CN105273015A - 一种高纯度芍药苷和白芍苷的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种高纯度芍药苷和白芍苷的制备方法，包括：(1)将粉碎后的含有芍药苷和白芍苷的牡丹科植物原料，加入乙醇溶液，超声提取，浓缩提取液得到浸膏；将浸膏用水溶解，萃取，减压浓缩得到萃取物；(2)采用柱色谱，以大孔树脂为填料，醇水溶液洗脱上述萃取物，收集含有芍药苷和白芍苷的流份，浓缩，干燥，得到粗提物；(3)对上述粗提物采用高速逆流色谱法分离，高速逆流色谱的溶剂系统由三氯化碳、丁醇、甲醇和水组成；紫外检测器在线监测，收集流份减压浓缩，结晶，干燥，得到芍药苷和白芍苷。采用本发明制备芍药苷和白芍苷，产品纯度高，品质好，适用于各种型号高速逆流色谱仪，易于产业化放大。
Description
技术领域
本发明属于天然药物提取分离领域，特别涉及一种高纯度芍药苷和白芍苷的制备方法。
背景技术
芍药苷(paeoniflorin)和白芍苷(又称芍药内酯苷，albiflorin)是一种单萜苷类成份，在牡丹科植物中普遍存在，是传统中药白芍、赤芍、牡丹皮中的主要有效成份和质量控制标准，具有多种药理作用和用途，白勺总苷在中国是一种治疗类风湿性关节炎的药物，芍药苷和白芍苷可作为有效成份应用于相关的药品和功能食品领域。
芍药苷和白芍苷的制备工艺相关研究文献主要集中如下：游松等(中国专利申请号02133298.3)公开了一种“芍药苷和芍药内酯苷的组合物及其制备方法”，所述组合物从芍药中提取分离得到，其中芍药苷与芍药内酯苷在该组合物中的比例为7：3～9：1，其制备工艺主要通过吸附树脂精制、氧化铝柱层析和硅胶柱层析制得。张现涛等(中国专利申请号200510041212.5)公开了一种“芍药苷提取物的制备方法”，所述工艺主要采用乙醇提取赤芍药材，上大孔树脂后，乙醇洗脱，洗脱液浓缩后上聚酰胺树脂，得含量90％以上芍药苷。朱静建等(中国专利申请号02110973.7)公开了一种“芍药中甙类化合物单体、提取和分离的方法”，所述成份包括芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷和羟基芍药苷，其方法主要采用白芍或赤芍在醇水溶液中溶胀，加热回流，浓缩至浸膏，用丙酮溶液超声提取，浓缩，硅胶拌样，上真空色谱柱粗分，再经硅胶柱反复进行分配色谱获得。石任兵等(中国专利申请号200710111231.×)公开了一种“芍药总苷提取物及其制备方法”，所述提取物主要包括芍药苷、白芍药苷、芍药新苷、芍药内酯A、B、C、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷及其衍生物等，可从芍药科各植物部位中制备。徐娟等(中国专利申请号2015103908662)公开了一种“芍药苷单体的提取方法”所述提取方法为以酸性水溶液为溶剂、结合超声-微波相结合的组合萃取技术对芍药苷单体进行提取，与传统的柱层析或大孔树脂吸附法相比具有如下明显优点：a)具有快速、彻底、效率高的优点，在生产过程中可缩短生产周期和提高芍药苷的提取率。刘江云等(中国专利申请号201110410067.9)公开了一种“芍药苷和白芍苷的制备方法”采用乙醇提取药材，上大孔树脂柱，乙醇洗脱，所得精致物上硅胶柱，得到纯度大于90％的芍药苷和白芍苷成品。
目前，采用大孔树脂技术纯化芍药总苷的工艺较为成熟，但芍药苷和白芍苷不好分开，采用硅胶柱层析柱效低，装柱差异性大，不宜重复和放大，且白芍苷含量低，用常规柱层析，回收率低，提高了生产成本。高速逆流色谱(High-speedcountercurrentchromatography,HSCCC)作为一种新型分离纯化技术，操作方便，快捷，分离度较高，克服了由固相载体带来的样品结合、失活、污染等缺点。已被广泛应用于天然产物活性成分的分离制备和总草药的分析鉴定。
芍药苷和白芍苷结构式如下：
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种高纯度芍药苷和白芍苷的制备方法，该方法制备芍药苷和白芍苷，产品纯度高，品质好，适用于各种型号高速逆流色谱仪，易于产业化放大。
本发明的一种高纯度芍药苷和白芍苷的制备方法，包括：
(1)将粉碎后的含有芍药苷和白芍苷的牡丹科植物原料，以固液质量比1:5-10加入乙醇溶液，超声提取，浓缩提取液得到浸膏；将浸膏按固液质量比1:100-150用水溶解，萃取，减压浓缩得到萃取物；
(2)采用柱色谱，以大孔树脂为填料，醇水溶液洗脱上述萃取物，收集含有芍药苷和白芍苷的流份，浓缩，干燥，得到粗提物；
(3)对上述粗提物采用高速逆流色谱法分离，高速逆流色谱的溶剂系统由三氯化碳、丁醇、甲醇和水按体积比4:1-2:2-3:1组成；紫外检测器在线监测，收集流份减压浓缩，结晶，干燥，得到芍药苷和白芍苷。
所述步骤(1)中的乙醇的体积分数为30-90％。
所述步骤(1)中的超声提取次数为2～3次。
所述步骤(1)中的萃取所用溶剂为乙酸乙酯。
所述步骤(2)中的醇水溶液为体积分数20-30％的乙醇水溶液。
所述步骤(3)中的高速逆流色谱的分离条件为：主机转速750-1000rpm/min，流动相2.5-15.0ml/min，水浴温度10-35℃。
所述步骤(3)中的溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相。
本发明将样品进行特殊简便预处理，使的样品中芍药苷和白芍苷纯度提高，上样量可以增加，同时制备高纯度的(含量大于95％)芍药苷和白芍苷两种物质，提高了产能。
有益效果
(1)本发明分离方法简便，快捷，分离周期短，可以短时间内分离制备高纯度芍药苷和白芍苷。传统的柱色谱方法操作繁琐，需要反复的进行柱层析分离，分离周期长，目标成分死吸附严重。
(2)本发明单体制备量大，根据所需芍药苷和白芍苷的质量，可以调节被分离样品的进样量，采用制备型高速逆流色谱仪，工艺重现性好，产品纯度高，具有良好的应用前景。
附图说明
图1为实施例1HSCCC分离得到的芍药苷和白芍苷的高速逆流色谱色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
取经干燥的牡丹科植物原料粉碎，称1000g，每次加入10L80％乙醇溶液超声提取60分钟，提取3次，提取液减压浓缩得到浸膏200g。按1质量份浸膏加入100质量份水溶解，乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物40g，萃取物上苯乙烯系大孔树脂柱，以体积分数25％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得粗提物，用于高速逆流分离。
在分液漏斗里配制三氯化碳、正丁醇、甲醇、水两相溶剂体系，按体积比4:2:1:1混合，振摇后静置分层，超声脱气30min。取上相注满高速逆流色谱仪作为固定相，转动主机，转速800rpm，同时以5ml/min泵入下相做流动相，水浴温度为30℃，建立动态平衡后，用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器在254nm波长下在线监测，收集各目标成分，连续制备，相应合并回收试剂，浓缩后干燥，从1000mg粗提物中分离得到高纯度的芍药苷和白芍苷250mg和100mg。经HPLC检测，含量分别为98.8％和98.2％，经UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性状的数据与现有技术相一致。
实施例2
取经干燥的牡丹科植物原料粉碎，称1000g，每次加入10L60％乙醇溶液超声提取60分钟，提取3次，提取液减压浓缩得到浸膏200g。按1质量份浸膏加入100质量份水溶解，乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物40g，萃取物上苯乙烯系AB-8大孔树脂柱，以体积分数25％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得粗提物，用于高速逆流分离。
在分液漏斗里配制三氯化碳、正丁醇、甲醇、水两相溶剂体系，按体积比4:1:3:2混合，振摇后静置分层，超声脱气30min。取上相注满高速逆流色谱仪作为固定相，转动主机，转速800rpm，同时以8ml/min泵入下相做流动相，水浴温度为20℃，建立动态平衡后，用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器在254nm波长下在线监测，收集各目标成分，连续制备，相应合并回收试剂，浓缩后干燥，从1000mg粗提物中分离得到高纯度的芍药苷和白芍苷250mg和100mg。经HPLC检测，含量分别为98.4％和97.2％，经UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性状的数据与现有技术相一致。
实施例3
取经干燥的牡丹科植物原料粉碎，称1000g，每次加入10L70％乙醇溶液超声提取60分钟，提取3次，提取液减压浓缩得到浸膏300g。按1质量份浸膏加入100质量份水溶解，乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物50g，萃取物上苯乙烯系AB-8大孔树脂柱，以体积分数50％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得粗提物，用于高速逆流分离。
在分液漏斗里配制三氯化碳、异丁醇、甲醇、水两相溶剂体系，按体积比4:2:2:1混合，振摇后静置分层，超声脱气30min。取上相注满高速逆流色谱仪作为固定相，转动主机，转速800rpm，同时以10ml/min泵入下相做流动相，水浴温度为25℃，建立动态平衡后，用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器在254nm波长下在线监测，收集各目标成分，连续制备，相应合并回收试剂，浓缩后干燥，从1000mg粗提物中分离得到高纯度的芍药苷和白芍苷230mg和110mg。经HPLC检测，含量分别为97.1％和96.5％，经UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性状的数据与现有技术相一致。
Claims (7)
1.一种高纯度芍药苷和白芍苷的制备方法，包括：
(1)将粉碎后的含有芍药苷和白芍苷的牡丹科植物原料，以固液质量比1:5-10加入乙醇溶液，超声提取，浓缩提取液得到浸膏；将浸膏按固液质量比1:100-150用水溶解，萃取，减压浓缩得到萃取物；
(2)采用柱色谱，以大孔树脂为填料，醇水溶液洗脱上述萃取物，收集含有芍药苷和白芍苷的流份，浓缩，干燥，得到粗提物；
(3)对上述粗提物采用高速逆流色谱法分离，高速逆流色谱的溶剂系统由三氯化碳、丁醇、甲醇和水按体积比4:1-2:2-3:1组成；紫外检测器在线监测，收集流份减压浓缩，结晶，干燥，得到芍药苷和白芍苷。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度芍药苷和白芍苷的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的乙醇的体积分数为30-90％。
3.根据权利要求1所述的一种高纯度芍药苷和白芍苷的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的超声提取次数为2～3次。
4.根据权利要求1所述的一种高纯度芍药苷和白芍苷的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的萃取所用溶剂为乙酸乙酯。
5.根据权利要求1所述的一种高纯度芍药苷和白芍苷的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的醇水溶液为体积分数20-30％的乙醇水溶液。
6.根据权利要求1所述的一种高纯度芍药苷和白芍苷的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的高速逆流色谱的分离条件为：主机转速750-1000rpm/min，流动相2.5-15.0ml/min，水浴温度10-35℃。
7.根据权利要求1所述的一种高纯度芍药苷和白芍苷的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相。
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