CN101757391B - 一种治疗心血管疾病的药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗心血管疾病的药物组合物及其制备方法和用途，属中药领域。该药物组合物的有效成分是由从中药瓜蒌和薤白中提取精制的总皂苷元和总生物碱组成，并制成适宜的剂型，该组合物在治疗冠心病、心绞痛、动脉硬化、胸痛、高脂血症等方面具有较好疗效。本发明现时还公开其中总皂苷元和总生物碱的制备方法。

Description

一种治疗心血管疾病的药物组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种用于治疗心血管疾病的药物组合物，特别是一种以中药瓜蒌和薤白提取物为有效成分的药物组合物及其制备方法和用途。属中药领域。

背景技术

心血管疾病和脑血管疾病、恶性肿瘤并称为人类三大死亡疾病，对其防治及深入研究，一直是医药学领域中的重点。心血管疾病目前常见有冠心病、高血压、心绞痛、急性心肌梗死、高血脂等，发病范围广，具有较大的危害生命危险。目前，传统西药及中药对心血管疾病的治疗均具有局限性，如西药的毒副作用较大、不宜长期服用，中药大多为活血化瘀类药物，适应症较单一，无法满足临床多病种的需要。故临床仍需要一种安全、速效、可靠的药物来弥补现有药物的不足。

瓜蒌薤白组方来源于《金匮要略》中的“瓜蒌薤白白酒汤”，现一直应用于临床，主要用于治疗由胸阳不振、痰阻气滞所致胸痹等。治宜通阳散结，行气祛痰，以瓜蒌理气宽胸，涤痰散结，为君药；薤白温通滑利，通阳散结，行气止痛，为臣药，两药相配，一祛痰结、二通阳气，相辅相成。瓜蒌薤白汤在心血管疾病应用的报道较多，在理论、实验、药理与临床应用等方面都报道较多，其用途已远远超出《金匮要略》所记载的范围。现代研究表明其能扩张冠脉、减慢心率、抑制血小板聚集、改善心功能、阻止血栓形成和显著抑制血清过氧化脂质形成的作用。这些最新研究成果为深入研究经方，拓宽古方今用的适用范围，发掘古方的临床实用价值提供基础。

但目前有关瓜蒌薤白组方制成的药物以及相关文献报道，均以粗提物的形式入药，未明确药物的有效成分，如“瓜萎薤白汤加减浸膏的药效学研究(黄咏梅等，《中药材》第27卷第9期)”、“不同制备工艺的瓜蒌薤白提取物药效学比较(曹红等，《中成药》第23卷第11期)”等。虽有文献报道了瓜蒌薤白组方中的总皂苷类等物质具有较强药理活性，但均是对其单一类成分进行的研究，而且局限于临床和药理活性研究的报道，并没有对其所含有的有效成分进行整体研究。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种用于治疗心血管疾病的药物组合物及其有效成分的配比。

本发明目的第一目的是这样实现的：

发明人提供一种用于治疗心血管疾病的药物组合物，该组合物的有效成分由瓜蒌薤白总皂苷元和瓜蒌薤白总生物碱组成。

首先，发明人对瓜蒌薤白组方中的有效成分进行了确证。

(1)瓜蒌薤白总皂苷元有效成分确证：瓜蒌薤白中含有皂苷类成分，文献报道多对其进行了研究，但发明人发现，皂苷类物质其实是在植物体内产生的生物活性较低的化合物，如在化合物上添加极性基团，把具有生物活性的皂苷元和糖结合起来形成生理活性较低的皂苷类而加以储存，使之更易排出体外。同样，这些皂苷类化合物在人体内的生物利用度也较低，口服的皂苷类化合物在肠道内难以吸收、生物利用度低，多数在体内代谢并不完全，有的甚至完全以原型(苷类形式)排除体外，只有少量的皂苷类化合物经肠道细菌、酶分解为皂苷元后才发挥出疗效；非口服的皂苷类化合物，被人体吸收的皂苷还需经血液转运到肝脏，再通过肝肠循环，将皂苷水解为皂苷元再吸收入血而发挥疗效，但因为步骤较多，故也不能迅速发挥疗效。因而，针对瓜蒌薤白总皂苷的药用价值，发明人提出一种新的药用物质，即瓜蒌薤白总皂苷元。它是按现有技术从瓜蒌薤白药材中提取得到瓜蒌薤白总皂苷，对该有效部位进行水解，使其中的皂苷类物质脱去糖基，生成更具生物活性的皂苷元，即成为本发明所提供的瓜蒌薤白总皂苷元。

发明人经研究证实，皂苷类物质经水解后所得皂苷元没有了糖基，其亲脂性大大增强，因而皂苷元较皂苷更易透过肠粘膜被吸收；同时，药物的分子越小也越容易被吸收，皂苷水解掉所带的糖分子变成皂苷元后，分子变得更小，也会更易吸收。另外，以皂苷元直接作为药用物质，克服了以往皂苷类物质在体内运行时间长、转化效率低、转化结果不确定等因素，大大提高了药物的生物利用率，节约了药物资源。

(2)瓜蒌薤白总生物碱确证：瓜蒌薤白中含有生物碱类(所有含氮类物质均归属为广义的生物碱类)成分，具有较强的药理活性，文献“栝楼有效成分的研究初报—有效部位分离、药理及临床观察”(《医药工业》，1975，(1)：15)等研究表明，瓜蒌皮的扩冠脉作用与其所含类生物碱有关，与总氨基酸无关，即说明生物碱类成分为一类具有较强药理活性的物质。发明人经药效学试验筛选发现瓜蒌薤白总生物碱能明显对抗垂体后叶素所致的大鼠急性心肌缺血影响，提高大鼠的存活率，具有较强的药理活性。

发明人最终确定了瓜蒌薤白总皂苷元和瓜蒌薤白总生物碱为主要有效成分，并以先进的“基线等比增减设计法”进行了多指标药效学试验筛选，最终得到两者有效成分的配比为0.5～4：1，经进一步优选为1.5：1。

本发明中的瓜蒌薤白总皂苷元的母核为薯蓣皂苷元结构，可以以薯蓣皂苷元作对照比色法测定总皂苷元的含量。测定方法如下：(1)对照品溶液的制备精密称取薯蓣皂苷元对照品0.8mg，置于10ml的量瓶中，加三氯甲烷使之溶解后定容至10ml，摇匀，即得。(2)供试品溶液的制备  取本发明组合物0.2g，精密称定，精密加甲醇100ml，称定重量，加热回流提取45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液50ml蒸干，残渣加甲醇适量溶解定量转移至10ml容量瓶中，用甲醇定容至10ml，摇匀，即得。(3)测定法精密吸取薯蓣皂苷元对照品溶液0.3、0.6、0.9、1.2、1.5ml置于10ml容量瓶中，挥尽溶剂，分别加入10ml高氯酸，70℃水浴15min，流水冷却30min后以高氯酸为空白，在406nm波长处测定吸收，绘制标准曲线。吸取上述供试品溶液1ml置10ml容量瓶中，挥尽溶剂，加高氯酸10ml，置70℃水浴上不断振摇，保温15min，流水冷却，在406nm处测定A值。将A值代入标准曲线计算样品含量。(4)结果以薯蓣皂苷元计，比色法测定瓜蒌薤白总皂苷元中总苷元的含量均不低于50％。

本发明中的瓜蒌薤白总生物碱是指广义的含氮化合物，故以腺苷作对照以雷氏铵盐沉淀比色法测定总生物碱含量。测定方法如下：(1)对照品溶液的制备取在105℃干燥至恒重的腺苷对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml含0.8mg的溶液，即得。(2)供试品溶液的制备取本发明组合物0.2g，精密称定，精密加甲醇100ml，称定重量，加热回流提取45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液50ml蒸干，残渣加0.1mol/L盐酸溶液溶解，转移至50ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。(3)测定法精密量取对照品溶液10ml，置25ml量瓶中；另精密量取供试品溶液20ml，置25ml量瓶中(作为供试样品I)；再取0.1mol/L盐酸溶液20ml，置25ml量瓶中。在上述三个量瓶中，各精密加入临用新制的2％硫氰酸铬铵溶液3ml，摇匀，加0.1mol/L的盐酸溶液稀释至刻度，摇匀；再精密量取供试品溶液20ml，置25ml量瓶中(作为供试样品II)，加0.1mol/L的盐酸溶液稀释至刻度，摇匀；将上述四个量瓶置冰水浴中放置1小时，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以0.1mol/L盐酸溶液为空白，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)试验，在520nm波长处分别测定吸收度，按下式计算样品中总生物碱的含量，即得。全部操作应在30分钟内完成。(4)结果以腺苷计，比色法测定瓜蒌薤白总生物碱中总生物碱的含量均不低于50％。

本发明中的瓜蒌薤白有效成分组合物可以单独应用，也可以与其他药物一起联合应用，即：在药物活性成分中，可以只有该组合物，也可以是该组合物与其他药物的混合物。所有以瓜蒌薤白总皂苷元和总生物碱按权利要求中明确的比例和方法使用的行为均属本发明保护的范围。

本发明的第二目的是提供该组合物的制备方法。

发明人首先对各有效成分进行了试验研究，以药效学试验指标进行考察，确定了合理的制备方法如下：

a、按1～3：1的重量比取瓜蒌、薤白药材，合并后加浓度为30％～60％乙醇提取1～3次，每次0.5～2小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.25(60℃测)，放冷，加乙醇使含醇量达50％～80％，静置分层，滤过，滤液减压回收乙醇，余液加盐酸调pH1～6，过阳离子交换树脂柱，先以水洗脱至pH6，水洗液备用；再以浓度为2％～20％钠盐溶液洗脱至无生物碱反应，收集钠盐洗脱液，浓缩干燥，干燥物以无水乙醇回流提取1～4次，合并无水乙醇液，减压回收乙醇，余液浓缩，干燥，即得瓜蒌薤白总生物碱；

b、取上述步骤中的备用水洗液，过大孔吸附树脂柱，先以水洗脱至pH6～7，再以浓度为30％～80％的乙醇洗脱至无色，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，余液用浓度2％～10％的盐酸或硫酸于100℃温度下水解1～6小时，过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱至pH6～7，再以浓度40％～80％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，余液干燥，即得瓜蒌薤白总皂苷元。

本发明中采用的大孔吸附树脂可以是丙烯酸类、苯乙烯类、甲基丙烯酸酯类等常用树脂，如D101、D201、AB-8等；采用的阳离子树脂可以是大孔型或凝胶型强酸型离子交换树脂，如001×3型等；采用的阴离子树脂可以是强碱性苯乙烯或聚苯乙烯型离子交换树脂，如201×4型等；采用的钠盐洗脱液可以是氯化钠、乙酸钠等；采用的水洗脱均为去离子水。

发明人经过进一步优选，确定了以下制备方法：

a、按1:1的重量比取瓜蒌、薤白药材，合并后加浓度40％的乙醇回流提取2次，每次1小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10(60℃测)，放冷，加乙醇使含醇量达70％，静置分层，滤过，滤液减压回收乙醇，余液加盐酸调pH2，过阳离子交换树脂柱，先以水洗脱至pH6，水洗液备用；再以浓度为5％的氯化钠溶液洗脱至无生物碱反应，收集氯化钠洗脱液，浓缩干燥，干燥物以无水乙醇回流提取3次，合并无水乙醇液，减压回收乙醇，余液浓缩，干燥，即得瓜蒌薤白总生物碱；

b、取上述步骤中的备用水洗液，过D101大孔吸附树脂柱，先以水洗脱至pH6～7，再以浓度为50％的乙醇洗脱至无色，收集50％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，余液用浓度为5％的盐酸于100℃温度下水解2小时，过D101大孔吸附树脂柱，先以水洗脱至pH6～7，再以浓度为60％的乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，余液干燥，即得瓜蒌薤白总皂苷元。

发明人发现，本发明组合物中有效成分制备时既可以采用上述两味药材合并提取的方法，也可以单独提取每味药材，再合并各自有效成分。此两种方法得到的有效成分组合均具有相似的药理活性。具体地说，该组合物的单独制备方法为：

a、按1～3:1的重量比取瓜蒌、薤白药材，将两种药材分别各自加30％～60％乙醇提取1～3次，每次0.5～2小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.25(60℃测)，放冷，加乙醇使含醇量达50％～80％，放置过夜，滤过，滤液减压回收乙醇，适当浓缩，加盐酸调pH1～6，过阳离子交换树脂柱，先以水洗脱至pH6，水洗液备用；再以2％～20％钠盐溶液洗脱至无生物碱反应，收集钠盐洗脱液，浓缩干燥，以无水乙醇回流提取1～4次，合并无水乙醇液，减压回收乙醇，浓缩，干燥，分别得到瓜蒌总生物碱和薤白总生物碱，合并即得瓜蒌薤白总生物碱；

b、将上述步骤中两种药材的备用水洗液分别各自进行浓缩，过大孔吸附树脂柱，先以水洗脱至pH6～7，再以30％～80％乙醇洗脱至无色，减压回收乙醇，适当浓缩，用2％～10％盐酸或硫酸100℃温度下水解1～6小时，过大孔吸附树脂柱，先以水洗脱至pH6～7，再以40％～80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，分别得到瓜蒌总皂苷元和薤白总皂苷元，合并即得瓜蒌薤白总皂苷元。

进一步优选方法：

a、按1:1的重量比取瓜蒌、薤白药材，将两种药材分别各自加40％乙醇回流提取2次，每次1小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10(60℃测)，放冷，加乙醇使含醇量达70％，放置过夜，滤过，滤液减压回收乙醇，适当浓缩，加盐酸调pH2，过阳离子交换树脂柱，先以水洗脱至pH6，水洗液备用；再以5％氯化钠溶液洗脱至无生物碱反应，收集氯化钠洗脱液，浓缩干燥，以无水乙醇回流提取3次，合并，减压回收乙醇，浓缩，干燥，分别得到瓜蒌总生物碱和薤白总生物碱，合并即得瓜蒌薤白总生物碱；

b、将上述步骤中两处药材的备用水洗液分别各自进行浓缩，过D101大孔树脂柱，先以水洗脱至pH6～7，再以50％乙醇洗脱至无色，减压回收乙醇，适当浓缩，用5％盐酸100℃温度下水解2小时，过D101大孔树脂柱，先用水洗脱至pH6～7，再以60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，分别得到瓜蒌总皂苷元和薤白总皂苷元，合并即得瓜蒌薤白总皂苷元。

上述各方法中制备瓜蒌薤白总皂苷元时，均采用了直接过大孔吸附树脂柱分离纯化的方法。但发明人经过试验研究发现，上大孔树脂的药液可以先过阴离子交换树脂柱来洗脱除杂，阴离子树脂能吸附大量带负电荷物质，使大孔树脂上样液更加纯化。直接过大孔树脂柱制备的总皂苷元与除杂后制备得到的总皂苷元药效学比较无显著性差异，仅存在洗脱效率的差异。故本发明中的瓜萎薤白总皂苷元制备时，也可以采用如下方法：

取前述步骤中的备用水洗液，先加氢氧化钠调pH8～9，过阴离子交换树脂柱，以水洗脱至无色，水洗液过大孔吸附树脂柱，先以水洗脱至pH6～7，再以30％～80％乙醇洗脱至无色，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，余液用2％～10％盐酸或硫酸100℃温度下水解1～6小时，水解液过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱至pH6～7，再以浓度为40％～80％乙醇洗脱，收集40％～80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得瓜蒌薤白总皂苷元；

详细步骤：将制备总生物碱过程中得到的备用水洗液，先加氢氧化钠调pH9，过阴离子交换树脂柱，以水洗脱至无色，将洗脱液过D101大孔吸附树脂柱，先以水洗脱至pH6～7，再以浓度为50％的乙醇洗脱至无色，收集50％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，余液用浓度为5％的盐酸于100℃温度下水解2小时，水解液过D101大孔吸附树脂柱，先以水洗脱至pH6～7，再以浓度为60％的乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，余液浓缩，干燥，即得瓜蒌薤白总皂苷元。

以上方法也适用于两种药材分别制备总生物碱和总皂苷元。

本发明中的药物组合物可以被制成滴丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、软胶囊剂、凝胶剂、栓剂等药学可以接受的剂型。如：

a、将瓜蒌薤白总皂苷元、总生物碱混合，加入适量的常规辅料如淀粉、乳糖、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠等制成胶囊剂、颗粒剂、片剂等制剂。

b、将瓜蒌薤白总皂苷元、总生物碱混合，可加入到熔融的PEG4000中以滴制法制成滴丸。

c、将瓜蒌薤白总皂苷元、总生物碱混合，以适量水溶解后直接加卡波姆、壳聚糖等常规药用辅料，制成凝胶剂、湿敷剂、喷雾剂等制剂。

本发明最后是提供该组合物在治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、心律失常、心肌炎、动脉硬化、胸痛、高脂血症等心血管疾病方面的应用。

有益效果

本发明的药物组合物，具有通阳散结、行气祛痰之功效，可用于治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、心律失常、心肌炎、动脉硬化、胸痛、高脂血症等心血管疾病。发明人通过以下实验研究，来说明本发明的突出效果。

一、对小鼠的抗炎作用研究

1、材料

1.1动物  昆明种小鼠，体重20±2g，购于安徽医科大学动物实验中心。

1.2药品与试剂

二甲苯(分析纯)

2、供试样品的制备取瓜蒌薤白总皂苷元12g，瓜蒌薤白总生物碱8g，混合，粉碎，加入熔融的聚乙二醇4000中，搅匀，将药液置滴丸机贮料缸中，保温(70℃)，30滴/分钟速度，滴入5～10℃的甲基硅油中，取出滴丸，吸除冷却剂，干燥，即得。

对照药复方丹参滴丸，天津天士力制药股份有限公司产品(批号：20070306)

3、方法与结果

3.1试验方法  取小鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，每组10只：本发明组、阳性对照组、空白对照组。灌胃给药，给药剂量分别为10ml/kg，空白对照组灌胃给予同体积生理盐水，每天两次，连续3天。末次给药1h后将二甲苯均匀涂布于各鼠右耳前后两面致炎，每鼠100ul。致炎4h后脱颈椎处死，用6mm直径打孔器分别在左右两耳同一部位打下圆耳片，精密称重，以左右耳片重量差作为肿胀度，计算右耳廓肿胀度及肿胀抑制率。

肿胀抑制率＝(对照组肿胀度-给药组肿胀度)÷对照组肿胀度×100％

3.2试验结果  结果见表1。

表1   对小鼠耳廓肿胀的影响(x±s，n＝10)

 

组别	二甲苯(ml/只)	肿胀度(mg)	抑制率(％)
				本发明组	0.1	0.9±0.48	85.5**
阳性对照组	0.1	1.5±0.87	75.8*
				空白对照组	0.1	6.2±1.23	—

注：与空白对照组比较(t检验)，*P<0.05，**P<0.01。

以上试验结果表明，与空白对照组比较，本发明组具有非常显著性差异，阳性对照组具有显著性差异，其均可明显抑制小鼠耳廓肿胀。但本发明组的试验效果尤为显著。

二、对小鼠常压耐缺氧的影响

1、材料

1.1动物  昆明种小鼠，体重20±2g，购于安徽医科大学动物实验中心。

1.2药品与试剂

盐酸异丙肾上腺素注射液：上海禾丰制药有限公司，批号070804

2、供试样品的制备同上。

对照药  复方丹参滴丸，天津天士力制药股份有限公司产品(批号：20070306)

3、方法与结果

小鼠30只，均分4组，第1组灌胃1％CMC-Na溶液，第2组灌胃本发明高剂量药物，第3组灌胃本发明低剂量药物；第4组灌胃复方丹参滴丸的1％CMC-Na混悬液，给药容积均为20ml/kg。分别连续给药3d，末次给药30min后，均皮下注射盐酸异丙肾上腺素注射液20mg/kg，将小鼠放入125ml磨砂口的广口瓶里进行缺氧实验。每瓶放一只小鼠，加盖封密，瓶底置5g钠石灰，使之不漏气，立即开始计时。以小鼠呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。结果见表2。

表2  对小鼠的存活时间影响结果

 

分组	剂量(g生药/kg)	存活时间(分钟)
			空白对照组	—	34.6±7.8
本发明高剂量组	8	71.2±4.1**
			本发明低剂量组	4	56.3±3.5*
阳性对照组	5	55.8±5.2*

与空白对照组相比，^*P<0.05^**P<0.01

结果表明，本发明药物组和阳性对照组均可明显延长小鼠的存活时间，本发明高剂量组与空白对照组相比具有极显著性差异，本发明低剂量组和阳性对照组与空白对照相比有显著性差异。本发明药物组的效果尤为显著。

三、对酒石酸锑钾致小鼠扭体反应的影响

1、材料

1.1动物  昆明种小鼠，由安徽医科大学动物实验中心提供。

1.2药品与试剂

供试品制备同上。

枉痹冲剂，由贵州汉方制药有限公司生产(批号070414)，取45g以水混悬至100ml；

酒石酸锑钾，天津化学试剂三厂生产。

2方法与结果

2.1试验方法

取小鼠30只，雌雄各半，体重20±2g，随机均匀分为3组，即空白组、阳性药组、本发明组，灌胃给药剂量均为10ml/kg，空白组灌胃给予同体积的生理盐水，每天给药1次，连续给药5天，于最后1次给药后1h，每鼠腹腔注射新配制的酒石酸锑钾液，立即观察小鼠首次出现扭体反应的潜伏期及10min内小鼠扭体发生数。

2.2试验结果  结果见表3。

表3  对酒石酸锑钾所致小鼠扭体反应的影响(X±S)

 

组别	动物数(只)	剂量(g/kg)	首次发生扭体反应的潜伏期(min)	10min内扭体发生次数(次)
					本发明组	10	3.0	3.87±0.59*	10.8±9.6
枉痹冲剂组	10	4.5	3.51±0.27*	15.2±3.6
					空白对照组	10	—	2.05±0.63	19.1±4.6

注：与空白对照组比，*P<0.05。

以上试验结果表明，本发明组和枉痹冲剂组均可明显延长小鼠首次发生扭体的潜伏期，减少小鼠扭体次数，与空白对照组比较具有显著性差异；但本发明组的效果尤为显著。

四、对垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血实验影响

1、材料

1.1动物  Wister大鼠50只，雌雄各半，体重200±10g。由安徽医科大学动物实验中心提供。

1.2药品与试剂

供试样品的制备  同上。

对照药  复方丹参滴丸，天津天士力制药股份有限公司产品(批号：20070306)

2、方法与结果

取筛选出的心电正常大鼠，禁食8h后，随机分为4组，每组10只。即空白组、阳性药组、本发明高剂量组、本发明低剂量组，灌胃给药，给药容积均为20ml/kg。分别给药7d，末次给药60min后ip戊巴比妥钠35mg/kg。待麻醉后，仰位固定于鼠台上，记录胸V II导联正常心电图。麻醉30min后，分别舌下iv垂体后叶素0.8U/kg，10s注完。注射后立即记录0，15，30min及1h时心电图，观察各期心电图变化，测量比较J点(QRS波群的终点与ST段交接处)上升的差别，计算有效率。结果见表4。

表4  对垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血实验结果(x±s，n＝10)

 

分组	剂量(g生药/kg)	有效率(％)
			空白对照组	—	20
本发明高剂量组	8	80**
			本发明低剂量组	4	50*
阳性对照组	5	40*

注：与空白对照组比，*P<0.05。

结果表明，试验药物均能对抗后叶素所致的急性心肌缺血，本发明的低、高剂量组及阳性对照组均可明显提高大鼠的存活率，高剂量组与空白对照组相比具有极显著性差异，低剂量组及阳性对照组与空白对照相比有显著性差异。但本发明药物组的效果尤为显著。

五、抗大鼠静脉血栓形成的作用

1、材料

1.1动物  Wister大鼠50只，雌雄各半，体重200±10g。由安徽医科大学动物实验中心提供。

1.2药品与试剂

供试样品的制备  同上。

对照药  复方丹参滴丸，天津天士力制药股份有限公司产品(批号：20070306)

2、方法与结果

2.1试验方法  取Wistar大鼠40只，随机分为4组，每组10只：本发明高剂量组、本发明低剂量组、阳性对照组、空白对照组，灌胃给药每天1次，给药剂量分别为10ml/kg，空白对照组灌胃给予同体积生理盐水，连续7天。末次给药6h后，用内径为1mm的玻璃毛细管插入鼠内眦静脉丛取血，至毛细管血柱达5cm，每隔30s折断毛细管一段，检查有无出现凝血丝，计算毛细管采血到出现血凝丝时间，即为凝血时间。

2.2试验结果  结果见表5。

表5  对大鼠静脉血栓形成的影响(X±S)

 

组别	动物数(只)	剂量(g生药/kg)	凝血时间(s)
				本发明高剂量组	10	8	96.00±37.58**
本发明低剂量组	10	4	81.00±28.43*
				阳性对照组	10	5	84.00±24.72*
空白对照组	10	—	61.00±78.62

注：与空白对照组比较(t检验)，^*P<0.05，^**P<0.01。

以上试验结果表明，本发明组及阳性对照组可明显延长凝血时间，本发明高剂量组与空白对照组具有极显著性差异，低剂量组和阳性对照组与空白组比较具有显著性差异。但本发明组的效果尤为显著。

六、对大鼠血液流变学的影响

1、材料

1.1动物

Wistar大鼠30只，雌雄各半，体重200±10g。由北京大学实验动物中心提供。

1.2供试样品同上。

1.3仪器

LBY—N6A自清洗旋转式粘度计北京普利生医疗器械科技有限公司

2、方法与结果

取大鼠，随机分为3组，每组10只。按表7所示剂量灌胃给药，每日1次，连续10日，对照组每日灌以等体积水。于末次给药后1h，各组大鼠以3％戊巴比妥钠依次麻醉后，经腹主动脉采血，肝素抗凝，置LBY—N6A自清洗旋转式粘度计上，测定全血粘度及血浆粘度。结果见表6。

表6    对正常大鼠血液流变学的影响(mpa·S；X±SD)

注：与空白对照组比较(t检验)，^*P<0.05，^**P<0.01。

以上试验结果表明，本发明组能显著够降低大鼠的全血粘度，与空白对照组比较具有极显著性差异，阳性对照组与空白对照比较具有显著性差异。结果本发明组的效果尤为显著。

七、对高脂血症大鼠血清TC、TG、HDL-C的影响

1、材料

1.1动物Wistar大鼠40只，雌雄各半，体重200±10g。由北京大学实验动物中心提供。

1.2药品与试剂    供试品制备同上。

对照药 复方丹参滴丸，天津天士力制药股份有限公司产品(批号：20070306)

高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测试盒，总胆固醇(TC)测试盒，甘油三酯(TG)测试盒。

1.3仪器 ZS-3型半自动生化测定仪。

2、方法与结果

2.1动物模型的建立 用1％胆固醇，0.2％甲基硫氧嘧啶，0.3％胆盐，7.5％猪油，10％蛋黄粉，81％基础饲料制成高脂饲料，喂饲大鼠。

2.2试验方法 大鼠适应性饲养5天，禁食12h，检测血清TC和TG，按体重和血脂水平将大鼠随机分为4组，每组10只：即空白对照组、模型对照组、本发明组、阳性对照组。除空白对照组喂饲基础饲料外，其余各组均喂高脂饲料，平均每鼠每天18g，不足给予普通饲料补充。在给予高脂饲料的同时，灌胃给药剂量均为10ml/kg，空白组和模型组灌胃给予同体积的生理盐水，每天给药1次，连续给药30天，末次给药后，禁食12h，下腔静脉取血，酶法测定TC、TG、HDL-C。

2.3试验结果 对高脂血症大鼠血清TC、TG、HDL-C的影响见表7。

表7  对高脂血症大鼠血清TC、TG、HDL-C的影响(mmol/L，X±S，n＝10)

 

组别	剂量(ml/kg)	TC	TG	HDL-C
					空白对照组	—	1.66±0.34	0.77±0.53	0.84±0.45
模型对照组	—	6.23±0.15	2.92±0.27	0.43±0.18
					本发明组	10	4.18±0.37*	1.84±0.23*	0.29±0.32*
阳性对照组	10	5.25±0.74	2.27±0.23	0.35±0.45

注：与模型对照组比较，^*P<0.05。

以上试验结果表明，模型对照组大鼠血中TC、TG水平显著高于空白对照组(P<0.05)，HDL-C显著低于空白对照组(P<0.05)，提示造模成功；与模型对照组比较，本发明组能显著降低TC、TG，并升高血HDL-C水平，具有显著性差异；较阳性对照组效果明显。

下面实施例制得的瓜蒌薤白总生物碱和总皂苷元组合物均能达到上述实验例的效果。

具体实施方式

实施例1：瓜蒌薤白总生物碱的制备

取瓜蒌5kg、薤白5kg，加40％乙醇回流提取2次，每次1小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至60℃测定相对密度为1.10，放冷，加乙醇使含醇量达70％，放置过夜，滤过，滤液减压回收乙醇，适当浓缩，加盐酸调pH2，过阳离子交换树脂柱，先以水洗脱，水洗液备用；再以5％氯化钠溶液洗脱至无生物碱反应，收集氯化钠洗脱液，浓缩干燥，以无水乙醇回流提取3次，合并，减压回收乙醇，浓缩，干燥，即得总生物碱(总生物碱含量65％)。

实施例2：瓜蒌薤白总生物碱的制备

取瓜蒌1.5kg、薤白1kg，加30％乙醇提取3次，每次0.5小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至60℃测定相对密度为1.05，放冷，加乙醇使含醇量达50％，放置过夜，滤过，滤液减压回收乙醇，适当浓缩，加盐酸调pH1，过阳离子交换树脂柱，先以水洗脱，水洗液备用；再以20％氯化钠溶液洗脱至无生物碱反应，收集氯化钠洗脱液，浓缩干燥，以无水乙醇回流提取2次，合并，减压回收乙醇，浓缩，干燥，即得总生物碱(总生物碱含量72％)。

实施例3：瓜蒌薤白总生物碱的制备

取瓜蒌6kg、薤白2kg，加60％乙醇回流提取1次，每次3小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至60℃测定相对密度为1.25，放冷，加乙醇使含醇量达80％，放置过夜，滤过，滤液减压回收乙醇，适当浓缩，加盐酸调pH4，过阳离子交换树脂柱，先以水洗脱，水洗液备用；再以2％乙酸钠溶液洗脱至无生物碱反应，收集乙酸钠洗脱液，浓缩干燥，以无水乙醇回流提取3次，合并，减压回收乙醇，浓缩，干燥，即得总生物碱(总生物碱含量81％)。

实施例4：瓜蒌薤白总皂苷元的制备

取实施例1中的备用水洗液，适当浓缩，加氢氧化钠调pH8，过阴离子交换树脂柱，以水洗脱至无色，水洗液浓缩，过D101大孔树脂柱，先以水洗脱，再以50％乙醇洗脱至无色，减压回收乙醇，适当浓缩，用5％盐酸水解4小时，水解液以氢氧化钠调至中性，过D101大孔树脂柱，分别用水、50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得总皂苷元(总皂苷元含量以薯蓣皂苷元计为71％)。

实施例5：瓜蒌薤白总皂苷元的制备

取实施例2中的备用水洗液，适当浓缩，加氢氧化钠调pH9，过阴离子交换树脂柱，以水洗脱至无色，水洗液浓缩，过D101大孔树脂柱，先以水洗脱，再以30％乙醇洗脱至无色，减压回收乙醇，适当浓缩，用10％盐酸水解2小时，水解液以氢氧化钠调至中性，过D101大孔树脂柱，分别用水、40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得总皂苷元(总皂苷元含量以薯蓣皂苷元计为63％)。

实施例6：瓜萎薤白总皂苷元的制备

取实施例3中的备用水洗液，适当浓缩，加氢氧化钠调pH9，过阴离子交换树脂柱，以水洗脱至无色，水洗液浓缩，过AB-8大孔树脂柱，先以水洗脱，再以80％乙醇洗脱至无色，减压回收乙醇，适当浓缩，用2％硫酸水解6小时，水解液以氢氧化钠调至中性，过AB-8大孔树脂柱，分别用水、80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得总皂苷元(总皂苷元含量以薯蓣皂苷元计为56％)。

实施例7：瓜蒌薤白总皂苷元的制备

取实施例2中的备用水洗液，适当浓缩，调pH至中性，过D101大孔树脂柱，先以水洗脱，再以30％乙醇洗脱至无色，减压回收乙醇，适当浓缩，用6％硫酸水解2小时，水解液以氢氧化钠调至中性，过D101大孔树脂柱，分别用水、60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得总皂苷元(总皂苷元含量以薯蓣皂苷元计为80％)。

实施例8：瓜蒌薤白总生物碱的制备

取瓜蒌4kg，加40％乙醇回流提取2次，每次1小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至60℃测定相对密度为1.10，放冷，加乙醇使含醇量达70％，放置过夜，滤过，滤液减压回收乙醇，适当浓缩，加盐酸调pH2，过阳离子交换树脂柱，先以水洗脱，水洗液备用；再以10％氯化钠溶液洗脱至无生物碱反应，收集氯化钠洗脱液，浓缩干燥，以无水乙醇回流提取3次，合并，减压回收乙醇，浓缩，干燥，得瓜蒌总生物碱；

取薤白2kg，加60％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至60℃测定相对密度为1.15，放冷，加乙醇使含醇量达80％，放置过夜，滤过，滤液减压回收乙醇，适当浓缩，加盐酸调pH3，过阳离子交换树脂柱，先以水洗脱，水洗液备用；再以8％氯化钠溶液洗脱至无生物碱反应，收集氯化钠洗脱液，浓缩干燥，以无水乙醇回流提取4次，合并，减压回收乙醇，浓缩，干燥，得薤白总生物碱；

将上述瓜蒌总生物碱和薤白总生物碱混合，即得瓜蒌薤白总生物碱。(总生物碱含量77％)

实施例9：瓜蒌薤白总皂苷元的制备

取实施例8中制备“瓜蒌总生物碱”中的备用水洗液进行浓缩，浓缩液加氢氧化钠调pH9，过阴离子交换树脂柱，以水洗脱至无色，水洗液浓缩，过D101大孔树脂柱，先以水洗脱，再以60％乙醇洗脱至无色，减压回收乙醇，适当浓缩，用10％盐酸水解3小时，水解液调至中性，过D101大孔树脂柱，分别用水、50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，得瓜蒌总皂苷元；

取实施例8中制备“薤白总生物碱”中的备用水洗液进行浓缩，调至中性，过AB-8大孔树脂柱，先以水洗脱，再以60％乙醇洗脱至无色，减压回收乙醇，适当浓缩，用7％硫酸水解4小时，水解液调至中性，浓缩，干燥，以无水乙醇回流提取3次，合并，减压回收乙醇，浓缩，干燥，得薤白总皂苷元；

将上述瓜蒌总皂苷元和薤白总皂苷元混合，即得瓜蒌薤白总皂苷元。(总皂苷元含量74％)

实施例10：

处方：瓜蒌薤白总生物碱  24g         瓜蒌薤白总皂苷元  36g

制法：取上述两味，混合，粉碎，加入熔融的聚乙二醇4000中，搅匀，将药液置滴丸机贮料缸中，保温(90℃)，30滴/分钟速度，滴入5～10℃的甲基硅油中，制成2000丸，取出滴丸，吸除冷却剂，干燥，即得。

实施例11：

处方：瓜蒌薤白总生物碱 100g       瓜蒌薤白总皂苷元  50g

制法：取以上两味，混匀，加入羧甲淀粉钠100g，再加微晶纤维素至总量2000g，混匀，以水为黏合剂，制丸条，压制成丸，即得。

实施例12：

处方：瓜蒌薤白总生物碱  200g       瓜蒌薤白总皂苷元  800g

制法：取上述两味，混匀，加入到熔融的半合成脂肪酸甘油酯中，加总量至2500g，搅匀，灌模，制成10000枚栓剂，即得。

实施例13：

处方：瓜蒌薤白总生物碱  60g       瓜蒌薤白总皂苷元  180g

制法：取聚乙二醇4000200g与聚乙二醇600060g，混合，熔融，加入上述两味，混匀，滴入5～10℃的甲基硅油中，制成滴丸20000丸，即得。

实施例14：

处方：瓜蒌薤白总生物碱60g瓜蒌薤白总皂苷元120g

制法：取上述两味，混匀，加20％微晶纤维素和2％羧甲淀粉钠，加淀粉至900g，混匀，制粒，压片，包薄膜衣，制成3000片，即得。

实施例15：

处方：瓜蒌薤白总生物碱  40g       瓜蒌薤白总皂苷元  60g

制法：取上述两味，粉碎，过筛，分剂量包装，制成散剂。

实施例16：

处方：瓜蒌薤白总生物碱  120g      瓜蒌薤白总皂苷元  300g    半夏 2400g

制法：取半夏药材，以70％乙醇渗漉提取，收集6倍量渗滤液，减压回收乙醇，干燥，粉碎，加入瓜蒌薤白总生物碱和总皂苷元，混匀，加10％淀粉，混匀，制粒，装胶囊，制成3000粒，即得。

实施例17：

处方：瓜蒌薤白总生物碱  250g    瓜蒌薤白总皂苷元  250g

制法：取大豆油加热至60℃～70℃保温，取4％的蜂蜡切成小片，加入植物油中，搅拌使溶解，制得软胶囊基质，加入上述两味，边加边搅拌，补加基质至总量3000g，混匀，以胶体磨研磨5分钟，压制成软胶囊5000粒，洗油，干燥，即得。

实施例18：

处方：瓜蒌薤白总生物碱  220g      瓜蒌薤白总皂苷元  150g

制法：取上述两味，混匀，加10％淀粉，混匀，以80％乙醇制粒，干燥，整粒，即得。

实施例19：

处方：瓜蒌薤白总生物碱  30g      瓜蒌薤白总皂苷元  45g

制法：取卡波姆94020g，加至700ml水面上，自然润胀24小时，搅匀，加三乙醇胺调节pH6～6.5，搅匀，静置48小时，充分搅匀，搅拌下依次加入甘油、瓜蒌薤白总生物碱、瓜蒌薤白总皂苷元，搅匀，调整pH并加水补足至2000g，搅匀，脱气，分装，每支装5g，即得。

实施例20：

取实施例13所制滴丸剂治疗64例冠心病心绞痛患者。治疗方案：口服或舌下含服，一次10丸，一日3次，3周为一个疗程。3个疗程后观察治疗前后临床症状、体征、硝酸甘油减少量、心电图疗效、血脂水平等。结果：治愈33例，好转19例，显效7例，无效5例，总有效率为92.2％。

Claims (8)

1.一种用于治疗心血管疾病的药物组合物，其特征在于该药物组合物的有效成分是由瓜蒌薤白总皂苷元和瓜蒌薤白总生物碱组成，二者的重量配比为0.5～4∶1，其中，制备所述瓜蒌薤白总皂苷元和瓜蒌薤白总生物碱的方法如下：

按1～3∶1的重量比取瓜蒌、薤白药材，合并后加浓度为30％～60％的乙醇提取1～3次，每次0.5～2小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至60℃时相对密度为1.05～1.25，放冷，加乙醇使含醇量达50％～80％，静置分层，滤过，滤液减压回收乙醇，余液加盐酸调pH1～6，过阳离子交换树脂柱，先以水洗脱至pH6，水洗液备用；再以浓度为2％～20％钠盐溶液洗脱至无生物碱反应，收集钠盐洗脱液，浓缩干燥，干燥物以无水乙醇回流提取1～4次，合并无水乙醇液，减压回收乙醇，余液浓缩，干燥，即得瓜蒌薤白总生物碱；

取上述步骤中的备用水洗液，过大孔吸附树脂柱，先以水洗脱至pH6～7，再以浓度为30％～80％的乙醇洗脱至无色，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，余液用浓度2％～10％的盐酸或硫酸于100℃温度下水解1～6小时，水解液过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱至pH6～7，再以浓度为40％～80％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，余液浓缩，干燥，即得瓜蒌薤白总皂苷元。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于瓜蒌薤白总皂苷元与瓜蒌薤白总生物碱的重量配比为1.5∶1。

3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于以薯蓣皂苷元计，瓜蒌薤白总皂苷元中总皂苷元的含量不低于50％；以腺苷计，瓜蒌薤白总生物碱中总生物碱的含量不低于50％。

4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于：将制备总生物碱过程中得到的备用水洗液，先加氢氧化钠调pH8～9，过阴离子交换树脂柱，以水洗脱至无色，然后再将收集的水洗液用来制备瓜蒌薤白总皂苷元。

5.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于：

按1∶1的重量比取瓜蒌、薤白药材，合并后加浓度为40％的乙醇回流提取2次，每次1小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至60℃时相对密度1.10，放冷，加乙醇使含醇量达70％，静置分层，滤过，滤液减压回收乙醇，余液加盐酸调pH2，过阳离子交换树脂柱，先以水洗脱至pH6，水洗液备用；再以浓度为5％的氯化钠溶液洗脱至无生物碱反应，收集氯化钠洗脱液，浓缩干燥，干燥物以无水乙醇回流提取3次，合并无水乙醇液，减压回收乙醇，余液浓缩，干燥，即得瓜蒌薤白总生物碱；

取上述步骤中的备用水洗液，过D101大孔吸附树脂柱，先以水洗脱至pH6～7，再以浓度为50％的乙醇洗脱至无色，收集50％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，余液用浓度为5％的盐酸于100℃温度下水解4小时，水解液过D101大孔吸附树脂柱，先以水洗脱至pH6～7，再以浓度为60％的乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，余液浓缩，干燥，即得瓜蒌薤白总皂苷元。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于：将制备总生物碱过程中得到的备用水洗液，先加氢氧化钠调pH9，过阴离子交换树脂柱，以水洗脱至无色，然后再将收集的水洗液用来制备瓜蒌薤白总皂苷元。

7.根据权利要求4至6中任一项所述的药物组合物，其特征在于：也可以将瓜蒌、薤白药材分别各自按上述工艺提取精制，最后将得到的瓜蒌总生物碱和薤白总生物碱合并为瓜蒌薤白总生物碱；将得到的瓜蒌总皂苷元和薤白总皂苷元合并为瓜蒌薤白总皂苷元。

8.权利要求1、2或3所述药物组合物在制备用于治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、心律失常、心肌炎、动脉硬化、胸痛或高脂血症的药物中的应用。