CN101904894B - 独一味总苷在制备药物中的用途 - Google Patents

独一味总苷在制备药物中的用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了独一味总苷在制备药物中的用途,即独一味总苷在制备预防和/或治疗老年痴呆症的药物中的用途。药效学实验结果表明独一味总苷对东莨菪碱引起的小鼠记忆获得障碍有明显的记忆改善作用;对脑缺血再灌注所致学习记忆障碍小鼠具有明显改善学习记忆功能的作用。独一味总苷在临床可以用于抗衰老、预防和/或治疗老年痴呆症。本发明的药物原料来源易得,易于产业化,可以根据需要制成各种剂型,为临床提供了使用更加方便、疗效更加有效、质量更加可控的现代中药,为患者带来更多的益处,从而产生了巨大的社会效益。

Description

独一味总苷在制备药物中的用途
技术领域
本发明涉及一种藏药提取物在制备预防和/或治疗老年痴呆症的药物中的用途,具体涉及独一味总苷在制备预防和/或治疗老年痴呆症的药物中的用途。
背景技术
老年痴呆症是一种进行性认知和记忆功能丧失疾病,大致可分为早老性痴呆(阿尔茨海默病,AD)、血管性痴呆(VD)和二者混合型。随着社会的发展,人口老龄化速度正在加快。据统计,目前欧洲、日本和美国的80岁以上人口中有20%以上的人患有该病。全世界65岁以上人口中有5000多万人患有不同种类的痴呆症。据估计,我国的老年期痴呆(主要包括老年性痴呆,其他还有血管性痴呆、混合性痴呆及由全身性疾病引发的老年人痴呆)病人有600万左右。并且随着人口的老龄化加剧,AD的发病率还将急速上升。由于该病影响患者的认知功能、记忆功能、语言功能、视空间功能、社会生活能力、个人生活自理能力和情感人格等,给家庭和社会带来很大负担。因此,WHO已将老年痴呆症定为21世纪五大重点疾病之一。寻找治疗老年痴呆症的有效药物已经成为世界医学界的研究热点之一。
独一味为唇形科植物Lamiophlomis rotata(Benth)Kudo的根、茎或全草。其味苦、性微寒。其制剂“独一味胶囊”被收载于05年版《中国药典》一部,已在临床上广泛应用,具有活血止痛,化瘀止血的功效。主要用于多种外科手术后的刀口疼痛、出血、外伤骨折、筋骨扭伤、风湿痹痛以及崩漏、痛经、牙龈肿痛、出血等的治疗。但未见关于独一味用于神经保护或用于治疗老年痴呆等疾病的相关专利申请和研究报道。
发明内容
本发明在对独一味进行研究的基础上,发现该植物中所包含的独一味总苷具有明显的改善学习记忆能力障碍以及改善自主活动和运动协调性的作用。因此,本发明的目的在于采用独一味药材,特别是独一味总苷预防和/或治疗老年痴呆症。
本发明提供了独一味总苷在制备预防和/或治疗老年痴呆症的药物中的用途。
具体来说,上述独一味总苷包含一种或多种选自环烯醚萜苷、苯乙醇苷和黄酮的化合物。优选地,一种或多种选自环烯醚萜苷、苯乙醇苷和黄酮的化合物的重量占独一味总苷重量的50%以上。
独一味总苷中各种成分的含量测定方法如下:
(1)总环烯醚萜苷的测定(分光光度法)
对照品溶液的制备:精密称取8-O-乙酰基山栀苷甲酯对照品适量,加水制成每1ml含8-O-乙酰基山栀苷甲酯对照品0.1mg的溶液。
供试品溶液的制备:精密称取本品粉末50mg,置10ml量瓶中,加蒸馏水溶解至刻度。上已处理好的聚酰胺柱(2g),用蒸馏水洗脱至100ml量瓶中。精密吸取洗脱液2ml,置10ml量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀,即得供试品溶液。
标准曲线的绘制:精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml,分别置10ml量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀,以蒸馏水为空白,在238nm波长处测定吸光度。以吸收度(A)为纵坐标,浓度C(μg·ml-1)为横坐标,绘制标准曲线。
测定法:取供试品溶液,以蒸馏水为空白,按照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA),在238nm波长处测定吸光度。
(2)总苯乙醇苷的测定(分光光度法)
对照品溶液的制备:精密称取类叶升麻苷对照品适量,用30%(体积/体积)乙醇水溶液溶解制成每1ml含0.5mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备:精密称取本品粉末50mg,置10ml量瓶中,加蒸馏水溶解至刻度。上已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱(柱体积10ml),先用蒸馏水洗脱50ml,弃去水洗脱液。再用30%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱至50ml量瓶中。精密吸取洗脱液1ml,置10ml量瓶中,加30%(体积/体积)乙醇水溶液至刻度,摇匀,即得供试品溶液。
标准曲线的绘制:精密量取对照品溶液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml,分别置25ml量瓶中,加30%(体积/体积)乙醇水溶液至刻度,摇匀,以30%乙醇(体积/体积)水溶液为空白,在334nm波长处测定吸光度。以吸收度(A)为纵坐标,浓度C(μg·ml-1)为横坐标,绘制标准曲线。
测定法:取供试品溶液,以30%(体积/体积)乙醇水溶液为空白,按照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA),在334nm波长处测定吸收度。
(3)总黄酮的测定(分光光度法)
对照品溶液的制备:精密称取干燥恒重的木犀草素苷对照品10.00mg,置50ml量瓶中,加70%(体积/体积)乙醇水溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
供试品溶液的制备:精密称取本品粉末20mg,置10ml量瓶中,用70%(体积/体积)乙醇水溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
标准曲线的绘制:精密量取木犀草素苷对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml,分别置25ml量瓶中,加水至6.0ml,加5%(重量/体积)亚硝酸钠水溶液1ml,混匀,放置6分钟,加10%(重量/体积)硝酸铝水溶液1ml,混匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液(1mol·L-1)10ml,加水至刻度,摇匀,放置15分钟,以相应的溶液为空白,在500nm波长处测定吸光度。以吸收度(A)为纵坐标,浓度C(μg·ml-1)为横坐标,绘制标准曲线。
测定法:取供试品溶液,精密量取1.0ml,置25ml量瓶中,加水至6.0ml,加5%(重量/体积)亚硝酸钠水溶液1ml,混匀,放置6分钟,加10%(重量/体积)硝酸铝水溶液1ml,混匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液(1mol·L-1)10ml,加水至刻度,摇匀,放置15分钟,以未加10%(重量/体积)硝酸铝水溶液的供试品溶液为空白,按照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA),在500mn波长处测定吸光度,即得。
在上述用途中,独一味总苷可以由本领域技术人员根据本领域公知的任何方法来制备,包括但不局限于下述制备方法。
一种独一味总苷的制备方法包括以下步骤:
(1)取独一味药材经溶剂提取;
(2)将浓缩的提取液通过大孔吸附树脂,用水、低浓度甲醇或乙醇水溶液洗脱,弃去洗脱液;
(3)用高浓度甲醇或乙醇水溶液洗脱,收集洗脱液,回收溶剂并干燥,即得独一味总苷。
其中,步骤(1)中的溶剂可以选自水、甲醇、乙醇和丙酮中的一种或多种,提取方法可以为温浸、热回流和/或渗漉;步骤(2)中的低浓度甲醇或乙醇水溶液优选为5%~20%(体积/体积)甲醇或乙醇水溶液;步骤(3)中的高浓度甲醇或乙醇水溶液优选为30%~95%(体积/体积)甲醇或乙醇水溶液。该制备方法简单易行、提取效果好、易于工业推广应用。
上述药物可以为包含独一味总苷的胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊剂、分散片、口腔崩解片、缓释片、控释片、注射液、输液或注射用无菌粉末。可以采用常规方法将独一味总苷与任何一种或一种以上药用辅料,如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、甘氨酸等混合制成上述剂型。
对本发明的药物的药效学部分进行了初步研究,结果发现本发明的药物对东莨菪碱引起的小鼠记忆获得障碍有明显的记忆改善作用;对脑缺血再灌注所致学习记忆障碍小鼠具有明显改善学习记忆功能的作用。在上述药理活性试验的基础上,独一味总苷在临床可以用于抗衰老、预防和/或治疗老年痴呆症,具体为早老性痴呆(阿尔海默氏综合症(AD))、血管性痴呆(VD)或二者混合型。
本发明的药物原料来源易得,易于产业化,可以根据需要制成各种剂型,为临床提供了使用更加方便、疗效更加有效、质量更加可控的现代中药,为患者带来更多的益处,从而产生了巨大的社会效益。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述,给出的实施例仅为了阐明本发明,而不是为了限制本发明的范围。
实施例1
取独一味药材10kg,用10倍重量50%(体积/体积)乙醇水溶液提取三次,每次1小时。收集提取液,减压回收乙醇至无醇味,并浓缩至适当体积,放置至室温。离心,上清液过HPD-300型大孔吸附树脂,先用水洗脱至无色,除去溶于极性溶剂的杂质,弃去,再用4树脂床体积(BV)的50%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱,收集乙醇洗脱液,将回收乙醇后的洗脱液减压干燥,即得独一味总苷。按独一味总苷的总重量计,总环烯醚萜苷含量为19.3%(重量),总苯乙醇苷含量为27.1%(重量),总黄酮含量为13.8%(重量)。
实施例2
取独一味药材10kg,用80%(体积/体积)乙醇水溶液渗漉提取,收集的渗漉液为25倍体积,减压回收乙醇至无醇味,并浓缩至适当体积,放置至室温。离心,上清液过HPD-300型大孔吸附树脂,依次用水和10%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱至无色,除去溶于极性溶剂的杂质,弃去,再用3BV 70%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱,收集乙醇洗脱液,将回收乙醇后的洗脱液减压干燥,即得独一味总苷。按独一味总苷的总重量计,总环烯醚萜苷含量为7.2%(重量),总苯乙醇苷含量为35.7%(重量),总黄酮含量为20.3%(重量)。
实施例3
取独一味药材10kg,用10倍重量水提取三次,每次1小时,收集提取液,浓缩至适当体积,放置至室温。离心,上清液过HPD-100型大孔吸附树脂,先用水洗脱至无色,除去溶于极性溶剂的杂质,弃去,再用8BV35%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱,收集乙醇洗脱液,将回收乙醇后的洗脱液减压干燥,即得独一味总苷。按独一味总苷的总重量计,总环烯醚萜苷含量为17.2%(重量),总苯乙醇苷含量为31.6%(重量),总黄酮含量为8.3%(重量)。
实施例4
取独一味药材10kg,用10倍重量30%(体积/体积)乙醇水溶液提取三次,每次1小时,收集提取液,减压回收乙醇至无醇味,并浓缩至适当体积,放置至室温。离心,上清液过D-101型大孔吸附树脂,先用水洗脱至无色,除去溶于极性溶剂的杂质,弃去,再用4BV 50%(体积/体积)甲醇水溶液洗脱,收集30%(体积/体积)甲醇水溶液的洗脱液,将回收甲醇后的洗脱液减压干燥,即得独一味总苷。按独一味总苷的总重量计,总环烯醚萜苷含量为11.3%(重量),总苯乙醇苷含量为23.4%(重量),总黄酮含量为17.8%(重量)。
实施例5
取独一味药材10kg,用10倍重量50%(体积/体积)丙酮水溶液提取三次,每次1小时,收集提取液,减压回收丙酮,并浓缩至适当体积,放置至室温。离心,上清液过AB-8型大孔吸附树脂,依次用水和10%甲醇水溶液洗脱至无色,除去溶于极性溶剂的杂质,弃去,再用3BV 70%(体积/体积)甲醇水溶液洗脱,收集70%(体积/体积)甲醇水溶液的洗脱液,将回收甲醇后的洗脱液减压干燥,即得独一味总苷。按独一味总苷的总重量计,总环烯醚萜苷含量为9.7%(重量),总苯乙醇苷含量为29.1%(重量),总黄酮含量为16.8%(重量)。
实施例6
取独一味总苷100g,微粉硅胶适量,混合均匀,采用胶囊制备工艺制备,即得独一味总苷胶囊。
实施例7
取独一味总苷100g,加到200g熔融的聚乙二醇4000中,采用滴丸制备工艺制备,即得独一味总苷滴丸。
实施例8
取独一味总苷100g,溶于500ml注射用水中,采用现有注射用无菌粉末制备工艺制备,即得独一味总苷注射用无菌粉末剂型。
实施例9
取独一味总苷100g,溶于1000ml注射用水中,采用注射剂制备工艺,即得独一味总苷注射液(含输液)。
实施例10
取独一味总苷100g,糊精400g,混合均匀,制粒,过筛,干燥,即得独一味总苷的颗粒剂;或将制得的颗粒经进一步压片,干燥,即得独一味总苷的片剂。
实施例11
取独一味总苷100g,羟丙基甲基纤维素100g,羧甲基纤维素钠60g,乳糖40g,混合均匀,制粒,干燥,压片,即得独一味总苷的缓释片剂。
实施例12
取独一味总苷100g,微晶纤维素120g,羧甲基纤维素钠30g,微粉硅胶1g,混合均匀,压片,即得独一味总苷的分散片。
实施例13
取独一味总苷100g,植物油250g,混匀,用明胶作囊壳材料,压制成软胶囊,即得独一味总苷的软胶囊。
试验例1
本发明药物的疗效由以下药效学试验证明:
1、试验材料
1.1药物及试剂
独一味总苷:褐色粉末(实施例1制备)。
吡拉西坦:天津金世制药有限公司产品,规格:0.4g/片,批号:20080415。
氢溴酸东莨菪碱注射液:上海禾丰制药有限公司产品,规格:0.3mg(1ml),批号:080601。
1.2动物
昆明小鼠,购自中国医学科学院实验动物研究所,许可证号SCXK(京)2005-0013。
2、独一味总苷对东莨菪碱所致记忆获得性障碍的小鼠的影响
选用昆明小鼠100只,22~24g,雌雄各半,随机分为五组,空白对照组、模型对照组、独一味总苷100mg/kg、400mg/kg和阳性药(吡拉西坦600mg/kg)组,各组均为20只,灌胃给药(0.2ml/10g体重),空白对照与模型对照给予等容量0.5%(重量/体积)CMC,每天一次,各组动物在给药8周后进行实验。分别在末次给药后45分钟,除空白组外,均腹腔注射东莨菪碱注射液2mg/kg,15分钟后进行训练,第二天测试。
行为学测试:将动物放入反应箱内适应环境3分钟,立即通以36V交流电。动物受到电击,多数动物会跳回平台以躲避伤害。有的动物可能再次或多次跳至铜栅上,受到电击后又迅速跳回平台。记录5分钟内小鼠的错误次数及潜伏期,以此作为学习成绩。24小时后再进行相同测试。记录受试动物5分钟内的错误次数及潜伏期(从刺激开始至第一次跳下平台的时间)。比较各剂量组的差异,结果见表1。
表1独一味总苷对东莨菪碱造成记忆获得性障碍小鼠的影响(n=20,x±s)
Figure G2009100691545D00081
*P<0.05(与模型对照组比较)    ##P<0.01(与空白对照组比较)
表1结果显示,给予东莨菪碱后,与正常对照组比较小鼠跳台试验的测试潜伏期缩短,测试错误次数增多。与模型组比较,吡拉西坦600mg/kg和独一味总苷400mg/kg均能明显延长测试潜伏期,减少错误次数,对东莨菪碱所致记忆获得性障碍有明显的改善作用。独一味总苷100mg/kg能明显延长测试潜伏期,但测试错误次数与模型组比较无显著差异。
3、独一味总苷对血管性痴呆小鼠学习记忆能力的影响
模型制备和分组:选用雄性昆明小鼠,以双侧颈总动脉线结扎再灌注加尾部放血法制备小鼠VD模型;手术一周后,测定小鼠记忆能力(跳台法),合乎要求的小鼠入选,经随机分组进行试验。假手术组仅暴露双侧颈总动脉而不结扎,且尾部不放血。将模型组小鼠120只,随机分为六组,假手术对照组、模型对照组、独一味总苷100、200、400mg/kg和阳性药(吡拉西坦600mg/kg)组,口服灌胃给药,0.2ml/10g体重,空白对照与模型对照给予0.5%(重量/体积)CMC,每天一次,连续1个月,末次给药后1小时训练,24小时后测试。
行为学测试:采用跳台实验,将小鼠放入反应箱内适应环境3分钟,立即通以36V交流电。动物受到电击,多数动物会跳回平台以躲避伤害。有的动物可能再次或多次跳至铜栅上,受到电击后又迅速跳回平台。如此训练5分钟,并记录每只鼠受到电击的次数或错误次数,以此作为学习成绩。24小时后重新做测验,此即为记忆保持测验。记录受电击的动物第一次跳下平台的潜伏期和5分钟内的错误次数。比较各剂量组的差异,结果见表2。
表2独一味总苷对血管性痴呆小鼠学习记忆能力的影响(n=20,x±s)
Figure G2009100691545D00091
*P<0.05(与模型对照组比)    ##P<0.01(与假手术对照组比)
表2结果显示,模型对照组较假手术对照组潜伏期缩短,错误次数增多。独一味总苷各剂量组及吡拉西坦组与模型组比较,均能使测试潜伏期延长,错误次数减少。表明独一味总苷对脑缺血再灌注所致学习记忆障碍小鼠的学习记忆功能具有明显的改善作用。

Claims (8)

1.独一味总苷在制备预防和/或治疗老年痴呆症的药物中的用途,所述独一味总苷包含环烯醚萜苷、苯乙醇苷和黄酮的化合物,所述独一味总苷的制备方法包括以下步骤:
(1)取独一味药材经溶剂提取,所述溶剂选自水、甲醇、乙醇和丙酮中的一种或多种;
(2)将浓缩的提取液通过大孔吸附树脂,用水、低浓度甲醇或乙醇水溶液洗脱,弃去洗脱液,所述低浓度甲醇或乙醇水溶液为体积百分比为5%~20%甲醇或乙醇水溶液;
(3)用高浓度甲醇或乙醇水溶液洗脱,收集洗脱液,回收溶剂并干燥,即得独一味总苷,所述高浓度甲醇或乙醇水溶液为体积百分比为30%~95%甲醇或乙醇水溶液。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述环烯醚萜苷、苯乙醇苷和黄酮的化合物的重量占独一味总苷重量的50%以上。
3.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述步骤(1)中的提取方法为温浸、热回流和/或渗漉。
4.根据权利要求1或2所述的用途,其特征在于,所述药物为包含独一味总苷的胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸、注射液或注射用无菌粉末。
5.根据权利要求4所述的用途,其特征在于,所述注射液为输液。
6.根据权利要求4所述的用途,其特征在于,所述片剂为分散片。
7.根据权利要求4所述的用途,其特征在于,所述胶囊剂为软胶囊剂,所述片剂为口腔崩解片、缓释片或控释片。
8.根据权利要求1或2所述的用途,其特征在于,所述老年痴呆症为早老性痴呆、血管性痴呆或二者混合型。
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