CN104873714A - 治疗妇女绝经综合征的补肾祛风更年方的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种补肾祛风更年方，该方法是将熟地黄120份、仙茅120份、山药120份、山茱萸120份、淫羊藿120份、盐巴戟天120份、桑寄生120份、酒女贞子120份、墨旱莲120份、当归100份、桂枝90份、独活90份、防风90份、细辛30份、甘草60份这十五味原料药，加水煎煮3次，每次煎煮0.5小时，滤过，合并滤液；滤液常压浓缩，加入羟苯乙酯，混匀，加纯化水，搅匀，分装，即得。按该方法制备得到的补肾祛风更年方用于治疗妇女绝经前后诸证的肾阴阳两虚型是有效的，能显著改善绝经前后诸症患者的症状、体征以及相关指标，且优于右归丸，是一种治疗绝经前后诸症有效、简便、安全的中药制剂。

Description

治疗妇女绝经综合征的补肾祛风更年方的制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗妇女绝经综合征的药物的制备方法，属于中医药技术领域。

背景技术

绝经综合征属中医绝经前后诸证范畴，是妇女在绝经前后，肾气渐衰，天葵渐竭，冲任二脉虚衰。以肾虚为主，可因偏于阴虚，偏于阳虚或阴阳俱虚而出现不同症候，并可累及心，肝，脾。

该病西医诊断标准符合1994年世界卫生组织提出的“围绝经期综合症”的妇女。围绝经期指围绕绝经的一段时期，包括从接近绝经出现与绝经有关的内分泌，生物学和临床特征起至最后一次月经后一年，即绝经过渡期至最后一次月经后一年。围绝经期综合征指妇女绝经前后由于性激素减少所致的一系列躯体及精神心理症状。

中医诊断标准参照《中药新药临床研究指导原则》第三辑“中药新药治疗女性更年期综合症临床研究指导原则”和符合全国高等医药院校第六版教科书，《中医妇科学》绝经前后诸证的肾阴阳两虚型主症见：症状形寒肢冷、潮热出汗、面色晦暗、易激动、失眠、疲乏、夜尿频数，骨关节、肌肉痛、舌淡、苔白滑、脉沉细；次症：面浮肢肿、眩晕，心悸、抑郁、性交痛； 舌象舌淡、苔白滑；脉象 脉沉细。

中医药治疗本病，重点在于整体调节，以补肾为主，兼调他脏，标本兼治，以达“阴平阳秘，精神乃至”的目的。在治疗上除了注重平调肾中阴阳（肾阴虚——滋养肾阴，佐以潜阳，肾阳虚——温肾扶阳，肾阴阳两虚——阴阳双补）。或滋补肝肾，交通心肾，温肾暖脾，或疏肝理气化痰。但通过长期的临床观察治疗，发现绝经前后诸证的根本仍然归结于肾虚，即肾气的虚衰。且对肾阳虚及阴阳俱虚之患者单以补肾温阳滋阴疗效不佳，临床观察发现肾阳虚衰则闭阻经络，使阳气不达出现风寒闭阻之症，且以补肾温阳，祛风散寒方法治疗每多见效。因此，以中医药补肾温阳，祛风散寒为主治疗妇女绝经综合征是本发明提出的技术背景。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种治疗妇女绝经综合征的补肾祛风更年方的制备方法，以实现采用中医药治疗妇女绝经综合征的目的。

本发明的技术方案是这样的：

本发明的补肾祛风更年方由以下重量份数的原料药制成：熟地黄114～132份、仙茅114～132份、山药114～132份、山茱萸114～132份、淫羊藿114～132份、盐巴戟天114～132份、桑寄生114～132份、酒女贞子114～132份、墨旱莲114～132份、当归95～110份、桂枝94.5～99份、独活94.5～99份、防风95～99份、细辛31.5～33份、甘草57～66份。辅料：羟苯乙酯0.5份。

方中熟地黄滋阴补肾、填精益髓；山药益气养阴；山茱萸补益肝脾；三药相配组成六味地黄丸中经典的“三补”，用以滋养肝肾；仙茅、淫羊藿、盐巴戟天温肾壮阳，强筋骨，袪风湿；当归补血活血；墨旱莲、酒女贞子补肾育阴；桂枝发汗解肌温通经脉，助阳化气；独活、防风发表散风，祛下焦湿邪搏痛；桑寄生补肝肾，强筋骨；细辛辛温发散，温络通奇；甘草益气补中，调和诸药。全方以补肾，调和肾中阴阳为主，配合祛风散寒除湿通络之除湿药以治疗绝经前后诸症肾虚、肾阴阳失调，经络闭阻之证。在治疗绝经前后诸症中具有承补肾之大法，传通络祛邪之所长，扬因地制宜之理念的独特见解。

本发明的补肾祛风更年方的制备方法如下：

将组方中的十五味原料药，加水煎煮3次，第一次加10.5倍量水（即加所有原料药总重量的10.5倍重量的水），第二、三次各加8倍量水，每次煎煮0.5小时，滤过，合并滤液；滤液常压浓缩，加入羟苯乙酯（用少量乙醇溶解），混匀，加纯化水，搅匀，分装，即得补肾祛风更年合剂。

处方药物理化性质及药理研究：

    熟地黄（玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥块根的炮制加工品）：地黄块根的主要化学成分是环烯醚萜苷类。熟地黄由于长时间的加热闷蒸，环烯醚萜苷类成分相对较少，约为生地黄的1/10。地黄分离得到的其他苷类有：洋地黄叶苷C、松果菊苷、焦地黄苯乙醇苷A₁、B₁、肉苁蓉苷A、F、以及蕊花糖苷等。

    熟地黄，甘，微温。归肝、肾经。具有补血滋阴，益精填髓的功效。用于血虚萎黄，心悸怔忡，月经不调，崩漏下血，肝肾阴虚，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精，内热消渴，眩晕，耳鸣，须发早白。

现代药理研究表明，熟地黄主要有以下三个方面的药理作用：①对血液系统的影响：熟地黄多糖灌胃对经环磷酰胺或放射所致的血虚小鼠外周血象、骨髓有核细胞下降均有拮抗作用，可促进小鼠造血干细胞的增值和分化；②对免疫系统的影响：口服地黄多糖可使环磷酰胺所致免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数显著升高；③对心血管系统的影响：地黄煎剂经口给药可明显对抗L-甲状腺素诱发的大鼠缺血性心肌肥厚，并能抑制心、脑线粒体Ca²⁺、Mg²⁺-ATP酶活性，从而保护心脑组织避免ATP耗竭和缺血损伤。

结合熟地黄的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，熟地黄在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

仙茅（石蒜科植物仙茅Curculigo orchioides Gaertn.的干燥根茎）：仙茅根茎含环木菠萝烷型三萜及其糖苷类化合物：仙茅皂苷元A、B、C、仙茅皂苷A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、仙茅醇，还含有甲基苯酚和氧代甲基苯酚的糖苷类化合物、仙茅苷、地衣二醇葡萄糖苷、仙茅素A、B、C、仙茅苷B、还含环阿尔廷醇型三萜皂苷类成分。

仙茅，辛，热；有毒。归肾、肝、脾经。具有补肾阳，强筋骨，祛寒湿的功效。用于阳痿遗精，筋骨痿软，腰膝冷痛，阳虚冷泻。

现代药理研究表明，仙茅主要有以下七个方面的药理作用：①适应原样作用：仙茅醇浸剂给小鼠灌服，可明显延长小鼠耐氧存活时间。仙茅醇浸剂给小鼠腹腔注射有抗高温作用；②抗衰老：仙茅可延长小鼠存活数及平均存活时间，并可明显降低心、脑的脂褐质含量；③免疫增强功能：仙茅电糖体外单独能刺激脾淋巴细胞增殖，对HC诱导免疫受抑小鼠胸腺及脾脏重量降低，胸腺细胞及脾脏T、B细胞增殖降低，有明显抑制作用；④抗骨质疏松：对骨样细胞的增殖有明显的促进作用；⑤镇静、抗惊厥：其醇浸剂有明显的镇静作用，小鼠腹腔注射能明显延长戊巴比妥钠引起的睡眠时间，也能明显延缓印防己毒素引起的小鼠阵孪性惊厥出现时间；⑥抗炎：腹腔注射仙茅醇提剂对巴豆油所致小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用；⑦其他：其水煎剂可显著提高Na⁺-K⁺-ATP酶活性，扩张冠状动脉、强心、加快心率等作用。

结合仙茅的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，仙茅在本方中采用水煎煮提取是合理的。

山药（薯蓣科植物薯蓣Dioscorea opposita Thunb.的干燥根茎）学成分：其根茎中含有山药多糖、多巴胺、盐酸山药碱、多酚氧化酶，并含有多种甾醇类成分胆甾烷醇，胆甾醇及其衍生物；近年还分离得到新的糖苷，尚含有多糖RDRS-1.

山药，甘，平。归脾、肺、肾经。具有补脾养胃，生津益肺，补肾涩精的功效。用于脾虚食少，久泻不止，肺虚咳喘，肾虚遗精，带下，尿频，虚热消渴。

现代药理研究表明，山药主要有以下四个方面的药理作用：药理活性：①调整胃肠运动：能抑制胃排空运动，能拮抗乙酰胆碱、氯化钡所致的离体回肠强直性收缩作用，以及对新斯的明负荷小鼠胃肠推进运动的增强有抑制作用；②免疫调节功能：山药多糖既能提高特异性细胞免疫和体液的免疫调节，也具有非特异性免疫功能；③降血糖：其水煎剂给小鼠灌胃，可以降低正常小鼠的血糖，对由四氧嘧啶引起的小鼠糖尿病有预防和治疗作用，对肾上腺素和葡萄糖引起的小鼠血糖升高也有显著的抑制作用，山药多糖为降血糖的有效成分，其作用与增加胰岛素分泌、改善受损的胰岛β细胞功能有关；④其他：其水煎剂给小鼠灌服，可增加其前列腺、精囊腺重量，产生雄性激素样作用，山药多糖具体体外抗突变作用。

    结合山药的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，山药在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

山茱萸（山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb. et Zucc.的干燥成熟果肉）：其果肉中主要含有①环烯醚萜苷类成分：马钱素、山茱萸苷、山茱萸新苷；②三萜类化合物：熊果酸、齐墩果酸；③鞣质类成分：山茱萸鞣质                                                、、路边青鞣质D、喜树鞣质A、B；④有机酸成分：酒石酸、苹果酸、柠檬酸、没食子酸、琥珀酸；其他还含山茱萸多糖等成分。

山茱萸，酸、涩，微温。归肝、肾经。具有补益肝肾，收涩固脱。用于眩晕耳鸣，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿尿频，崩漏带下，大汗虚脱，内热消渴。

现代药理研究表明，山茱萸主要有以下五个方面的药理作用：①免疫调节功能：其水煎剂腹腔给药使小鼠胸腺明显萎缩，减慢网状内皮细胞对炭粒的廓清率，也能升高小鼠血清溶血素抗体含量及血清抗免疫球蛋白G含量，显示出免疫调节作用，山茱萸总苷在体外能明显抑制小鼠淋巴细胞转化和LAK细胞生成，体内服用可抑制IL-2的产生，有免疫抑制作用；②降血压：山茱萸煎剂能降低四氧嘧啶糖尿病大鼠的血糖水平，且能增加肝糖元含量，其环烯醚萜类成分能降低链尿霉素糖尿病大鼠血糖水平，对糖尿病导致的心脏和肾病变还有保护作用；③抗炎：山茱萸水煎剂对醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增高，大鼠棉球肉芽组织增生，二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀以及蛋清引起的大鼠足趾肿胀等炎症有抑制作用，体内实验证明，山茱萸总苷有良好的抗炎作用；④抗菌：体外实验证明，其煎剂对金黄色葡萄球菌、志贺氏痢疾杆菌及董色毛藓菌等真菌有抑制作用，鲜果肉多伤寒杆菌和痢疾杆菌有抑制作用；⑤其他：山茱萸多糖有抗氧化活性，还有保肝、抗肿瘤和抗缺陷病毒等作用。

结合山茱萸的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，山茱萸在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

淫羊藿（小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum (Sieb. et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥叶）：其地上部分主要含黄酮类成分，如：淫羊藿苷、淫羊藿新苷、山奈酚-3,7-O-α-L-二鼠李糖苷、β-脱水淫羊藿苷等。

淫羊藿，辛、甘，温。归肝、肾经。具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的功效。用于肾阳虚衰，阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛。

现代药理研究表明，淫羊藿主要有以下五个方面的药理作用：①促进性腺功能：淫羊藿水煎剂的萃取部位呈剂量依耐性使苯肾上腺素或电刺激处理的海绵体平滑肌松弛并增加耐受性，同时增加L-精氨酸水平和小鼠海绵体组织中环磷鸟苷的产生；②促进骨形成：机理研究显示淫羊藿总黄酮可以通过保护性腺，抑制骨吸收和骨细胞白介素-6及肿瘤坏死因子α的mRNA表达，促进骨形成和骨细胞转化生长因子β1的mRNA表达，从而防止骨质疏松症；③对心血管系统影响：淫羊藿提取物能降低麻醉犬总外周血管阻力和左室舒张末期压，增加冠状动脉血流量、心输出量、脉搏输出量等，同时淫羊藿水提取物具有钙拮抗活性；④免疫调节功能：淫羊藿能增强机体非特异性免疫功能和细胞免疫功能，调节体液免疫功能，有效成分主要为 淫羊藿苷和淫羊藿多糖。淫羊藿多糖和淫羊藿总黄酮均可 显著提高巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数，可显著拮抗环磷酰胺所致小鼠单核巨噬细胞吞噬功能降低。对巨噬细胞分泌白细胞介素-1（IL-1）和抗肿瘤因子（TNF）具有双向调节作用；⑤其他：其提取物及淫羊藿苷具有抗抑郁作用，淫羊藿总黄酮还具有抗炎作用。

结合淫羊藿的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，淫羊藿在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

盐巴戟天（茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How的干燥根的炮制品）：巴戟天的根主要含有①黄酮类成分，如：1,6-二羟基-2,4-二甲氧基蒽醌、甲基异茜草素、大黄素甲醚；②环烯醚萜及其苷类：去乙酰车叶草苷；具有抗抑郁活性的低聚糖类：耐斯糖、七聚糖；③环丙酮类衍生物：巴戟天素。

盐巴戟天，甘、辛，微温。归肾、肝经。具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的功效。用于阳痿遗精，宫冷不孕，月经不调，少腹冷痛，风湿痹痛，筋骨痿软。

现代研究药理表明，盐巴戟天主要有以下五个方面的作用：①提高机体机能，增强免疫：其水煎剂给小鼠灌胃能显著增强小鼠体重，延长游泳时间，提高抗疲劳能力，巴戟天多糖灌胃能增加幼年小鼠胸腺重量，提高脾脏产生免疫特异玫瑰花结形成细胞以及巨嗜细胞的吞噬能力，低聚糖体外能增强小鼠脾细胞增殖能力，增强小鼠脾细胞抗体形成细胞数目。水提液灌胃能提高S₁₈₀荷瘤小鼠的免疫功能，调节并改善机体和红细胞的免疫功能；②对生殖功能的影响：巴戟天水煎液给雌性大鼠灌服，可使卵巢、子宫及垂体重量增加，并增加卵巢中人绒毛膜促性腺激素/促黄体激素受体的功能还能提高卵巢对促黄体激素的反应，促进排卵黄体生成并维持黄体功能，雄性小鼠灌服水煎液可对精元细胞和初级精母细胞产生作用，显著降低精子畸形率，其水提物对人精子膜的脂质过氧化损伤有显著地干预作用，明显保护精子膜结构和功能；③对骨骼系统的影响：水提液和醇提液灌胃能使骨细胞分化有关的核心结合因子α₁表达增强，促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化，从而促进骨形成；④对心肌细胞的影响：其水提液灌胃对大鼠心肌缺血再灌注损伤也有保护作用；⑤保肝：其水煎液灌胃能减弱四氯化碳所致急性肝损伤模型小鼠细胞受损程度，还能明显抑制小鼠移植性肝癌肿瘤的生长。

结合盐巴戟天的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，盐巴戟天在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

桑寄生（桑寄生科植物桑寄生Taxillus chinensis (DC.) Danser的干燥带叶茎枝）：主要含桑寄生毒蛋白、桑寄生凝集素；黄酮类成分：扁蓄苷、槲皮素、槲皮苷、还含有d-儿茶素等。

桑寄生，苦、甘，平。归肝、肾经。具有祛风湿，补肝肾，强筋骨，安胎元的功效。用于风湿痹痛，腰膝酸软，筋骨无力，崩漏经多，妊娠漏血，胎动不安，头晕目眩。

现代药理研究表明，桑寄生主要有以下三个方面的药理作用：①对心血管系统的影响：a. 降血压：其水浸剂及醇浸剂有降压作用，活性成分主要为扁蓄苷，大鼠尾静脉注射水煎液也显示有一过性降压作用；b. 降血脂：桑寄生脱脂后水煎液的乙醇萃取物对高脂血症大鼠有明显的降胆固醇及三酰甘油的作用，能显著提高SOD活性，降低血清中过氧化脂质含量；②对免疫系统的影响：其水煎液及其颗粒剂灌胃对2,4-二氮基苯所致小鼠耳廓皮肤迟发性超敏反应有明显的抑制作用；③抗炎、镇痛：桑寄生水煎液及其颗粒剂灌胃给药对醋酸所致的小鼠扭体反应有明显的抑制作用，对角叉菜胶引致大鼠足趾肿胀也有抑制作用。

结合桑寄生的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，桑寄生在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

酒女贞子（木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实的炮制品）：主要含有①三萜类成分，如：齐墩果酸、熊果酸、19α-羟基-乙酰熊果酸等；②裂环烯醚萜类，如：女贞子苷、女贞子酸、女贞子果A、B、C、D、女贞苦苷等；③黄酮类，如：槲皮素、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡糖糖苷等；④含有苯丙素苷类成分，如女贞子素、丁香苷等。

酒女贞子，甘、苦，凉。归肝、肾经。具有滋补肝肾，明目乌发的功效。用于肝肾阴虚，眩晕耳鸣，腰膝酸软，须发早白，目暗不明，内热消渴，骨蒸潮热。

现代药理研究表明，酒女贞子主要有以下八个方面的药理作用：①增强免疫：水煎剂对正常小鼠灌胃的非特异性免疫和环磷酰胺所致免疫抑制小鼠的细胞免疫有增强作用，对肾上腺皮质激素所致阴虚小鼠脾的T淋巴细胞有明显促进作用，体外还可提高正常小鼠T淋巴细胞分泌白介素-2的能力；②抗氧化，抗衰老；③促进毛囊生长：水煎液对体外培养的小鼠触须毛囊有显著地促进生长作用；④促进黑色素合成；⑤保肝：齐墩果酸和女贞子酒炙品水煎液灌胃对四氯化碳引起的大、小鼠急性肝损伤有明显的保护作用，可使血清谷丙转氨酶明显下降；⑥抗肿瘤；⑦降血糖：其水煎剂灌胃对正常小鼠血糖及由四氧嘧啶、肾上腺素和葡萄糖引起的小鼠血糖增高均有显著地促进作用，齐墩果酸是降血糖的主要成分；⑧其他：抗动脉粥样硬化，抗炎，抗菌等。

结合酒女贞子的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，酒女贞子在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

墨旱莲（菊科植物鳢肠Eclipta prostrata L.的干燥地上部分）：主要含①三萜皂苷类成分：旱莲苷A、B、C、D、醴肠皂苷-；②三萜类成分：刺囊酸、齐墩果酸；③噻吩类化合物：α-三联噻吩；④香豆素类化合物；⑤黄酮类：槲皮素、芹菜素等；⑥挥发油：环氧石竹烯等。

墨旱莲，甘、酸，寒。归肾、肝经。具有滋补肝肾，凉血止血的功效。用于肝肾阴虚，牙齿松动，须发早白，眩晕耳鸣，腰膝酸软，阴虚血热吐血、衄血、尿血，血痢，崩漏下血，外伤出血。

现代药理研究表明，墨旱莲主要有以下八个方面的药理作用：①止血：水煎液灌胃能明显缩短胃出血小鼠凝原酶原时间和部分凝血酶原时间，升高纤维蛋白原含量和血小板数量，减少胃粘膜出血点数，有显著的止血作用；②抗炎：水煎液灌胃对巴豆油所致的小鼠耳廓肿胀，角叉菜胶或甲醛所致大鼠足趾肿胀，醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增高，组胺引起的大鼠皮肤毛细血管通透性增高，大鼠棉球肉芽组织增生仅有显著地抑制作用；③解蛇毒；④保肝；⑤对免疫功能的影响：能显著提高小鼠迟发性超敏反应和血清抗溶血素抗体水平，抑制环磷酰胺诱导的小鼠胸腺细胞凋亡；⑥对心血管系统的影响；⑦抗诱变：水煎剂灌胃或腹腔注射，对环磷酰胺诱发的小鼠骨髓多染红细胞微核有明显的抑制作用，具抗诱变活性；⑧其他：抗菌、升高外周白细胞等。

结合墨旱莲的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，墨旱莲在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

当归（伞形科植物当归Angelica sinensis (OLiv.) Diels的干燥根）：当归根含挥发油及非挥发性成分。全株各部分都含挥发油，而以果实含量为多。油中主要成分为正丁烯酜内酯和藁本酸酯，前者乃是具有特殊香气的成分；另有邻羧基苯正戊酮及倍半萜烯等。

当归，甘、辛，温。归肝、心、脾经。具有补血活血，调经止痛，润肠通便的功效。用于血虚萎黄，眩晕心悸，月经不调，经闭痛经，虚寒腹痛，风湿痹痛，跌扑损伤，痈疽疮疡，肠燥便秘。

现代药理研究表明，当归主要有以下五个方面的药理作用：①抗血栓形成作用：当归水剂静脉注射或口服对大鼠动脉和静脉旁路血栓的形成有明显抑制作用；②改善血液循环作用；③对心血管系统的作用：当归煎剂或流浸膏对离体小鼠心脏有抑制作用，剂量大时可使心跳停止于舒张期。当归对大鼠心肌缺血再灌注的心律失常具有保护作用，当归注射液0.6 g/Kg用于大鼠腹腔注射，能使早搏发生率和心律失常总发生率明显减少；④改善冠脉循环的作用：静脉注射当归煎剂（2 g/kg）可显著增加冠脉流量，降低冠脉阻力和心肌耗氧量，增加心排出量和心搏指数，减轻阻断冠脉时的心肌梗死范围；⑤对平滑的肌的作用：当归挥发油是当归对血管平滑肌起解痉作用的主要活性部分，其中藁本内酯活性最强。当归挥发油对肠平滑肌痉挛也有较强的抑制作用。

结合当归的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，当归在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

桂枝（樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥嫩枝）：桂枝含挥发油，油中主要成分为桂皮醛，还有苯甲酸苄酯，乙酸肉桂酯，β-荜澄茄烯，菖莆烯，香豆精等。

桂枝，辛、甘，温。归心、肺、膀胱经。具有发汗解肌，温通经脉，助阳化气，平冲降气的功效。用于风寒感冒，脘腹冷痛，血寒经闭，关节痹痛，痰饮，水肿，心悸，奔豚。

现代药理研究表明，桂枝主要有以下两个方面的药理作用：①抗菌作用：桂枝醇提物在体外能抑制大肠杆菌、枯草杆菌及金黄色葡萄球菌，有效浓度为25 mg/mL或以下；对白色葡萄球菌、志贺氏痢疾杆菌、伤寒和副伤寒杆菌、肺炎球菌、产气杆菌、变形杆菌、炭疽杆菌等均有抑制；②抗病毒作用：桂枝煎剂对流感病毒有抑制作用。

结合桂枝的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，当归在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

独活（伞形科植物重齿毛当归Angelica pubescens Maxim. f. biserrata Shan et Yuan的干燥根）：主要含香豆素类化合物，如：佛手柑内酯。蛇床子素等；还含有挥发油：百里香酚，对-甲基苯酚等。

独活，辛、苦，微温。归肾、膀胱经。具有祛风除湿，通痹止痛的功效。用于风寒湿痹，腰膝疼痛，少阴伏风头痛，风寒挟湿头痛。

现代药理研究表明，独活主要有以下三个方面的药理作用：①抗炎、镇痛及镇静作用；②对血小板聚集有抑制作用；③降压作用，但不持久，所含香柑内酯、花椒毒素等有光敏及抗肿瘤作用。

结合独活的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，独活在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

防风（伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata (Turcz.) Schischk.的干燥根）：防风根主要含①色酮类成分：防风色酮醇，4′-O-葡萄糖基-5-O-甲基齿阿密，3′-O-当归酰基亥酚，亥茅酚，3′-O-乙酰基亥茅酚，亥茅酚甙，5-O-甲基具阿米醇，升麻素，升麻素甙；②香豆精类成分：香柑内酯，补骨脂素，欧前胡内酯，珊瑚菜素，德尔妥因，花椒毒素，川白芷内酯，东莨菪素；③聚乙炔类成发：人参炔醇，镰叶芹二醇，防风酸性多糖A、C；④挥发油含数10种成分，能鉴定的共20种，含量较高的有辛醛，β-甜没药烯，壬醛，7-辛烯-4-醇，已醛，侧析烯和β-桉叶醇等。⑤还含β-谷甾醇，β-谷醇-β-D-葡萄糖甙，甘露醇，香草酸等。

防风，辛、甘，微温。归膀胱、肝、脾经。具有祛风解表，胜湿止痛，止痉的功效。用于感冒头痛，风湿痹痛，风疹瘙痒，破伤风。

现代药理研究表明，防风主要有以下四个方面的药理作用：①抗过敏、抗炎：防风有抑制DNCB所致的迟发型超敏反应的作用；②解热、镇痛：将家兔用三联疫苗（百日咳、白喉、破伤风疫苗）制成动物致热模型。防风水煎液2 g/kg，以安替匹林和生理盐水作对照。防风水煎液在1~2小时内解热作用明显；③抗惊厥：防风水提物可延长小鼠惊厥发生的潜伏期；④其他：其水煎剂金黄色葡萄糖球菌、乙型溶血性链球菌和肺炎双球菌均有一定的抑制作用。

结合防风的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，防风在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

细辛（马兜铃科植物北细辛Asarum heterotropoides Fr. Schmidt var. mandshuricum (Maxim.)Kitag.、汉城细辛Asarum sieboldii Miq. var. seoulense Nakai 或华细辛Asarum sieboLdii Miq.的干燥根和根茎）：细辛全草含挥发油2.5%， 油中主要成分为甲基丁香酚、黄樟醚、细辛醚、榄香素，尚含优香芹酮、爱草醚、蒎烯、莰烯、桉油精、去甲基衡州乌药碱、辛味物质派立托胺和-N-异丁基-2,4,8,10-十二碳四烯酰胺等，油中主要成分为α-侧柏烯（α-月桂烯、γ-松油醇、榄香素， 尚含α-松油醇、黄樟醚、甲基丁香酚、肉豆蔻醚、芳樟醇、细辛醚、柠檬烯等．华细辛还含有正十五烷、谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、芝麻脂素和N-异丁基十四碳四烯酰胺等．汉城细辛含挥发油1%，油中主要成分为优香芹酮，另含α-或β-蒎烯、桉油精、甲基丁香酚、黄樟醚、α-甲氧基黄樟醚、榄香素、细辛醚等。

细辛，辛，温。归心、肺、肾经。具有祛风散寒，祛风止痛，通窍，温肺化饮的功效。用于风寒感冒，头痛，牙痛，鼻塞流涕，鼻鼽，鼻渊，风湿痹痛，痰饮咳喘。

现代药理研究表明，细辛主要有以下五个方面的药理作用：①解热镇痛作用；②对心血管系统的影响：细辛挥发油能明显增加小鼠离体心脏的冠脉流量；并能降压，而煎剂能升压；③对呼吸系统的作用：细辛挥发油对组胺或乙酰胆碱致痉的气管平滑肌有非常显著的松弛作用，且其抗组胺作用较抗乙酰胆碱强；③抗炎；④其他：镇咳、祛痰等。

结合细辛的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，细辛在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

甘草（豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycy-rrhiza inflata Bat.、或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根茎）甘草含有多种化学成分，主要成分有甘草酸、甘草苷等。甘草的化学组成极为复杂，目前为止从甘草中分离出的化合物有甘草甜素、甘草甙、异甘草甙、新甘草甙、新异甘草甙、甘草素、异甘草素以及甘草西定、甘草醇、异甘草醇、7-甲基香豆精、伞形花内酯等数十种化合物，但这些成分和数量通常会随甘草的种类、种植区域、采收时间等因素的不同而异。大量的研究表明，甘草甜素和黄酮类物质是甘草中最重要的生理活性物质，主要存在于甘草根表皮以内的部分。

甘草，甘，平。归心、肺、脾、胃经。具有补脾和胃，益气复脉的功效。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心动悸，脉结代。

现代药理研究表明，甘草主要有以下四个方面的药理作用：①对消化系统的作用：除去甘草甜素的浸膏及甘草中黄酮甙类对大鼠实验性溃疡有明显保护作用；②肾上腺皮质激素样作用：甘草浸膏、甘草甜素及甘草次酸对健康人及动物都有促进钠，水潴留的作用；小剂量甘草甜素（每只100 μg）能使大鼠胸腺萎缩及肾上腺重量增加，产生糖皮质激素可的松样作用。大剂量时则糖皮质激素样作用不明显，只呈现盐皮质激素样作用；③抗炎：对巴豆油所致小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用；④其他：抗菌、抗肿瘤、解毒等。

结合甘草的有效成分、药理学的研究、临床应用及功能主治的特色，甘草在本发明中采用水煎煮提取的制备工艺。

下面通过一个试验例来验证本发明的技术效果：

1.试验目的：

通过随机、开放、对照的设计，对本发明的方法制备出的补肾祛风更年方治疗妇女绝经前后诸证的肾阴阳两虚型的疗效及安全性进行临床观察。

试验对象纳入标准：

①符合西医诊断标准。

②符合中医诊断标准。

③年龄在40~55岁的妇女

④3个月内没有使用过激素及其它中药治疗者。

⑤已经签订了知情同意书的患者。

⑥能够随访者。

试验对象排除标准：

①患者不符合西医的诊断标准和中医的辨证标准。

②患者年龄在40岁以下或者55岁以上。

③在3个月内使用过性激素或者使用过对性激素水平有影响的药物。

④不明原因的不规则阴道流血没有治愈,子宫切除术后,双侧卵巢切除术后,妇科器质性病变及生殖器恶性肿瘤者。

⑤合并严重心脑血管、肝、肾等脏器病变和内分泌代谢性疾病、高血压、精神病患者。

⑥没有签署知情同意书和不能够随访的患者。

安全性观测指标：

①血、尿、大便常规检查。

②肝、肾功能检查。

疗效性观测指标：

（1）主要症状：形寒肢冷、潮热出汗、面色晦暗、易激动、失眠、疲乏、夜尿频数，骨关节、肌肉痛、面浮肢肿、眩晕，心悸、抑郁、性交痛等症状。

（2）主要体征：舌象、脉象等。

（3）理化检查：血FSH、.LH、.E2及血、尿、便常规检查，前3项必做，其他根据病情需要酌情选做。

研究对象分组：

入选符合上述标准且自愿参加本次临床观察的绝经前后诸证患者共计130例，按随机分组原则分为合剂组和对照组，合剂组使用本发明制备的补肾祛风更年方的合剂型。合剂组：100例，年龄40-55岁，平均50.33±3.11岁，病程4－7年，平均6.14±1.70年；对照组：30例，年龄40－55岁，平均50.00±2.841岁，病程4－7年，平均5.97±1.73年；两组一般资料具有可比性。

治疗方法：

合剂组：按本发明的组方自拟更年汤：熟地12g  怀山药12g   枣皮12g 仙茅12g  仙灵脾12g  巴戟天12g 当归10g 桂枝9g 独活9g 防风9g 桑寄生12g 细辛3g 炙甘草6g。每剂由贵阳中医学院第二附属医院机煎药房制成规格为100ml/袋的袋装中药3袋。并随症加减。

对照组：按教材方熟地黄15g、附子（炮附片）6g、肉桂6g、山药12g、山茱萸12g、菟丝子12g、鹿角胶6g、枸杞子15g、当归10g、杜仲10g，每剂由贵阳中医学院第二附属医院机煎药房制成规格为100ml/袋的袋装中药3袋。并随症加减。

疗程：

合剂组：按本发明的组方自拟的更年汤100ml，口服，3次/天；对照组：教材方100ml，口服，3次/天。两组均以30天为1疗程，观察治疗3疗程。两组在服药的同时，均对患者进行绝经及绝经后疾病的健康教育和心理调护。

疗效判定标准：

治愈：中医临床症状、体征消失或基本消失，证候积分减少≧95%

显效：中医临床症状、体征明显改善，证候积分减少≧70%；

有效：中医临床症状、体征均有好转，证候积分减少≧30%；

无效：中医临床症状、体征均无明显改善，甚或加重，证候积分减少不足30%。

所有临床资料数据由SPSS 16.0 统计分析。 计量资料以“x±s”表示，组间比较采用成组t检验，组内各疗程间比较采用单因素方差分析；计数资料用协方差分析；疗效等级资料采用秩和检验。

试验结果如下表1-表6所示：

注：1、交互项组别*用药前：F=0.229、P=0.633＞0.05，可以认为各组回归直线是平行的，可以使用协方差分析；2.Corrected Model的F=5.113，P=0.007＜0.05，所选模型具有统计学意义；3.组别的检验统计量F=6.700，P=0.011＜0.05，说明校正用药前的FSH后，两组治疗后的FSH差异有统计学意义；4.用药前F=4.324，P=0.040＜0.05，可认为协变量用药前的FSH对用药后的影响有统计学意义；5.调整后的均数对照组67.755＞合剂组63.103，所以合剂组优于对照组。

注：1、交互项组别*用药前：F=2.236、P=0.137＞0.05，可以认为各组回归直线是平行的，可以使用协方差分析；2.Corrected Model的F=37.783，P=0.000＜0.05，所选模型具有统计学意义；3.组别的检验统计量F=39.642，P=0.000＜0.05，说明校正用药前的LH后，两组治疗后的LH差异有统计学意义；4.用药前F=44.153，P=0.000＜0.05，可认为协变量用药前的LH对用药后的影响有统计学意义；5.调整后的均数对照组44.436＞合剂组39.882，所以合剂组优于对照组。

注：1、交互项组别*用药前：F=0.716、P=0.399＞0.05，可以认为各组回归直线是平行的，可以使用协方差分析；2.Corrected Model的F=99.842，P=0.000＜0.05，所选模型具有统计学意义； 3.组别的检验统计量F=44.340，P=0.000＜0.05，说明校正用药前的E2后，两组治疗后的E2差异有统计学意义；4.用药前F=58.437，P=0.000＜0.05，可认为协变量用药前的E2对用药后的影响有统计学意义；5.调整后的均数对照组82.657＜合剂组92.848，所以合剂组优于对照组。

注：两组治疗1个疗程后两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；两组治疗2个疗程后两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；两组治疗3个疗程后两组比较差异有显著统计学意义（P＜0.01），合剂组较对照组改善症状疗效更好。

注：与对照组比较 Z=-3.293，P＜0.05。合剂组、 对照组总有效率分别为90%、66.67%，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05），提示合剂组疗效优于对照组。

安全性分析：

全部病例治疗观察期间，密切监测肝肾功、三大常规等均无变化。合剂组中有一例在开始服药的前两天中，出现腹泻，但症状轻微，每天2-3次，不影响继续治疗，两天后症状逐渐好转，一周后消失，不良反应发生率为1%。对照组中有一例出现头晕，两例出现乏力、嗜睡、口干，但症状轻微，不影响继续治疗，不良反应发生率为10%。从用药安全性考虑：合剂组相对较好。

结论与讨论：

通过以上两组病例的临床观察研究发现，合剂组在针对肾阴阳虚型患者的主症及次症的治疗及在降低血清促卵泡生成激素、促黄体生成激素、提高血清雌二醇方面合剂组均明显优于对照组。基于以上结果，我们将本发明与右归丸进行比较分析如下：自拟更年汤，组成：熟地12g  怀山药12g   枣皮12g 仙茅12g  仙灵脾12g  巴戟天12g 当归10g 桂枝9g 独活9g 防风9g 桑寄生12g 细辛3g 炙甘草6g。畏寒肢冷者桂枝易为肉桂10g，小便清长，夜尿频数者加五味子12g，肉苁蓉12g，桑螵蛸12g，益肾固涩，肾阴阳俱虚加制龟板15g，女贞子12g，旱莲草12g，肾阳亏虚明显者加鹿角霜15g。方中熟地、怀山药、枣皮滋补肾阴，以阴中求阳；仙茅、仙灵脾、巴戟天温补肾阳；桂枝、当归加强温通经脉，助阳化气之功；且桂枝能入肝肾血分而祛寒；独活、细辛入肾经，能搜伏风；防风周行肌表，使之外出；桑寄生祛风胜湿，以助阳气外达。全方共奏补肾温阳，祛风散寒之功。右归丸：熟地黄15g、附子（炮附片）6g、肉桂6g、山药12g、山茱萸12g、菟丝子12g、鹿角胶6g、枸杞子15g、当归10g、杜仲10g。若兼月经量多或崩中漏下者，重用鹿角胶，加用赤石脂、补骨脂，以增强温肾固冲止崩之功，若兼腰背冷痛明显者，加川椒、巴戟天，以增补肾扶阳，温补督脉之效。方中以附子、肉桂、鹿角胶为君药，温补肾阳，填精补髓。臣以熟地黄、枸杞子、山茱萸、山药滋阴益肾，养肝补脾。佐以菟丝子补阳益阴，固精缩尿；杜仲补益肝肾，强筋壮骨；当归补血养肝。诸药配合，共奏温补肾阳，填精止遗之功。此方较前方比较无祛风散寒之品，故温通经脉，助阳气外达之力不胜前方。此乃两方组方、方义不同之处。即是自拟更年汤优于右归丸的作用机制所在。从其现代药理作用机制来看，本发明的药方具有补肾温阳滋阴，增加免疫功能，改善微循环的作用肯定。患者的生殖内分泌－免疫调节功能从紊乱恢复达到新的调节平衡而使症状改善。而独活、防风、桑寄生、细辛具有扩张血管、解痉利尿、改善微循环之作用，其是否能够改善或增强盆腔血液循环，从而促进卵巢血容量的增加，促使卵巢分泌激素量增加，有待进一步研究和探讨。全部病例治疗观察期间，密切监测肝肾功、血尿便常规等实验室检查，均无明显变化，临床应用具有安全性。故本发明制备出的补肾祛风更年方治疗妇女绝经前后诸证的肾阴阳两虚型疗效性好、安全性高，是一种治疗妇女绝经前后诸证有效、简便、安全的中药制剂。

典型病例：

倪某,女,48岁,因“反复腰骶酸痛伴心悸失眠1年,加重1月” 于2007年10月12日就诊。患者自服更年期药物治疗后症状部分缓解。之后无明显诱因出现形寒肢冷、腰骶酸痛、小便清长、夜尿频数，3月前自行停服药物后症状加重。现症见：形寒肢冷、腰骶酸痛、小便清长、夜尿频数，面色晦暗、精神萎靡，心悸失眠、眩晕耳鸣、健忘，舌淡、苔白滑、脉沉细。中医诊断为“绝经前后诸证”，证属肾阳虚，治宜补肾温阳，祛风散寒，予本发明制备出的补肾祛风更年方治疗，口服每次10g，每日3次。1月后复诊时面色红润、精神可，食欲较前好转，舌脉基本同前。提示治疗有效，继续服用本发明制备出的补肾祛风更年方，2月后复诊时诉形寒肢冷、腰骶酸痛、眩晕耳鸣消失，睡眠明显改善，仅劳累后略感腰骶酸痛，达到临床治愈。

附图说明

图1是制备工艺流程图；

图2是煎煮工艺对照品色谱图；

图3是煎煮工艺正交实验色谱图一；

图4是煎煮工艺正交实验色谱图二；

图5是煎煮工艺正交实验色谱图三；

图6是水提取工艺三批验证色谱图；

图7是中试样品含量测定色谱图；

图8是中试样品薄层鉴别图谱。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。

实施例：

一.处方及制法：

处方：熟地黄120 g、仙茅120 g、山药120 g、山茱萸120 g、淫羊藿120 g、盐巴戟天120 g、桑寄生120 g、酒女贞子120 g、墨旱莲120 g、当归100 g、桂枝90 g、独活90 g、防风90 g、细辛30 g、甘草60 g ；制成1000 mL。

制法：以上十五味药，加水煎煮3次，第一次加10.5倍水，第二、三次各加8倍量水，每次煎煮0.5小时，滤过，合并滤液；滤液常压浓缩到约800 mL，加入0.5 g羟苯乙酯（用少量乙醇溶解），混匀，加纯化水至1000 mL，搅匀，分装，即得。

本发明的制备工艺流程图如图1所示。本发明的工艺路线确定如下：熟地黄、仙茅、山药等十五味药材加水煎煮提取→水提液浓缩为药液→加入适量羟苯乙酯，混匀，定容，分装→成品。

二.药材前处理工艺研究：

熟地黄：玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥块根的炮制加工品，切厚片或块，干燥，即得。

仙茅：石蒜科植物仙茅Curculigo orchioides Gaertn.的干燥根茎，除去根头和须根，洗净，干燥。

山药：薯蓣科植物薯蓣Dioscorea opposita Thunb.的干燥根茎，除去杂质，分开大小个，泡润至透，切厚片，干燥。

山茱萸：山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb. et Zucc.的干燥成熟果肉。

淫羊藿：小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum (Sieb. et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥叶。

盐巴戟天：茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How的干燥根，照盐蒸法（《中国药典》2010年一部 附录II D）蒸透，趁热除去木心，切段，干燥。

桑寄生：桑寄生科植物桑寄生Taxillus chinensis (DC.) Danser的干燥带叶茎枝，除去粗茎，切段，干燥，或蒸后干燥。

酒女贞子：木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实，照酒炖法或酒蒸法（《中国药典》2010年一部 附录 II D）炖至酒吸收或蒸透。

墨旱莲：菊科植物鳢肠EcLipta prostrata L.的干燥地上部分，除去杂质，略洗，切段，干燥。

当归：伞形科植物当归Angelica sinensis (OLiv.) Diels的干燥根，除去杂质，洗净，润透，切薄片，晒干或低温干燥。

桂枝：樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥嫩枝，除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥。

独活：伞形科植物重齿毛当归Angelica pubescens Maxim. f. biserrata Shan et Yuan的干燥根，除去杂质，洗净，润透，切薄片，晒干或低温干燥。

防风：伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata (Turcz.)Schischk.的干燥根，除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥。

细辛：马兜铃科植物北细辛Asarum heterotropoides Fr. Schmidt var. mandshuricum (Maxim.)Kitag.、汉城细辛Asarum sieboldii Miq. var. seoulense Nakai 或华细辛Asarum sieboldii Miq.的干燥根和根茎，除去杂质，喷淋清水，稍润，切段，阴干。

甘草：豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycy-

rrhiza inflata Bat.、或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根茎，除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥。

三.工艺条件的筛选：

    （一）提取工艺研究：

    1 药材吸水率的测定：

称取1/2临床处方量药材共计77 g，加8倍量水浸泡，浸泡不同时间，滤过，称湿药重量（至药材重量不再增加为止)，测定药材吸水率，公式如下（结果见表1-1）。

mb—药材吸水饱和状态下的质量（g）    

    mg—药材在干燥状态下的质量（g）

由表1-1可知，药材吸水率为2.1倍，为方便操作，以吸水率为2.5倍计算，即药材吸水量为药材重的2.5倍。因此首次水提时应该多加药材重量的2.5倍量的水。

浸泡时间的单因素考察：

在满足药材吸水率的条件下，考察浸泡时间，对处方出膏率的影响, 以总固体物收率为考察指标，优选出对处方出膏率影响最大的浸泡时间。

试验方法和结果：

    2.1.1 样品制备  ：

称取1/2临床处方量药材共计77 g，首次加10.5倍量水，后2次加8倍量水，根据传统用药习惯并综合考虑医院制剂室实际生产情况，分别浸泡0 h、0.5 h、4 h和浸泡过夜，煎煮2次，每次0.5 h，过滤，合并滤液，药液定溶至50 mL，备用。

总固体物收率测定：

从上述药液中各精密取两份10 mL，至已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，照干燥失重测定法（《中国药典》2010年版一部 附录IX G）测定，计算总固体物收率，公式如下（结果见表2-1，方差分析见表2-2）。

W为10 mL滤液中固体物的重量，V为定容体积，Wt为样品投料重量。

单因素方差分析表明：p>0.05，说明不同的浸泡时间无显著性差异；根据传统工艺和节约成本的需要，选用浸泡时间为0.5 h。

煎煮工艺的正交因素：

在满足药材吸水率的条件下，浸泡0.5 h，考察加水量、煎煮时间、煎煮次数三个影响煎煮效果的主要因素，按每个因素3水平，用L₉(3⁴)正交表安排试验（表3-1）。水煮工艺采用正交试验进行筛选（表3-2），为了使工艺能充分反映药物疗效，并结合本方药物组成的特点及本方的功能主治，以本方中淫羊藿的有效成分反淫羊藿苷的含量为指标对工艺进行评价，优选水提条件。正交结果方差分析及因素水平分析见表3-3，表3-4。

样品制备：

称取1/2临床处方量药材共计77 g，按正交试验表进行试验（表3-2）（第一次浸泡0.5 h），药液滤过，合并滤液，浓缩，药液定容至50 mL，备用。

试验样品中淫羊藿苷的测定：

3.2.1 仪器：

AgiLent technoLongies 1260 Infinity、G4212B DAD二极管阵列检测器；梅特勒 MS105DU电子天平；舒美KQ-500DA型数控超声波清洗器。

试药：

乙腈（色谱纯）、稀乙醇、甲醇（分析纯），水为重蒸水，淫羊藿苷对照品（中国食品药品检定研究院，国家药品标准物质，批号：110737-200415），补肾祛风更年方正交试验样品，缺淫羊藿的阴性样品。

方法与结果：

3.3.1 色谱条件与系统适应性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱Agilengt C₁₈（CAPCELL PAKC18，5 μm，4.6 × 250 mm）；乙腈-水溶液(30:70)为流动相；检测波长为270nm 。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000。

对照品储备液的配制：

精密称取在60℃减压干燥4小时的淫羊藿苷对照品0.02028 g置20 mL量瓶中，加甲醇超声溶解并至刻度，摇匀，配成1.014 mg/mL的储备液。

    3.3.3 对照品溶液的配制：

    精密量取对照品储备液1.0 mL置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成0.1014 mg/mL的对照品溶液；对照品色谱图如图2所示。

供试品溶液配制：

精密量取样品2 mL置20 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。

    3.3.5 含量测量：

    精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，记录，计算含量，结果见表3-2，表3-3，图3、图4、图5。

结果分析：

以样品中淫羊藿苷含量为指标，从表3-2、表3-3分析可得：因素A、B、C均无显著性影响，为次要因素，结合临床长期应用的生产方案，考虑节约成本和生产需要选择A水平1，B水平3，C水平1，则该处方拟定最佳提取工艺条件为：A₁B₃C₁，即处方药材加水煎煮3次，第一次加10.5倍水，第二、三次各加8倍量水，每次煎煮0.5小时，滤过，合并滤液。

三批样品的工艺验证实验：

取处方药材，按最佳提取工艺条件A₁B₃C₁提取，测定淫羊藿苷含量，结果表明（见表3-5，图6）：总固体物收率平均值为31.88%，RSD=2.87%，说明工艺稳定可行。

浓缩：

    因该制剂为传统工艺合剂，考虑传统习惯及实际生产情况，采用常压浓缩。

（二）制剂成型工艺研究：

    为了增加合剂的稳定性，保证制剂的质量，必须选择有效的防腐剂。根据《中国药典》2010年版一部，药用最常用的防腐剂分别为苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐及羟苯乙酯类。苯甲酸及其钠盐是一种酸性防腐剂，当pH为2.5~4时其抑菌作用较强；当pH>5.5时，抑菌效果明显减弱，且对真菌和酵母菌抑制效果较差，且毒性较大。因此，不宜作为本制剂的防腐剂。山梨酸及其钾盐也是酸性防腐剂，对真菌和酵母菌有很好抑制作用，其适用的pH值范围为<6。羟苯乙酯的毒性比苯甲酸及其钠盐低得多，应用pH值范围广，其抑菌作用几乎不受pH值的影响，对霉菌、酵母、细菌有广泛的抗菌作用。

防腐剂的选择：

分别取含0.3%的山梨酸（《中国药典》2010版一部，规定最大山梨酸用量）及0.05%的羟苯乙酯（《中国药典》2010版一部，规定最大山梨酸用量）的补肾祛风更年方在温度为45℃，分别在0月、1月、2月、3月，相对湿度为75%环境下，照微生物限度法（《中国药典》2010年版一部 附录XIII C）测定检查，结果见表5-1。

结果：山梨酸在加速条件下3个月开始防腐失效。

分别取含0.3%的山梨酸及0.05%的羟苯乙酯的补肾祛风更年方分别在0个月、3个月、6个月、7个月，在室温环境下，照微生物限度法（《中国药典》2010年版一部 附录XIII C）测定检查，结果见表5-2。

结果：山梨酸在室温条件下6个月时开始防腐失效。

    据表5-1，表5-2拟定选择羟苯乙酯作为补肾祛风更年方的防腐剂。

防腐剂的用量：

根据本制剂含水分较重，容易发霉变质的特点，且《中国药典》（2010年版一部）规定，羟苯酯类的用量不得超过0.05%，故选择浓度分别为0.01%、0.03%、0.05%羟苯乙酯为本制剂的防腐剂进行对比。

取含不同浓度羟苯乙酯的补肾祛风更年方（分别含羟苯乙酯0.01%、0.03%、0.05%），分别在0个月、1个月、2个月、3个月，在温度为45℃，相对湿度为75%环境下，照微生物限度法（《中国药典》2010年版一部 附录XIII C）测定检查，结果见表5-3。

结果：0.01%羟苯乙酯，0.03%羟苯乙酯在加速条件下3个月时防腐失效。

取含不同浓度羟苯乙酯的补肾祛风更年方（分别含羟苯乙酯0.01%、0.03%、0.05%），分别在0个月、3个月、6个月、7个月，在室温环境下，照微生物限度法（《中国药典》2010年版一部 附录XIII C）测定检查，结果见表5-4。

结果：0.01%羟苯乙酯，0.03%羟苯乙酯在室温条件下7个月时防腐失效。

通过3个月的加速试验及7个月稳定性试验，发现仅有0.05%的羟苯乙酯具有良好的防腐作用，能够确保制剂的质量，故选择0.05%浓度作为防腐剂。

（三）中试研究：

    按拟订制备工艺条件进行三批放大10倍生产，对生产工艺指标进行全面考核，对药材和成品进行质量评定，考察本品制备工艺的合理性。由中试工艺参数统计表中数据显示，按所投料理论应生产100瓶（100 mL/瓶）成品计，拟订该制剂成品实际得率不低于85% 。

    经三批中试生产结果表明，本产品各项技术参数与工艺优选条件相同，且工艺条件稳定，说明工艺可行，适合批量生产（见表6-1，图7，图8）。

当然，以上只是发明的具体应用范例，本发明还有其他的实施方式，凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明所要求的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种治疗妇女绝经综合征的补肾祛风更年方的制备方法，其特征在于：补肾祛风更年方由以下重量份数的原料药制成：熟地黄114～132份、仙茅114～132份、山药114～132份、山茱萸114～132份、淫羊藿114～132份、盐巴戟天114～132份、桑寄生114～132份、酒女贞子114～132份、墨旱莲114～132份、当归95～110份、桂枝94.5～99份、独活94.5～99份、防风95～99份、细辛31.5～33份、甘草57～66份；

其制备方法是：将组方中的十五味原料药，加水煎煮3次，每次煎煮0.5小时，滤过，合并滤液；滤液常压浓缩，加入羟苯乙酯，混匀，加纯化水，搅匀，分装，即得。

2.根据权利要求1所述的治疗妇女绝经综合征的补肾祛风更年方的制备方法，其特征在于：所述加水煎煮3次中第一次加10.5倍量水，第二、三次各加8倍量水。

3.根据权利要求1所述的治疗妇女绝经综合征的补肾祛风更年方的制备方法，其特征在于：所述羟苯乙酯先用乙醇溶解后再加入。