CN103524578B

CN103524578B - 一种从牡丹雄蕊中提取分离芍药苷类化合物的方法

Info

Publication number: CN103524578B
Application number: CN201310471806.4A
Authority: CN
Inventors: 郑国生; 史美丽; 周远明; 马传利; 于曙光
Original assignee: Qingdao Agricultural University
Current assignee: Qingdao Agricultural University
Priority date: 2013-10-11
Filing date: 2013-10-11
Publication date: 2016-06-08
Anticipated expiration: 2033-10-11
Also published as: CN103524578A

Abstract

本发明公开了一种从牡丹雄蕊中提取分离芍药苷类化合物的方法，牡丹雄蕊干燥、粉碎，用甲醇作溶剂超声提取三次，过滤后提取液减压浓缩至干得浸膏；雄蕊残渣再用氯仿/甲醇作溶剂超声提取三次，过滤后提取液减压浓缩至干，溶剂分别回收。两次浸膏合并后经硅胶柱层析、Sephadex？LH-20凝胶柱层析及制备型HPLC等方法分离得到系列芍药苷类化合物。该方法操作简便可控，获得的系列芍药苷类化合物杂质少，纯度高，可广泛应用于药品、保健品等行业，具有较高的经济价值。

Description

一种从牡丹雄蕊中提取分离芍药苷类化合物的方法

技术领域

本发明涉及植物中生物活性物质的提取分离方法，具体是指从牡丹雄蕊中提取分离芍药苷类化合物的方法。

背景技术

牡丹（学名：PaeoniasuffruticosaAndr）：毛莨科，芍药属，为多年生落叶灌木，花色有红、粉、黄、白、绿、紫等；花蕊以雄蕊居多。牡丹原产于中国西部秦岭和大巴山一带，除了作为观赏植物外，还可用于生产丹皮入药，具有改善心血管疾病、镇静、消炎和提高机体免疫力等药效。

有文献报道从芍药属植物的根等部位可分离得到系列芍药苷类化合物，此类化合物具有抗凝血、神经肌肉阻滞、提高认知功能、止痛、抗炎、抗高血压、降血脂及抗血栓等多种生物活性。民间因牡丹雄蕊茶具有降低血脂、预防和辅助治疗心脑血管疾病等功效而备受人们关注，同时因其对胃肠功能紊乱、便秘有积极的辅助治疗作用，对前列腺炎、前列腺肥大有辅助治疗和恢复作用，被誉为“植物黄金”。但目前国内外对牡丹雄蕊中次级代谢产物的提取分离及药理作用研究未见文献及专利报道。因此，从牡丹雄蕊中提取分离芍药苷类化合物等生物活性物质，可以提升牡丹的应用价值和经济价值，对牡丹的综合利用具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从牡丹雄蕊中提取分离芍药苷类化合物的方法。该方法采用硅胶柱层析、凝胶柱层析及高效液相制备技术，提取分离出系列芍药苷类化合物。该方法操作简便可控，获得的系列芍药苷类化合物杂质少，纯度高，可广泛应用于药品、保健品等行业，具有较高的经济价值。

本发明所述的从牡丹雄蕊中提取分离芍药苷类化合物的方法，包括以下步骤：

1)牡丹雄蕊干燥、粉碎，先用甲醇超声浸提三次，过滤收集滤液，减压蒸馏浓缩至干得浸膏；溶剂回收，循环使用。雄蕊滤渣再用二氯甲烷/甲醇（体积比1︰1）超声浸提三次，过滤收集滤液，减压蒸馏浓缩至干得浸膏；溶剂回收，循环使用。两次所得浸膏合并得总浸膏。

2)对总浸膏经硅胶柱层析，分离得到多个组分。

3)对其中部分组分分别进行硅胶柱层析，再进行sephadexLH-20凝胶柱层析，然后用制备型HPLC进行分离，可以得到系列芍药苷类化合物(结构见附图)。溶剂回收，循环使用。

以上步骤1)中使用甲醇浸提时，料液比为1︰1～3(W/V)，超声处理时间为30～60分钟；使用二氯甲烷/甲醇（体积比1︰1）浸提时，料液比为1︰1～3(W/V)，超声处理时间为30～60分钟。

以上步骤2)中，使用的硅胶为100～300目，洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯(0～100％，V/V)或二氯甲烷/甲醇（30～100％，V/V)，梯度洗脱。溶剂回收，循环使用。

以上步骤3)中，硅胶柱层析时使用的硅胶为100～300目，洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯(0～100％，V/V)或二氯甲烷/甲醇（30～100％，V/V)，等度或梯度洗脱。凝胶柱层析时用石油醚/二氯甲烷/甲醇(1︰1︰1，V/V/V)或者二氯甲烷/甲醇(1︰1，V/V)作洗脱剂洗脱。用制备型HPLC进行分离时，使用C-18柱，甲醇/水(0～100％，V/V)作洗脱剂，等度或梯度洗脱。以上溶剂均分别回收，循环使用。

本发明提供了一种从牡丹雄蕊中提取分离芍药苷类化合物的方法。该方法利用超声辅助溶剂提取，硅胶柱层析、凝胶柱层析和制备型HPLC等层析技术从牡丹雄蕊中提取分离芍药苷类化合物。该方法操作简便可控，获得的系列芍药苷类化合物杂质少，纯度高，可广泛应用于药品、保健品等行业，具有较高的经济价值。

附图说明

牡丹雄蕊中芍药苷类化合物类化合物结构图

具体实施方式

实施例1

2)总浸膏经硅胶柱层析，使用的硅胶为100～200目，洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯(0～100％，V/V)或二氯甲烷/甲醇（30～100％，V/V)，梯度洗脱，分离得到多个组分(Fr.1～Fr.11)。溶剂回收循环使用。

3)对组分Fr.7进行硅胶柱层析，使用的硅胶为200～300目，洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯(20～100％，V/V)，梯度洗脱，分离得到系列组分(Fr.7-1～Fr.7-9)。对组分Fr.7-7再进行sephadexLH-20凝胶柱层析，二氯甲烷/甲醇(1︰1，V/V)作洗脱剂洗脱，分离得到系列组分(Fr.7-7-1～Fr.7-7-3)。然后用制备型HPLC对组分Fr.7-7-3进行分离，使用C-18柱，甲醇/水(65％，V/V)作洗脱剂，等度洗脱可以得到化合物1，即芍药苷（结构见附图）。所得化合物纯度达99%以上。溶剂分别回收循环使用。

化合物1，即芍药苷结构的确定，通过分析其NMR数据并与文献数据比对确定其结构，其NMR数据见附表。

实施例2

3)对组分Fr.8进行硅胶柱层析，使用的硅胶为200～300目，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇（30～100％，V/V)，梯度洗脱，分离得到系列组分(Fr.8-1～Fr.8-7)。对Fr.8-5再进行sephadexLH-20凝胶柱层析，二氯甲烷/甲醇(1︰1，V/V)作洗脱剂洗脱，分离得到系列组分(Fr.8-5-1～Fr.8-5-4)。然后用制备型HPLC对组分Fr.8-5-2进行分离，使用C-18柱，甲醇/水(60％，V/V)作洗脱剂，等度洗脱可以得到两种芍药苷类化合物类化合物2和化合物3（结构见附图）。所得化合物纯度达99%以上。溶剂分别回收循环使用。

化合物2和化合物3结构的确定，通过分析其NMR数据并与文献数据比对确定其结构，其NMR数据见附表。

芍药苷类化合物1、化合物2和化合物3的NMR数据：

表1：化合物1,2,3的¹H-NMR谱（600MHz,CD₃OD）

表2：化合物1,2,3的¹³C-NMR谱（150MHz,CD₃OD）

Claims

1.一种从牡丹雄蕊中提取分离芍药苷类化合物的方法，包括以下步骤：1)干燥的牡丹雄蕊样品粉碎后，先用甲醇超声浸提三次，过滤收集滤液，减压蒸馏浓缩至干得浸膏；雄蕊滤渣再用体积比为1:1的二氯甲烷/甲醇超声浸提三次，过滤收集滤液，减压蒸馏浓缩至干得浸膏；两次所得浸膏合并得总浸膏；2)总浸膏经硅胶柱层析，分离得到多个组分；3)再对其中部分组分分别进行硅胶柱层析，SephadexLH-20凝胶柱层析，然后用制备型HPLC进行分离，得到芍药苷类化合物，溶剂均分别回收，循环使用；

所述芍药苷类化合物具有式I和/或式Ⅱ所示结构，所述式I中，R为H或CH₃；

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)使用甲醇浸提时，料液的质量体积比为1︰1～3，超声处理时间为30～60分钟；使用体积比1︰1的二氯甲烷/甲醇浸提时，料液质量体积比为1︰1～3，超声处理时间为30～60分钟。

3.根据权利要求1所述的方法，特征在于：步骤2)硅胶柱层析时使用的硅胶为100～300目，按照石油醚/乙酸乙酯体积比从100％～0％或者按照二氯甲烷/甲醇的体积比从100％～30％的比例梯度洗脱。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3)硅胶柱层析时使用的硅胶为100～300目，按照石油醚/乙酸乙酯体积比为100％～0％或二氯甲烷/甲醇体积比为100％～0％等度或梯度洗脱；凝胶柱层析时用体积比为1︰1︰1的石油醚/二氯甲烷/甲醇或者体积比为1︰1的二氯甲烷/甲醇作洗脱剂洗脱；用制备型HPLC进行分离时，使用C-18柱，用甲醇/水体积比为0～100％，等度或梯度洗脱。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述牡丹品种为凤丹。