CN105016982B

CN105016982B - 一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法

Info

Publication number: CN105016982B
Application number: CN201510448102.4A
Authority: CN
Inventors: 汤道权; 孙世安; 纪海侠; 杨方秀; 董露露; 栗政
Original assignee: Xuzhou Medical College
Current assignee: Xuzhou Medical College
Priority date: 2015-07-27
Filing date: 2015-07-27
Publication date: 2017-05-10
Anticipated expiration: 2035-07-27
Also published as: CN105016982A

Abstract

本发明公开了一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法涉及和厚朴酚及厚朴酚提取技术领域。该方法首先用有机溶剂超声提取厚朴中的木质素类成分；接下来用分析型高效液相色谱仪对提取物的组成进行分离分析；然后，用半制备型高效液相色谱仪对提取物中的成分进行分离纯化就可以得到和厚朴酚及厚朴酚2种化合物；最后，用高效液相色谱法对化合物的纯度进行测定。根据核磁共振波谱分析对化合物的结构进行鉴定，该方法所得目标化合物纯度高，杂质含量极低，工艺过程绿色环保，对环境无严重危害，综合成本低。

Description

一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法

技术领域

本发明涉及和厚朴酚及厚朴酚提取技术领域，具体是一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法。

背景技术

厚朴为木兰科木兰属植物厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.的干皮、根皮或枝皮，性温,味苦、辛，有燥湿消痰、下气除满的功效，用于治疗湿滞伤中、脱痞吐泻、腹胀便秘、痰饮喘咳等症。药理研究表明厚朴具有抗真菌、抗病毒、抗过敏、抗溃疡、抗变态、抗癌、抑制血小板凝集、降压、保肝、影响胃肠活动等作用，其主要活性成分为木质素类成分，其中，和厚朴酚及其异构体厚朴酚占绝对优势，二者也是厚朴及相关制剂质量控制的主要指标。据文献报道，分离纯化厚朴木质素的方法主要有反复硅胶柱层析法及高速逆流色谱法，硅胶柱层析法的操作过程繁琐，回收率较低，经常使用氯仿、苯等毒性较强的有机溶剂；在高速逆流色谱法中溶剂系统的选择比较困难，缺乏理论指导。因此，建立一种高效快速的提取、分离纯化厚朴木质素的方法对于深化厚朴的药理作用研究及完善质量控制体系均具有重要的意义。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明提供一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法，高效、快速、简便的从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚。

本发明是以如下技术方案实现的：一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法,其特征在于：包括如下步骤：

(1)厚朴木质素的提取：将厚朴药材粉碎，用有机溶剂进行提取，过滤，提取液经减压浓缩得粗提物，有机溶剂的用量为补骨脂药材的6-12倍；

(2)厚朴木质素的分离分析：用分析型高效液相色谱仪对步骤(1)中的粗提物的组成进行分离分析，流动相为甲醇-水，流速为1.0mL/min；

(3)厚朴木质素的分离纯化：用半制备型高效液相色谱仪对粗提物中的成分进行分离纯化，流动相为甲醇与水，流速为20-30mL/min，然后根据色谱图手动收集目标组分馏分，减压浓缩除去溶剂；

(4)化合物的纯度检测及结构鉴定：将每一个目标组分馏分减压浓缩后用甲醇溶解，其纯度用高效液相色谱法进行检测，分析结果表明2种化合物的纯度都达到了98％以上经核磁共振波谱分析2种化合物分别是和厚朴酚及厚朴酚。

进一步是：步骤(2)中的分析型高效液相色谱仪中的色谱柱采用参数为250×4.6mm I.D.,5μm的C18柱，检测波长为254nm，柱温为室温。

步骤(3)中的半制备型高效液相色谱仪中的色谱柱采用参数为250×4.6mm I.D.,10μm的C18柱，检测波长为254nm，柱温为室温。

步骤(1)中有机溶剂为甲醇或乙醇或石油醚或乙酸乙酯；提取方法为冷浸或超声或加热回流，提取次数为2-5次，提取时间为15-60分钟。

更进一步是：步骤(1)中有机溶剂为乙醇，提取方法为超声。

乙醇的浓度为50％～95％。

乙醇的浓度为80％。

有机溶剂的用量为补骨脂药材的10倍，提取次数为3次，提取时间为45分钟。

步骤(2)分离分析用甲醇-水洗脱液进行洗脱，洗脱方式有76％甲醇-水等度洗脱或73％甲醇-水等度洗脱或70％甲醇-水等度洗脱。

步骤(3)分离纯化用甲醇-水洗脱液进行洗脱，洗脱方式有甲醇-水梯度洗脱或80％甲醇-水等度洗脱或75％甲醇-水等度洗脱或70％甲醇-水等度洗脱。

本发明的有益效果是：高效、快速、简便的从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚；该工艺过程绿色环保，对环境无严重危害，综合成本低。

附图说明

图1是厚朴粗提物的分析型高效液相色谱图；

图2是厚朴粗提物的半制备型高效液相色谱图；

图3是和厚朴酚的高效液相色谱图及紫外光谱图；

图4是厚朴酚的高效液相色谱图及紫外光谱图；

图中：I为和厚朴酚；II为厚朴酚。

具体实施方式

下面结合实施例和附图详细说明本发明的技术方案，但保护范围不被此限制。实施例中所用设备或原料皆可从市场获得。所用试剂均购自天津市化学试剂三厂，所用水为去离子水。

实施例：从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法，其步骤为：

(1)厚朴木质素的提取：将厚朴药材粉碎，用10倍量80％乙醇超声提取3次，每次45分钟，过滤，将提取液合并，减压浓缩得粗提物。

(2)厚朴木质素的分离分析：用分析型高效液相色谱仪对粗提物的组成进行分离分析，色谱柱为C₁₈柱(250×4.6mm I.D.,5μm)，流动相为甲醇-水(73：27，V/V)；流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，柱温为室温。

(3)厚朴木质素的分离纯化：用半制备型高效液相色谱仪对粗提物中的成分进行分离纯化，色谱柱为C₁₈柱(250×25.4mm I.D.,10μm)，流动相为甲醇-水(75：25，V/V)，流速为25.0mL/min，检测波长为254nm，柱温为室温。根据色谱图手动收集目标组分馏分，减压浓缩除去溶剂。

(4)化合物的纯度检测及结构鉴定：将每一个目标组分馏分减压浓缩后用甲醇溶解，其纯度用高效液相色谱法进行检测，色谱条件见步骤(2)，分析结果表明2种化合物的纯度都达到了98％以上。经核磁共振波谱分析2种化合物分别是和厚朴酚及厚朴酚。

发明人通过使用不同浓度的甲醇作流动相，采用不同的洗脱方式，控制甲醇-水洗脱液的流速为20-30mL/min(优选25mL/min)，优选出了实现本发明目的的纯化条件，有关实验结果如下：

表一厚朴粗提物的半制备型高效液相色谱分离条件

	洗脱条件
		实施例1	80％甲醇-水等度洗脱
实施例2	75％甲醇-水等度洗脱
		实施例3	70％甲醇-水等度洗脱
实施例4	甲醇-水梯度洗脱

在实施例1中，洗脱液中甲醇的浓度较高，洗脱时间较短，厚朴酚与其附近杂质之间的分离效果不够理想，所得厚朴酚的纯度较低。实施例2中，洗脱液中甲醇的浓度适中，厚朴酚与其附近杂质之间分离效果良好，分离时间也较为适宜。实施例3中，洗脱液中甲醇的浓度较低，厚朴酚与其附近杂质之间的分离效果良好，但分离时间太长。实施例4采用甲醇-水梯度洗脱，也可以在合适的时间内获得良好的分离效果，但由于洗脱液的浓度不断发生变化导致难以实现回收再利用。

图2是当选用实施例2体系时厚朴粗提物的半制备型高效液相色谱图，由图可见，各成分分离良好，分离时间也较为适宜。根据色谱图手动收集各峰组分，回收溶剂后，即可得到相应的高纯度化合物。经高效液相色谱峰面积归一化法分析测试，纯度高于98％，这一点可从图3至图4中看出。

经核磁共振波谱分析证实所提取纯化得到的2个化合物的化学结构式如下：

2个化合物的鉴定结果如下：

和厚朴酚：¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:7.2～7.3(2H,m,2,6-H),7.1(1H,dd,J＝8.0,2.2Hz,4'-H),7.0(1H,d,J＝2.2Hz,6'-H),6.9～7.0(2H,m,5,3'-H),5.9～6.1(2H,m,8,8'-H),5.2～5.3(2H,m,9-H),5.0～5.2(2H,m,9'-H),3.5(2H,d,J＝6.5Hz,7-H),3.4(2H,d,J＝6.7Hz,7'-H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δppm:154.0(C-4),150.8(C-2'),137.8(C-8'),136.1(C-8),132.3(C-5'),131.1(C-6'),130.2(C-2),129.8(C-3),128.8(C-4'),128.5(C-6),126.4(C-1),116.8(C-3'),116.6(C-5),115.6(C-9),115.5(C-9'),39.7(C-7'),35.0(C-7),27.8(C-1').

厚朴酚：¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:7.2(2H,dd,J＝8.3,2.2Hz,4,4'-H),7.1(2H,d,J＝2.2Hz,6,6'-H),6.9(2H,d,J＝8.3Hz,3',3-H),5.9～6.0(2H,m,8,8'-H),5.0～5.1(4H,m,9,9'-H),3.4(4H,d,J＝6.7Hz,7’,7-H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δppm:151.2(C-2,2'),137.5(C-8,8'),133.3(C-5,5'),131.1(C-6,6'),130.1(C-4,4'),123.5(C-1,1'),116.7(C-3,3'),115.8(C-9,9'),39.3(C-7,7').

从实施例可以看出，本发明从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚，首先用80％乙醇超声提取厚朴中的木质素类成分；接下来用分析型高效液相色谱仪对提取物的组成进行分离分析；然后，用半制备型高效液相色谱仪对提取物中的成分进行分离纯化就可以得到2种化合物；最后，用高效液相色谱法对化合物的纯度进行测定，根据核磁共振波谱分析对化合物的结构进行鉴定。该方法所得目标化合物纯度高，杂质含量极低，这一点可从图3至图4中看出。除此之外，还具有如下优势：

(1)厚朴中木质素的提取方法有回流提取、超声提取、冷浸提取、超临界CO₂萃取、超高压提取等，超声提取具有时间短、能耗低、操作简单、条件温和等优点，尤其适合热敏性物质的大规模提取。用80％乙醇对厚朴中木质素类成分进行超声提取可以使目标成分最大程度溶出，而水溶性杂质尽量不被溶出。不仅提高了提取效率，而且可以使粗提物尽可能纯净，最大限度降低了制备型C₁₈柱被污染的程度。

(2)用高效液相色谱法对厚朴粗提物的组成进行分离分析，用甲醇-水作流动相等度洗脱可以在短时间内对2种目标化合物实现基线分离。

(3)用半制备型高效液相色谱法对化合物进行分离纯化，可以得到2种高纯度单体化合物，方法操作简单，效率高，工艺周期短，节省试剂，降低了生产成本。

(4)用高效液相色谱法对制备所得化合物的纯度进行测定，该方法准确、快速。

(5)提取、分离、纯化过程中仅用到乙醇、甲醇和水，不使用对环境和人体危害大的氯仿、苯等有机溶剂，乙醇-水提取液及甲醇-水洗脱液经减压蒸馏回收后均可以重复使用多次，绿色环保。

(6)优化了层析方法的条件(洗脱液的组成和流速)，使化合物的纯度和纯化效率都大为提高。

应当指出的是，具体实施方式只是本发明比较有代表性的例子，显然本发明的技术方案不限于上述实施例。还可以有很多变形。本领域的普通技术人员，从此文件中所公开提到或是联想到的，均应认为是本发明所要保护的范围。

Claims

1.一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法,其特征在于：包括如下步骤：

（1）厚朴木质素的提取：将厚朴药材粉碎，用有机溶剂进行提取，过滤，提取液经减压浓缩得粗提物，有机溶剂的用量为厚朴药材的6-12倍；

（2）厚朴木质素的分离分析：用分析型高效液相色谱仪对步骤（1）中的粗提物的组成进行分离分析，流动相为甲醇-水，流速为1.0 mL/min；

（3）厚朴木质素的分离纯化：用半制备型高效液相色谱仪对粗提物中的成分进行分离纯化，流动相为甲醇与水，流速为20-30 mL/min，然后根据色谱图手动收集目标组分馏分，减压浓缩除去溶剂；

（4）化合物的纯度检测及结构鉴定：将每一个目标组分馏分减压浓缩后用甲醇溶解，其纯度用高效液相色谱法进行检测，分析结果表明2种化合物的纯度都达到了98%以上经核磁共振波谱分析2种化合物分别是和厚朴酚及厚朴酚。

2.根据权利要求1所述的一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法，其特征在于：步骤（2）中的分析型高效液相色谱仪中的色谱柱采用参数为250×4.6 mm I.D., 5μm的C18柱，检测波长为254 nm，柱温为室温。

3.根据权利要求1所述的一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法，其特征在于：步骤（3）中的半制备型高效液相色谱仪中的色谱柱采用参数为250×4.6 mm I.D.,10μm的C18柱，检测波长为254 nm，柱温为室温。

4.根据权利要求1所述的一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法，其特征在于：步骤（1）中有机溶剂为甲醇或乙醇或石油醚或乙酸乙酯；提取方法为冷浸或超声或加热回流，提取次数为2-5次，提取时间为15-60分钟。

5.根据权利要求4所述的一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法，其特征在于：步骤（1）中有机溶剂为乙醇，提取方法为超声。

6.根据权利要求4所述的一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法，其特征在于：乙醇的浓度为50%～95%。

7.根据权利要求6所述的一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法，其特征在于：乙醇的浓度为80%。

8.根据权利要求4所述的一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法，其特征在于：有机溶剂的用量为厚朴药材的10倍，提取次数为3次，提取时间为45分钟。

9.根据权利要求1所述的一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法，其特征在于：步骤（2）分离分析用甲醇-水洗脱液进行洗脱，洗脱方式有76%甲醇-水等度洗脱或73%甲醇-水等度洗脱或70%甲醇-水等度洗脱。

10.根据权利要求1所述的一种从厚朴中提取、分离纯化和厚朴酚及厚朴酚的方法，其特征在于：步骤（3）分离纯化用甲醇-水洗脱液进行洗脱，洗脱方式有甲醇-水梯度洗脱或80%甲醇-水等度洗脱或75%甲醇-水等度洗脱或70%甲醇-水等度洗脱。