CN101849950A - 救必应酸在制备调血脂的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了从冬青科植物铁冬青(llex rotunda Thunb)的干燥树皮中制备救必应酸的新方法，经药理试验证明具有调节血脂作用，具有在制备调节血脂的药物中的应用的新用途。本发明也阐述了救必应酸的药物制剂，可以是片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂中的任何一种。

Description

救必应酸在制备调血脂的药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种从救必应中提取调血脂有效成分的新方法及医药用途，尤其是对治疗高血脂症及高血脂引起的脂肪肝的应用，也涉及该药物的药物制剂，本发明属于医药技术领域。

背景技术

脂肪代谢或运转异常使血浆一种或多种脂质高于正常称为高血脂症。高血脂症是一种全身性疾病，是指血中胆固醇(TC)和/或甘油三酯(TG)过高或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)过低。高血脂症的主要危害是导致动脉粥样硬化，进而导致众多的相关疾病，该病对身体的损害是隐匿、逐渐、进行性和全身性的。它的直接损害是加速全身动脉粥样硬化，因为全身的重要器官都要依靠动脉供血、供氧，一旦动脉被粥样斑块堵塞，就会导致严重后果。动脉硬化引起的肾功能衰竭等，都与高血脂症密切相关。大量研究资料表明，高血脂症是脑卒中、冠心病、心肌梗死、心脏猝死独立而重要的危险因素。这些心脑血管性疾病的发病率高，危害大，病情进展凶险，其死亡率约占人类总死亡率的半数左右。目前调解血脂的药物很多，主要分为以下三类：(1)他汀类，以降低胆固醇为主，如舒降之、普拉固等；(2)贝特类：以降低甘油三酯为主，如诺衡、力平脂等；(3)天然药物类，对降低胆固醇和甘油三酯均有效，且可以升高高密度脂蛋白，具有综合调节血脂的功效，且副作用小，如龙泰牌降脂宁等。因为血脂增高是一个缓慢的过程，血脂的调节特别是消除血脂的不良影响也同样需要一个持续作用的过程，因此患者应根据自身的不同情况，选择降脂作用明显的药物。因此，一个安全有效、毒副作用小的降脂药物，正是高血脂患者所需要的。我们发明的本专利正是符合本条件的天然药物在治疗高血脂方面的应用。

救必应来源于冬青科植物铁冬青(llex rotunda Thunb)的干燥树皮，又名龙胆仔、白银、白沉香、白兰香、狗屎木、熊胆木、冬青仔、碎骨木、小风藤、白凡木、九层皮、过山风、红熊胆、冬青柴、山冬青、白皮冬青、大叶冬青等。铁冬青生长于荒山疏林、丘陵或溪边，主要分布于广东、广西、福建、台湾、云南、江苏、浙江、安徽、江西、湖南等省区。味苦、性寒，有清热解毒、消肿止痛、利湿、祛风解暑等功效，见载于《岭南采药录》，称“自木香、味苦、清热毒”为我国南方地区民间草药(黄闻键，救必应的民间应用，江西中医药，1996，2：147)。救必应树皮含黄酮苷、酚类，鞣质、三萜苷。临床上常用于感冒、扁桃体炎，咽喉炎、急性肠胃炎、痢疾、骨痛等，外用治跌打损伤、痈疖疮疡，外伤出血、烧伤、烫伤等。三萜类皂苷是近年来冬青属植物化学成分研究热点，其中很多具有明显的生理活性。

目前利用救必应药材为原料生产的药物，主要都是粗提物，制备工艺主要以水提醇沉，提取物干燥、粉碎直接入药的方法，由于以前该药材的主要有效成分不清楚，使得对于以该药材为主要组方的中成药质量难以得到很好的控制，鉴于该药材在临床上其明确的药理功效，为了更好的控制制剂的质量，掌握该药材中所含的化学成分组成，我们对药材的提取物经过纯化、水解、得到单一的成分救必应酸，我们通过吸收入血的有效成分研究发现救必应中的主要吸收入血成分为救必应酸。通过进一步的研究发现救必应酸在调节TC、TG、HDL-C等试验中较具栖冬青苷有了更强的作用。在本发明发表之前，文献检索中发现刘国樵发明的专利(CN101342205)，是用救必应药材，加乙醇提取，滤过，浓缩，加水搅匀后，滤取沉淀物，干燥得提取物，1g提取物干品中含有具栖冬青苷和救必应酸总量为0.50～0.80g，其中具栖冬青苷和救必应酸质量比为12～1.5∶1，此提取物中二者含量只占到总提取物的50～80％，其中主要的成分为具栖冬青苷，有降血脂的作用，与我们发明的专利有本质的区别。我们的提取物是单一成分救必应酸，含量在95％以上，经过吸收入血研究筛选出来的活性成分，有明显的技术进步及本质的区别。在本发明完成前未发现救必应酸及制成的药物用于治疗高血脂症的报道。

我们研究的救必应酸新制备方法是，取救必应药材，用乙醇或甲醇回流提取，合并提取液，加入药用活性炭脱脂，浓缩至小体积，直接加入碱性水溶液进行水解，重结晶得单一成分救必应酸，与文献相比(救必应中具栖冬青甙的分离与鉴定，广东药学院学报，1997，13(2)：103～104)，没有加入有机溶剂进行萃取，没有利用化学分析方法进行分离，可以直接得到单一有效成分救必应酸，含量达到95％以上，具有明显的区别及技术进步。其有效成分明确，含量高，毒副作用小，工艺简单，生产周期短，本发明的新工艺能从冬青属植物中产业化大量制备救必应酸，并未见报道有治疗高血脂疾病的应用，具有广泛的应用前景。

本发明完成前未发现有关以救必应酸作为防治高血脂疾病药物的报道，也未发现救必应酸用于防治高血脂疾病的临床方面应用。

救必应酸(rotundic acid)结构式

发明内容

发明贡献之一是，我们通过吸收入血的有效成分研究发现救必应中的具栖冬青苷不是主要吸收入血成分，而是具栖冬青苷通过肠道菌代谢成救必应酸，再吸收入血起到调血脂作用，通过进一步的研究发现救必应酸在调节TC、TG、HDL-C、LDL-C等试验中较具栖冬青苷有了更强的活性；病理切片证明救必应酸还抑制和逆转了脂肪肝的发展，说明具有治疗因高血脂症引起的脂肪肝的作用。与文献报道的以具栖冬青苷为主要成分的混合物有本质的区别和明显的技术进步。

本发明的重要意义在于将救必应的提取物服用之前在体外将总皂苷通过碱进行降解，获得能吸收入血的有效成分救必应酸，解决了由于个体差异造成口服救必应粗提物在体内降解程度不一致而使生物活性不一致的问题，同时可减少服用量，降低药物的毒副作用，是本发明的一个主要创新点。

发明贡献二是，提供一种大量制备救必应酸的方法，取救必应药材，用乙醇回流提取，合并提取液，加入药用活性炭脱脂，浓缩至小体积，直接加入碱性水溶液进行水解，重结晶得单一成分救必应酸，没有加入有机溶剂进行萃取，没有利用化学分析方法进行分离，可以直接得到单一有效成分救必应酸，含量达到95％以上，具有明显的技术进步。其有效成分明确，含量高，毒副作用小，工艺简单，生产周期短，本发明的新工艺能从冬青属植物中产业化大量制备救必应酸。

本发明的贡献三是，提供救必应酸的药物制剂。主要的药物形态为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂，注射剂中的任何一种。

本发明所述的救必应酸的制备方法如下：

救必应药材用50-95％的乙醇或甲醇，优选70-85％的乙醇或甲醇，回流提取2-3次，每次1-3小时，合并提取液，加药液体积0.3-3.0％药用活性碳，过滤，滤液浓缩至每1ml含1g药材；加0.3～3mol/l的碱溶液1-5倍量，100℃水解1-5小时。放冷，用酸调PH值为2-6，过滤，弃去水解液，滤饼用去离子水洗至中性；再用50-95％的乙醇或甲醇加热至沸，加入药液体积的0.2-2％的药用活性炭，趁热过滤，滤液减压浓缩回收至无醇味、加水至每1ml含1g药材，放置，过滤，水洗，干燥，再重结晶1-3次，得救必应酸，含量在95％以上。

本发明的生产工艺生产周期短，安全，成本低，收率高，纯度可达95％以上。特别适合产业化大量生产。鉴于本发明提取的救必应酸具有调血脂等作用，本发明的工艺所获得的救必应酸可产业化大量制备，将有广阔的应用前景。

为实现上述目的，本发明提供以下技术解决方案。

救必应酸利用高效液相色谱法测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05％磷酸水溶液(80∶20)为流动相；检测波长为215nm。理论板数按救必应酸峰计算不低于3000。

对照品溶液的制备精密称取救必应酸对照品，置容量瓶中，用甲醇溶解制成1ml含救必应酸0.1mg的对照品溶液。

供试品溶液的制备取提取物10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

救必应酸具有调血脂等作用，这些药理作用，通过以下药效学试验得到证实。

1、救必应酸对大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C的影响

取雄性大鼠60只，随机分为6组，除空白对照组外，其余各组每天给予高脂饲料：2％胆固醇，10％猪油，0.5％胆酸钠，0.2％丙基硫氧嘧啶，87％基础饲料。除空白对照组自由饮水外，高脂模型组给予等量生理盐水，其余各组灌胃给药，每日1次，按照表1分组，给药，连续给药15d。用药后禁食12h，测定血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量，结果见表1。

表1、救必应酸对高脂血症大鼠血脂指标的影响结果

与模型对照组比较，^*P＜0.05；^**P＜0.01；

与正常组比较，^△P＜0.05；^△△P＜0.01；

结果表明，模型对照组血清TC、TG、LDL-C值明显升高，HDL-C明显下降。与模型对照组比较，救必应酸能明显降低血清TC、TG含量，显著降低血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量，显著升高血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。

2、肝组织MDA及SOD测定

末次取血后将动物断头处死，取大鼠肝左叶0.1g制备10％组织匀浆，3000rpm离心15min，再取上清1500rpm离心10min，利用总蛋白试剂盒测定蛋白浓度(考马斯亮蓝法)，按试剂盒说明测定MDA含量及SOD活性。

表2、救必应酸对大鼠肝组织内MDA及SOD的影响

与模型对照组比较，^*P＜0.05；^**P＜0.01；

与正常组比较，^△P＜0.05；^△△P＜0.01；

结果显示，救必应酸高、中、低剂量组均有清除体内脂质过氧化产物MDA的能力，并随剂量的增加，效果加强。对SOD活力也有提高的能力。

3、救必应酸对肝脂变的影响

取肝左叶，浸入20％中性甲醛溶液中固定，常规HE染色，光镜下观察。结果显示，空白组织无肝脂变，高脂模型肝脂变达85％以上为重度脂肪肝；救必应酸低剂量组肝脂变约为70％为中度脂肪肝，救必应酸中剂量组肝脂变约为50％为轻度脂肪肝，救必应酸高剂量组肝脂变约为35％为轻度脂肪肝。说明救必应酸有抑制脂肪肝发展并逆转脂肪肝的作用。

从以上的药效学实验可知，救必应酸具有治疗高血脂症及高血脂引起的脂肪肝的作用，并且长期服用没有副作用。

本发明是通过如下的实验施例得以实现(证实)

实例1

药材用70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，加提取液体积2％药用活性碳，过滤，滤液浓缩至每1ml含1g药材；加1mol/l的氢氧化钠溶液2倍量，100℃水解4小时，放冷，用盐酸调PH值为3，过滤，弃去水解液，滤饼用去离子水洗至中性，再用85％的乙醇加热至沸，加入药液体积的1％的药用活性炭，趁热过滤，滤液减压浓缩回收至无醇味，加水至每1ml含1g药材，放置，过滤，水洗，干燥，再重结晶2次，得救必应酸，收率为3.2％，含量为96.4％。

实例2

药材用85％的乙醇回流提取2次，每次3小时，合并提取液，加提取液体积3％药用活性碳，过滤，滤液浓缩至每1ml含1g药材；加1mol/l的氢氧化钾溶液3倍量，100℃水解4小时，放冷，用硫酸调PH值为3，过滤，弃去水解液，滤饼用去离子水洗至中性，再用80％的乙醇加热至沸，加入药液体积的1.5％的药用活性炭，趁热过滤，滤液减压浓缩回收至无醇味、加水至每1ml含1g药材，放置，过滤，水洗，干燥，再重结晶3次，得救必应酸，收率为3.1％，含量为97.2％。

实例3

药材用95％的乙醇回流提取2次，每次3小时，合并提取液，加提取液体积3％药用活性碳，过滤，滤液浓缩至每1ml含1g药材；加2mol/l的碳酸钾溶液4倍量，100℃水解5小时，放冷，用硫酸调PH值为3，过滤，弃去水解液，滤饼用去离子水洗至中性，再用90％的乙醇加热至沸，加入药液体积的1.5％的药用活性炭，趁热过滤，滤液减压浓缩回收至无醇味，加水至每1ml含1g药材，放置，过滤，水洗，干燥，再重结晶3次，得救必应酸，收率为2.9％，含量为95.2％。

实例4

药材用50％的乙醇回流提取2次，每次3小时，合并提取液，加提取液体积1％药用活性碳，过滤，滤液浓缩至每1ml含1g药材；加2mol/l的碳酸钠溶液5倍量，100℃水解5小时，放冷，用硫酸调PH值为3，过滤，弃去水解液，滤饼用去离子水洗至中性，再用90％的乙醇加热至沸，加入药液体积的0.8％的药用活性炭，趁热过滤，滤液减压浓缩回收至无醇味、加水至每1ml含1g药材，放置，过滤，水洗，干燥，再重结晶3次，得救必应酸，收率为3.2％，含量为95.8％。

实例5、(胶囊剂)

救必应酸100g，药用淀粉适量，混合均匀，制粒，干燥，整粒，装入1号胶囊，制成1000粒，即得。每次1粒、每日2次。

实施例6、(片剂)

救必应酸100g，药用淀粉适量，糊精适量，混合均匀，制粒，干燥，整粒，干燥，加入润滑剂适量，压片，制成1000片，即得。每次1片、每日2次。

实施例7、(滴丸剂)

称取15g聚乙二醇4000，15g聚乙二醇6000，在水浴上熔化，救必应酸10g，搅拌均匀，倾入保温管中，调节恒温装置，使药液在80-90℃下滴入冷却过的液体石蜡中，滴完后，将药丸倾入滤纸上吸干石蜡油，制成1000粒，即得。每次10粒、每日2次。

实施例8、(颗粒剂)

救必应酸100g，糊精400g，乳糖500g，混合均匀，用适量乙醇制粒，干燥、整粒、分装，制成1000袋，即得。每次1袋、每日2次。

Claims (7)

1.救必应酸在制备调血脂的药物中的应用及制剂。

2.权利要求1所述救必应酸是从冬青科植物铁冬青(llex rotundaThunb)的干燥树皮中提取得到，也可以从冬青科同属植物中提取得到。

3.权利要求1所述救必应酸制备方法，其特征在于：药材用50-95％的乙醇或甲醇回流提取2-3次，每次1-3小时，合并提取液，加提取液体积0.3-3.0％药用活性碳，过滤，滤液浓缩至每1ml含1g药材；加0.3～3mol/l的碱溶液1-5倍量，100℃水解1-5小时，放冷，用酸调PH值为2-6，过滤，弃去水解液，滤饼用去离子水洗至中性，再用50-95％的乙醇或甲醇加热至沸，加入药液体积的0.2-2％的药用活性炭，趁热过滤，滤液减压浓缩回收至无醇味、加水至每1ml含1g药材，放置，过滤，水洗，干燥，再重结晶1-3次，得救必应酸。

4.根据权利要求3所述的得到救必应酸的制备方法的特征在于：水解用的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠等；调PH值为2-6的酸为盐酸或硫酸。

5.一种药物制剂，其特征在于含有权利要求1或权利要求2所述的救必应酸及在治疗有效剂量下一种或多种药学上可接受的药用赋形剂。

6.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于所说的制剂选自于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂中的任何一种。

7.根据权利要求5所述的药用赋形剂包括填充剂、崩解剂等，填充剂选自淀粉、乳糖、微晶纤维素、糊精、磷酸钙等；崩解剂选自羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联聚维酮；也可选加黏合剂、润湿剂和润滑剂。