CN1721425A - 一种从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷得方法，该方法为将干净的肉苁蓉药材粉碎，用水或/和有机溶剂溶剂进行提取。提取液浓缩后，经大孔吸附树脂柱分离，先用水洗脱除去部分杂质，再用5－15％(V/V)甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱除去部分杂质，最后用20－35％(V/V)甲醇水溶液或乙醇水溶液进行洗脱。在洗脱的过程中用HPLC进行监控，当有效成分松果菊苷的纯度降到85％以下时，停止洗脱，合并高浓度的洗脱液，浓缩、干燥，即制得其有效成分松果菊苷，纯度达90％以上。

Description

一种从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法
技术领域
本发明涉及从药材中提取、分离其有效成分的方法，特别涉及一种从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法。
背景技术
肉苁蓉为著名的补益中药，具有补肾阳、益精血、润肠通便等功效，《中国药典》2000年版一部收载肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma的干燥带鳞叶的肉质茎，另外还有2个同属植物管花肉苁蓉Cistanche tubulosa(Schenk)Wight和盐生肉苁蓉Cistanche salsa G.Beck的干燥带鳞叶的肉质茎亦作为药用。
肉苁蓉药材中主要含有苯乙醇苷类成分，松果菊苷(Echinacoside)是其中含量较高的一种成分。以往从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法是采用一定的溶剂提取肉苁蓉药材，得到含松果菊苷的提取物，然后利用正丁醇进行萃取，再通过大孔吸附树脂、硅胶柱层析、sephadex LH-20柱层析和/或制备HPLC等一系列复杂的过程，从而获得纯度较高的松果菊苷(色谱，2001，19(3)：200-202；西北药学杂志，2002，17(1)：3-4)。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法，该方法通过高效液相色谱法对大孔树脂洗脱过程的监控，极大提高了洗脱效率，从而通过大孔树脂一步纯化即得到了高纯度的松果菊苷(纯度＞90％)，克服了以往提纯方法的繁琐操作过程，大大降低了生产成本。
本发明技术方案如下：
本发明提供的从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法，其步骤如下：
1、将干净的肉苁蓉药材粉碎，用水或/和有机溶剂进行提取；
2、树脂吸附分离：将步骤1得到的提取液浓缩，使其通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱除去部分杂质，再用5-15％(V/V)甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱除去部分杂质，最后用20-35％(V/V)甲醇水溶液或乙醇水溶液进行洗脱。在洗脱的过程中用HPLC进行监控，当有效成分松果菊苷的纯度降到85％以下时，停止洗脱，合并高浓度的洗脱液；
3、浓缩、干燥：将步骤2所得高浓度洗脱液浓缩、干燥，即制得松果菊苷，纯度达90％以上。
所述步骤1的肉苁蓉药材包括肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma、管花肉苁蓉Cistanche tubulosa(Schenk)Wight或盐生肉苁蓉Cistanche salsa G.Beck的肉质茎。
所述步骤1的肉苁蓉药材为肉苁蓉、管花肉苁蓉或盐生肉苁蓉的的干燥肉质茎鲜品经下述步骤处理后的片材：
将新鲜肉苁蓉、管花肉苁蓉或盐生肉苁蓉药材除去杂质，切制成0.3-1.5cm厚片，用温度为70-100℃的热水浸泡中0.5-10min，取出，晾干。
所述步骤1中的有机溶剂主要是指低碳醇或丙酮，所述的低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇；
所述步骤1中的水和有机溶剂的混合溶剂进行提取时，其混合溶剂中有机溶剂的体积比浓度为40-100％(V/V)。
所述步骤1中提取溶剂的用量为4-10倍药材量，提取次数为2-4次，提取方法为热回流提取、浸渍提取、超声提取或渗漉提取。
所述步骤2的所采用的大孔吸附树脂柱为以苯乙烯为原料，二乙烯苯、甲基丙烯腈或丙烯酸甲酯为交联剂组成的大孔吸附树脂柱。
所述步骤2的所采用的大孔吸附树脂是指D-101、HPD-500、HP-20；XAD-4、AB-8、SP-825、NKA、SIP-1100或XAD-2中的任一种。
所述步骤3浓缩液的干燥方法为常压干燥、减压真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。
本发明的方法简单、易行，以HPLC为检测手段，可以有效地对整个工艺流程进行质量控制，保证了有效成分的含量，得到的原料药纯度高，色泽好；另外，该提取、纯化方法使用常规提取设备，造价低廉，工艺中没有用到有毒的有机溶剂，无污染，有利于保护环境，适于工业化生产。
本发明方法提取、分离的松果菊苷可用于制备预防和治疗老年性痴呆药物。
附图说明
附图1为实施例1所得松果菊苷得高效液相色谱图。
具体实施方案：
实施例1：
1、取管花肉苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎(100g)，除去杂质，切制成0.4cm厚片，用温度为80℃的热水浸泡中3min，取出，晾干，将之进行粉碎；
2、先用6倍量70％的乙醇回流提取2小时，然后用4倍量70％的乙醇回流提取2次，每次1小时；
3、提取液减压浓缩，上HP 20型大孔吸附树脂柱，缓缓上样。先用水洗脱至无糖反应，改用10％乙醇洗脱7倍柱保留体积，最后用25％乙醇洗脱，当洗脱至6倍柱保留体积时，用HPLC检测至松果菊苷的纯度降至85％，停止收集。将30％乙醇洗脱部分回收溶剂，喷雾干燥，得松果菊苷6.3g，纯度为95.6％。高效液相色谱图见附图1。
以高效液相色谱法测定松果菊苷的含量：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-0.1％甲酸水(30∶70)，流速为1mL/min，检测波长为330nm。
实施例2：
1、取肉苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎(100g)，除去杂质，切制成0.1cm厚片，用温度为70℃的热水浸泡中3min，取出，晾干，将之进行粉碎；
2、用10倍量95％的乙醇室温浸泡24h，共提取2次，过滤，合并滤液；
3、提取液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.00-1.10，加水溶解，上D-101型大孔吸附树脂柱，缓缓上样，先用水洗脱至无糖反应，改用5％乙醇洗脱5倍柱保留体积，再改用20％甲醇洗脱，当洗脱至6倍柱保留体积时，用HPLC检测至松果菊苷的纯度降至85％，停止收集，回收溶剂，冷冻干燥，得松果菊苷0.8g，纯度为92.5％。
实施例3：
1、取盐生肉苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎(100g)，除去杂质，切制成1.5cm厚片，用温度为100℃的热水浸泡中8min，取出，晾干，将之进行粉碎；
2、用8倍量丙酮超声提取30min，共提取三次；
3、提取液减压浓缩，上HPD-500型大孔吸附树脂柱，缓缓上样。先用水洗脱至无糖反应，改用5％乙醇洗脱6倍柱保留体积，最后用35％乙醇洗脱，当洗脱至5倍柱保留体积时，用HPLC检测至松果菊苷的纯度降至85％，停止收集。将35％乙醇洗脱部分回收溶剂，减压真空干燥，得松果菊苷4.5g，纯度为93.2％。
实施例4：
1、取肉苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎(100g)，除去杂质，切制成0.5cm厚片，用温度为90℃的热水浸泡中1min，取出，晾干，将之进行粉碎；
2、先用6倍量80％的乙醇回流提取1次，然后用4倍量80％的乙醇回流提取2次，每次1小时；
3、提取液减压浓缩，上AB-8型大孔吸附树脂柱，缓缓上样。先用水洗脱至无糖反应，改用10％乙醇洗脱3倍柱保留体积，最后用22％乙醇洗脱，当洗脱至7倍柱保留体积时，用HPLC检测至松果菊苷的纯度降至85％，停止收集。将22％乙醇洗脱部分回收溶剂，喷雾干燥，得松果菊苷1.0g，纯度为95.4％。
实施例5：
1、取管花肉苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎(100g)，除去杂质，切制成0.6cm厚片，用温度为90℃的热水浸泡中7min，取出，晾干，将之进行粉碎；
2、用8倍量水回流提取1次，然后用6倍量的水回流提取2次，每次1小时，合并提取液；
3、提取液上XAD-4型大孔吸附树脂柱，缓缓上样。先用水洗脱至无糖反应，改用10％乙醇洗脱7倍柱保留体积，最后用22％乙醇洗脱，当洗脱至8倍柱保留体积时，用HPLC检测至松果菊苷的纯度降至85％，停止收集。将22％乙醇洗脱部分回收溶剂，冷冻干燥，得松果菊苷5.3g，纯度为90.8％。
实施例6：
1、取管花肉苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎(100g)，除去杂质，粉碎；
2、先用6倍量70％的乙醇回流提取2小时，然后用4倍量70％的乙醇回流提取2次，每次1小时；
2、提取液减压浓缩，上AB-8型大孔吸附树脂柱，缓缓上样。先用水洗至无糖反应，改用10％乙醇洗脱7倍柱保留体积，最后用25％乙醇洗脱，当洗脱至6倍柱保留体积时，用HPLC检测至松果菊苷的纯度降至85％，停止收集。将30％乙醇洗脱部分回收溶剂，喷雾干燥，得松果菊苷3.8g，纯度为95.6％。

Claims (9)

1、一种从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法，其步骤如下：
(1)将干净的肉苁蓉药材粉碎，用水或/和有机溶剂进行提取；
(2)树脂吸附分离：将步骤1得到的提取液浓缩，使其通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱除去部分杂质，再用5-15％(V/V)甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱除去部分杂质，最后用20-35％(V/V)甲醇水溶液或乙醇水溶液进行洗脱；在洗脱的过程中用HPLC进行监控，当有效成分松果菊苷的纯度降到85％以下时，停止洗脱，合并高浓度的洗脱液；
(3)浓缩、干燥：将步骤2所得高浓度洗脱液浓缩、干燥，即制得松果菊苷，纯度达90％以上。
2、按权利要求1所述的从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法，其特征在于，所述步骤(1)的肉苁蓉药材为肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma、管花肉苁蓉Cistanche tubulosa(Schenk)Wight或盐生肉苁蓉Cistanche salsa G.Beck的肉质茎。
3、按权利要求1所述的从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法，其特征在于，所述步骤(1)的肉苁蓉药材为肉苁蓉、管花肉苁蓉或盐生肉苁蓉的干燥肉质茎鲜品经下述步骤处理后的片材：
将新鲜肉苁蓉、管花肉苁蓉或盐生肉苁蓉药材除去杂质，切制成0.3-1.5cm厚片，用温度为70-100℃的热水浸泡中0.5-10min，取出，晾干。
4、按权利要求1所述的从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法，其特征在于，所述步骤1中的有机溶剂为低碳醇或丙酮；所述的低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇。
5、按权利要求1所述的从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的水和有机溶剂的混合溶剂进行提取时，其混合溶剂中有机溶剂的体积比浓度为40-100％(V/V)。
6、按权利要求1所述的从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法，其特征在于，所述步骤(1)中提取溶剂的用量为4-10倍药材量，提取次数为2-4次，提取方法为热回流提取、浸渍提取、超声提取或渗漉提取。
7、按权利要求1所述的从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法，其特征在于，所述步骤(2)所采用的大孔吸附树脂柱为以苯乙烯为原料，二乙烯苯、甲基丙烯腈或丙烯酸甲酯为交联剂组成的大孔吸附树脂柱。
8、按权利要求1所述的从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法，其特征在于，所述步骤(2)的大孔吸附树脂是指D-101、HPD-500、HP-20；XAD-4、AB-8、SP-825、NKA、SIP-1100或XAD-2中的任一种。
9、按权利要求1所述的从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法，其特征在于，所述步骤(3)对浓缩液的干燥为常压干燥、减压真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。
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