因子女的事，加上本人性格多思多虑，使得王某经常出现失眠多梦的症状。于是服用本专利胶囊剂，改善了睡眠状况，失眠多梦症状消失。一般服用剂量为每次3粒，每日2次，3-5天左右即可恢复正常，效果明显。

以上所述仅为本发明的优选实施例，并不用于限制本发明，对其中部分技术特症进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.肉苁蓉苯乙醇苷改善睡眠的作用及其应用。

2.根据权利要求1所述的肉苁蓉苯乙醇苷改善睡眠的作用及其应用，其特征在于：所述的肉苁蓉苯乙醇苷制备方法如下：

1）提取工艺：荒漠肉苁蓉饮片，粉碎成20-40目粗粉，称取1 kg，以12 L 70%乙醇，80℃回流浸提2次，每次2h；合并提取液，50 ℃减压浓缩至膏状，加少量水制成混悬液1 L，即得肉苁蓉提取溶液；

2）纯化工艺：取肉苁蓉提取溶液上三菱大孔树脂DIAION HP2MGL柱，树脂与生药量的体积比为1：1，大孔吸附树脂柱的径高比为 1∶9，先用 3 BV的水除杂，再用4 BV 的 60%乙醇洗脱，洗脱液50 ℃减压浓缩，在60 ℃和0.1 MPa的条件下真空干燥，即得肉苁蓉苯乙醇苷提取物151.6 g，经多次实验制得的肉苁蓉苯乙醇苷提取物，通过HPLC含量测定，提取物中松果菊苷和毛蕊花糖苷的质量分数均大于64.0%和18.0%，即肉苁蓉苯乙醇苷提取物中苯乙醇苷的质量分数以松果菊苷和毛蕊花糖苷计大于82.0%。

3.根据权利要求1所述的肉苁蓉苯乙醇苷改善睡眠的作用及其应用，其特征在于：采用跑台力竭训练结合腹腔注射PCPA造成虚劳失眠模型，证明肉苁蓉苯乙醇苷具有抗失眠的生物活性。

4.根据权利要求1所述的肉苁蓉苯乙醇苷改善睡眠的作用及其应用，其特征在于采用改善睡眠功能检验方法，利用肉苁蓉苯乙醇苷进行改善睡眠功能研究，证明肉苁蓉苯乙醇苷具有抗失眠的生物活性。

5.根据权利要求1所述的肉苁蓉苯乙醇苷改善睡眠的作用及其应用，其特征在于所述苯乙醇苷纯度大于82%时，可用于制备治疗抗失眠的药物或保健食品。

6.根据权利要求1所述的肉苁蓉苯乙醇苷改善睡眠的作用及其应用，其特征在于所述肉苁蓉苯乙醇苷可单独或与其他药物组合应用于失眠的治疗。

7.根据权利要求1所述的肉苁蓉苯乙醇苷改善睡眠的作用及其应用，其特征在于，所述的肉苁蓉苯乙醇苷可与药学或食品方面可接受的载体或赋形剂制成颗粒剂、胶囊或片剂。