CN1660163A - 从藏药独一味中提取总环烯醚萜苷的方法及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种从藏药独一味中提取总环烯醚萜苷的方法，该方法采用独一味为原料，以乙醇溶液回流提取，并利用对水溶性成分具有选择性吸附作用的大孔树脂进行分离和富集，得到环烯醚萜苷产物，其中总环烯醚萜苷类化合物的含量大于80％。本发明工艺简便、操作方便、安全、重复性好，可工业化生产。本发明同时还提供了所提取的总环烯醚萜苷作为止血活性成分的应用。
Description
技术领域
本发明涉及中草药有效成分的提取工艺，尤其涉及一种从藏药独一味中提取总环烯醚萜苷的工艺，同时本发明还涉及该提取物作为止血活性成分的应用。
背景技术
独一味为唇形科独一味属植物独一味[Lamiophlomis rotata(Benth.)Kudo]的全草或根，是我国藏、蒙、纳西等民族民间常用药之一。其味苦，微寒、有小毒、入口久则金如土，有麻痹感，具有止血、镇痛消肿、活血化瘀、补髓、行气、续筋接骨之功效。《晶珠本草》记载“固精髓，引流黄水”。《青藏高原药物图鉴》记载“补髓，止血，治浮肿后流黄水，关节积黄水，骨松质发炎”。
以藏药独一味为主要成分研制开发的药物已见报道(2000版《中国药典》收载独一味胶囊)，并实现工业化生产，临床广泛应用于各种外科手术后的镇痛止血及牙科、妇科、关节炎等方面；对药用独一味中各成分提取工艺的研究报道的较少。独一味药物具有止血功能，但由于其中的止血活性成分一直未能明确，因此止血疗效未能充分发挥。
对于天然产物的水溶性成分的提取分离，大孔树脂吸附法是一种非常有效的工业化生产方法，但利用大孔吸附树脂柱从独一味药物中提取总环烯醚萜苷的工业化生产方法，目前尚未见国内外有关文献和专利报道。
发明内容：
本发明的目的是为了提供一种从传统藏药独一味中提取总环烯醚萜苷的工艺。
本发明的另一目的是提供上述提取物总环烯醚萜苷作为止血活性成分中的应用。
本发明的目的是通过以下措施实现：
1、一种总环烯醚萜苷的提取方法，包括以下工艺步骤：①将干燥、粉碎的独一味植物用4-8倍量、浓度为0-95％的乙醇溶液在20-70℃下温浸提取，过滤、浓缩至浸膏状；②用10-15倍量、温度为30-90℃的热水溶解上述浸膏状物，冷却、过滤除去脂溶性成分得提取液；③将提取液缓慢流过经乙醇洗脱处理过的聚酰胺柱，再使母液缓慢流过经乙醇洗脱处理过的大孔树脂柱；④先以蒸馏水冲洗上述大孔树脂柱，再用浓度为10-95％的乙醇溶液冲洗大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液、减压浓缩、真空干燥得总环烯醚萜苷产物。
步骤①中所述的温浸提取可反复多次。
步骤③中，提取液流过聚酰胺柱后，用蒸馏水冲洗聚酰胺柱，并将洗脱液与所述母液混合后，再上所述大孔树脂柱。
所述提取物总环烯醚萜苷作为止血活性成分的在医药上的应用：以总环烯醚萜苷为活性成分，配以药用铺料，用公知的方法制备成药剂学上的任何一种剂型。
本发明提取的总环烯醚萜苷作为止血活性成分的药效可以从以下实验中体现：
1、实验目的：应用小鼠断尾止血法和毛细管凝血法，研究独一味醇提取物及总环烯醚萜苷的止血作用。
2、实验条件：三级动物实验室，室温20～25℃，空调恒温。
3、实验对象：动物BalB/C小鼠50只，体重20±2g，由兰州军区兰州总医院动物实验科提供，合格证号：甘肃省医动字第1402-0201号。
4、药材与仪器：独一味醇提取物和独一味总环烯醚萜苷由实验室自制，临用前制成0.1g/ml，0.1g/ml和0.025g/ml的水溶液。云南白药，云南白药集团股份有限公司，批号20040320，临用前制成0.1g/ml。一次性定量取血管(20ul，长度为12cm)，天津蓟县四平玻璃仪器厂。
5、实验方法与结果
①对出血时间的影响：取小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组：空白对照组、云南白药组(2g/kg)、独一味醇提取物组(2g/kg)、独一味总环烯醚萜苷高剂量组(2g/kg)、独一味总环烯醚萜苷低剂量组(0.5g/kg)，每组10只。空白对照组灌胃给予生理盐水，其余各组灌胃给予受试药物(给药体积0.4ml/20g)，每天灌胃一次，灌胃前禁食10小时，连续给药3天。于第3天用药后1小时，小鼠夹固定，以利剪将小鼠尾尖1/3处横断，待血液自行溢出开始计时，每隔30s用滤纸片吸去血滴一次，直至出血自然停止(滤纸吸时无血)为止，计算出血时间和缩短率(与生理盐水组比较)。结果见表1。
表1独一味提取物对小鼠出血时间的影响
组别 剂量 动物数(只) 出血时间(min) 缩短率(％)
生理盐水组 10 24.31±3.33 -----
云南白药组 2g/kg 10 12.00±4.5** 50.64
独一味醇提取物组 2g/kg 10 15.20±4.08** 37.47
总环烯醚萜苷高剂量组 2g/kg 10 12.00±2.88** 50.64
总环烯醚萜苷低剂量组 0.5g/kg 10 13.35±5.13** 45.08
注：*p＜0.05，**p＜0.01，与对照组比较；
结果：由表1结果可知独一味醇提取物，独一味总环烯醚萜苷高剂量组(2g/kg)、独一味总环烯醚萜苷低剂量组(0.5g/kg)均能显著缩短小鼠断尾出血时间，缩短率分别为37.47％、50.64％和45.08％。独一味总环烯醚萜苷高剂量组、独一味总环烯醚萜苷低剂量组的止血作用与云南白药相近，比独一味醇提物的止血作用好。
②对小鼠凝血时间的影响
取小鼠40只，分组及给药同2.1，于末次灌胃给药后1hr，用一次性定量取血管插入小鼠眦球后静脉丛取血，至玻璃毛细管内充满，放平，每隔30s交替从两端折断玻璃毛细管一小段，检查有无血凝丝出现。一旦出现血凝丝，从另一端折断进行验证，平均两端出现血凝丝的时间，即为凝血时间。与生理盐水组比较，计算缩短率。结果见表2。
表2独一味提取物对小鼠凝血时间的影响
组别 剂量 动物数(只) 出血时间(min) 缩短率(％)
生理盐水组 10 246.60±71.87 -----
云南白药组 2g/kg 10 176.50±34.76** 28.43
独一味醇提取物组 2g/kg 10 189.70±27.70** 23.07
总环烯醚萜苷高剂量组 2g/kg 10 177.25±39.19** 28.12
总环烯醚萜苷低剂量组 0.5g/kg 10 209.90±52.55 14.88
注：*p＜0.05，**p＜0.01，与对照组比较
结果：表2结果表明独一味醇提取物(2g/kg)，独一味总环烯醚萜苷高剂量组(2g/kg)、独一味总环烯醚萜苷低剂量组(0.5g/kg)均能显著缩短小鼠凝血时间，缩短率分别为23.07％、28.12％和14.88％。独一味醇提取物(2g/kg)和独一味总环烯醚萜苷高剂量组(2g/kg)的促凝血作用与云南白药相近。
结论
6、结论
上述两个药效学实验结果表明，独一味总环烯醚萜苷能显著缩短小鼠断尾止血时间和凝血时间，其药效与云南白药相近。
经初步药效学研究表明：本发明的独一味总环烯醚萜苷具有明显的缩短出血时间，促进凝血的作用。为进一步的新药研究提供了合理的工艺方法。
附图说明
图1为本发明工艺流程图
具体实施方式
实施例一：取独一味地上部分5kg为原料，将其粉碎，过20目筛，加以25000ml的体积百分浓度为70％的乙醇在50℃下温浸，搅拌浸提3小时，滤过，药渣中再加入25000ml的体积百分浓度为70％的乙醇(反复提取3次)，将滤液合并，滤液减压浓缩至浸膏状，再用60℃10000ml热水溶解，冷却后过滤除去沉淀。母液上4.5kg经乙醇洗脱处理好(以95％乙醇洗脱，直至乙醇洗脱液加蒸馏水不出现浑浊为止，再以蒸馏水洗脱柱子至无醇味，即可。)的聚酰胺(14-30目)柱，上样速度为10ml/分钟，以30000ml的蒸馏水冲洗聚酰胺柱(流速为10000ml/小时)，从聚酰胺柱中流出的母液和水洗脱液上经乙醇洗脱处理好(以95％乙醇洗脱，直至乙醇洗脱液加蒸馏水不出现浑浊为止，再以蒸馏水洗脱柱子至无醇味，即可。)的4.5kg D101大孔树脂柱，上样速度为10ml/分钟，以30000ml的蒸馏水冲洗大孔树脂柱(流速为10000ml/小时)，再用20000ml 70％乙醇冲洗大孔树脂柱(流速为10000ml/小时)，回收乙醇洗脱液，浓缩，真空干燥制得环烯醚萜苷含量≥80％的独一味总环烯醚萜苷，粉碎，即得。
实施例二、取独一味地上部分5kg为原料，将其粉碎，过20目筛，加以25000ml的体积百分浓度为30％的乙醇在70℃下温浸，搅拌浸提2小时，滤过，药渣中再加入25000ml的体积百分浓度为30％的乙醇(反复提取3次)，将滤液合并，滤液减压浓缩至浸膏状，再用10000ml 30℃热水溶解，冷却后过滤除去沉淀。母液上4.5kg经乙醇洗脱处理好(以95％乙醇洗脱，直至乙醇洗脱液加蒸馏水不出现浑浊为止，再以蒸馏水洗脱柱子至无醇味，即可。)的聚酰胺(14-30目)柱，上样速度为10ml/分钟，以30000ml的蒸馏水冲洗聚酰胺柱(流速为10000ml/小时)，从聚酰胺柱中流出的母液和水洗脱液上经乙醇洗脱处理好(以95％乙醇洗脱，直至乙醇洗脱液加蒸馏水不出现浑浊为止，再以蒸馏水洗脱柱子至无醇味，即可。)的4.5kg D101大孔树脂柱，上样速度为10ml/分钟，以30000ml的蒸馏水冲洗大孔树脂柱(流速为10000ml/小时)，再用20000ml 30％乙醇冲洗大孔树脂柱(流速为10000ml/小时)，回收乙醇洗脱液，浓缩，真空干燥制得环烯醚萜苷含量≥80％的独一味总环烯醚萜苷，粉碎，即得。
实施例三：取独一味地上部分5kg为原料，将其粉碎，过20目筛，加以25000ml的体积百分浓度为50％的乙醇在20℃下温浸，搅拌浸提3小时，滤过，药渣中再加入25000ml的体积百分浓度为70％的乙醇(反复提取3次)，将滤液合并，滤液减压浓缩至浸膏状，再用10000ml 90℃热水溶解，冷却后过滤除去沉淀。母液上4.5kg经乙醇洗脱处理好(以95％乙醇洗脱，直至乙醇洗脱液加蒸馏水不出现浑浊为止，再以蒸馏水洗脱柱子至无醇味，即可。)的聚酰胺(14-30目)柱，上样速度为10ml/分钟，以30000ml的蒸馏水冲洗聚酰胺柱(流速为10000ml/小时)，从聚酰胺柱中流出的母液和水洗脱液上经乙醇洗脱处理好(以95％乙醇洗脱，直至乙醇洗脱液加蒸馏水不出现浑浊为止，再以蒸馏水洗脱柱子至无醇味，即可。)的4.5kg D101大孔树脂柱，上样速度为10ml/分钟，以30000ml的蒸馏水冲洗大孔树脂柱(流速为10000ml/小时)，再用20000ml 50％乙醇冲洗大孔树脂柱(流速为10000ml/小时)，回收乙醇洗脱液，浓缩，真空干燥制得环烯醚萜苷含量≥80％的独一味总环烯醚萜苷，粉碎，即得。
实施例四：取独一味地上部分5kg为原料，将其粉碎，过20目筛，加以25000ml的体积百分浓度为95％的乙醇在60℃下温浸，搅拌浸提2小时，滤过，药渣中再加入25000ml的体积、百分浓度为95％的乙醇(反复提取3次)，将滤液合并，滤液减压浓缩至浸膏状，再用10000ml 70℃热水溶解，冷却后过滤除去沉淀。母液上4.5kg经乙醇洗脱处理好(以95％乙醇洗脱，直至乙醇洗脱液加蒸馏水不出现浑浊为止，再以蒸馏水洗脱柱子至无醇味，即可。)的聚酰胺(14-30目)柱，上样速度为10ml/分钟，以30000ml的蒸馏水冲洗聚酰胺柱(流速为10000ml/小时)，从聚酰胺柱中流出的母液和水洗脱液上经乙醇洗脱处理好(以95％乙醇洗脱，直至乙醇洗脱液加蒸馏水不出现浑浊为止，再以蒸馏水洗脱柱子至无醇味，即可。)的4.5kg D101大孔树脂柱，上样速度为10ml/分钟，以30000ml的蒸馏水冲洗大孔树脂柱(流速为10000ml/小时)，再用20000ml 95％乙醇冲洗大孔树脂柱(流速为10000ml/小时)，回收乙醇洗脱液，浓缩，真空干燥制得环烯醚萜苷含量≥80％的独一味总环烯醚萜苷，粉碎，即得。
实施例五：取独一味地上部分5kg为原料，将其粉碎，过20目筛，加以25000ml的水在60℃下温浸，搅拌浸提2小时，滤过，(反复提取3次)，将滤液合并，滤液减压浓缩至浸膏状，再用10000ml 70℃热水溶解，冷却后过滤除去沉淀。母液上4.5kg经乙醇洗脱处理好(以95％乙醇洗脱，直至乙醇洗脱液加蒸馏水不出现浑浊为止，再以蒸馏水洗脱柱子至无醇味，即可。)的聚酰胺(14-30目)柱，上样速度为10ml/分钟，以30000ml的蒸馏水冲洗聚酰胺柱(流速为10000ml/小时)，从聚酰胺柱中流出的母液和水洗脱液上经乙醇洗脱处理好(以95％乙醇洗脱，直至乙醇洗脱液加蒸馏水不出现浑浊为止，再以蒸馏水洗脱柱子至无醇味，即可。)的4.5kg D101大孔树脂柱，上样速度为10ml/分钟，以30000ml的蒸馏水冲洗大孔树脂柱(流速为10000ml/小时)，再用20000ml浓度为10％的乙醇冲洗大孔树脂柱(流速为10000ml/小时)，回收乙醇洗脱液，浓缩，真空干燥制得环烯醚萜苷含量≥80％的独一味总环烯醚萜苷，粉碎，即得。
Claims (5)
1、一种总环烯醚萜苷的提取方法，包括以下工艺步骤：①将干燥、粉碎的独一味植物用4-8倍量、浓度为0-95％的乙醇溶液在20-70℃下温浸提取，过滤、浓缩至浸膏状；②用10-15倍量、温度为30-90℃的热水溶解上述浸膏状物，冷却、过滤除去脂溶性成分得提取液；③将提取液缓慢流过经乙醇洗脱处理过的聚酰胺柱，再使母液缓慢流过经乙醇洗脱处理过的大孔树脂柱；④先以蒸馏水冲洗上述大孔树脂柱，再用浓度为10-95％的乙醇溶液冲洗大孔树脂柱，收集乙醇洗脱液、减压浓缩、真空干燥得总环烯醚萜苷产物。
2、如权利要求1所述的总环烯醚萜苷的提取方法，其特征在于：步骤①中所述的温浸提取可反复多次。
3、如权利要求1或2所述的总环烯醚萜苷的提取方法，其特征在于：步骤③中，提取液流过聚酰胺柱后，用蒸馏水冲洗聚酰胺柱，并将洗脱液与所述母液混合后，再上所述大孔树脂柱。
4、如权利要求1所述的方法提取的总环烯醚萜苷作为止血活性成分在医药上的应用。
5、如权利要求4所述的总环烯醚萜苷的用途，其特征在于：以总环烯醚萜苷为活性成分，配以药用铺料制备成药剂学上的任何一种剂型。
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