CN105902951A

CN105902951A - 联合化疗药治疗骨肉瘤的中药复方组合物

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Publication number: CN105902951A
Application number: CN201610285595.9A
Authority: CN
Inventors: 张绪伟
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2016-05-03
Filing date: 2016-05-03
Publication date: 2016-08-31

Abstract

本发明提供了一种联合化疗药治疗骨肉瘤的中药复方组合物，其原料药包括党参、炒白术、炙黄芪、茯苓、生甘草、法半夏、陈皮、木香、当归、白芍、丹参、川芎、熟地黄、延胡索、香附、狗脊、桑寄生、续断、秦艽、刺五加、三棱、莪术、斑蝥、地龙、全蝎、海藻、生牡蛎、夏枯草和王不留行。本发明中药复方组合物具有很好的治疗骨肉瘤的作用，并且改善患者带瘤生存质量，适用于临床推广。

Description

联合化疗药治疗骨肉瘤的中药复方组合物

技术领域

本发明涉及中医药技术领域，尤其涉及一种联合化疗药治疗骨肉瘤的中药复方组合物。

背景技术

骨肉瘤是最常见的原发恶性骨肿瘤，好发于青少年，多发于长骨两端，患者一旦发病，从发现到确诊一般已经处于中晚期，手术治疗机会大大减少，而仅限于化疗，但是化疗毒副作用大，从而使一部分患者倾向于中医药治疗或中医辅助治疗，使得中医药在治疗骨肉瘤方面有一定的发展空间。

中医从整体观念出发，将骨肉瘤的病因归纳为内因、外因和不内外因，认为其发病机理是肾气亏虚，肾精亏损，劳倦内伤，骨髓空虚，毒邪乘虚而入，尤以寒邪热毒等邪陷肌肤，毒攻于内，伤筋蚀骨，或暴力损伤骨骼，气滞血凝，经络受阻，日久不化，蕴结成毒，耗伤阴液，腐骨蚀骼，聚结成瘤；或由于肾气不足，骨无营养，寒湿之邪侵袭，痰浊蕴阻骨骼积聚日久，以致瘀血毒邪凝滞，络道阻塞聚而成形发为骨瘤。所以治疗上宜标本同治，虚实兼顾。

当前骨肉瘤的治疗上，手术和化疗仍然占主导地位，手术技术的提高和化疗的规范化使骨肉瘤患者的长期生存率有所提高，但是化疗的副作用很明显，如胃肠道反应、内脏损坏、骨髓抑制等等，中西医结合治疗可以很好地解决这些问题。

中西医结合治疗骨肉瘤，当前临床研究主要集中于中药对骨肉瘤化疗增敏作用和防治化疗副作用的研究上。中医药在对局部病灶的处理上不及西医的效果那么明显，但是中医药对调整患者的全身状况，纠正脏腑失调，增强化疗和手术效果，减轻化疗的毒副作用，增强患者自身的免疫力，从而提高生活质量及生存率都有独到之处，弥补西医只重视局部而忽视整体的弊端。

目前认为，骨肉瘤的化疗应尽可能早点进行。化疗后患者全身状况较差，单纯化疗效果并不理想，且化疗药物大多具有细胞毒性，在抑制肿瘤细胞生长的同时，也杀伤正常细胞，使患者术后免疫功能更加低下，临床上因细胞减少和严重贫血等化疗药物毒副作用造成化疗中断或终止者并不少见。因此，化疗药物增敏作用的提高，化疗药物毒副作用的降低，人体免疫功能的提高，是临床化疗治疗骨肉瘤的重要因素。中医在临床上常应用补肾健脾、软坚散结、祛痰破瘀、扶正固本的方法组方来达到此目的。

本发明中药复方组合物通过理论分析，并进行一定样本量的临床观察，进一步利用现代医学技术进行体内外实验研究以探讨本发明中药复方组合物抗肿瘤作用机理，为该方的临床合理应用提供科学实验依据，得出的结论证实，本发明中药复方组合物联合化疗药，对骨肉瘤具有很好的治疗作用，对化疗起到增敏作用，降低化疗药毒副作用，有效提高患者带瘤生存质量，适用于临床推广。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种联合化疗药治疗骨肉瘤的中药复方组合物，本发明中药复方组合物联合化药，具有很好的治疗骨肉瘤的作用，并且改善患者带瘤生存质量，适用于临床推广。

基于此，本发明提供了一种联合化疗药治疗骨肉瘤的中药复方组合物，其原料药包括党参、炒白术、炙黄芪、茯苓、生甘草、法半夏、陈皮、木香、当归、白芍、丹参、川芎、熟地黄、延胡索、香附、狗脊、桑寄生、续断、秦艽、刺五加、三棱、莪术、斑蝥、地龙、全蝎、海藻、生牡蛎、夏枯草和王不留行。

其中，所述中药复方组合物中各原料药的重量分别为党参35g～50g、炒白术20g～30g、炙黄芪25g～40g、茯苓15g～25g、生甘草10g～20g、法半夏15g～25g、陈皮10g～20g、木香15g～25g、当归10g～30g、白芍25g～30g、丹参15g～20g、川芎25g～35g、熟地黄20g～30g、延胡索10g～20g、香附5g～15g、狗脊10g～20g、桑寄生10g～20g、续断5g～15g、秦艽10g～20g、刺五加20g～30g、三棱15g～25g、莪术20g～30g、斑蝥5g～15g、地龙10g～20g、全蝎15g～25g、海藻10g～20g、生牡蛎10g～20g、夏枯草15g～25g、王不留行20g～30g。

其中，所述中药复方组合物中各原料药的重量分别为党参40g～45g、炒白术25g～30g、炙黄芪30g～35g、茯苓20g～25g、生甘草10g～15g、法半夏20g～25g、陈皮15g～20g、木香15g～20g、当归20g～25g、白芍25g～30g、丹参15g～20g、川芎30g～35g、熟地黄20g～25g、延胡索10g～15g、香附5g～10g、狗脊15g～20g、桑寄生10g～15g、续断5g～10g、秦艽10g～15g、刺五加25g～30g、三棱15g～20g、莪术25g～30g、斑蝥5g～10g、地龙10g～15g、全蝎15g～20g、海藻10g～15g、生牡蛎10g～15g、夏枯草15g～20g、王不留行20g～25g。

其中，所述中药复方组合物中各原料药的重量分别为党参45g、炒白术25g、炙黄芪35g、茯苓20g、生甘草15g、法半夏20g、陈皮15g、木香20g、当归20g、白芍30g、丹参20g、川芎30g、熟地黄25g、延胡索15g、香附10g、狗脊15g、桑寄生15g、续断10g、秦艽15g、刺五加25g、三棱20g、莪术25g、斑蝥10g、地龙15g、全蝎20g、海藻15g、生牡蛎15g、夏枯草20g、王不留行25g。

本发明还提供一种联合化疗药治疗骨肉瘤的药物，其由活性成分和药学上可接受的赋形剂或载体组成，所述活性成分为上述中药复方组合物的提取物。

其中，所述药学上可接受的赋形剂包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等。

其中，所述中药复方组合物的剂型为口服剂型，包括煎煮剂、胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂、口服液、酒剂、丸剂、微丸剂、合剂或酊剂。

本发明还提供了上述中药复方组合物的提取方法，其包括：

第一步，按重量配比取法半夏、当归、白芍、丹参、川芎、熟地黄、延胡索、狗脊、桑寄生、续断、秦艽、刺五加、三棱、莪术、斑蝥、地龙、全蝎、海藻、生牡蛎和王不留行药材，粉碎，混合在一起，用相对于混合物质量8～12倍量醇浓度50～80％乙醇渗漉提取，渗漉液浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂吸附，树脂用量为该步使用药材总量的0.5～3倍，2～4倍树脂体积的纯水洗脱杂质，先用4倍树脂体积的醇浓度70％的乙醇洗脱，在用3倍树脂体积的醇浓度80％的乙醇洗脱，在用3倍树脂体积的醇浓度90％的乙醇洗脱，洗脱液合并并浓缩，干燥粉碎，得第一细粉；

第二步，按重量配比取余下原料药组分，粉碎，混合在一起，加相对于混合物质量6～10倍量水，100℃提取2～4次，每次0.5～2小时，水煎液合并，滤液减压浓缩至相当于该步药材0.5-2g/mL，加2-5倍量醇浓度95％乙醇沉淀，上清液浓缩至无醇味，用盐酸调节pH1～3，乙酸乙酯萃取2～5次，萃取液减压浓缩，干燥粉碎，得第二细粉；

第三步，将第一细粉和第二细粉混合均匀，得到中药复方组合物提取细粉。

本发明还提供一种药物口服液，取300g中药复方组合物提取细粉，加入300ml水搅拌均匀，2-4℃冷藏12h，滤过，滤液加入适宜的防腐剂和矫味剂，加水调至1000ml，即得口服液。

有益的技术效果

本发明提供的中药复方组合物联合化药，具有很好的治疗骨肉瘤的作用，并且改善患者带瘤生存质量，适用于临床推广。

具体实施方式

本发明提供了一种联合化疗药治疗骨肉瘤的中药复方组合物，其原料药包括党参、炒白术、炙黄芪、茯苓、生甘草、法半夏、陈皮、木香、当归、白芍、丹参、川芎、熟地黄、延胡索、香附、狗脊、桑寄生、续断、秦艽、刺五加、三棱、莪术、斑蝥、地龙、全蝎、海藻、生牡蛎、夏枯草和王不留行。

骨肉瘤同其他恶性肿瘤一样，是一种严重影响身体健康。它是最常见的恶性、原发性骨肿瘤，其恶性程度高、发展迅速，如未经正规治疗，半年至一年内肿瘤就会发生肺转移，导致患者死亡。骨肉瘤主要发病部位在下肢，尤其是膝关节周围会出现无原因的关节疼痛，表现为关节周围间歇性疼痛、酸痛、钝痛，服止疼药有效。临床上治疗骨肉瘤往往受技术限制，多采用化疗，然而化疗作用的不确定，化疗药物所导致的毒副作用十分显著，因此近年来多采取中药联合化疗药进行治疗。

本发明中药复方组合物，根据临床中对于骨肉瘤的病因病机进行综合分析，结合现有的治疗手段，按照补肾健脾、软坚散结、祛痰破瘀、扶正固本的原则进行组方用药，其组方思路如下：

骨肉瘤的发病机理是肾气亏虚，肾精亏损，劳倦内伤，骨髓空虚，毒邪乘虚而入，因此补肾健脾是要务，本发明中药复方组合物使用大剂量的生地黄补益肝肾，炒白术健脾益气，两药合用为君药对，生地黄滋补肝肾、炒白术健脾助运，化生气血，两药合用，肝脾肾同补，辅助正气，抗邪外出；用狗脊、桑寄生、续断、秦艽配合生地黄补益肝肾，肾主骨生髓，肝肾得补，则骨髓得充，扶正祛邪，加入党参、炙黄芪、茯苓、生甘草、法半夏、陈皮、木香健脾助运，以补后天脾胃养先天肝肾，其中党参、炙黄芪健脾补气力强，茯苓、法半夏、陈皮、木香有燥湿健脾功效，健脾助运力强，诸药合用，配合君药，共为臣药组；此外，使用当归、白芍、丹参、川芎、熟地黄、延胡索、香附，诸药合用，补气养血，养肝健脾，气血得以生化，脾气得健，全身气血充盈，当归、白芍养血力强，丹参、川芎活血功效，熟地滋补肝肾之功显著，延胡索、香附具有行气活血，化瘀止痛的功效，延胡索、白芍、生甘草活血行气，酸酐化阴，可以起到很好的缓解疼痛的作用，有效改善癌痛，中焦得枢，肝体得养，则疏泄正常，骨肉瘤，本是毒邪、热邪侵袭人体骨骼，因此加入刺五加、三棱、莪术、斑蝥、地龙、全蝎、海藻、生牡蛎、夏枯草、王不留行，清热解毒，软坚散结，以达到祛邪目的，其中刺五加有很好的扶正祛邪的功效，三棱、莪术具有很好的活血化瘀，散瘀结的功效，斑蝥是癌症的特效药物，对于各种肿瘤都有很好的散瘀除结的功效，地龙、全蝎有很好的通络止痛、解毒的功效，海藻、夏枯草、王不留行、生牡蛎都有很好的散瘀结的功效，此外，骨肉瘤肺转移发生率极高，因此使用三棱、莪术、全蝎等药物，有很好的截断疗效，减少肿瘤转移发生，提高患者生存率。

党参：味甘，性平，归肺、脾经，具有补气益脾，养血生津的功效，主治脾肺气虚或气血两虚之倦怠乏力、气短，咳嗽自汗等症状，党参长于补脾养胃，调理中焦，兼有养血的作用，其性平，健脾运而不燥；滋味阴而不湿，能够改善机体的免疫状态，提高抗病能力，促进消化吸收，提高新陈代谢，促进肠道对营养物质的吸收。

炒白术：拉丁名atractylodis macrocephalae rhizoma，味甘、苦，性温，入脾、胃经，有补脾利气，燥湿利水，固表止汗，运脾润燥的作用，主要用于脾失健运、气不化水所致之痞满腹泻，痰饮水肿；中气不足之心烦懒言，崩中漏下，久痢脱肛；脾虚气弱之奏里不固、虚汗自汗等证。

炙黄芪：拉丁名Astragali Radix，味甘，性温，入脾、肺经，有补益脾土，升举阳气、固表止汗，托疮生肌的功效，主治脾肺气虚所致之乏力食少便溏，心悸气短，中气下陷之脏器下垂，气不摄血之崩漏便血，久泻脱肛；表虚不固之自汗盗汗，气血不足等证。

茯苓：味甘、淡，性平，入脾、肺、膀胱、心经，有渗湿利水、健脾宁心的作用，主要用于水湿停滞之水肿，小便不利；湿热蕴结之热淋，脾虚湿困之食少便溏、痰饮停滞、癫痫等证。

生甘草：味甘，性平，入十二经，有清热解毒，调和药性，祛痰止咳的作用，并能健脾和中，缓急止痛，主要用于脾胃虚弱之腹胀纳呆，乏力；能缓解腹中拘挛性疼痛，缓和某些药物的烈性和毒性，减轻药物对机体的毒副作用或对胃肠道的刺激。

法半夏：味辛、性温，归脾、胃、肺经，具有燥湿化痰的功效，主治痰多咳嗽，风痰眩晕，痰厥头痛等证。

陈皮：味辛、苦，性温，归脾、肺经，具有理气健脾，燥湿化痰的功效，主治脾胃气滞，湿浊中阻所致之脘腹胀满，恶心呕吐，食少纳呆，胃寒气逆或胃有虚热之呕逆少食等证。

木香：味辛，苦，性温，归脾，胃，肝，肺经，具有行气止痛，健脾消食的功效，主治胸胁、玩腹胀痛、泻痢后重，食积不消，不思饮食等证。

当归：拉丁名angelicae sinensis radix，味甘、辛，性温，入肝、心、脾经，有补血活血，调经止痛，润肠通便的作用，主要用于心血不足之头晕目眩，倦怠乏力，心悸气短，及其他血虚证；血海空虚，冲任虚寒或淤血阻滞之月经不调，经痛，产或腹痛，及其他血瘀作痛及阴虚血少肠燥之便秘等症状。

白芍：味苦、酸，性凉，入肝、脾经，具有养血柔肝，缓中止痛，敛阴收汗的作用，主治胸腹胁肋疼痛，泻痢腹痛，自汗盗汗，阴虚发热，月经不调，崩漏，带下等证。

丹参：味苦、性寒，入心、肝经，有活血化瘀、祛瘀生新、凉血宁心的作用，主要用于血瘀气滞之心胸，胸胁刺痛，胸闷气短，腹胀；妇女气血不和之月经不调，经痛经闭；气血瘀滞，心腹疼痛等症状。

川芎：味辛，性温，归肝、胆、心包经，具有活血行气，祛风止痛的功效，主治月经不调；经闭痛经；产后瘀滞腥痛；症瘕肿块；胸胁疼痛；头痛眩晕；风寒湿痹；跌打损伤；痈疽疮疡等证。

熟地黄：又名熟地，味甘，性微温，入肝、肾经，具有补血滋阴，益精填髓的作用，用于血虚萎黄；眩晕，心悸，失眠，月经不调，崩不止；肝肾阴亏，盗汗，足膝疼痛，腰膝酸软，耳鸣耳聋，头目昏花；遗精阳痿；不育不孕；月经不调；崩漏下血；须发早白；消渴；便秘；肾虚喘促等证。

延胡索：味苦、辛，性温，归肝、心、胃经，具有善行走散，可升可降，具有活血散瘀，行气止痛的功效，主治胸痹心痛，胁肋、脘腹诸痛，头痛、腰痛、疝气痛、筋骨痛、痛经、经闭，产后瘀腹痛，跌打损伤等证。

香附：味辛、甘、微苦，性平，归肝、三焦经，具有理气解郁，调经止痛的功效，主治肝郁气滞，胸、胁、脘腹胀痛，消化不良，月经不调，经闭痛经，寒疝腹痛，乳房胀痛等证。

狗脊：味苦、甘，性温，入肝、肾经，具有祛风湿，补肝肾，强腰膝的作用，用于腰膝酸软，关节疼痛，屈利不利，肾阳不足、尿频遗尿，遗精滑精，白带过多等证。

桑寄生：味苦，甘，性平，归肝、肾经，具有补肝肾、强筋骨、祛风湿、安胎元的功效，主治肝肾不足所致的腰酸疼痛，筋骨痿软，足膝无力，肝肾不足，精血虚亏，胎元不固之胎动不安，腰腹疼痛等证。

续断：味辛，性微温，归肝、肾经，具有补肝肾；强筋骨；调血脉；续折伤；止崩漏的功效，主治腰背酸痛；肢节痿痹；跌扑创伤、损筋折骨、胎动漏红、血崩、遗精、带下、痈疽疮肿等证。

秦艽：味辛、苦，性微寒，归胃经、肝经、胆经，具有祛风湿，舒筋络，清虚热的功效，主治风湿痹痛，筋脉拘挛，骨节酸痛，日晡潮热，小儿疳积发热等证。

刺五加：拉丁名Acanthopanacis Senticosi Radix et Rhizomaseu Caulis，味辛、苦、微甘，性温，入脾、肾、心经，具有益气健脾，补肾安神，祛风除湿的功效，用于风寒湿痹、腰膝疼痛、筋骨痿软、行动迟缓、体虚羸弱、跌打损伤、骨折、水肿、脚气、阴下湿痒等证。

三棱：味苦、辛，性平，入肝、脾经，具有破血行气，消积止痛的功效，用于血淤闭经，痛经，产后瘀滞腹痛，腹中症瘕痞块，食积气滞，脘腹胀痛等证。

莪术：味辛、苦，性温，入肝、脾经，具有破血行气，消积止痛的功效，用于气滞血瘀所致的症瘕痞块，胸腹瘀痛，闭经，痛经，脘腹胀痛，跌打损伤，血瘀肿痛等证。

斑蝥：拉丁名Lytta vesicatoria，味辛，性热，归胃经、肝经、肾经，具有破血逐瘀消漱，攻毒散结的功效，用于癓瘕肿块，积年顽癣，瘰疬，赘疣，痈疽不溃，恶疮死肌。

地龙：味咸，性寒，归肝、脾、膀胱经，具有清热定惊，通络平喘，利尿的功效，主治高热神昏、关节痹痛，肢体麻木，半身不遂，肺热咳喘，水肿尿少的功效。

全蝎：味辛，性平，归肝经，具有息风镇痉，攻毒散结，通络止痛的功效，主治小儿惊风，抽搐痉挛，中风口歪，半身不遂，破伤风，风湿顽痹，偏正头痛，疮疡，瘰疬等证。

海藻：味苦、咸，性寒，归肝、胃、肾经，具有消痰软坚散结，利水消肿的功效，主治甲状腺肿大，项下淋巴结结核。散结气痈肿，腹内积块、胀痛、腹中空鸣。还可下十二种水肿，疗皮间积聚暴溃，留气结热，利小便。

生牡蛎：味咸，性微寒，入肝、胆、肾经，具有平肝潜阳，镇惊安神，软坚散结，收敛固涩的功效，主治眩晕耳鸣，手足振颤，心悸失眠，烦躁不安，惊痫癫狂，瘰疬瘿瘤，乳房结块，自汗盗汗，遗精尿频，崩漏带下，吞酸胃痛，湿疹疮疡等证。

夏枯草：味苦、辛，性寒，入肝、胆经，具有清火，明目，散结，消肿的功效，主治目赤肿痛，目珠夜痛，头痛眩晕，瘰疬，瘿瘤，肿痛；甲状腺肿大，淋巴结结核，乳腺增生，高血压、高血糖、高血脂和高血粘等证。

王不留行：拉丁名Vaccaria segetalis，为石竹科植物麦蓝菜的干燥成熟种子，味苦，性平，入肝，胃经，具有活血通经，下乳消痈，利尿通淋的作用，主治血瘀经闭，痛经，难产；产后乳汁不下，乳痈肿痛；热淋，血淋，石淋等证。

进一步优选，所述治疗骨肉瘤的中药复方组合物仅由上述原料药制备而成。

所述中药复方组合物中各原料药的重量分别为党参35g～50g、炒白术20g～30g、炙黄芪25g～40g、茯苓15g～25g、生甘草10g～20g、法半夏15g～25g、陈皮10g～20g、木香15g～25g、当归10g～30g、白芍25g～30g、丹参15g～20g、川芎25g～35g、熟地黄20g～30g、延胡索10g～20g、香附5g～15g、狗脊10g～20g、桑寄生10g～20g、续断5g～15g、秦艽10g～20g、刺五加20g～30g、三棱15g～25g、莪术20g～30g、斑蝥5g～15g、地龙10g～20g、全蝎5g～15g、海藻10g～20g、生牡蛎10g～20g、夏枯草15g～25g、王不留行20g～30g。

进一步优选，所述中药复方组合物中各原料药的重量分别为党参40g～45g、炒白术25g～30g、炙黄芪30g～35g、茯苓20g～25g、生甘草10g～15g、法半夏20g～25g、陈皮15g～20g、木香15g～20g、当归20g～25g、白芍25g～30g、丹参15g～20g、川芎30g～35g、熟地黄20g～25g、延胡索10g～15g、香附5g～10g、狗脊15g～20g、桑寄生10g～15g、续断5g～10g、秦艽10g～15g、刺五加25g～30g、三棱15g～20g、莪术25g～30g、斑蝥5g～10g、地龙10g～15g、全蝎15g～20g、海藻10g～15g、生牡蛎10g～15g、夏枯草15g～20g、王不留行20g～25g。

最优选，所述中药复方组合物中各原料药的重量分别为党参45g、炒白术25g、炙黄芪35g、茯苓20g、生甘草15g、法半夏20g、陈皮15g、木香20g、当归20g、白芍30g、丹参20g、川芎30g、熟地黄25g、延胡索15g、香附10g、狗脊15g、桑寄生15g、续断10g、秦艽15g、刺五加25g、三棱20g、莪术25g、斑蝥10g、地龙15g、全蝎10g、海藻15g、生牡蛎15g、夏枯草20g、王不留行25g。

本发明提供的中药复方组合物是通过将上述原料药提取后，搭配药学上可接受的赋形剂获得各种需要的药物剂型。可用的药学上可接受的赋形剂可以是药物制剂领域中任何常规的赋形剂，特定赋形剂的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为药学上可接受的赋形剂包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等。必要时，还可以在药物组合物中加入香味剂、防腐剂和甜味剂等。

所述药学上可接受的赋形剂包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等。

所述中药复方组合物的剂型为口服剂型，包括煎煮剂、胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂、口服液、酒剂、丸剂、微丸剂、合剂或酊剂，优选为口服液。

本发明还提供了上述中药复方组合物的提取方法，其包括：

以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。

实施例1口服液1

称取法半夏20g、当归20g、白芍30g、丹参20g、川芎30g、熟地黄25g、延胡索15g、狗脊15g、桑寄生15g、续断10g、秦艽15g、刺五加25g、三棱20g、莪术25g、斑蝥10g、地龙15g、全蝎10g、海藻15g、生牡蛎15g和王不留行25g，粉碎，混合在一起，用4kg醇浓度为70％乙醇渗漉提取，渗漉液浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂吸附，树脂用量为该步使用药材总量的2倍，3倍树脂体积的纯水洗脱杂质，先用4倍树脂体积的醇浓度70％的乙醇洗脱，在用3倍树脂体积的醇浓度80％的乙醇洗脱，在用3倍树脂体积的醇浓度90％的乙醇洗脱，洗脱液合并并浓缩，干燥粉碎，得第一细粉，称取党参45g、炒白术25g、炙黄芪35g、茯苓20g、生甘草15g、陈皮15g、木香20g、香附10g、夏枯草20g，粉碎，混合在一起，加1.6kg水，100℃提取3次，每次1小时，水煎液合并，滤液减压浓缩至相当于该步药材2g/mL，加3倍量醇浓度95％乙醇沉淀，上清液浓缩至无醇味，用盐酸调节pH1～3，乙酸乙酯萃取3次，萃取液减压浓缩，干燥粉碎，得第二细粉；取300g中药复方组合物提取细粉，加入300ml水搅拌均匀，2-4℃冷藏12h，滤过，滤液加入矫味剂甜蜜素1.2g、防腐剂山梨酸溶液10ml，加水调至1000ml，即得口服液。

实施例2口服液2

称取法半夏20g、当归20g、白芍25g、丹参15g、川芎30g、熟地黄25g、延胡索15g、狗脊20g、桑寄生15g、续断10g、秦艽15g、刺五加30g、三棱20g、莪术30g、斑蝥10g、地龙15g、全蝎10g、海藻15g、生牡蛎15g和王不留行25g，粉碎，混合在一起，用4kg醇浓度为70％乙醇渗漉提取，渗漉液浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂吸附，树脂用量为该步使用药材总量的2倍，3倍树脂体积的纯水洗脱杂质，先用4倍树脂体积的醇浓度70％的乙醇洗脱，在用3倍树脂体积的醇浓度80％的乙醇洗脱，在用3倍树脂体积的醇浓度90％的乙醇洗脱，洗脱液合并并浓缩，干燥粉碎，得第一细粉，称取党参40g～45g、炒白术25g～30g、炙黄芪30g～35g、茯苓20g～25g、生甘草10g～15g、陈皮15g～20g、木香15g～20g、香附5g～10g、夏枯草15g～20g，粉碎，混合在一起，加1.6kg水，100℃提取3次，每次1小时，水煎液合并，滤液减压浓缩至相当于该步药材2g/mL，加3倍量醇浓度95％乙醇沉淀，上清液浓缩至无醇味，用盐酸调节pH1～3，乙酸乙酯萃取3次，萃取液减压浓缩，干燥粉碎，得第二细粉；取300g中药复方组合物提取细粉，加入300ml水搅拌均匀，2-4℃冷藏12h，滤过，滤液加入矫味剂甜蜜素1.2g、防腐剂山梨酸溶液10ml，加水调至1000ml，即得口服液。

实施例3口服液3

称取法半夏25g、当归25g、白芍30g、丹参20g、川芎35g、熟地黄25g、延胡索15g、狗脊20g、桑寄生15g、续断10g、秦艽15g、刺五加30g、三棱20g、莪术30g、斑蝥9g、地龙15g、全蝎5g、海藻15g、生牡蛎15g和王不留行25g，粉碎，混合在一起，用4kg醇浓度为70％乙醇渗漉提取，渗漉液浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂吸附，树脂用量为该步使用药材总量的2倍，3倍树脂体积的纯水洗脱杂质，先用4倍树脂体积的醇浓度70％的乙醇洗脱，在用3倍树脂体积的醇浓度80％的乙醇洗脱，在用3倍树脂体积的醇浓度90％的乙醇洗脱，洗脱液合并并浓缩，干燥粉碎，得第一细粉，称取党参45g、炒白术30g、炙黄芪35g、茯苓25g、生甘草15g、陈皮20g、木香20g、香附10g、夏枯草20g，粉碎，混合在一起，加1.6kg水，100℃提取3次，每次1小时，水煎液合并，滤液减压浓缩至相当于该步药材2g/mL，加3倍量醇浓度95％乙醇沉淀，上清液浓缩至无醇味，用盐酸调节pH1～3，乙酸乙酯萃取3次，萃取液减压浓缩，干燥粉碎，得第二细粉；取300g中药复方组合物提取细粉，加入300ml水搅拌均匀，2-4℃冷藏12h，滤过，滤液加入矫味剂甜蜜素1.2g、防腐剂山梨酸溶液10ml，加水调至1000ml，即得口服液。

实施例4药物毒理学试验

本发明中药制剂使用党参、炒白术、炙黄芪、茯苓、生甘草、法半夏、陈皮、木香、当归、白芍、丹参、川芎、熟地黄、延胡索、香附、狗脊、桑寄生、续断、秦艽、刺五加、三棱、莪术、斑蝥、地龙、全蝎、海藻、生牡蛎、夏枯草和王不留行等药物，其中药典标注，可能存在毒性或者副作用的药物有斑蝥、地龙、全蝎，但是根据其最优组合用量，斑蝥9g、地龙15g、全蝎5g，每次摄入量为斑蝥4.5g、地龙7.5g、全蝎2.5g，其用量均小于药典规定的最大用量，而且，经过临床药物目录检索，斑蝥、地龙、全蝎用于多个中成药组方，且用量均大于药典规定用量且无毒副作用，因此，将全方配伍进行急毒性和长期毒性试验，对其安全性进行评估。

药物急毒性试验

实验动物：SD大鼠，SPF级，雌雄各半，40只，体重200±20g。

实验药物：本发明实施例1制备的口服液1，浓缩成生药浓度1.20g/ml，备用。

动物饲养环境条件：青岛大学基础医学院实验动物房实验动物屏障系统，温度20～26℃，湿度40～70％。

给药途径：灌胃，给药体积40ml/kg，给药3次，间隔8h。

动物分组：取检疫合格的SD大鼠称重，按体重随机分为2组，每组动物20只，雌雄各半。

给药：各鼠禁食不禁水，12小时后，给药组按40ml/kg体重灌胃给予1.20g/ml的本发明口服液1，给药3次，间隔8h，然后连续观察14天。

一般症状观察：观察内容包括饮水、进食，外观体征、一般行为活动。

观察时间：连续给药7天，停药观察7天，共观察14天。

观察频率：给药期间，每天给药后1/2、1、2、3、4、6、8h。试验第2天至第14天，每日上午、下午各观察一次。

观察记录：记录毒性反应症状出现、加重、减轻和死亡的时间。

体重：给药后第2天起隔日称量SD大鼠体重。

解剖观察：给药第14天，处死并大体解剖动物，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等主要脏器有无病变，有病变脏器进行病理检查。

统计方法：使用SPSS13.0软件，统计学方法为t检验。

实验结果

一般症状观察结果

连续给药本发明中药复方组合物浓缩煎煮液后，无SD大鼠死亡，SD大鼠饮水、进食、外观体征、一般行为活动均正常，停药观察期间，亦未见SD大鼠死亡。

体重观察结果

连续观察14日内，一般状况良好，饮食、二便正常，且外观、皮毛、行为、呼吸均正常，鼻、眼、口腔无异常分泌物。

解剖观察结果

观察结束后处死SD大鼠，大体解剖肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等各主要脏器色泽、形状、大小等未见异常。

最大给药量计算

本发明中药复方组合物浓缩煎煮液SD大鼠灌胃给药的最大给药量为93.91g/kg，该剂量以临床成人(体重按60kg计)日用剂量为30g折算，相当于临床成人用量(0.5g/kg)的180倍，现代药理学认为，动物实验给药为人体给药量的100倍以上，而无明显毒副作用且无迟发毒性反应，即可认为该药无明显毒副作用，因此通过本发明中药复方组合物急性毒性实验研究，其给药剂量为人体给药剂量的187.82倍，可以认为其具有很好的安全性。

本发明长期毒性实验研究

实验动物：同急毒性实验。

实验药物：制备方法同急毒性实验，其生药浓度分别0.60g/ml、0.30g/ml，4℃保存备用。

动物饲养与管理：同急毒性实验。

给药途径：灌胃，给药体积40ml/kg，每日给药2次，连续给药30天。

动物分组：取检疫合格的SD大鼠称重，按体重随机分为3组，每组动物20只，雌雄各半。

给药：各鼠禁食不禁水，给药组按40ml/kg体重灌胃给予生药浓度0.805g/ml、0.5635g/kg的实施例1制备的口服液1，每日给药2次，然后连续观察30天。

观察项目与指标：同急毒性实验。

统计方法：使用SPSS13.0软件，统计学方法为t检验。

实验结果

一般症状观察结果：每日2次灌胃本发明实施例1制备的口服液1后，SD大鼠饮水、进食、外观体征、一般行为活动均正常，连续观察30天未见SD大鼠死亡。

体重观察结果：给药后SD大鼠活动正常。观察30日内，动物未见死亡，一般状况良好，饮食、二便正常，且外观、皮毛、行为、呼吸均正常，鼻、眼、口腔无异常分泌物，与对照组比较，未见明显异常反应，差异无统计学差异(P＞0.05)。

解剖观察结果：观察结束后处死SD大鼠，大体解剖肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等各主要脏器色泽、形状、大小等未见异常。

最大给药量计算：本发明口服液SD大鼠灌胃给药的最大给药量为64.4g/kg、45.08g/kg，该剂量以临床成人(体重按60kg计)日用剂量为30g折算，相当于临床成人用量(0.5g/kg)的128.8倍、90.16倍，现代药理学认为，动物实验给药连续给药30天，动物无明显毒副作用，亦无明显的蓄积毒性，可以认为其具有很好的安全性。

实施例5临床实验研究

一般资料：193例患者随机分为两组，治疗组119例，男75例，女44例；其中术后11例；年龄12-38岁，平均20.2岁。对照组74例，男43例，女31例；其中术后10例；年龄9-32岁，平均20.3岁。

纳入标准，所选病例均有活检病理证实，心、肝、肾功能正常，预计生存期大于3月，签署知情同意书。

治疗方法：对照组采用常规静脉化疗滴注及对症支持治疗，化疗方案为：奥沙利铂130mg/m²，静滴，第1天；阿霉素30mg/m²，静注，第1-2天；甲氨喋呤针12g/m²，静滴，第15天、第22天，甲氨喋呤静滴6h，结束后6h开始口服亚叶酸钙片15mg，每6h给药1次，共12次，结束后休息1-2周重复。化疗的同时常规抑酸、止吐及保肝，所有病例均化疗4个周期以上，治疗组在此基础上服用本发明实施例1制备的口服液1，每日3次，每次50ml。

疗效判定标准：所有病例均完成4个周期化疗，参照WHO疗效标准，分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)和进展(PD)。毒性反应按WHO抗癌药物毒性标准分为0-IV度。

结果

肿瘤缓解情况

4个周期化疗后，治疗组死亡5例，对照组死亡9例，治疗组和对照组均无CR病例，PR病例治疗组18例，对照组4例；SD病例治疗组86例，对照组40例；PD病例，治疗组20例，对照组21例；PR+SD治疗组为91.23％，对照组为67.69％，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。(见表1)

表1肿瘤缓解情况

组别	N	CR	PR	SD	PD
						对照组	65	0	4	40	21
治疗组	114	0	18	86	10

治疗组的PR、SD、PD与对照组相比有明显差异(P＜0.05)

化疗不良反应，见表2。

表2化疗药不良反应

治疗组的不良反应发生率与对照组相比有明显差异(P＜0.05)。

骨肉瘤的治疗方法有手术、放疗、化疗、中药治疗及免疫治疗等，单纯化疗易损伤人体正气，对消化道系统及造血系统有影响，致患者纳差、乏力、贫血、白细胞及血小板下降等。配合中药治疗，既能减轻化疗副作用，又能增强疗效，改善症状，缓解痛苦。中药治疗组与单纯化疗组比较，患者的胃肠反应及骨髓抑制大大降低，化疗结束后患者体质恢复较快，抗病能力增强，提高了生活质量

实施例6动物实验

材料：骨肉瘤OS-732细胞株购自北京积水潭医院；RPMI-1640干粉及TRIzol购自美国Gibco公司；胰蛋白酶、MTT及RnaseA均购自华美生物工程公司；实施例1制备的口服液1；顺铂由齐鲁制药厂提供；Fas多克隆抗体购自福州迈新生物有限公司；B-actin及Fas引物由上海生工生物有限公司合成；PCR试剂购自TAKARA公司。

仪器：IT-61型二氧化碳培养箱(日本YAMA-TO公司)；LH50A型倒置相差显微镜(OLYMPUS)；MKASENT酶标分析仪(LABSYSTEMS生产)；H-600型透射电子显微镜(日立公司)；JSM-7300型扫描电子显微镜(日立公司)。

细胞培养及给药方法：OS-732细胞株按常规细胞培养方法进行培养。待细胞贴壁后给药，具体分组方法见表3所示。

免疫组化方法检测Fas表达

调节细胞浓度至2×10⁵/ml后，分别加入不同浓度的本发明实施例1制备的口服液1，继续培养24h，对照组则只加入培养液。取出盖玻片，以4℃丙酮固定10min。使用SP法进行免疫组化染色，染色过程按说明书进行。以胞浆呈棕黄色为阳性，利用显微图像分析系统得出平均灰度值，来反映Fas表达强度。

逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Fas表达

收集肿瘤细胞，按试剂盒说明书提取总RNA后，逆转录合成cDNA，再行Fas的PCR扩增，扩增产物为513bp。取10μl扩增产物电泳后，B-actin基因表达为参照，用凝胶分析仪比较Fas在不同组间表达水平的差异。

MTT法检测肿瘤细胞抑制率

5×10⁵/ml细胞接种于96孔板，每孔100μl，贴壁后加入不同浓度口服液1或对照PBS的细胞培养基，每孔100μl，每种浓度平行4孔，培养24h后，加入5mg/ml的MTT20μl，37℃孵育4h，弃上清加150μlDMSO溶解，540nm测定吸光度。细胞抑制率(％)＝(1-实验组吸光度值/对照组吸光度值)×100％。

肿瘤细胞凋亡形态学观察

于倒置相差显微镜下直接观察肿瘤细胞形态及贴壁情况。另取盖玻片置入6孔板内，待细胞凋亡后，固定10min，加入0.5ml染色液，染5min后，将盖玻片盖在滴有抗荧光淬灭封片液的载玻片上，荧光显微镜下照片。

扫描电镜及透射电镜下肿瘤细胞的超微结构观察

OS-732细胞经2.5％戊二醛固定后，按常规扫描电镜及透射电镜的操作程序制备电镜标本，并分别拍摄下电镜照片。

流式细胞仪测定凋亡细胞所占比例将细胞加入70％冷乙醇固定48h。离心弃上清后，加入10g/LRNase200μl，37℃水浴30min后，洗去RNase，100μlPI染液4℃避光染色1h。FAC-SCAN流式细胞仪测定荧光强度，激发光波长488nm，Cel-1Quest分析软件测定细胞凋亡率。

统计学处理

应用SPSS13.0软件分析数据，计量数据用均数±标准差表示，组间差异用两个独立样本t检验。

结果

本发明口服液1与顺铂对骨肉瘤OS-732细胞的抑制作用

本发明口服液1可抑制OS-732细胞增殖，并呈浓度依赖性。除25μg/ml组与125μg/ml组比较抑制率无明显改变外，其余各组比较均有统计学差异(P＜0.01)，可见本发明口服液1浓度增加到25μg/ml以上，对肿瘤细胞的抑制作用已不再明显提升。并且此时的促凋亡作用也未见明显增加。顺铂对OS-732细胞的抑制率及诱导凋亡率的影响，均具有浓度依赖性，不同浓度组间比较差异有显著性意义(P＜0.01)，见表3。

表3中药、顺铂作用下的骨肉瘤OS-732细胞的增殖抑制率及诱导凋亡率

本发明口服液对骨肉瘤细胞表面Fas受体表达的影响

表4不同浓度口服液作用下的骨肉瘤OS-732细胞的Fas的表达

指标	0μg/ml	1μg/ml	5μg/ml	25μg/ml	125μg/ml
						Fas蛋白	147.5±5.6	127.5±5.2	108.6±4.9	91.1±4.7	84.3±4.5
Fas-mRNA	0.14±0.03	0.28±0.06	0.37±0.08	0.49±0.10	0.52±0.13

低浓度口服液与低浓度顺铂联用对OS-732细胞的抑制作用。

①OS-732细胞凋亡的形态改变：相差显微镜下见单用顺铂(1μg/ml)时仅部分细胞变小，变圆；与25μg/ml本发明口服液1合用时可见染色质及细胞质浓缩，大量细胞脱落而悬浮于培养液中。荧光显微镜下见单用顺铂(1μg/ml)时，细胞内荧光呈均匀分布，以淡染的正常细胞为主；合用时可见细胞内浓集、发亮的荧光显色，表明有大量凋亡细胞存在。

②OS-732细胞的超微结构改变：单用顺铂(1μg/ml)时，于扫描电镜下见细胞表面微绒毛比较丰富且向周围扩展；透射电镜下仅见细胞核畸形。顺铂(1μg/ml)与25μl/ml本发明口服液1合用时，于扫描电镜下见凋亡细胞表面微绒毛减少且扩展程度缩小，细胞轮廓变模糊；透射电镜下见核固缩，染色质浓缩于核膜，细胞皱缩，胞浆空泡化明显，可见凋亡小体。25μg/ml的本发明口服液与1μg/ml顺铂合用于OS-732细胞24h，细胞抑制率及诱导凋亡率与单用相比，差异有显著性意义(P＜0.01)，见表4。

本发明口服液具有诱导机体产生白介素、干扰素、肿瘤坏死因子及增强LAK细胞、NK细胞活性等免疫调节作用具有诱导机体产生白介素、干扰素、肿瘤坏死因子及增强LAK细胞、NK细胞活性等免疫调节作用。本研究发现本发明中药复方组合物与顺铂合用，极大地提升了骨肉瘤细胞对顺铂的敏感性，表明本发明口服液是一种很理想的化疗增敏剂。

所有上述的首要实施这一知识产权，并没有设定限制其他形式的实施这种新产品和/或新方法。本领域技术人员将利用这一重要信息，上述内容修改，以实现类似的执行情况。但是，所有修改或改造基于本发明新产品属于保留的权利。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims

1.一种联合化疗药治疗骨肉瘤的中药复方组合物，其特征在于：原料药包括党参、炒白术、炙黄芪、茯苓、生甘草、法半夏、陈皮、木香、当归、白芍、丹参、川芎、熟地黄、延胡索、香附、狗脊、桑寄生、续断、秦艽、刺五加、三棱、莪术、斑蝥、地龙、全蝎、海藻、生牡蛎、夏枯草和王不留行。

2.如权利要求1所述的联合化疗药治疗骨肉瘤的中药复方组合物，其特征在于：各原料药的重量分别为党参35g～50g、炒白术20g～30g、炙黄芪25g～40g、茯苓15g～25g、生甘草10g～20g、法半夏15g～25g、陈皮10g～20g、木香15g～25g、当归10g～30g、白芍25g～30g、丹参15g～20g、川芎25g～35g、熟地黄20g～30g、延胡索10g～20g、香附5g～15g、狗脊10g～20g、桑寄生10g～20g、续断5g～15g、秦艽10g～20g、刺五加20g～30g、三棱15g～25g、莪术20g～30g、斑蝥5g～15g、地龙10g～20g、全蝎15g～25g、海藻10g～20g、生牡蛎10g～20g、夏枯草15g～25g、王不留行20g～30g。

3.如权利要求1或2所述的联合化疗药治疗骨肉瘤的中药复方组合物，其特征在于：各原料药的重量分别为党参40g～45g、炒白术25g～30g、炙黄芪30g～35g、茯苓20g～25g、生甘草10g～15g、法半夏20g～25g、陈皮15g～20g、木香15g～20g、当归20g～25g、白芍25g～30g、丹参15g～20g、川芎30g～35g、熟地黄20g～25g、延胡索10g～15g、香附5g～10g、狗脊15g～20g、桑寄生10g～15g、续断5g～10g、秦艽10g～15g、刺五加25g～30g、三棱15g～20g、莪术25g～30g、斑蝥5g～10g、地龙10g～15g、全蝎15g～20g、海藻10g～15g、生牡蛎10g～15g、夏枯草15g～20g、王不留行20g～25g。

4.如权利要求1至3所述的联合化疗药治疗骨肉瘤的中药复方组合物，其特征在于：各原料药的重量分别为党参45g、炒白术25g、炙黄芪35g、茯苓20g、生甘草15g、法半夏20g、陈皮15g、木香20g、当归20g、白芍30g、丹参20g、川芎30g、熟地黄25g、延胡索15g、香附10g、狗脊15g、桑寄生15g、续断10g、秦艽15g、刺五加25g、三棱20g、莪术25g、斑蝥10g、地龙15g、全蝎20g、海藻15g、生牡蛎15g、夏枯草20g、王不留行25g。

5.一种联合化疗药治疗骨肉瘤的药物，其特征在于：由活性成分和药学上可接受的赋形剂或载体组成，所述活性成分为权利要求1至4所述中药复方组合物的提取物。

6.如权利要求5所述的联合化疗药治疗骨肉瘤的药物，其特征在于：所述药学上可接受的赋形剂包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等。

7.如权利要求5或6所述的联合化疗药治疗骨肉瘤的药物，其特征在于：所述药物为口服剂型，包括煎煮剂、胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂、口服液、酒剂、丸剂、微丸剂、合剂或酊剂。

8.权利要求1至4所述中药复方组合物的提取方法，其特征在于，包括：

9.一种药物口服液，其特征在于：由权利要求1至4所述中药复方组合物的提取物和药学上可接受的赋形剂或载体组成。