CN105111255A - 一种肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的提取分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的提取分离方法,所述方法,步骤如下:将肉苁蓉切丁、干燥,加75%乙醇于多功能超声波提取罐中提取三次,合并提取液浓缩至无乙醇,将肉苁蓉提取液浓缩液用超滤设备过滤澄清,上大孔树脂柱进行吸附,先用水洗至无色,再用一定浓度的乙醇洗脱,收集含有松果菊苷和毛蕊花糖苷的洗脱液,用外循环真空浓缩器浓缩,浓缩液喷雾干燥得肉苁蓉提取物,高效液相跟踪检测,松果菊苷含量≥25%;毛蕊花糖苷含量≥10%。苯乙醇苷类总含量≥80%,收率达20%。
Description
一、技术领域
本发明涉及一种中药有效成分的提取方法,特别涉及一种从中药肉苁蓉中提取同时含有松果菊苷和毛蕊花糖苷等活性成分的方法。
二、技术背景
肉苁蓉主要分布于新疆、甘肃、宁夏、内蒙古等地,现已进行人工种植。是一种寄生在梭梭、红柳根部的列当科肉苁蓉属多年生寄生草本植物,属列当科濒危种。具有补肾壮阳,益精气,延缓衰老,润肠等功效,素有“沙漠人参”的美誉。药用价值极高,是我国传统的名贵中药材。
肉苁蓉含有多种活性成分,主要包括:苯乙醇苷类、环烯醚萜苷类、木脂素苷类等,因苯乙醇苷类具有的抗氧化、促进物质代谢、改善学习记忆、增强性功能、延缓衰老等多种药理活性,近年来对肉苁蓉苯乙醇苷类研究活跃,工业生产的肉苁蓉提取物大多以分离苯乙醇苷类为主,而松果菊苷和毛蕊花糖苷是含量较高的苯乙醇苷类物质,因此,也是评价肉苁蓉质量优劣的重要指标成分。鉴于肉苁蓉苯乙醇苷类良好的药理作用,运用最简化的工艺分离制备较高含量,较高收率的苯乙醇苷类化合物,对制药及保健品研究具有重大意义。
目前以松果菊苷和毛蕊花糖苷为指标成分对肉苁蓉苯乙醇苷类的研究已有许多技术资料及专利支持,专利“一种肉苁蓉提取物的生产方法”(专利号:200710032806.9)介绍了一种通过细胞破碎技术、高温灭酶技术、喷雾干燥技术和大孔树脂分离技术制备肉苁蓉苯乙醇苷提取物,此种方法以遏制酶催化反应,提高松果菊苷及毛蕊花糖苷的含量。专利“应用膜分离技术从肉苁蓉中生产含有苯乙醇苷的原料及其制备方法”(专利号:200710102756.7)介绍一种运用膜分离制备苯乙醇苷的方法,此法主要运用目标成分与其他成分之间的分子量差异进行分离,分离过程稳定,无相变,从而最大程度的收集苯乙醇苷类物质。专利“一种肉苁蓉苯乙醇总苷的制备方法”(专利号:CN102441040A)利用肉苁蓉苷在弱酸条件下的稳定性,通过粉碎,浸提、树脂吸附,解吸,浓缩的过程制备,使松果菊苷和毛蕊花糖苷含量合计比例大于90%。
目前肉苁蓉苯乙醇苷类的分离主要集中在松果菊苷和毛蕊花糖苷的分离制备,部分工艺只提供松果菊苷分离方法或毛蕊花糖苷分离方法,分离结果单一,造成了资源浪费,鲜有的同时制备松果菊苷及毛蕊花糖苷的方法也存在制备工艺复杂,生产成本较高的问题,不适用于大规模生产。
三、发明内容
本发明的主要目的在于提供一种从肉苁蓉中同时获得高含量松果菊苷和毛蕊花糖苷的方法,该方法工艺简单,成本低,适用于肉苁蓉提取物大规模生产。
本发明的制备方法,包括以下步骤:
1)鲜肉苁蓉,切丁、灭酶,干燥,粗粉。
2)乙醇多次提取,收集全部乙醇提取液,浓缩至无醇味。
3)过滤,得肉苁蓉提取液澄清溶液。
4)将肉苁蓉提取液的澄清水溶液上大孔树脂柱进行吸附,先用水洗至流出液澄清,再用乙醇洗脱,收集全部乙醇洗脱液。
5)乙醇洗脱液浓缩,干燥,得到本发明肉苁蓉提取物。
经过对本发明肉苁蓉提取物中有效成分的含量测定,其中:
松果菊苷含量为25%以上,
毛蕊花糖苷含量为10%以上,
总的苯乙醇苷类成分含量为80%以上。
本发明所述的制备方法,其中,步骤1)中所述切丁,是将肉苁蓉切成正方体小块,长宽高均约1.5cm。步骤1)中所述灭酶,是将肉苁蓉小块在温度为60℃~80℃下进行蒸煮,使其中的蛋白酶等蛋白质类物质灭酶失活。步骤1)中所述干燥,是将灭酶后的肉苁蓉在干燥箱中干燥,干燥后的肉苁蓉小块水分要求≦15%。所述粗粉是将干燥后的肉苁蓉小块用粉碎机粉碎成颗粒。
本发明所述的制备方法,其中,步骤2)中所述提取方法为回流提取或超声加热提取。步骤2)中所述提取时的乙醇浓度为20-90%。
本发明所述的制备方法,其中,步骤4)中所述的用乙醇洗脱,乙醇洗脱液浓度为10~95%.
优选的,本发明的制备方法,步骤如下:
1)鲜肉苁蓉,切丁,灭酶,干燥,粗粉。
2)将药材粗粉置于超声波提取罐中,按1:8~1:40的料液质量体积比向提取罐中加入质量浓度为10%~90%的乙醇溶液,调节提取温度为10℃~80℃,超声提取1~3小时,提取次数为1~3次,合并提取液减压浓缩至无乙醇。
3)将肉苁蓉提取物浓缩液用超滤设备进行过滤澄清,得肉苁蓉提取物的澄清溶液。
4)将肉苁蓉提取物澄清溶液上大孔树脂柱进行吸附,首先用纯化水洗脱至流出液无色澄清,除去杂质,然后用10%~95%乙醇溶液洗脱,收集全部的10%~95%乙醇洗脱液。
5)将乙醇洗脱液用外循环真空浓缩器进行浓缩,再进行喷雾干燥得肉苁蓉提取物。
特别优选的,本发明的制备方法,步骤如下:
1)鲜肉苁蓉,切丁,灭酶,干燥,粗粉。
2)将药材粗粉置于超声波提取罐中,按1:8~1:20的料液质量体积比向提取罐中加入质量浓度为40%~80%的乙醇溶液,调节提取温度为30~50℃,超声提取1~3小时,提取次数为1~3次,合并提取液减压浓缩至无乙醇。
3)将肉苁蓉提取物浓缩液用超滤设备进行过滤澄清,得肉苁蓉提取物水溶液的澄清溶液。
4)将肉苁蓉提取物澄清溶液上大孔树脂柱进行吸附,首先用纯化水洗脱至流出液无色澄清,除去杂质,然后用30%~70%乙醇溶液洗脱,收集全部的30%~70%乙醇洗脱液。
5)将乙醇洗脱液用外循环真空浓缩器进行浓缩,再进行喷雾干燥得肉苁蓉提取物。
最优选的,本发明的制备方法,步骤如下:
50公斤肉苁蓉粗粉中加入500公斤75%乙醇,用多功能超声波提取罐于45℃超声提取1.5小时,以上方法重复提取3次,合并三次提取液,于70℃以下减压浓缩至无乙醇,该溶液用超滤设备过滤至澄清,澄清液上大孔树脂柱进行吸附,首先用纯化水洗脱至流出液无色澄清,再用55%乙醇洗脱,收集全部55%乙醇洗脱液,用外循环真空浓缩器进行浓缩,浓缩液喷雾干燥即得肉苁蓉提取物,松果菊苷含量为26.91,毛蕊花糖苷含量为11.45%。收率为18%。
为检测得到的肉苁蓉提取物中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量,本发明提供了一种松果菊苷和毛蕊花糖苷高效液相检测方法,该方法如下:
1所用仪器和设备
Agilent1260高效液相色谱仪(配有:四元泵、标准型自动进样器、柱温箱、AgilentDAD检测器);电子天平(感量0.0001g);超声波清洗仪;玻璃回流装置;电热恒温水浴锅;玻璃仪器(各规格移液管或移液器、各规格容量瓶等);
2所需试剂和药品
毛蕊花糖苷、松果菊苷标准品(含量≥98%);甲醇、乙腈为色谱纯,水为超纯水。
3溶液配制
3.1标准溶液:分别称取松果菊苷和毛蕊花糖苷对照品5.1mg、5.0mg,置于10mL的容量瓶中,用洗脱剂定容至刻度,作为对照品储备液。
3.2样品溶液:精密称取一定质量的样品置于容量瓶中,以洗脱液溶解定容,配制成一定浓度的样品溶液,使之峰面积在线性范围之内。
4测定步骤
4.1色谱条件
色谱柱:AgilentZORBAXEclipsePlusC18(4.6mm×25mm,5μm);柱温:20℃;流动相:甲醇、乙腈、水梯度洗脱,洗脱程序见下表;流速:1mL/min;检测波长:334nm。
表1洗脱程序
4.2标准曲线的绘制
分别精密吸取松果菊苷储备液0.8mL,毛蕊花糖苷储备液0.2mL,将二者混合,制成混合对照品溶液。用高效液相自动进样器分别进样2、4、6、8、10、12uL,以峰面积对进样质量进行线性回归,绘制标准曲线。
4.3样品含量测定
将样品过0.45um微孔滤膜,进样10uL,得出以上两种物质的峰面积,以外标法测定样品溶液中毛蕊花糖苷和松果菊苷的含量。
4.4计算公式
样品中毛蕊花糖苷或松果菊苷(g/100g)的浓度计算公式为:
C(g/100g)=(Cx×V)×100/Ms
式中:Cx—样品溶液中毛蕊花糖苷或松果菊苷的浓度(mg/mL);
V—样品溶液体积,mL;
Ms—样品重量(mg)。
本发明最优选的制备方法是经过筛选获得的,本发明经过筛选发现,采用75%乙醇为提取溶剂,采用AB-8型号的大孔树脂填料,采用55%乙醇洗脱,可以得到收率18%,松果菊苷含量为25%以上,毛蕊花糖苷含量为10%以上,总的苯乙醇苷类成分含量为80%以上的肉苁蓉提取物。
和现有技术相比,在各项指标上均优于现有技术。
四、具体实施方式:
以下通过实例进一步说明本发明,但不作为对本发明的限制。
实施例1
将50公斤干燥的肉苁蓉丁,粗粉,加400公斤75%乙醇用多功能超声波提取罐于40℃超声提取1.5小时,按以上方法再提取一次,合并两次提取液,于50℃以下减压浓缩至无乙醇,将该溶液用超滤设备过滤澄清得肉苁蓉提取液的澄清溶液;再将该溶液上于大孔树脂进行吸附,纯化水洗至流出液澄清,再用55%乙醇洗脱,收集全部的55%乙醇洗脱液;用外循环真空浓缩器进行浓缩,浓缩液喷雾干燥即得肉苁蓉苯乙醇苷提取物9公斤,经检测松果菊苷含量为26%,毛蕊花糖苷含量为11%。
实施例2
将50公斤干燥的肉苁蓉丁,粗粉,加400公斤75%乙醇用多功能超声波提取罐于40℃超声提取1.5小时,按以上方法再提取一次,合并两次提取液,于50℃以下减压浓缩至无乙醇,将该溶液用超滤设备过滤澄清得肉苁蓉提取液的澄清溶液;再将该溶液上于大孔树脂进行吸附,纯化水洗至流出液澄清,再用55%乙醇洗脱,收集全部的55%乙醇洗脱液;用外循环真空浓缩器进行浓缩,浓缩液喷雾干燥即得肉苁蓉苯乙醇苷提取物9.67公斤,经检测松果菊苷含量为26.71%,毛蕊花糖苷含量为12%。
实施例3
将50公斤干燥的肉苁蓉丁,粗粉,加400公斤75%乙醇用多功能超声波提取罐于40℃超声提取1.5小时,按以上方法再提取一次,合并两次提取液,于50℃以下减压浓缩至无乙醇,将该溶液用超滤设备过滤澄清得肉苁蓉提取液的澄清溶液;再将该溶液上于大孔树脂进行吸附,纯化水洗至流出液澄清,再用55%乙醇洗脱,收集全部的55%乙醇洗脱液;用外循环真空浓缩器进行浓缩,浓缩液喷雾干燥即得肉苁蓉苯乙醇苷提取物9.5公斤,经检测松果菊苷含量为25%,毛蕊花糖苷含量为10.6%。
实施例4
50公斤肉苁蓉粗粉中加入500公斤75%乙醇,用多功能超声波提取罐于45℃超声提取1.5小时,以上方法重复提取3次,合并三次提取液,于70℃以下减压浓缩至无乙醇,该溶液用超滤设备过滤至澄清,澄清液上大孔树脂柱进行吸附,首先用纯化水洗脱至流出液无色澄清,再用55%乙醇洗脱,收集全部55%乙醇洗脱液,用外循环真空浓缩器进行浓缩,浓缩液喷雾干燥即得肉苁蓉提取物,松果菊苷含量为26.91,毛蕊花糖苷含量为11.45%。收率为18%。
Claims (10)
1.一种从肉苁蓉中提取松果菊苷和毛蕊花糖苷的方法,所述方法步骤如下:
1)鲜肉苁蓉,切丁、灭酶,干燥,粗粉,
2)用乙醇提取,收集乙醇提取液,浓缩至无醇味,
3)过滤,得肉苁蓉提取液澄清溶液,
4)将肉苁蓉提取液的澄清水溶液上大孔树脂柱进行吸附,先用水洗至流出液澄清,再用乙醇洗脱,收集全部乙醇洗脱液,
5)乙醇洗脱液浓缩,干燥,得到肉苁蓉提取物。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中所述切丁是将肉苁蓉切成长宽高为1.5cm的正方体小块。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中所述灭酶是将肉苁蓉小块在60~80℃下蒸煮。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中所述干燥是将灭酶的肉苁蓉小块干燥,使水分≦15%。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)中所述提取方法为回流提取或超声加热提取。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)中所述提取时的乙醇浓度为20%~90%。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤4)中所述的用乙醇洗脱,乙醇洗脱液浓度为10%~95%。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法步骤如下:
1)鲜肉苁蓉,切丁,灭酶,干燥,粗粉,
2)将药材粗粉置于超声波提取罐中,按1:8~1:40的料液质量体积比向提取罐中加入质量浓度为10%~90%的乙醇溶液,调节提取温度为10~80℃,超声提取1~3小时,提取次数为1~3次,合并提取液减压浓缩至无乙醇,
3)将肉苁蓉提取物水溶液用超滤设备进行过滤澄清,得肉苁蓉提取物水溶液的澄清溶液,
4)将肉苁蓉提取物澄清溶液上于大孔树脂柱进行吸附,首先用纯化水洗脱至流出液无色澄清,除去杂质,然后用10%~95%乙醇溶液洗脱,收集全部的10%~95%乙醇洗脱液,
5)将乙醇洗脱液用外循环真空浓缩器进行浓缩,再进行喷雾干燥得肉苁蓉提取物。
9.根据权利要求1的分离方法,其特征在于,所述方法步骤如下:
1)鲜肉苁蓉,切丁,灭酶,干燥,粗粉,
2)将药材粗粉置于超声波提取罐中,按1:8~1:20的料液质量体积比向提取罐中加入质量浓度为40%~80%的乙醇溶液,调节提取温度为30~50℃,超声提取1~3小时,提取次数为1~3次,合并提取液减压浓缩至无乙醇,
3)将肉苁蓉提取物水溶液用超滤设备进行过滤澄清,得肉苁蓉提取物水溶液的澄清溶液,
4)将肉苁蓉提取物澄清溶液上于大孔树脂柱进行吸附,首先用纯化水洗脱至流出液无色澄清,除去杂质,然后用30%~70%乙醇溶液洗脱,收集全部的30%~70%乙醇洗脱液,
5)将乙醇洗脱液用外循环真空浓缩器进行浓缩,再进行喷雾干燥得肉苁蓉提取物。
10.根据权利要求1的分离方法,其特征在于,所述方法步骤如下:将经过切丁,灭酶,干燥,粗粉后的50公斤肉苁蓉粗粉和500公斤75%乙醇混合,用多功能超声波提取罐于45℃超声提取1.5小时,以上方法重复提取3次,合并三次提取液,于70℃以下减压浓缩至无乙醇,该溶液用超滤设备过滤至澄清,澄清液上AB-8型大孔树脂柱进行吸附,首先用纯化水洗脱至流出液无色澄清,再用55%乙醇洗脱,收集全部55%乙醇洗脱液,用外循环真空浓缩器进行浓缩,浓缩液喷雾干燥即得肉苁蓉提取物。
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