CN103570779A - 模拟移动床分离制备甘草苷的方法 - Google Patents

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张大兵
张宁
罗军侠
王亚辉
李胜迎
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Abstract

本发明模拟移动床分离甘草苷的技术，采用加热回流、大孔树脂精制以及模拟移动床分离的方法，从甘草粉末中提取分离精制甘草总黄酮并进一步分离提纯甘草皂苷。提取溶剂无毒性，简便易行，同时应用模拟移动床色谱(简称SMBC)系统对其进行分离纯化，由于模拟移动床过程是连续过程，可以提高生产的自动化水平和生产效率，并使生产环境得到极大的改善，真正实现了清洁生产。

Description

模拟移动床分离制备甘草苷的方法
技术领域
本发明涉及的是模拟移动床分离制备甘草苷的方法，具体是采用加热回流提取、大孔树脂精制并用模拟移动床对甘草总黄酮中的甘草苷进行分离纯化的方法。
背景技术
甘草黄酮是中药甘草中含有的一大类化合物，化学结构多样。甘草苷，分子式C21H22O9，相对分子质量418.39，熔点212-213℃，是甘草黄酮类化合物中重要的单体活性成分，具有抗氧化、抗HIV等多种药理作用。由于甘草苷在甘草原料中含量偏低，传统的提取分离技术工艺程序繁琐、操作复杂，且纯度也不高，本方法采用醇提后直接过大孔树脂精制，并用模拟移动床色谱进行分离甘草苷，得到了高纯的的结晶产品。
发明内容
本发明的目的是提供一种从甘草中提取甘草总黄酮的生产工艺并用模拟移动床分离甘草苷的方法，属于天然产物的提取分离纯化领域，包括醇提取、大孔树脂精制、模拟移动床分离、重结晶以及成品的纯度检测。
本发明为实现上述发明目的采用如下步骤：
a、提取：将粉末过60目筛后置于提取器中，95%乙醇为溶剂，70℃水浴回流2个小时，提取2-3次，合并提取液，减压浓缩成稠膏状；
    b、大孔树脂精制：a步骤的浓缩物加入蒸馏水溶解，过滤，弃去沉淀，过滤液上AB-8树脂柱，然后分别用蒸馏水、40%乙醇、80%乙醇和95%乙醇洗脱树脂柱，收集40%乙醇和80%乙醇洗脱部位，减压回收乙醇，浓缩物真空干燥得甘草总黄酮提取物；
    c、模拟移动床分离：将b步骤得到的甘草总黄酮提取物用甲醇：水=20:80混合溶液溶解作为模拟移动床色谱的进样原料进行连续分离提纯，即制得纯度为90%以上的甘草苷液体，减压浓缩，浓缩物60℃恒温干燥，即得甘草苷粉末；
    d、重结晶：将c步骤中得到的甘草苷粉末用乙醇水重结晶，得白色晶体；
   e、成品的纯度检测：泵：NewstyleNP7000型泵；色谱柱(ODS填料4.6*250mm，5μm)；检测器：汉邦紫外检测器NewstyleNU3000，检测波长：254nm，检测温度：室温； 流动相：甲醇:水(1%的冰醋酸)=25:75，流速：1mL/min；峰面积归一化法测得甘草苷的纯度为95%以上。
 
具体实施方式
实施方案一
1、提取：将粉末过60目筛后称取10g置于提取器中，用60mL95%乙醇提取，70℃水浴回流2个小时，提取2次，合并提取液，减压浓缩至15mL；
2、大孔树脂精制：浓缩液加入75mL蒸馏水溶解，过滤，弃去沉淀，过滤液上AB-8树脂柱，然后分别用蒸馏水、40%乙醇、80%乙醇和95%乙醇洗脱树脂柱，洗脱剂用量分别为400mL，收集40%乙醇和80%乙醇洗脱部位，减压回收乙醇，浓缩物真空干燥得甘草总黄酮提取物；
3、模拟移动床分离：将甘草总黄酮提取物用甲醇：水=20:80混合溶液溶解，浓度为0.2g/mL，作为模拟移动床色谱的进样原料；对模拟移动床的操作参数进行选择，确定参数如下：进样流速0.1mL/min，洗脱流速1.5mL/min，提取液流速1mL/min，切换时间21min，温度控制在30-35℃；从提取液出口得到纯度为92%的甘草苷液体，减压浓缩，浓缩物60℃恒温干燥，即得甘草苷粉末；
4、重结晶：将得到的甘草苷粉末用乙醇水重结晶，得白色晶体，经HPLC检测纯度为98%。
 
实施方案二
1、提取：将粉末过60目筛后称取50g置于提取器中，用300mL95%乙醇提取，70℃水浴回流2个小时，提取2次，合并提取液，减压浓缩至60mL；
2、大孔树脂精制：浓缩液加入300mL蒸馏水溶解，过滤，弃去沉淀，过滤液上AB-8树脂柱，然后分别用蒸馏水、40%乙醇、80%乙醇和95%乙醇洗脱树脂柱，洗脱剂用量分别为2000mL，收集40%乙醇和80%乙醇洗脱部位，减压回收乙醇，浓缩物真空干燥得甘草总黄酮提取物；
3、模拟移动床分离：将甘草总黄酮提取物用甲醇：水=20:80混合溶液溶解，浓度为0.2g/mL，作为模拟移动床色谱的进样原料；对模拟移动床的操作参数进行选择，确定参数如下：进样流速0.2mL/min，洗脱流速2.0mL/min，提取液流速1.2mL/min，切换时间20min，温度控制在30-35℃；从提取液出口得到纯度为91.2%的甘草苷液体，减压浓缩，浓缩物60℃恒温干燥，即得甘草苷粉末；
4、重结晶：将得到的甘草苷粉末用乙醇水重结晶，得白色晶体，经HPLC检测纯度为97.5%。
 
实施方案三
1、提取：将粉末过60目筛后称取50g置于提取器中，用300mL95%乙醇提取，70℃水浴回流2个小时，提取3次，合并提取液，减压浓缩至60mL；
2、大孔树脂精制：浓缩液加入300mL蒸馏水溶解，过滤，弃去沉淀，过滤液上AB-8树脂柱，然后分别用蒸馏水、40%乙醇、80%乙醇和95%乙醇洗脱树脂柱，洗脱剂用量分别为2000mL，收集40%乙醇和80%乙醇洗脱部位，减压回收乙醇，浓缩物真空干燥得甘草总黄酮提取物；
3、模拟移动床分离：将甘草总黄酮提取物用甲醇：水=20:80混合溶液溶解，浓度为0.4g/mL，作为模拟移动床色谱的进样原料；对模拟移动床的操作参数进行选择，确定参数如下：进样流速0.5mL/min，洗脱流速2.5mL/min，提取液流速1.8mL/min，切换时间18min，温度控制在30-35℃；从提取液出口得到纯度为90.6%的甘草苷液体，减压浓缩，浓缩物60℃恒温干燥，即得甘草苷粉末；
4、重结晶：将得到的甘草苷粉末用乙醇水重结晶，得白色晶体，经HPLC检测纯度为98.2%。
 
上述实施实例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权力要求的保护范围内，对本发明做出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。

Claims (4)

1. 模拟移动床色谱分离甘草苷的方法，是以甘草的根茎粉末为原料通过下列步骤实现的：
    a、提取：将粉末过60目筛后置于提取器中，95%乙醇为溶剂，70℃水浴回流2个小时，提取2-3次，合并提取液，减压浓缩成稠膏状；
    b、大孔树脂精制：a步骤的浓缩物加入蒸馏水溶解，过滤，弃去沉淀，过滤液上大孔树脂柱，然后分别用蒸馏水、40%乙醇、80%乙醇和95%乙醇洗脱树脂柱，收集40%乙醇和80%乙醇洗脱部位，减压回收乙醇，浓缩物真空干燥得甘草总黄酮提取物；
    c、模拟移动床分离：将b步骤得到的甘草总黄酮提取物用甲醇：水=20:80混合溶液溶解作为模拟移动床色谱的进样原料进行连续分离提纯，即制得纯度为90%以上的甘草苷液体，减压浓缩，浓缩物60℃恒温干燥，即得甘草苷粉末；
    d、重结晶：将c步骤中得到的甘草苷粉末用乙醇水重结晶，得白色晶体；
 e、成品的HPLC检测：泵：NewstyleNP7000型泵；色谱柱(ODS填料4.6*250mm，5μm)；检测器：汉邦紫外检测器NewstyleNU3000，检测波长：254nm，检测温度：室温；流动相：甲醇:水(1%的冰醋酸)=25:75，流速：1mL/min；峰面积归一化法测得甘草苷的纯度为95%以上。
2.权利要求1所述的模拟移动床分离甘草苷的方法，其特征在于a步骤中每次回流所用95%乙醇的用量为甘草粉末的6倍量。
3.权利要求1所述的模拟移动床分离甘草苷的方法，其特征在于b步骤中所用的大孔吸附树脂为AB-8树脂，洗脱剂的用量为4倍的树脂柱体积。
4.权利要求1所述的模拟移动床分离甘草苷的方法，其特征在于c步骤中模拟移动床的分离条件为：固定相为十八烷基硅胶键合硅胶，填料粒度10-20μm；流动相为甲醇与水的混合溶液；进入模拟移动床系统的浓度为0～10g/mL；进样流速为0～10mL/min，洗脱液流速为0～50mL/min，提取液流速为0～50mL/min，提余液流速为0～50mL/min；切换时间为15-25min；温度控制在30-50℃。
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