CN102627677A

CN102627677A - 从虎杖中分离纯化单体化合物的方法

Info

Publication number: CN102627677A
Application number: CN2012100767781A
Authority: CN
Inventors: 柳仁民; 董雯文; 孙爱玲
Original assignee: Liaocheng University
Current assignee: Liaocheng University
Priority date: 2012-03-22
Filing date: 2012-03-22
Publication date: 2012-08-08

Abstract

本发明涉及从从虎杖中分离纯化白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖甙和大黄素的方法，是以虎杖为原料，经过下述步骤：（1）虎杖提取物的制备：取粉碎好的虎杖药材，用乙醇或甲醇渗漉提取，渗漉液经回收至无醇后喷雾干燥得到提取物粗粉；（2）柱层析纯化：以Superose12为分离介质层析分离纯化，用甲醇-水或乙醇-水为洗脱液，得到高纯度白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖甙和大黄素单体化合物。工艺过程绿色环保，对环境无严重危害。

Description

从虎杖中分离纯化单体化合物的方法

技术领域

本发明属于化工领域，具体是涉及一种从中药虎杖中分离纯化白藜芦醇苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖甙、白藜芦醇和大黄素的方法。

背景技术

虎杖为蓼科蓼属多年生草本植物虎杖（Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.）的干燥根和茎，叶亦入药。虎杖性味苦寒，归肝、肺、胆经。主要功效有祛风利湿、祛痰止咳、清热解毒、活血化瘀。中医临床用于治疗湿热黄疸、肺热咳嗽、疮痈肿毒、关节痹痛、经闭经痛、水火烫伤、跌打损伤等。虎杖中的主要有效成分为蒽醌类化合物和芪类成分，蒽醌类化合物主要有大黄素、大黄素8-O-β-D-葡萄糖甙）等，芪类成分主要是白藜芦醇和白藜芦醇苷。

现已有文献报道从虎杖中提取纯化相关成分的方法。苏文强[中压柱层析法分离白藜芦醇的研究，林产化学与工业,2004年01期] 对虎杖中的白藜芦醇进行了提取分离和含量测定，采用中压硅胶柱层析法分离白藜芦醇。周建军等［孔树脂分离纯化虎杖中蒽醌类化合物工艺研究，中成药，2011年 07期］以蒽醌类化合物量为指标,考察大孔树脂对蒽醌类化合物吸附及洗脱参数，纯化后蒽醌类化合物量为71.71%。张凌燕等[凝胶柱层析分离虎杖中白藜芦醇的研究, 天然产物研究与开发,2009年 01期] 探讨了虎杖中白藜芦醇分离纯化的工艺条件,比较了不同溶剂、不同浓度、不同流速洗脱条件下白藜芦醇样品在LH-20凝胶层析柱上的分离效果,采用中压液相色谱检测收集到的白藜芦醇纯度可达80.34%。钟芳芳等[虎杖中大黄素的分离及抗菌活性的初步研究，中南民族大学学报(自然科学版),2006年 01期] 采用pH梯度法提取虎杖中的大黄素, 然后用滤纸扩散法及薄层色谱自显影生物技术研究其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、绿脓杆菌、草分枝杆菌的抗菌效果。

近年来也出现了与制备白藜芦醇苷和白藜芦醇有关的专利文献。《白藜芦醇和白藜芦醇甙的制备方法》（中国专利，申请号01118461.2）用卤代烃硅胶柱层析进行第一步分离，然后用高速逆流色谱进行第二次分离得到目标产物。《白藜芦醇和白藜芦醇甙分离方法及其应用》（中国专利，申请号00121100.5）对初提物进行乙酸乙酯萃取，然后进行硅胶柱层析，再以甲醇-氯仿为溶剂进行重结晶得到白藜芦醇苷，并通过第二次层析和重结晶得到白藜芦醇。《虎杖苷和白藜芦醇的新制备方法》（中国专利，申请号200310112538.3）用聚酰胺层析法分离制备了虎杖苷和白藜芦醇。

《从虎杖中提取纯度98%以上的白藜芦醇的工艺》（中国专利，公开号CN101338327）将虎杖药材经过一系列处理过程得到粗品白藜芦醇，再用虎杖专用絮凝剂絮凝沉淀,过滤,氧化铝层析精制,结晶与重结晶和真空干燥等工艺步骤得到98%成品。《虎杖中有效成分大黄素的提取方法》（中国专利，申请号200510061919.2）提供虎杖中有效成分大黄素的提取方法。

上述方法或主要是进行单一成分的分离，或是进行混合物的提取，得到的产品纯度较低，或需要使用卤代烃为溶剂，对环境有严重危害，或溶剂体系比较复杂，生产规模较小，生产成本较高。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简便、绿色环保、分离量大、综合成本低、生产周期短的快速从中药虎杖中分离纯化白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖甙和大黄素的方法。

本发明的方案如下：

从虎杖中分离纯化白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-b-D-葡萄糖甙和大黄素的方法，步骤为：

（1）虎杖提取物的制备：取粉碎好的虎杖药材，用乙醇或甲醇渗漉提取，渗漉液经回收至无醇后喷雾干燥得到提取物粗粉；

（2）柱层析纯化：将虎杖的提取物用甲醇溶解，上Superose 12柱进行层析分离纯化，用甲醇-水或乙醇-水为洗脱液进行洗脱，洗脱液流速为每小时1-10倍柱体积，流出液由紫外检测器在254 nm检测，收集目标组分馏分，将得到的馏分减压浓缩，得到高纯度白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-b-D-葡萄糖甙和大黄素单体化合物。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1）渗漉提取时使用3柱串联，逆流渗漉，介质温度为40-80℃，渗漉液流速为2-10倍单柱体积/小时。更加优选的是，介质温度为50-60℃（优选55℃），渗漉液流速为3-5倍单柱体积/小时（优选4倍单柱体积/小时）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1）渗漉提取时所用乙醇或甲醇的质量浓度为50%-100%（优选70%-90%，更优选85%）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（2）洗脱液为20%-85%的甲醇-水洗脱液（优选40%-70%，更优选65%）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（2）用洗脱液进行洗脱时，洗脱液流速为每小时2-6倍柱体积（优选每小时3倍柱体积）。

本发明从虎杖中分离纯化白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-b-D-葡萄糖甙和大黄素的方法，采用3柱串联提取，所得提取物目标化合物含量高，杂质低，这一优点从虎杖提取物HPLC图（图1）可清楚看出。除此之外，还具有如下优势：

（1）提取物经过一步分离纯化就可以同时得到白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-b-D-葡萄糖甙和大黄素等多种高纯度单体化合物。不需要象已有技术一样对样品进行多次分离，只需要一个分离步骤即可得到多种高纯度化合物，方法操作简单，效率高，工艺周期短，节省试剂，降低了生产成本。

（2）纯化过程中不使用对环境危害大的氯仿等有机溶剂，绿色环保。

（3）优化了层析方法的条件（洗脱液组成），使纯度和效率都大为提高。

附图说明

图1是虎杖提取物的高效液相色谱图。

图2是实施例2层析色谱图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图详细说明本发明的技术方案，但保护范围不被此限制。实施例中所用设备或原料皆可从市场获得。所用Superose 12购自通用电气（中国）医疗集团，所用试剂均购自天津试剂四厂，所用水为去离子水。

实施例：虎杖药材经粉碎后，装入3柱串联渗漉柱逆流渗漉系统，以85%乙醇为渗漉溶剂，介质温度为55℃，渗漉液流速4倍单柱体积/小时。渗漉液经回收至无醇后喷雾干燥得到虎杖药材提取物粗粉。

将虎杖药材提取物粗粉用65%甲醇溶解，上Superose 12层析，用甲醇-水为洗脱液进行洗脱，洗脱液流速为每小时3倍柱体积，流出液由紫外检测器在254 nm检测，收集目标组分馏分，将得到的馏分减压浓缩，即得到所要分离的单体化合物。

发明人通过使用不同浓度的甲醇，采用不同洗脱方式，优选出了实现本发明目的的纯化条件，有关实验结果如下：

表一柱层析条件

	洗脱液条件
		实施例1	80%甲醇-水等度洗脱
实施例2	65%甲醇-水等度洗脱
		实施例3	50%甲醇-水等度洗脱
实施例4	30%甲醇-水和85甲醇-水梯度洗脱

在实施例1中，采用80%甲醇-水为洗脱液等度洗脱，各成分洗脱时间较短，但相互之间分离效果不够理想，所得成分纯度较低。实施例2中采用65%甲醇-水为洗脱液等度洗脱，各成分之间分离良好，分离时间也较为适宜。实施例3中采用50%甲醇-水为洗脱液等度洗脱，各成分分离良好，但分离时间太长。实施例4采用30%甲醇-水和85甲醇-水梯度洗脱，各成分分离良好，分离时间也可以，但洗脱液由于浓度变化回收利用存在较大困难。

图2是当选用实施例2体系时层析色谱图，由图2可见，由图2可见，各成分分离良好，分离时间也较为适宜。根据色谱图收集各峰组分，回收溶剂后，即可得到相应高纯度化合物。根据¹H-NMR和¹³C-NMR的测试，对所得峰组分进行鉴定，得到了白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-b-D-葡萄糖甙和大黄素。

经HPLC面积归一化法分析测试，实施例2所得到的各个组分的纯度很高，均在98%以上。

经现代波谱数据证实所提取纯化得到的白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-b-D-葡萄糖甙和大黄素结构式如下：

应当指出的是，具体实施方式只是本发明比较有代表性的例子，显然本发明的技术方案不限于上述实施例。还可以有很多变形。本领域的普通技术人员，从此文件中所公开提到或是联想到的，均应认为是本专利所要保护的范围。

Claims

1.从虎杖中分离纯化单体化合物的方法，其特征是，步骤为：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（1）渗漉提取时使用3柱串联，逆流渗漉，介质温度为40-80℃，渗漉液流速为2-10倍单柱体积/小时。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征是，介质温度为50-60℃，渗漉液流速为3-5倍单柱体积/小时。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是，介质温度为55℃，渗漉液流速为4倍单柱体积/小时。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（1）渗漉提取时所用乙醇或甲醇的质量浓度为50%-100%。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征是，所用乙醇或甲醇的质量浓度为70%-90%。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征是，所用乙醇或甲醇的质量浓度为85%。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（2）洗脱液为20%-85%的甲醇-水洗脱液（优选40%-70%，更优选65%）。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征是，步骤（2）用洗脱液进行洗脱时，洗脱液流速为每小时2-6倍柱体积（优选每小时3倍柱体积）。