CN103933386B - 一种用于治疗血友病的复方血友胶囊及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗血友病的复方血友胶囊及其制备方法，制得的该复方血友胶囊以每1000粒计由以下中药原料组成：黄芪：117g，紫河车：35g，当归：35g，生地黄：140g，白芍：70g，苍术：70g，仙鹤草：70g，茜草：58g，白茅根：117g，川芎：53g，延胡索：58g，海马：35g，甘草：35g。制备方法是以海马、紫河车和延胡索三味粉碎成细粉，过筛，混匀；其余当归等十味分别以12倍量水煎煮三次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.30～1.35（60℃）的清膏，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎，制粒，装胶囊，共制成1000粒，即得。其组方合理，君、臣、佐、使配伍得当，共奏健脾益气，滋补肝肾、养血摄血之功效，疗效显著，具有广阔的临床应用前景。

Description

一种用于治疗血友病的复方血友胶囊及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种中药及其制备，特别是一种用于治疗血友病的复方血友胶囊及其制备方法。

背景技术

血友病是一种以三高著称(出血率高、死亡率高、致残率高)，严重危害世界各族人民健康，以遗传为主的出血性疾病。

血友病是凝血因子Ⅷ/Ⅸ缺乏，因此提高患者自身凝血因子活性，进行病因学治疗是其关键。本项目就探讨提高血友病自身凝血因子活性，进行病因学治疗。为治疗该病，刘教授进行了大量文献检索，发现血友病患者80％有腰膝酸软、关节肿痛、畸形、肌肉萎缩、面色不华、倦怠无力等症状，本病当属祖国医学的“血证”、“虚劳”等范畴。病因多因感受外邪、多食厚味、情志过激、劳倦过度等。血液生化于脾，藏受于肝，总统于心，输布于肺，化精于肾，脉为血之府，血液生化之后，在脉中运行不息，环周不休，以充润营养全身。各种原因致脉络损伤或血液忘行时，就会引起血液溢出脉外而成血证。所以其病多与肝、脾、肾及气血亏损有关，治疗当以健脾益气、滋补肝肾、养血摄血为主。对血证的治疗可归纳为治火、治气、治血三原则，应用凉血止血，收敛止血，活血止血。因血证之中以热迫血行所致者最多，故以凉血止血药为主。本病以先天不足，肾为先天之本，肾经亏虚；脾为后天之本，化源不足；肝主藏血，肝肾同源，其发病与三脏虚损密切相关。2004年，世界卫生组织(WHO)拟删除FⅧ、FⅨ凝血因子制剂。但由于采用基因治疗目前仍处在研究阶段，别无它法，探讨新疗法势在必行。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种用于治疗血友病的复方血友胶囊及其制备方法。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种用于治疗血友病的复方血友胶囊，其特征在于，制得的该复方血友胶囊以每1000粒计，由以下中药原料组成：黄芪：117g，紫河车：35g，当归：35g，生地黄：140g，白芍：70g，苍术：70g，仙鹤草：70g，茜草：58g，白茅根：117g，川芎：53g，延胡索：58g，海马：35g，甘草：35g。

上述用于治疗血友病的复方血友胶囊的制备方法，其特征在于，以海马、紫河车和延胡索三味粉碎成细粉，过筛，混匀；其余当归等十味分别以12倍量水煎煮三次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.30～1.35(60℃)的清膏，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎，制粒，装胶囊，共制成1000粒，即得。

本发明的用于治疗血友病的复方血友胶囊，由黄芪、当归、川芎等十三味药材组成，具有健脾益气、滋补肝肾、养血摄血，应用于脾、肝、肾、气血虚引起的血症，具有提高各种凝血因子活性作用，主治西医血友病、血管性血友病等凝血因子缺乏症。

本发明的用于治疗血友病的复方血友胶囊，其组方合理，君、臣、佐、使配伍得当，共奏健脾益气，滋补肝肾、养血摄血之功效，经反复实践、修改，临床应用疗效显著，具有广阔的临床应用前景。

附图说明

图1是本发明的制备工艺流程图。

以下结合附图和实施例以及各实验对本发明作进一步的详细说明。

具体实施方式

一、用于治疗血友病的复方血友胶囊处方组成、来源、理论依据以及使用背景

本发明的用于治疗血友病的复方血友胶囊，其处方来源于申请人研发的煎剂经验方，经临床试验表明，其具有健脾益气、滋补肝肾、养血摄血，应用于脾、肝、肾、气血虚引起的血症，具有提高各种凝血因子活性作用，主治西医血友病、血管性血友病等凝血因子缺乏症。从2005年至今，随机接诊来自全国各地的血友病800余例，疗效颇佳，总有效率达85％以上，且无不良反应，长期用(3个月以上)未见肝肾损害，是一个案例有效的中药制剂。从长远讲可减轻广大患者的经济负担，使大多数患者可长期服药，以完成全部疗程。由此可见，为了造福广大患者，迫切需要将该组方制中成药胶囊制剂。

(一)、处方组成

以每1000粒胶囊计，由以下中药原料组成：黄芪：117g，紫河车：35g，当归：35g，生地黄：140g，白芍：70g，苍术：70g，仙鹤草：70g，茜草：58g，白茅根：117g，川芎：53g，延胡索：58g，海马：35g，甘草：35g。

【性状】本品为胶囊剂，内容物为黄棕色至棕褐色的颗粒，气微、味苦。

【功能主治】健脾益气、滋补肝肾、养血摄血，用于脾、肝、肾、气血虚引起的血证，具有提高各种凝血因子活性的作用，治疗西医血友病、血管性血友病等凝血因子缺乏症。

【规格】每粒装0.3g。

【用法用量】口服，一日3次，一次4粒。

【不良反应】尚不明确。

【禁忌】尚不明确。

【注意事项】

1.孕妇禁服。

2.对本品过敏者禁用，过敏体质者慎用。

3.本品性状发生改变时禁止使用。

4.请将本品放在儿童不能接触的地方。

5.如正在使用其他药品，使用本品前请咨询医师或药师。

制备方法参见图1，以海马、紫河车和延胡索三味粉碎成细粉，过筛，混匀；其余当归等十味分别以12倍量水煎煮三次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.30～1.35(60℃)的清膏，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎，制粒，装胶囊，共制成1000粒，即得。

(二)制备工艺研究

根据临床经验，考虑到制剂成型和服用量等因素，海马、紫河车、延胡索粉碎入药，因此对出粉率进行考察。当归、川芎、白芍、生地黄、苍术、仙鹤草、茜草、白茅根和甘草水提取入药。

1、出粉率的考察：按处方量称取海马30g、紫河车30g、延胡索50g，共三份，粉碎成细粉(80目)，称取细粉量，计算收粉率，结果见表1。

表1：实验室粉碎出粉率考察

从表1可以看出，出粉率稳定。

2、煎煮工艺参数的确定

煎煮工艺研究中，以中药饮片为原料，在此基础上，进行以芍药苷和干膏率为指标的正交试验，考察因素为：加水量、煎煮时间和煎煮次数。因素水平见表2。

表2：水提取工艺正交试验因素水平表

干膏率测定：煎煮液，过滤，记录体积，精密吸取50ml，水浴蒸干，参照中国药典之浸出物测定法恒重的方式，在105℃干燥6小时，在干燥器中放凉称重，计算。

芍药苷测定：从各滤液中吸取7.0ml置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，进样。色谱条件：乙腈—0.1％磷酸(14：86)，检测波长：230nm。

试验方法：取方中水提取药材65.5g，共九份，按照正交表进行试验，结果见表3。

对表中的干膏数据进行直观分析，从极差角度看，各因素对干膏率的影响依次为：B>A>C，即加水量>煎煮时间>煎煮次数。最优工艺为：煎煮3次，加水量8倍，煎煮1.0小时。对芍药苷数据进行直观分析，从极差角度看，各因素对芍药苷含量的影响依次为：C>A>B，即煎煮次数>煎煮时间>加水量。最优工艺为：煎煮时间1.5小时，加水量12倍，煎煮次数3次。

方差分析：

根据正交试验数据(表3)，对实验结果进行方差分析，结果见表4、表5。

表3：正交试验结果

综合评分＝干膏率/干膏率的最大值×30+芍药苷/芍药苷的最大值×70。

表4：方差分析表

*F_0.05(2，2)＝19.00

综上所述：结合大生产的成本需求，最佳的提取工艺为：煎煮时间1小时，加水量12倍，煎煮次数3次。

验证实验

取1.5个实验处方量药材饮片，三份，煎煮3次，每次加水12倍量，每次煎煮1小时，煎煮液滤过，按确定的干膏率测定方法和芍药苷测定方法，计算干膏率和芍药苷得量，结果见表4，平均干膏率24.87％，说明优选工艺稳定，重复性好。

表5：验证试验

实验编号	干膏率/％	芍药苷量(mg)
			1	24.95	276.84
2	22.79	306.38
			3	23.88	225.27
平均值	23.87	269.50

本处方中的打粉药材实际出粉率93.7％，打粉药材共22g，共出细粉20.6g，提取出膏率23.87％，提取药材131g，共出干膏31.3g，原一个处方共出干粉51.3g，胶囊装量为0.3g每粒，即1000粒处方量，约为原汤剂处方的5.8倍。

(三)中试制备：

以上十三味，海马、紫河车和延胡索三味粉碎成细粉，过筛，混匀；其余当归等十味分别以12倍量水煎煮三次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.30～1.35(60℃)的清膏，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎，制粒，装胶囊，共制成1000粒，即得。三批中试数据见表6。

表6：中试工艺参数总结

本处方为13味中药材经过提取制成的胶囊剂，根据药材所含不同成分，采取相应的提取方法，在提取工艺中对各工艺参数进行了考察，并确定了最佳提取工艺参数，按此条件进行了实验，结果表明本工艺较稳定。

(四)理论依据(方义分析)

血友病是一种以三高著称(出血率高、死亡率高、致残率高)，严重危害世界各族人民健康，以遗传为主的出血性疾病。

方中的黄芪、紫河车为君药：

黄芪：甘，微温，入肺、脾经，功效：补气升阳，固表止汗，托疮排脓，利尿退肿；

紫河车：甘，咸，入心、肺、肾经，补益阴阳气血。二者为君药，健脾补肾，益气养血。

当归、生地、白芍、苍术为臣药：

当归：苦、温，入肝、心、脾经，功效：补血调经，活血止痛，润肠通便；

生地：甘、苦、寒，入心肝肾经，功效：清热、凉血、滋阴；

白芍：酸，微寒，入肝经，功效：柔肝止痛，养血敛阴；

苍术：辛、苦、温，入肝、胃经，功效：燥湿健脾。以上四药协助君药，健脾补肝、益气养血、滋阴凉血。

仙鹤草、茜草、白茅根、川芎、元胡、海马为佐药：

仙鹤草：苦、凉，入肺、肝、脾经，功效为止血；

茜草：苦、寒，入肝经，功效：凉血、止血、祛瘀通淋；

白茅根：甘、寒，入肺、胃经，功效：凉血、止血，清热利尿。

以上三药具有凉血、止血、清热之功效，协助君臣药治疗时清热为主，血清则凉，可使血液不溢于脉外。

川芎：辛、温，入肝、胆经，功效：活血通经、祛风止痛；

元胡：辛、苦、温，入肝、肺经。以上二药可防止君臣药补气过度，脉管滞涩不畅而血瘀，符合中医补中有行之理论。

海马：甘、温，入肾经，功效：温肾壮阳，化结消肿。上药温阳通脉，防止凉血太过，脉络不通，同时补脾肾二本，以生精血。

甘草为使药：

甘草：甘、平，入十二经，功效：补脾益气，解毒缓急，止咳祛痰，通行二十经脉，和中之国老，引药直达病所。

根据以上处方的方义分析，该合理，君臣佐使配伍得当，共奏健脾益气，滋补肝肾、养血摄血之功效。

(五)质量研究的试验资料及文献资料

该方药味成份复杂，其性质各不相同，现将有关的文献资料及研究资料归纳总结如下：

5.1文献研究：

5.1.1当归：

当归主要含：

(1)挥发性成分：中性油组成，如：藁本内酯(Ligustilide)、正丁烯基内酯(n-Butyli-dene-phthalide)、2-甲基-十二烷-5-酮(2-methyl-dodecane-5-one)、苯乙酮(acetophenone)、对聚伞花素(P-cymene)、月桂烯(myrcene)、正丁基四氢化酜内酯(n-Butyli-tetrahydrophthalide)、正十二烷醇(dodecanol)等。酚性油组成，如：对-甲基苯甲醇(P-methyl-benzolcohol)、5-甲氧基-2，3-二甲苯酚(5-methoxyl-2,3-dicresol)、苯酚(phenol)、邻甲苯酚(o-cresol)、对甲苯酚(P-cresol)、愈创木酚(guaiacol)、2，3-二甲苯酚(2，3-dierdsol)、对乙苯酚(p-ethylphe-nol)、间乙苯酚(o-ethylphenol)、4-乙基间苯二酚(4-ethylresorcinol)、2，4-二羟基苯乙酮(2，4-dihy-droacetophenone)等。酸性油组成，如：邻苯二甲酸酐(phthalic anhy-dride)、肉豆蔻酸(myristic acid)、茴香酸(anisicacid)等。

(2)有机酸：当归根中含有阿魏酸(ferulic acid)、丁二酸(succinic acid)、烟酸(nicotinic acid)、香草酸(vanillic acid)、正二十四酸(n-tetracosanoic acid)、棕榈酸(palmitic acid)。

(3)糖类：含有蔗糖(sucrose)，果糖(fructose)和葡萄糖(glucose)，并分离出有抗补体活性的阿拉伯半乳聚糖(arabigalactan)，静止后认为有a(1→4)多聚半乳多糖结合阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖构成的中性糖链，并与肽类结合。

(4)维生素。含有维生素B12(vitamine B12)0.25～40ug/100g，维生素A(vitamineA)0.0675％。(5)氨基酸、尿嘌呤等碱性成分及多种为人体必需的无机元素等。

藁本内酯(Ligustilde)的结构式为：

现代药理研究表明：

(1)当归具有抗炎镇痛及抗损伤作用。当归水浸膏口服可抑制大鼠被动皮肤过敏PCA反应及漏出色素量。当归水煎液对多种致炎剂引起的急、慢性炎症均有显著的抑制作用，摘除双侧肾上腺后其抗炎作用仍然存在；并能降低大鼠炎症组织PGE2的释放量，降低豚鼠补体旁路溶血活性，但不能拮抗组织胺的致炎作用。

(2)本品水提物能降低血管通透性，小鼠口服185.9mg(生药)/kg对血管通透性的ID50与口服乙酰水杨酸钠201.1mg/kg作用相当，即其作用为后者1.1倍，且亦似乙酰水杨酸钠能抑制在血小板中致炎物质如5-HT的释放，从而产生消炎作用。.

(3)本品水提物及乙酰水杨酸钠对腹腔注入醋酸引起扭体反应的ID50分别为65.9(生药)mg/kg及114.3mg/kg，说明本品阵痛作用强度为乙酰水杨酸钠的1.7倍，当归口服或局部应用于不同原因引起的家兔急性浮肿，显示抗浮肿作用。

(4)抗菌作用：当归在试管内对大肠杆菌、伤寒及副伤寒、痢疾杆菌、霍乱弧菌、变形杆菌、甲型及乙型溶血性链球菌、白喉杆菌有轻度抑制作用。其挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、福氏痢疾杆菌、绿脓杆菌等感染小鼠预防性给药或感染后治疗，均有较好抑制作用。

(5)抗辐射损伤作用：预防性给予当归多糖对受辐射照射小鼠的造血组织有一定的辐射防护作用；当归多糖对受照小鼠的造血细胞亦有辐射防护作用。

(6)抗氧化和清除自由基的作用。其中所含阿魏酸通过直接消除自由基、抑制氧化反应和自由基反应，以及与生物膜磷脂结合保护膜脂质等多种机理拮抗自由基对组织的损害。根据有效成分性质及药理作用，本制剂以水提取入药。

5.1.2白芍

白芍干燥根中提取的有效成分是白芍总苷(total glucosides of paeonia，TGP)，包括芍药苷(paeoniflorin),经基芍药苷(hudroxy-paeoni-florin)、芍药花苷(paeonin)、芍药内醋苷(albi-florin)、苯甲酞芍药苷(benzoylpaeoniflorin)等。其中芍药苷的含量占总苷的90％以上。

芍药苷(Paeoniflorin)的结构式为：

现代药理研究表明：

(一)抗炎作用：实验表明，白芍总苷可以抑制大鼠角叉菜胶性足肿胀、弗氏完全佐剂引起的大鼠足爪肿胀以及大鼠佐剂性关节炎。进一步的研究发现，切除松果腺的大鼠给予白芍总苷，可使松果腺切除引发的足爪过度肿胀得以抑制。另外，白芍总苷可以对抗D一半乳糖胺或四氯化碳所致的小鼠肝损伤，如血清谷丙转氨酶升高、血清白蛋白下降及肝糖原含量下降，并可明显改善形态学上肝细胞的变性和坏死，而且对乙醇诱导的血清转氨酶的升高亦有抑制作用。

(二)免疫调节作用：在不同的病理状态下，白芍总苷对异常的免疫功能具有双向调节机制。在小鼠的实验中，对环磷酞胺降低的迟发型超敏反应有恢复作用，而对环磷酞胺增高的迟发型超敏反应则有抑制作用。在佐剂型关节炎大鼠模型、系统性红斑狼疮小鼠模型和多种肝损伤模型上，白芍总苷可在不同程度上调节机体的免疫功能紊乱，包括对免疫应答的多个环节产生作用，而且作用特点呈功能和浓度剂量依赖性的双向免疫调节。以水提取入药。

5.1.3黄芪：

黄芪含单糖、多糖、皂苷、黄酮、氨基酸、微量元素、蛋白质、核黄素、叶酸、维生素P、有机酸、香豆素、β-谷甾醇、胡萝卜素、羽扇豆醇、正十六醇、胆酸、甜菜碱等多种成分。

其黄酮主要为黄酮类、异黄酮类、二氢黄酮类，主要有山奈素、槲皮素、异鼠李素、鼠李柠檬素、熊竹素。

在黄芪及其同属近缘植物中共分离出四十余种三萜皂苷，其结构为四环三萜及五环三萜类，苷的糖多为葡萄糖、半乳糖、鼠李糖，多接于苷元3，6位。有些苷的某些羟基乙酰化。在膜荚黄芪中有乙酰黄芪苷Ⅰ(AcetylastragalosideⅠ)、黄芪苷(Astragaloside)Ⅰ～Ⅷ、异黄芪苷(Isoastragaloside)Ⅰ～Ⅱ、黄芪皂苷甲、乙、丙(Astragalus saponinⅠ、Ⅱ、Ⅲ)、环黄芪醇和大豆皂苷Ⅰ；蒙古黄芪中有黄芪苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ和大豆皂苷Ⅰ。黄芪的有机酸主要有香草酸、阿魏酸、异阿魏酸、对羟苯基丙烯酸、咖啡酸、绿原酸及棕榈酸。以水提取入药。

黄芪甲苷的结构式为：

黄芪能提高人体免疫力、具有抗疲劳、抗衰老作用，并且有扩张血管和扩张冠脉作用。

5.1.4川芎：

为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎。

化学成分：川芎含有挥发油、生物碱、酚性物质、有机酸、苯酞内酯及其他等成分。本制剂以水提取入药。

药理作用：

(1)对心、脑血管系统的作用：

对心脏的作用：川芎嗪对离体豚鼠灌流心脏产生剂量依赖性抑制心肌收缩和增加冠脉流量。川芎嗪对麻醉兔心肌缺血再灌注所致心肌损伤和心肌顿抑有保护作用。

对脑血管的作用：川芎嗪能显著增加缺血大鼠血浆中NO含量，降低MMS总量和组织中MDA的含量，降低血比黏度，对大鼠缺血性再灌注损伤具有保护作用。

对冠脉循环的作用：川芎水提物及生物碱能扩张冠脉，增加冠脉流量，改善心肌缺氧状况。给麻醉犬iv川芎嗪后，冠脉及脑血流量增多，冠脉、脑血管、外周阻力降低。川芎嗪也能显著增加清醒小鼠的冠脉流量。

对外周血管及血压的作用：川芎总生物碱、川芎嗪能降低麻醉犬的外周血管阻力。川芎生物碱、酚性部分和川芎嗪能抑制氯化钾和肾上腺素对家兔离体胸主动脉条的收缩作用。川芎浸膏、水浸液、乙醇水浸液、乙醇浸出液和生物碱对麻醉犬、猫、兔不论im或iv均有显著而持久的降压作用。水浸液给高血压犬或大鼠ig，也有明显的降压作用。

(2)对血小板聚集、血栓形成和血液粘滞度的影响川芎嗪能延长体外ADP诱导的血小板聚集时间，对已聚集的血小板有解聚作用，还有提高红细胞和血小板表面电荷，降低血粘度，改善血液流变的作用。阿魏酸能抑制血小板TXA2的释放，对其活性有直接的拮抗作用，还能升高血小板内cAMP含量，抑制血小板集。

(3)延缓慢性肾损害的作用：川芎嗪能够显著增加肾血流量，减轻兔肾热缺血模型的肾组织损伤，还能提高膜性肾炎家兔肾组织的SOD活性，减轻肾组织细胞的脂质过氧化损伤。

(4)对平滑肌的作用：家兔离体妊娠子宫实验证明，川芎浸膏能增强子宫收缩，形成痉挛，大剂量反而使子宫麻痹，收缩停止。

5.1.5甘草

系豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草G.inflata Bat、或光果甘草G.glabra L.的根及根茎。

化学成分：根和根茎主含三萜皂甙。其中主要的一种，谷称甘草甜素(glycyrrhizin)的，系甘草的甜味成分，是1分子的18β-甘草次酸(18β-glycyrrheticacid)和2分子的葡萄醛酸(glucuronic acid)结合生成的甘草酸(glycyrrhizic acid)的钾盐和钙盐。其他的三萜皂甙有：乌拉尔甘草皂甙(uralsaponin)A、B和甘草皂甙(licoricesaponin)A3、B2、C2、D3、E2、F3、G2、H2、J2、K2。又含黄酮素类化合物：甘草甙元(liquiritigenin)，甘草甙(liquiritin)，异甘草甙元(isoliquiritigenin)，异甘草甙(isoliquiritin)，新甘草甙(neoliquiritin)，亲异甘草甙(neoisoliquiritin)，甘草西定(licoricidin)，甘草利酮(licoricone)，刺芒柄花素(formononetin)，5-O-甲基甘草本定(5-O-methyllicoricidin)，甘草甙元-4＇-芹糖葡萄糖甙[liquiritigenin-4＇-qpiofur-anosyl(1→2)glucopyranoside，apioliquiritin]，甘草甙元-7，4＇-二葡萄糖甙(liquiritigenin-7，4＇-diglucoside)，新西兰牡荆甙Ⅱ(viceninⅡ)即是6，8-二-葡萄糖基芹菜素、芒柄花甙(ononin)，异甘草黄酮醇(isolicoflanonol)，异甘草甙元-4＇-芹糖葡萄甙。还含香豆精类化合物：甘草香豆精(glycycoum-arim)，甘草酚(glycyrol)，异甘草酚(isoglycyrol)甘草香豆精-7-甲醚(glycyrin)，新甘草酚(neoglycyrol)，甘草吡喃香豆精(licopyranocoumarin)，甘草香豆酮(licocoumarione)等。又含生物碱：5，6，7，8-四氢-4-甲基喹啉(5，6，7，8-teTCMLIBahydro-4-methylquinoline)，5，6，7，8-四氢-2，4-二甲基喹啉(5，6，7，8-teTCMLIBahydro-2,4-dimethylquinoline)，3-甲基-6，7，8-三氢吡咯并[1，2-a]嘧啶-3-酮(3-methyl-6,7,8-TCMLIBihydropyrrolo[1，2-]pyrimidin-3-one)。还含甘草苯并呋喃(licobenzofuran)，又名甘草新木脂素(liconeolignan)，β-谷甾醇(β-sitosterol)，正二十三烷(n-TCMLIBicosane)，正二十六烷(n-hexacos-ane)，正二十七烷(n-heptacosane)等。另含甘草葡聚糖GBW(glucan GBW)，三种中性的具网状内皮活性的甘草多糖(glycyrrigan)UA、UB、UC，多种具免疫兴奋作用的多糖(polysaccharide)GR-2a、GR-2Ⅱb、GR-2ⅡC和多糖GPS等。本制剂以水提取入药。

药理作用：

(1)对消化系统的作用

除去甘草甜素的浸膏及甘草中黄酮甙类对大鼠实验性溃疡有明显保护作用。

(2)肾上腺皮质激素样作用甘草浸膏、甘草甜素及甘草次酸对健康人及动物都有促进钠,水潴留的作用；小剂量甘草甜素(每只100ug)能使大鼠胸腺萎缩及肾上腺重量增加，产生糖皮质激素可的松样作用。大剂量时则糖皮质激素样作用不明显，只呈现盐皮质激素样作用。

(3)解毒作用

甘草浸膏及甘草甜素对某些药物中毒、食物中毒、体内代谢产物中毒都有一定的解毒能力。解毒作用的有效成分为甘草甜素，解毒机制为甘草甜素对毒物有吸附作用，甘草甜素水解产物葡萄糖醛酸能与毒物结合，以及甘草甜素有肾上腺皮质激素样作用，增强肝脏的解毒能力等方面因素综合作用的结果。④止咳平喘作用甘草次酸有明显的中枢性镇咳作用，大剂量的甘草次酸可使小鼠呼吸抑制。此外甘草甜素、甘草次酸盐尚有抗炎症及抗过敏、抗肝损伤、抗促癌、抗菌、抗艾滋病毒(甘草甜素)作用。

5.1.6地黄

玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的新鲜或干燥块根。具有滋阴清热；凉血补血之功效。

地黄的化学成分以甙类为主，其中又以环烯醚萜甙类为主。从鲜地黄分得的环烯醚萜甙有：益母草甙(leonuride)，桃叶珊瑚甙(aucubin)，梓醇(catalpol)等，以梓醇的含量最高。又含糖类：D-葡萄糖(D-glucose)，D-半乳糖(D-gluctose)，水苏糖(stachyose)，毛蕊花糖(verbascose)，以水苏糖的含量最高，达64.9％。还含人体必需的氨基酸以及葡萄糖胺(glucosamine)胡萝卜甙(daucosterol)，1-乙基-β-D-galacetoside)，腺甙(adenoside)及无机元素等。

梓醇和地黄苷结构式分别为：

地黄多糖可促进正常小鼠骨髓造血干细胞的增殖，刺激其造血功能。并对放射损伤有一定的保护和促进恢复作用。地黄低聚糖也能增强小鼠的造血干细胞。地黄多糖b有明显的免疫调节活性，能使Lewis肝癌细胞内P53基因的表达明显增加，从而对地黄多糖的抗肿瘤机理从基因水平上找到了依据。鲜地黄汁、鲜地黄及干地黄水煎液均有拮抗阿司匹林诱导的小鼠凝血时间延长，其中鲜地黄汁的作用明显强于干地黄。地黄水提取液有明显降压作用，对寒冷情况下的血压则有稳定作用。从而显示地黄对血压具有双向调节作用。另外，地黄低聚糖不仅可以调节实验性糖尿病紊乱，亦可调节生理性高血糖状态。地黄水提液还可抑制胃酸分泌和抗溃疡，有镇定作用等。本制剂中地黄以水煎入药。

5.1.7延胡索

为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥块茎。含叔胺、季胺类生物碱。如延胡索甲素、乙素等。此外，延胡索中尚含有大量淀粉，少量黏液质、树脂、挥发油，另含无机微量元素。还含有多糖、羟链霉素、豆甾醇、谷甾醇、油酸、亚油酸、亚麻酸、延胡索酸等。

药理作用：

(1)镇痛作用：延胡索以及其生物碱在镇痛方面的作用延胡索甲素，乙素，丑素对小鼠，大鼠，兔均具有镇痛作用，以乙素效果最为明显。

(2)镇静，催眠与麻醉作用。

(3)抗溃疡作用：

脱氢延胡索碱是延胡索中治疗冠心病的主要有效成分，具有扩张冠状血管，提高冠脉血流量，改善心肌营养性血流量，增强心肌耐缺氧能力以及保护心肌缺血，坏死等作用。

延胡索有效成分(延胡索乙素)药理作用明确且水溶性好，故采用水煎煮入药。

5.1.8海马

含有谷氨酸(glutamic acid)，天冬氨酸(aspartic acid)，甘氨酸(glycine)，脯氨酸(proline)，丙氨酸(alanine)，亮氨酸(leucine)等17种氨基酸；钙(Ca)，磷(P)，钠(Na)，钾(K)，镁(Mg)，铁(Fe)，锶(Sr)，硅(Si)等19种无机元素。另外还含有硬脂酸(stearicacid)，胆甾醇(cholesterol)。此外还推测含有胆甾二醇(cholesterdiol)。本制剂以打粉入药。

现代药理研究表明：

1.性激素样作用：海马的乙醇提取物，可延长正常雌小鼠的动情期，对去势鼠则可出现动情期，并使子宫及卵巢(正常小鼠)重量增加。海马(品种未注明)提取液表现雄性激素样作用，其效力较蛇床子、淫羊藿弱，但比蛤蚧强。

2、延缓衰老作用：海马能延长小鼠(NiH雄性小鼠)缺氧和存活时间，延长小鼠的游泳时间，显示了较好的抗应激力，增强体质和对外界不良刺激的抵抗力，增强动物的记忆力。海马对MAO-B(单胺氧化酶B)活性、过氧化脂质均有显著影响。海马配人参的制剂经药理实验表明，小鼠游泳持续时间明显延长，并能对抗氢化考的松引起小鼠胸腺萎缩的不良影响，表现出此制剂的补益作用。

5.1.9紫河车：

为健康人类的胎盘，胎盘含蛋白质、糖、钙、维生素、免疫因子、女性激素、助孕酮、类固醇激素、促性腺激素、促肾上腺皮质激素等。胎盘含有与血液凝固有关的成分，其中有类似凝血因子Ⅷ的纤维蛋白稳定因子，尿激酶抑制物(能抑制尿激酶活化纤维蛋白溶酶元的作用)和纤维蛋白溶酶元活化物。本制剂以粉末入药。

5.1.10苍术：

为北苍术Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.的干燥根茎。根茎含挥发油1.5％，主含α-桉叶醇、β-桉叶醇和苍术呋喃烃，还含β-芹子烯，左旋的α甜没药萜醇(α-bisabolol)，茅术醇，榄香醇，苍术酮，芹子二烯酮等。又含聚乙炔化合物：苍术呋喃烃醇(atractyoldinol)，乙酰基苍术呋喃烃醇(acetylα-tractylodinol)等水溶性成分。还含钴、铬、铜、锰、钼、镍、锡、锶、钒、锌、铁、磷、铝、锆、钛、镁、钙等无机元素。本制剂以水提取入药。

α-桉叶醇和β-桉叶醇的结构式如下：

药理作用：

1、抗缺氧作用：用氰化钾所致小鼠缺氧模型证明，苍术丙酮提取物750mg/kg灌胃能明显提高小鼠存活时间，降低相对死亡率。苍术的抗缺氧主要活性成分为β-桉叶醇。

2、对心血管的作用：苍术对蟾蜍心脏有轻度抑制作用，对蟾蜍后肢血管有轻微扩张作用。苍术浸膏小剂量静脉注射，可使家兔血压轻度上升，大剂量则使血压下降。

3、中枢抑制作用：苍术挥发油少量对蛙有镇静作用，同时使脊髓反射亢进；较大量则呈抑制作用，终至呼吸麻痹而死。其抑制成分主要是β-桉叶醇和茅苍术醇。茅苍术及其所含β-桉叶醇还有抗电击所致小鼠痉挛作用。

4、对肝脏的影响：苍术水煎剂每天10g生药/kg连续给小鼠灌胃7天，能明显促进肝蛋白的合成。生药及其所含苍术醇、苍术酮、B-桉叶醇对四氯化碳诱发的一级培养鼠肝细胞损害均有显著的预防作用。

5.1.11仙鹤草：

为蔷薇科植物龙牙草Agrimonia pilosa Ledeb.的干燥地上部分。

化学成分：仙鹤草全草含仙鹤草素(Agrimon-ins)，已知的有仙鹤草甲素(Agrimonin A)、仙鹤草乙素(Agrimonin B)、仙鹤草丙素、仙鹤草丁素、仙鹤草戊素、仙鹤草己素等6种。

尚含木犀草素-7-葡萄糖甙(Luteolin-7-glucoside)、芹菜素-7-葡萄糖甙(Apigenin-7-glucoside)、槲皮素(Quercetin)、大波斯菊甙(Cosmosiin)、金丝桃甙(Hyperoside)、芦丁(Rutin)、儿茶素(Catechin)；鞣花酸(Ellagic acid)、没食子酸(Gallic acid)、咖啡酸(Caffeic acid)；仙鹤草内酯(Agrimonolide)、香豆素(Coumarin)、欧芹酚甲醚(Osthole)、仙鹤草醇(Agri-monol)、鹤草酚(Agrimophol)及鞣质、甾醇、皂甙和挥发油等。本制剂以水提取入药。

药理作用：

1.止血作用现代药理研究结果对仙鹤草能否止血尚无定论，曾有报告，小鼠静脉注射仙鹤草素后，出血时间缩短45％.给104只兔分别静脉注射仙鹤草钠盐2mg/kg，可使血小板数量增加，血清钙含量增加及凝血时间缩短.以仙鹤草制成粉剂，用于外伤出血、内脏手术时出血或渗血，有肯定疗效.亦有报告认为，该品浸剂及仙鹤草注射液，不论体外或体内实验，均无促进血凝作用.该品所含仙鹤草素A、B、C及另一种酚性松脂酸，均无促血凝作用。

2、对心血管系统的作用

该品浸剂和仙鹤草素对离体蛙心，均有强心作用；能增加蛙和蟾蜍的心率和收缩强度，而水提取部分的醇提取物对离体蛙心则有抑制作用，仙鹤草乙醇浸膏给麻醉兔、犬静脉注射，可使血压上升，而其水提取部分的醇提取物则使家兔的血压下降；给兔和蛙后肢血管灌流，低浓度使血管收缩，高浓度则使血管扩张。仙鹤草浸剂及水提取物给兔耳血管灌流，低浓度时无影响，高浓度时则呈扩张反应，并能对抗肾上腺素的缩血管作用。

水提取物及酸水提取物对电刺激齿髓的家兔痛觉有抑制作用，仙鹤草素能降低小鼠和兔红细胞的脆性，略有降低大鼠基础代谢的作用，其醇溶性浸出物能兴奋呼吸中枢，对骨骼肌也有兴奋作用，能使已疲劳的骨骼肌恢复兴奋。

此外，尚有降血糖作用。

5.1.12茜草：

为茜草科植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根及根茎。

化学成分：根含蒽醌甙茜草酸(Rubierythrinic acid)、水解生成甙元茜素(Alizarin)及葡萄糖.尚含紫色素(紫茜素，Purpurin)、伪紫色素(伪紫茜素，Pseudopurpurin)、茜草色素(Munjistin)。本制剂以水提取入药。

药理作用：

1、止血作用：实验证明：该品有轻度止血作用，茜草根温浸液能缩短家兔出血和凝血时间，炒炭后作用更显著。

2.止咳、祛痰作用：茜草根煎剂给小鼠灌胃，有止咳、祛痰作用。

3.对平滑肌的作用：对离体兔回肠，茜草根煎剂能对抗乙酰胆碱的收缩作用.根的水提取物对离体豚鼠子宫有兴奋作用，产妇口服亦有加强子宫收缩的作用.在小鼠离体小肠试验中，紫茜素、茜素无明显解痉作用。

4、其他作用：茜草制剂能治疗膀胱结石.其对由镁和胺构成的结石有一定的溶媒作用，但对膀胱结石实际上并无多大作用，机制可能是兴奋膀胱肌肉，从而帮助结石的排除.对大鼠的实验性肾或膀胱结石的形成，也有某些抑制作用。

5.1.13白茅根：

为禾本科植物白茅Imperata cylindrical(L.)Beauv.var.major(Nees)C.E.Hubb.的干燥根茎。

化学成分：根茎含芦竹素(arundoin)，印白茅素(cylindrin)，薏苡素(coixol)，羊齿烯醇(fernenol)，西米杜鹃醇(simiarenol)，异山柑子萜醇(isoarborinol)，白头翁素(anemonin)；还含甾醇类：豆甾醇(stigmasterol)，β-谷甾醇(β-sitosterol)，菜油甾醇(camposterol)，糖类，多量蔗糖(sucros)，葡萄糖(glucose)及少量果糖(fructose)，木糖(sylose)；简单酸类：枸橼酸(cittic acid)草酸(oxalic acid)及苹果酸(malic acid)。

本制剂以水提取入药。

药理作用：止血作用：研究表明：白茅根可加速凝血过程的第二阶段，即促进凝血酶原的形成，因而有止血作用.有人认为，白茅根的止血作用在于能缩短出血及凝血时间。

其他作用：白茅根水浸液有降低血管通透性的作用。

5.1.14质量标准研究：

鉴别：仪器与试药：本项下所用批号20130201，20130202，20130203。所用化学试剂为分析纯，薄层所用硅胶G为青岛海洋化工厂生产。当归对照药材(120927-200613)、延胡索对照药材(120928-200604)、川芎对照药材(120918-200809)、芍药苷对照品(110736-200833)均购自中国药品生物制品检定所。KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，BS210S分析天平(Max210g，d＝0.1mg)(北京赛多利斯天平有限公司)。

(1)为方中当归、川芎的鉴别：取本品内容物5g，加乙醚20mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材及川芎对照药材粉末各1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附录ⅥB)试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷—醋酸乙酯(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。此法专属性及重复性好，空白无干扰，故收入质量标准正文。

(2)为方中延胡索的鉴别：取本品内容物5g，加甲醇50ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取三次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部，附录ⅥB)试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯—丙酮(9：2)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸内熏3min，取出，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。本法专属性及重复性好，空白无干扰，故纳入质量标准正文。

另外本实验还对白芍进行了薄层鉴别，具体方法如下：

取本品内容物3g，加乙醇10ml，振摇提取5min，滤过，滤液蒸干，残渣乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品适量，加甲醇制成1mg/ml的溶液。另取白芍对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部，附录ⅥB)，吸取上述溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40：5：10：0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品中在与对照品色谱和对照药材色谱相同的位置上，均未出现相同颜色的斑点。故不纳入质量标准正文。

检查：按中国药典2010版一部附录ⅠL胶囊剂项下规定进行检查。结果见表1。

表1：三批样品检查结果

5.1.14参考文献：

【1】干国平，刘焱文，川芎的化学成分及药理研究进展，李秋怡【J】.时珍国医国药，2006，17(7)1298-1299。

【2】康军，当归化学成分及其药理作用研究进展，【J】.中医中药，2005，2(23)：120。

【3】柳永青，当归的化学成分与生物活性【J】.航空航天医药，2009，20(11)：127-128。

【4】国家药典委员会编，中华人民共和国药典，2005版，一部，北京，化学工业出版社。

【5】徐国钧主编，中药材粉末显微鉴定，1986，北京，人民卫生出版社。

【6】康廷国主编，中药鉴定学，2003，北京，中国中医药出版社。

【7】苗明三，李振国主编，中药质量控制技术，[M]，北京，人民卫生出版社，2000年。

【8】阴键，郭力弓主编，中药现代研究与临床应用，[M]，北京，学苑出版社，1994年。

(六)复方血友胶囊稳定性试验

按《中国药典》2010版二部附录ⅪⅩC和《中药、天然药物稳定性研究技术指导原则》(国食药监注[2006]678号)中有关胶囊剂稳定性试验的各项规定，采用室温留样观察法，对复方血友胶囊临床应用包装的三个批号样品进行稳定性考察试验，以观察其质量变化，现将试验情况报告如下。

1、仪器与试药：

仪器：UV-8三用紫外分析仪(无锡科达仪器厂)，超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司，型号：KQ—100型)，电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司，型号：BS210S，d＝0.1mg)。

化学试剂与试药：化学试剂为分析纯，对照品均购自中国药品生物制品检验所，硅胶G为青岛海洋化工厂生产。

2、试验方法与结果：

1.方法：室温留样观察法。

2.留样条件和留样量：

留样室：面积15m²，留样量30瓶(批号：20130201，20130202，20130203)；在常温条件下放置6个月，分别于0个月、3个月和6个月各取样一次，按稳定性考察项目进行检测，样品起始情况见样品检验报告单。

3.检测指标：性状、鉴别、水分、崩解时限。

4.结果见表1～表3。

3、结论

采用室温留样观察法，分别考察了6个月的复方血友胶囊上市包装的三个批号样品，经检验各项指标均符合注册质量标准草案和《中华人民共和国药典》2010年版一部附录胶囊剂项下规定，表明本品稳定性良好。

表1：复方血友胶囊稳定性试验报告(批号：20130201)

表2：复方血友胶囊稳定性试验报告(批号：20130202)

表3：复方血友胶囊稳定性试验报告(批号：20130203)

(七)复方血友胶囊小鼠急性毒性实验资料及文献资料

复方血友胶囊按40％的浓度及0.4ml/10g的给药容量，24小时给昆明种小鼠灌胃2次，小鼠无一只死亡，也无明显中毒反应，测得复方血友胶囊最大受试药物量为32g/kg，相当生药95.04g/kg，为临床人拟用量的533倍。

实验目的：24小时内给药2次，观察小鼠接受过量复方血友胶囊所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性实验设计剂量、分析毒性作用的靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、临床剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。

7.1实验条件

7.1.1动物品系：昆明种小鼠体重18－22g，♀♂各半，由第四军医大学实验动物中心提供，合格证号：0022491，许可证号：SCXK(军)2012-007。

7.1.2饲养管理：实验动物购回后适应性喂养2-3天后方可使用，实验动物分组后标记样品名称、实验动物种类、性别及组别。净化室温度保持在20-25℃；相对湿度保持在45-70％。保持门窗密闭，使用空气净化系统，送新风全口开启，送风机隔日换机一次，人流、物流和废弃物按照规定的方向运行，不得逆转。饲料和垫料由钴60照射处理，每天清扫地面、笼具架和墙壁，并用紫外线消毒一次，实验前后认真洗手和用75％酒精棉球消毒。试验结束后，对处死动物的尸体、垃圾应袋装后及时清理和焚烧。

7.1.3受试药物：

7.1.3.1.名称：复方血友胶囊。

7.1.3.2.来源：西安新城医大医院

7.1.3.3.批号：20130201

7.1.3.4.规格含量：每粒0.3g，含生药0.89，每g含生药2.97g。

7.1.3.5.临床用量：每日3次，每次4粒，人日用量为0.06g/kg(体重按60kg计)。

7.1.4药液制备：实验时取复方血友胶囊药粉，用去离子水作溶剂，配成40％复方血友胶囊悬液。

7.2.实验方法

7.2.1预试：取昆明种小鼠4只，给药前禁食12小时，按40％的最大给药浓度，按0.4ml/10g的最大给药体积，24小时内灌药2次，给药后观察小鼠一般情况。见给药后，4只小鼠大便正常，无死亡，活动自如，进食、饮水正常，也无明显中毒反应，提示本品难以测出LD₅₀，故选择最大受试药物量实验。

7.2.2最大受试药物量实验及给药组，每组各20只小鼠(♀♂各半)，给药前禁食12小时，给药组以40％浓度的复方血友胶囊悬液，按0.4ml/10g，24小时内2次灌胃给药，对照组给与同体积去离子水，连续观察14天，详细记录小鼠行为活动、状态、饮食、大小便及毛色、分泌物等。

7.3.实验结果

给药后，小鼠大便正常呈湿润颗粒状，无死亡，活动自如，进食、饮水均正常，皮毛光洁，口、鼻、眼及肛门清洁无分泌物，连续观察两周，体重有增加，给药前体重、第7日、第14日体重见表1，给药组体重与对照组体重无显著性差异。解剖所见：胸腔，腹腔未见异常液体，肠管未见胀气，心、肝、脾、肺、肾等重要脏器未见颜色、形态异常，没有出血点或其它病理改变，胃粘膜颜色红润，无出血点或溃疡，尸检无异常。

表1：急毒小鼠体重n＝20

注：给药组与对照组比较P>0.05。

7.4、实验结论

给昆明种小鼠灌胃未测出LD₅₀，24小时内给药2次，观察14天，小鼠死亡。其最大受试药物量为32g/kg，相当生药95.04g/kg，约为临床人拟用量的533倍。在此剂量下未观察到的急性毒性反应。

7.5参考资料：

中药、天然药物研究技术指导原则，国家食品药品监督管理局，二00五年七月。

8、治疗血友病(脾肝肾气血虚证)临床总结报告

血友病是一种以三高著称(出血率高、死亡率高、致残率高)，而严重危害世界各民族健康，缺医少药的出血性疾病，目前西医仅有出血时应用血液制品止血的替代疗法，该疗法不但容易并发肝炎、艾滋病毒，而且更大的危害是易并发凝血因子抗体，加重出血[1]。因此，2004年世界卫生组织(WHO)拟删除FⅧ、FⅨ凝血因子制剂。基因治疗目前仍处在研究阶段，别无它法，探讨新疗法势在必行。

申请人研究发现，血友病85％患者有腰膝酸软、关节肿痛；筋腱挛缩，伸屈受限；倦怠无力，肌肉萎缩，反复出血，面色不华等症候。认为上述证候属中医脾肝肾气血虚证，属“血症”、“虚劳”范畴。其病因与外伤劳倦，情志过激，辛辣好酒等有关。依据中医脾为后天之本，生化之源，统血摄血；肾为先天之本，主骨生髓；肝藏血，肝肾同源发病机理，前瞻性拟定了具有健脾益气，滋肝补肾，养血摄血功效的处方。

8.1资料与方法

8.1.1临床资料

2006年1月～2006年9月本院随机收住来自全国各地的血友病(脾肝肾气血虚证)患者65例，男64例(98.46％)，女1例(1.33％)。中位年龄12.6(0.8～56)岁。有遗传史者18例(27.69％)，遗传史不明者47例(72.31％)。中医证候及舌脉象表现见表1。

65例中，血友病A56例(86.15％)、血友病B9例(14.85％)，其中重型18例(27.69％)、中型30例(46.15％)、轻型17例(26.15％)、无亚临床型。

8.1.2诊断标准

采用张之南主编的血液病诊断及疗效标准，以Ⅷ因子活性(FⅧ∶C)、FⅨ∶C、FⅪ∶C测定为主，结合遗传史，自发或外伤后出血不止等临床表现，并可排除获得性凝血因子缺乏症及血管性血友病，进行诊断。并进一步按FⅧ∶C、FⅨ∶C的高低，区分为重型(＜1％)、中型(≥2％～＜5％)、轻型(≥5％～＜25％)和亚临床型(≥25～＜50％)。

8.1.3纳入标准

对随机收住，在不用浓缩Ⅷ、Ⅸ因子及血浆等血液制品的条件下，采用以复方血友胶囊中药为主，出血时联用止血合剂治疗18天，检验资料完整的病例，纳入观察统计对象。

8.1.4、排除标准

对随机收住的患者，全部进行血、尿常规、肝肾功、心电图、FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅪ∶C检查。对个别年龄较大、女性患者以及皮肤、粘膜出血为主而关节、肌肉出血较少者，通过Ⅷ因子抗原(FⅧ∶Ag)、血管性血友病因子抗原(vWF∶Ag)、出血时间等检查，排除获得性Ⅷ因子减少症及血管性血友病(vWD)。

8.1.5治疗方法

随机收住的65例血友病(脾肝肾气血虚证)患者，在未用浓缩Ⅷ、Ⅸ因子及血浆等血液制品的条件下，服用复方血友胶囊，治疗18天，复查效果。出血者临时联用止血合剂250ml，静滴，每日1～2瓶。出院后继续服用2～6个月，每3个月复查凝血因子，随访长期疗效。

8.6凝血因子活性检测方法：

用一期法检测FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅪ∶C。三种凝血因子缺乏血浆及基质血浆均购自美国飞世尔科学公司。

8.7疗效判断标准：

(1)观察治疗前后临床主要证候和舌脉象变化；

(2)观察治疗前后FⅧ、FⅨ变化。

为了排除检验误差，并结合长期疗效观察，暂订血友病A(B)治疗18天后，复查FⅧ∶C(FⅨ∶C)较治疗前提高0.3％以上者为有效，＜0.3％者为效果不明显。

8.8不良反应：

治疗前和治疗18天后分别检测临床表现、心电图、肝肾功、血糖、血、尿常规以及电解质指标的变化，判断药物不良反应。

8.9统计学分析：

以SPSS11.0统计软件进行统计学分析，组间比较采用配对t检验和X²检验及秩和检验。

8.10结果：

1、临床证候及舌脉象变化(表1)。

65例血友病(脾肝肾气血虚证)治疗18天后，除肌肉萎缩变化不明显外，其余证候及舌脉象均显著好转，恢复正常者均值56.2例(86.46±7.06％)，与治疗前22.7例(34.92±7.89％)相比，有显著性差异，p<0.01。

2、治疗前后凝血因子活性的变化(表2)。

血友病A 56例，治疗18天后与治疗前相比，FⅧ：C、FⅨ：C、FⅪ：C均有显著性差异(p<0.01)。血友病B 9例，治疗18天后与治疗前相比，FIX：C有显著性差异(p<0.01)，FⅧ：C、FⅪ：C无差别(p>0.05)。近期有效62/65例(95.38％)，无效3/65例(4.62％)，其中1例进一步检查Ⅷ因子抗体为0.75Bethesdo U/ml血浆，另2例治疗时间仅2周。

表1：复方血友胶囊治疗血友病(脾肝肾气血虚证)18天主要证候及舌脉象变化

表2:治疗血友病(脾肝肾气血虚证)18天后凝血因子活性变化

表3：65例血友病(脾肝肾气血虚证)治疗前后安全性检查

3、治疗前后血红蛋白变化：

65例患者的血红蛋白的均值由治疗前(110±18.17)g/L(40g/L～135g/L)上升为(122.09±13.32)g/L(90g/L～140g/L)，P＜0.05，有差异。

4、不良反应：随机收住的65例血友病(脾肝肾气血虚证)患者，除4例(6.15％)因输液速度较快，出现头晕、恶心，减慢输液速度后症状消失外，其余病例无明显不适。用药前后复查肝肾功、心电图、电解质、血糖及血、尿常规等。治疗前检查：除3例丙型肝炎ALT轻度升高外，其余检测均正常。用药18天后各项检查均正常(表3)，P﹥0.05。

5、随访结果：26人出院后继续服用复方血友胶囊2～6个月，在当地复查凝血因子，其结果均呈指数式上升，上升幅度与用药时间呈正相关(图1)，其中血友病A 24例，服药2个月、3个月及6个月FⅧ∶C由治疗前的(3.25±2.91)％依次上升到(6.31±2.16)％、(8.36±1.06)％、(16.38±2.71)％，最高21.9％，与治疗前相比，有显著性差别(P＜0.01)。血友病B2例，服药2个月、6个月，复查FⅨ∶C由治疗前(4.15±2.26)％分别上升到7.8％、11.6％，因例数少，未做统计学分析。

6、讨论:

血友病属中医“血症”“虚劳”范畴，已列入国家特殊慢性疾病，是医学界公认的疑难病研究课题，探讨新方法势在必行。

中医治病的核心理论是辨证立方，治病求本。申请人认为血友病患者的倦怠无力、肌肉萎缩、反复出血属脾气虚；腰膝酸软、关节肿痛、畸形属肾虚；肢体麻木、肌腱挛缩、伸屈受限属肝虚；反复出血、面色不华、舌淡脉虚等症候属气血虚。中医认为脾为后天之本，生化之源，益气养血、统血摄血，益气血友；肾为先天之本，肝藏血，主筋，肝肾同源。二本旺盛，则气血充足。因此脾肝肾气血虚是血友病的发病病机。依据辩证立方，治病求本，标本兼治原则前瞻性的拟定了处方。

方中黄芪补气升阳，紫河车补益阴阳气血，二者为君药。健脾补肾、益气养血摄血。当归补血调经，活血止痛；生地清热凉血滋阴；白芍柔肝止痛，养血敛阴；苍术燥湿健脾，以上四味为臣药，协助君药健脾补肝，益气养血，滋阴养血。仙鹤草、茜草、白茅根、川芎、元胡、海马六味为佐药。其中仙鹤草收涩止血；茜草凉血止血、祛瘀通淋；白茅根凉血止血，清热利尿，三者凉血、止血、清热，协助君臣药清热，血清则凉，血不外溢于脉外。川芎活血通径，祛风止痛；元胡活血行气止痛，二者防止君臣药补气过度，脉管滞涩不畅而血瘀，补中有行。海马温肾壮阳，化结消肿；以上六味为佐药，温阳通脉，防止凉血太过，脉络不通，同时补脾肝肾二本，以生精血，发挥助君臣，防过度作用。甘草味甘平，入十二经，补脾益气，解毒缓急，通行十二经脉，和中之国老，引药直达病所。由于组方合理，君臣佐使配伍得当，达到了病、症、方药统一，共奏健脾益肾，滋肝补肾，养血摄血之功效。65例血友病(脾肝肾气血虚证)患者，服用18天，取得了良好治疗效果，总结如下。

7、临床疗效总结：

65例血友病(脾肝肾气血虚证)服用18天，主要临床证候及舌脉象恢复正常者均值56.2例(86.46±7.06％)，与治疗前22.7例(34.92±7.89％)相比，有显著性差异(p<0.01)。除肌肉萎缩恢复较慢29例(44.62％)外，出血、关节肿痛、面色不华、舌脉象、腰膝酸软、倦怠无力均恢复正常，均值达53例(91.11％)与治疗前相比，有显著性差异(p<0.01)。

1、65例血友病(脾肝肾气血虚证)服用18天，其中血友病A 56例，Ⅷ因子由治疗前均值(3.32±2.21)％上升到(5.64±1.96)％，治疗前后相比，有显著性差异(p<0.01)。血友病B 9例，IX因子由治疗前均值(4.92±1.81)％上升到(5.64±1.96)％，前后相比，有显著性差异(p<0.01)。65例血友病总有效率95.38％(62/65例)，无效率4.62％(3/65例)。

2、长期随访：65例血友病(脾肝肾气血虚证)治疗18天出院后继续服复方血友胶囊2～6个月者26例，其中血友病A 24例，服药2个月、3个月及6个月者，FⅧ均值由治疗前的(3.25±2.91)％分别上升到(6.31±2.16)％、(8.36±1.06)％、(16.38±2.71)％，与治疗前相比，有显著性差别(P＜0.01)。血友病B 2例，服药2个月、6个月，Ⅸ因子由治疗前(4.15±2.26)％分别上升到7.8％、11.6％。

3、65例血友病(脾肝肾气血虚证)服用18天，血红蛋白的均值由治疗前(11.52±18.17)g/L(40g/L～135g/L)上升为(122.09±13.32)g/L(90g/L～140g/L)，有差异(P＜0.05)。

4、65例血友病(脾肝肾气血虚证)服用复方血友胶囊18天，复查肝肾功、电解质、血糖、心电图等均未见异常。

通过65例血友病(脾肝肾气血虚证)临床观察，说明复方血友胶囊是一种安全、有效的中药方剂，有良好、广阔的广用前景。

参考文献：

【1】叶仕高，内科学，第6版，北京：人民卫生出版社，2004：663-666。

【2】张之南主编，血液病诊断及疗效标准，第2版，北京:科学出版社，1998:304-311。

【3】沈丕安编著，中药药理与临床运用，[M].北京：人民卫生出版社，2006，201～202。

9、典型病例：

病例1：血友病A并发Ⅷ因子抗体新疗法一月痊愈

患者：熊××，男，83岁，湖北襄阳铁路二院。2013年年2月27日以血友病A并发Ⅷ因子抗体，全身多部位反复出血12年之病史就诊陕西医大血友病研究院医大医院，采用服用复方血友胶囊结合非血液制品治疗一月，病情好转，出血停止。经申请人医院与第四军医大学西京医院的检查，各项凝血因子都已恢复正常(见下表)，特别是Ⅷ因子由入院时2.1％提高到269％，且体内抗体已经清除，身体恢复健康。

中西医结合非血液制品新疗法治疗前后凝血因子恢复经过

病例2：血友病血囊肿术后伤口愈合、FⅧ恢复正常(86％)

崔××，女，28岁，陕西铜川籍，2012年6月5日，以“右股部包块”之主诉就诊。FⅧ3.8％，APTT 60.6秒；B超示右股部皮下可见5.8﹡2.8*4.2cm³低回音区，边界清。因此诊断为血友病A并右股部血囊肿。

采用服用复方血友胶囊结合非血液制品疗法综合治疗方案进行止血、消炎、消肿、提升因子活性、手术切除血囊肿、换药等，治疗26天，伤口愈合，FⅧ由3.8％上升为86％出院。

病例3：血友病A治疗三周FⅧ由1.0％上升到172％

安××，女，宁夏灵武市人，1970年出生。一岁时，出现皮肤紫斑。六年前，生产时出血过多，之后两年内经常出现皮肤紫斑、青紫块。月经量偏多。2013年8月在银川分院检查第八凝血因子活性：Ⅷ5.57％，Ⅸ40％，Ⅺ40％。

医院了解了患者既往病史，同时检查凝血因子活性为Ⅷ1.0％，Ⅸ72％，Ⅺ75％，APTT延长至60.5S，CT延长时间为150分。抗“0”(+)，C-反应蛋白(+)，B超显示：左股内侧3.2*3.3*5.7cm低回音区，右膝关节3.2*3.1*4.2cm低回音区。因此诊断患者为：血友病A、左膝关节出血，外伤后左股部血肿。

西安医大医院依据患者情况，运用服用复方血友胶囊结合非血液制品疗法综合治疗。2013年9月21日，患者左膝膝关节恢复良好，股部肿痛消失，可以自行走动。同时检查第八凝血因子活性为32％。

2013年9月28日，患者左膝关节伸屈基本正常。检查第八凝血因子活性为172％，凝血因子抗体为0。因子恢复正常出院。

Claims (2)

1.一种用于治疗血友病的复方血友胶囊，其特征在于，制得的该复方血友胶囊以每1000粒计由以下中药原料组成：黄芪：117g，紫河车：35g，当归：35g，生地黄：140g，白芍：70g，苍术：70g，仙鹤草：70g，茜草：58g，白茅根：117g，川芎：53g，延胡索：58g，海马：35g，甘草：35g。

2.权利要求1所述的用于治疗血友病的复方血友胶囊的制备方法，其特征在于，以海马、紫河车和延胡索三味粉碎成细粉，过筛，混匀；其余十味药以12倍量水煎煮三次，每次1小时，滤过，合并十味药所得滤液，在60℃下，浓缩至相对密度1.30～1.35的清膏，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎，制粒，装胶囊，即得。