CN100528857C - 四区模拟移动床色谱法分离纯化芦荟黄酮的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了四区模拟移动床色谱法分离纯化芦荟黄酮的方法，具体步骤：取0.5-1kg干芦荟于5-10kg超声热水浸提，过滤获得滤液；然后向滤液中加入等体积的乙酸乙酯，在常温下进行液液萃取3-5小时，过滤，滤液减压蒸干得到芦荟黄酮粗提物；其次芦荟黄酮粗提物配成进样液进入模拟移动床分离纯化；甲醇溶解芦荟黄酮粗提物，0.45μm有机系滤膜过滤得浓度100-300mg/ml的模拟移动床的进料液；洗脱液为甲醇与水的混合物，甲醇与水的体积比为45∶55；最后将萃取液真空浓缩，冷冻真空烘干得成品。本发明的模拟移动床生产是连续的，自动化水平，工作效率、生产环境得到极大的改善。
Description
技术领域
本发明涉及天然药物的分离提纯方法，具体涉及一种四区模拟移动床色谱法分离纯化芦荟黄酮的方法。
背景技术
芦荟黄酮有抑制TPK活性阻断癌细胞分裂作用。芦荟中含有黄酮类、芦荟素、芦荟多糖和其他杂质等多种组分，提取芦荟黄酮的方法是浸泡、过滤、萃取得到粗产品，但是要达到药用要求必须进一步纯化，目前常用的纯化方法是以中性氧化铝作为填料的柱层析法，这种方法虽然可以进行大规模制备，但是分离的效率低，流动相浪费严重，固定相利用效率低，产量低，成本高，产品纯度只能达到60％，若要提高纯度就要降低收率，导致成本提高。
70年代以来，美国UOP公司开发了模拟移动床(SMB)原理的色谱技术，该技术使吸附剂颗粒装填后不在移动，由原料进出口和产品液流进出口不断切换的方法，形成吸附剂颗粒和液流相对逆流运动来模拟固定相的移动。近年来利用模拟移动床色谱分离药物技术得到了快速的发展。美国的一些专利文献报道了模拟移动床色谱分离手性药物如光学异构体、外消旋物质和对映体以及石油化学品的分离。日本Daicel化学工业公司也开发了使用模拟移动床色谱分离手性异构体的方法。但是，对于使用模拟移动床色谱分离提纯芦荟黄酮的方法仍未见公开报道。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种使用四区模拟移动床色谱法分离纯化芦荟黄酮的方法，工业化连续生产，提高产品的纯度和收率，降低生产成本。
本发明的目的的实现包括以下步骤：
a、取0.5-1kg干芦荟于5-10kg超声热水浸提，过滤获得滤液；
b、向滤液中加入等体积的乙酸乙酯，在常温下进行液液萃取3-5小时，过滤，滤液减压蒸干得到芦荟黄酮粗提物；
c、芦荟黄酮粗提物配成进样液进入模拟移动床分离纯化；甲醇溶解芦荟黄酮粗提物，0.45μm有机系滤膜过滤得浓度100-300mg/ml的模拟移动床的进料液；洗脱液为甲醇与水的混合物，甲醇与水的体积比为45∶55；
d、将萃取液真空浓缩，冷冻真空烘干得成品。
本发明方法中的模拟移动床由洗脱泵、进样泵、萃取泵、色谱柱、电磁阀、信号采集器、系统控制器及计算机连接组成，洗脱泵流量10-1000ml/min，压力2-10Mpa；进样泵流量1-50ml/min，压力2-10Mpa；萃取泵流量10-500ml/min，压力2-10Mpa；工作温度15-25℃；色谱填料为十八烷基硅烷键硅胶，填料粒度30-50μm。
本发明方法中的模拟移动床有4-16支色谱柱串联组成，经电磁阀切换改变进料口、出料口位置，色谱柱分4个区域，每区由1-4支相同的色谱柱；进样液流速为1-50ml/min，洗脱液流速为10-1000ml/min，萃取液流速为10-300ml/min，提余液流速为10-500ml/min；阀切换时间为10-28min。
本发明方法与目前精提芦荟黄酮的柱层析法比较，生产每千克芦荟黄酮产品可节省溶剂15500L，节省填料880.6Kg，产品纯度达到93％以上；模拟移动床生产是连续的，柱层析方法是间歇的，模拟移动床色谱的引入提高了生产的自动化水平，工作效率、生产环境得到极大的改善。
具体实施方式
实例1：依以下步骤在江苏汉邦科技有限公司的模拟移动床上分离纯化芦荟黄酮：
a、取0.5kg干芦荟于5kg热水超声浸提，过滤获得滤液；
b、向滤液中加入等体积的乙酸乙酯，在常温下进行液液萃取3小时，过滤，滤液减压蒸干得到芦荟黄酮粗提物；
c、芦荟黄酮粗提物配成进样液进入模拟移动床分离纯化；甲醇溶解芦荟黄酮粗提物，0.45μm有机系滤膜过滤得浓度100mg/ml的模拟移动床的进料液；洗脱液为甲醇与水的混合物，甲醇与水的体积比为45∶55；
d、将模拟移动床的萃取液真空浓缩，冷冻真空烘干得成品。
该模拟移动床由洗脱泵、进样泵、萃取泵、色谱柱、电磁阀、信号采集器、系统控制器及计算机连接组成，洗脱泵流量10ml/min，压力2Mpa；进样泵流量1ml/min，压力2Mpa；萃取泵流量10ml/min，压力2Mpa；工作温度15℃；色谱填料为十八烷基硅烷键硅胶，填料粒度30μm。
该模拟移动床有4支色谱柱组成，用电磁阀切换改变进料口、出料口位置，4支色谱柱子分4个区域，每区由1支色谱柱串联组成；进样液流速为1ml/min，洗脱液流速为10ml/min，萃取液流速为10ml/min，提余液流速为10ml/min；阀切换时间为10min。
成品高效液相色谱(HPLC)法检测：PerkinElmer Series200高效液相色谱系统，二极管阵列检测器，Hedera ODS-24.6mm×250mm分析柱，填料粒径5μm，洗脱液的甲醇/0.4％磷酸水溶液(v/v)＝50/50，流速1ml/mim，进样量20μl，检测温度25℃，使用外标法测定成品总黄酮含量93％。
实例2：依以下步骤在江苏汉邦科技有限公司的模拟移动床上分离纯化芦荟黄酮：
a、取0.8kg干芦荟于8kg热水超声浸提，过滤获得滤液；
b、向滤液中加入等体积的乙酸乙酯，在常温下进行液液萃取4小时，过滤，滤液减压蒸干得到芦荟黄酮粗提物；
c、芦荟黄酮粗提物配成进样液进入模拟移动床分离纯化；甲醇溶解芦荟黄酮粗提物，0.45μm有机系滤膜过滤得浓度200mg/ml的模拟移动床的进料液；洗脱液为甲醇与水的混合物，甲醇与水的体积比为45∶55；
d、将模拟移动床的萃取液真空浓缩，冷冻真空烘干得成品。
该模拟移动床由洗脱泵、进样泵、萃取泵、色谱柱、电磁阀、信号采集器、系统控制器及计算机连接组成，洗脱泵流量500ml/min，压力5Mpa；进样泵流量25ml/min，压力5Mpa，萃取泵流量250ml/min，压力5Mpa；工作温度20℃；色谱填料为十八烷基硅烷键硅胶，填料粒度40μm。
该模拟移动床有12支色谱柱组成，用电磁阀切换改变进料口、出料口位置，12支色谱柱分4个区域，每区由3支相同的色谱柱串联组成；进样液流速为25ml/min，洗脱液流速为500ml/min，萃取液流速为250ml/min，提余液流速为250ml/min；阀切换时间为19min。
成品高效液相色谱(HPLC)法检测：PerkinElmer Series200高效液相色谱系统，二极管阵列检测器，Hedera ODS-24.6mm×250mm分析柱，填料粒径5μm，洗脱液的甲醇/0.4％磷酸水溶液(v/v)＝50/50，流速1ml/mim，进样量20μl，检测温度25℃，使用外标法测定成品总黄酮含量95％。
实例3：依以下步骤在江苏汉邦科技有限公司的模拟移动床上分离纯化芦荟黄酮：
a、取1kg干芦荟10kg热水超声浸提，过滤获得滤液；
b、向滤液中加入等体积的乙酸乙酯，在常温下进行液液萃取5小时，过滤，滤液减压蒸干得到芦荟黄酮粗提物；
c、芦荟黄酮粗提物配成进样液进入模拟移动床分离纯化；甲醇溶解芦荟黄酮粗提物，0.45μm有机系滤膜过滤得浓度300mg/ml的模拟移动床的进料液；洗脱液为甲醇与水的混合物，甲醇与水的体积比为45∶55；
d、将模拟移动床的萃取液真空浓缩，冷冻真空烘干得成品。
该模拟移动床由洗脱泵、进样泵、萃取泵、色谱柱、电磁阀、信号采集器、系统控制器及计算机连接组成，洗脱泵流量1000ml/min，压力10Mpa；进样泵流量50ml/min，压力10Mpa；萃取泵流量500ml/min，压力10Mpa；工作温度25℃；色谱填料为十八烷基硅烷键硅胶，填料粒度50μm。
该模拟移动床色谱装置有16支色谱柱组成，用电磁阀切换改变进料口、出料口位置，16支色谱柱分4个区域，每区由4支相同的色谱柱串联组成；进样液流速为50ml/min，洗脱液流速为1000ml/min，萃取液流速为500ml/min，提余液流速为300ml/min；阀切换时间为28min。
成品高效液相色谱(HPLC)法检测：PerkinElmer Series200高效液相色谱系统，二极管阵列检测器，Hedera ODS-24.6mm×250mm分析柱，填料粒径5μm，洗脱液的甲醇/0.4％磷酸水溶液(v/v)＝50/50，流速1ml/mim，进样量20μl，检测温度25℃，使用外标法测定成品总黄酮含量98％。
Claims (1)
1.四区模拟移动床色谱法分离纯化芦荟黄酮的方法，其特征在于：具体步骤如下：a、取0.5-1kg干芦荟于5-10kg超声热水浸提，过滤获得滤液；b、向滤液中加入等体积的乙酸乙酯，在常温下进行液液萃取3-5小时，过滤，滤液减压蒸干得到芦荟黄酮粗提物；c、芦荟黄酮粗提物配成进样液进入模拟移动床分离纯化；甲醇溶解芦荟黄酮粗提物，0.45μm有机系滤膜过滤得浓度100-300mg/ml的模拟移动床的进料液；洗脱液为甲醇与水的混合物，甲醇与水的体积比为45∶55；d、将萃取液真空浓缩，冷冻真空烘干得成品。
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| 纯化银杏总内脂的新工艺. 高丽娟等.化学世界，第46卷第12期. 2005 |
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