CN103102375B - 从连翘叶中复合提取连翘苷、连翘酯苷a和芦丁的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从连翘叶中复合提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法，其是利用连翘叶中的连翘苷为非极性化合物，易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，难溶于水，连翘酯苷A为极性化合物，易溶于水、甲醇、乙醇等，芦丁易溶于甲醇、热乙醇，不易溶于水的特性，综合考虑，通过乙醇浸提、大孔吸附树脂分离、反相硅胶柱层析连续提取工艺，从连翘叶中复合提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁，能把连翘叶的有效活性成分提取完全，合理利用了连翘叶资源；同时，本发明使用大孔吸附树脂的吸附和解吸附，可分离连翘苷、连翘酯苷A和芦丁，用反相硅胶纯化连翘酯苷A，分离完全，而且纯度较高，工艺条件简单，适合工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种属于连翘叶分离技术领域，特别是一种从天然植物连翘叶中连续提取有效成分连翘酯苷A、连翘苷和芦丁的方法。
背景技术
连翘为木犀科连翘属落叶灌木，是常用药材，传统以果实入药，但民间调查显示，连翘叶有消除便秘，预防感冒，降血脂，降血压等作用。国内己有研究者对连翘叶的化学成分进行了初步分析，并利用连翘叶制成茶叶作为滋补调理饮料应用。连翘叶常作为保健茶使用，化学研究证明，连翘叶与常用药材连翘果实的化学成分有较好一致性，主要含有木质素类、苯丙素苷类、三萜酸类、黄酮类和挥发油类等，并且叶子中的有效生物活性成分如连翘苷、连翘酯苷的含量远高于连翘果实。
连翘苷和连翘酯苷A是国家药典2010年版规定的连翘质量控制指标成分。连翘苷有较好的抗菌、降血脂和减肥作用；连翘酯苷有较好的抗病毒和抗氧化作用，对金黄色葡萄球菌等多种致病菌具有抑制作用，还能抑制磷酸二酯酶、真菌以及活性氧；芦丁具有抗炎、抗病毒、抗氧化、降低毛细血管脆性和通透性等作用。三者在医药和食品领域作为天然药物、天然防腐剂、天然抗氧化剂均具有很广泛的应用前景。
目前各种文献资料中，从连翘果实或连翘叶中只单独提取一种活性成分或者两种，没有合理利用连翘资源，造成资源的严重浪费。如中国专利200610148179.0，200810176773.X，201010235729.9等都是针对一种活性成分进行工艺研究，中国专利201110209731.3公开了一种从连翘叶提取连翘苷和连翘酯苷A的方法，其先通过热水提取，沉淀分离，再用有机溶剂萃取，乙醇重结晶等制备连翘苷和连翘酯苷A，但耗时太长，得率比较低，而且大量芦丁被丢弃。现有技术采用的方法直接水提或水提后有机溶剂萃取，或碱水提取，或酸水提取，没有综合考虑其他活性物质的活性，而且操作复杂，成本较高。目前尚未见到从连翘叶中同时提取分离连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的相关报道。
发明内容
为了解决现有技术中提取分离连翘苷、连翘酯苷A所存在的技术问题，本发明提供了一种方法简单，原料利用率高、可从连翘叶中连续提取分离出连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法。
解决上述技术问题所采用的技术方案是由以下步骤组成：
（1）提取
将连翘叶粉碎至40～60目，60～75℃用体积浓度为55%的乙醇浸提40～60分钟，每1g连翘叶对应添加15～40mL的乙醇，优选20～30mL，提取2～3次，合并浸提液，静置，过滤，50～60℃减压浓缩回收乙醇，按照每100mL浓缩液中添加3～6mL的量向浓缩液中添加无水乙醇，优选4～5mL，室温静置，过滤，得到连翘叶提取液；
（2）树脂分离
将连翘叶提取液用大孔吸附树脂吸附，连翘叶与大孔吸附树脂的质量比为1：1.6～2，优选1：1.8，水洗杂质，用体积浓度为30%的乙醇洗脱，洗脱流速为1～3BV/h，洗脱体积为5～8BV，得到馏分Ⅰ，用浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱流速为1～3BV/h，洗脱体积为5～8BV，得到馏分Ⅱ；
（3）沉淀分离
将馏分Ⅰ减压浓缩回收乙醇，室温静置至沉淀物与水分离，得到沉淀物为芦丁粗品，水层为连翘酯苷A粗提液，用水饱和的正丁醇萃取1～3次，回收正丁醇，余液干燥，得到连翘酯苷A粗品；将馏分Ⅱ减压浓缩回收乙醇，室温静置，分离沉淀，得到连翘苷粗品；
（4）纯化
将步骤（3）中所得的连翘苷粗品和芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶2～4次，干燥，分别得到连翘苷和芦丁；将连翘酯苷A粗品用体积浓度为30%的甲醇溶解，用C18反相硅胶柱层析分离，体积浓度为30%的甲醇平衡，体积浓度为40%的甲醇洗脱，35～40℃减压浓缩回收甲醇，余液冷冻干燥，得连翘酯苷A。
上述大孔吸附树脂的型号是AB-8或D101。
上述步骤（4）中将连翘苷粗品和芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶2～4次，干燥，分别得到连翘苷和芦丁；将连翘酯苷A粗品用体积浓度为30%的甲醇溶解，用C18反相硅胶柱层析分离，3倍柱床体积的浓度为30%的甲醇平衡，体积浓度为40%的甲醇洗脱，35～40℃减压浓缩回收甲醇，冷冻干燥，得连翘酯苷A。
本发明从连翘叶中复合提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法是利用连翘叶中的连翘苷为非极性化合物，易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，难溶于水，连翘酯苷A为极性化合物，易溶于水、甲醇、乙醇等，芦丁易溶于甲醇、热乙醇，不易溶于水的特性，综合考虑，通过乙醇浸提、大孔吸附树脂分离、反相硅胶柱层析连续提取工艺，从连翘叶中复合提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁，能把连翘叶的有效活性成分提取完全，合理利用了连翘叶资源；同时，本发明使用大孔吸附树脂的吸附和解吸附，可分离连翘苷、连翘酯苷A和芦丁，用反相硅胶纯化连翘酯苷A，分离完全，而且纯度较高，工艺条件简单，适合工业化生产。
附图说明
图1为连翘酯苷A、芦丁和连翘苷的标准品混合样与实施例1提取的连翘酯苷A、芦丁和连翘苷制品的高效液相色谱图。
图2为实施例1提取的连翘酯苷A与标准品的紫外扫描对比图。
图3为实施例1提取的芦丁与标准品的紫外扫描对比图。
图4为实施例1提取的连翘苷与标准品的紫外扫描对比图。
具体实施方式
现结合具体的实施例对本发明进行进一步的说明，但本发明的不仅限于下属的实施例。
实施例1
以原料连翘叶40g为例，从连翘叶中连续提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法，由以下步骤组成：
（1）提取
将40g连翘叶粉碎至50目，用1000mL体积浓度为55%的乙醇70℃浸提50分钟，连翘叶与乙醇的料液比为1：25g/mL，过滤，滤渣再加入800mL体积浓度为55%的乙醇70℃浸提50分钟，合并2次的浸提液，静置12小时，过滤，55℃减压浓缩回收乙醇，得浓缩液665mL，按照每100mL浓缩液中添加5mL无水乙醇的量向浓缩液中加入33.25mL无水乙醇，室温静置12小时，过滤，得到连翘叶提取液。
（2）树脂分离
将连翘叶提取液通过72g体积为2.6cm（直径）×25cm（柱高）的AB-8大孔吸附树脂柱吸附，连翘叶与AB-8大孔吸附树脂的质量比为1﹕1.8，用1000mL水洗杂质，用725mL体积浓度为30%的乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，得到馏分Ⅰ，用700mL体积浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，得到馏分Ⅱ。
（3）沉淀分离
将馏分Ⅰ50℃减压浓缩回收乙醇，得馏分Ⅰ浓缩液70mL，室温静置至沉淀物与水层分离，沉淀物为0.282g芦丁粗品，水层为70mL连翘酯苷A粗提液，用水饱和的正丁醇萃取2次，回收正丁醇，余液在50℃烘箱干燥，得到4.76g连翘酯苷A粗品；将馏分Ⅱ50℃减压浓缩回收乙醇，得馏分Ⅱ浓缩液70mL，室温静置，分离沉淀得到0.735g连翘苷粗品。
（4）纯化
将0.735g连翘苷粗品和0.282g芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶3次，干燥，得到纯度95%的0.128g连翘苷和94%的0.149g芦丁；将4.76g连翘酯苷A粗品用8cm（直径）×50cm（柱高）的C18反相硅胶柱层析分离，用体积浓度为30%的甲醇溶解粗品，用3倍反相硅胶柱柱床体积的浓度为30%的甲醇平衡，用体积浓度为40%的甲醇洗脱，经薄层层析法确定，当洗脱到7000mL时开始收集连翘酯苷A洗脱峰，收集体积为3360mL，38℃减压浓缩回收甲醇，余液冷冻干燥，得2.557g纯度为93%的连翘酯苷A。
实施例2
以原料连翘叶40g为例，从连翘叶中连续提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法，由以下步骤组成：
（1）提取
将40g连翘叶粉碎至50目，用1200mL体积浓度为55%的乙醇70℃浸提50分钟，连翘叶与乙醇的料液比为1﹕30g/mL，过滤，滤渣再加入800mL体积浓度为55%的乙醇70℃浸提50分钟，合并2次的浸提液，静置12小时，过滤，55℃减压浓缩回收乙醇，得浓缩液，按照每100mL浓缩液中添加5mL无水乙醇的量向浓缩液中加入无水乙醇，室温静置12小时，过滤，得到连翘叶提取液。
（2）树脂分离
将连翘叶提取液通过2.6cm（直径）×25cm（柱高）的AB-8大孔吸附树脂柱吸附，连翘叶与大孔吸附树脂的质量比为1：1.6，用1000mL水洗杂质，用765mL体积浓度为30%的乙醇洗脱，洗脱流速为1BV/h，得到馏分Ⅰ，用700mL体积浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱流速为1BV/h，得到馏分Ⅱ。
（3）沉淀分离
将馏分Ⅰ50℃减压浓缩回收乙醇，得馏分Ⅰ浓缩液60mL，室温静置至沉淀物与水层分离，沉淀物为0.295g芦丁粗品，水层为70mL连翘酯苷A粗提液，用水饱和的正丁醇萃取2次，回收正丁醇，余液在50℃烘箱干燥，得到4.453g连翘酯苷A粗品；将馏分Ⅱ50℃减压浓缩回收乙醇，得馏分Ⅱ浓缩液100mL，室温静置，分离沉淀得到0.919g连翘苷粗品。
（4）纯化
将0.919g连翘苷粗品和0.295g芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶3次，干燥，得到纯度95%的0.160g连翘苷和93%的0.182g芦丁；将4.453g连翘酯苷A粗品用8cm（直径）×50cm（柱高）的C18反相硅胶柱层析分离，用体积浓度为30%的甲醇溶解粗品，用3倍反相硅胶柱柱床体积的浓度为30%的甲醇平衡，用体积浓度为40%的甲醇洗脱，经薄层层析法确定，当洗脱到7000mL时开始收集连翘酯苷A洗脱峰，收集体积为3145mL，38℃减压浓缩回收甲醇，余液冷冻干燥，得2.261g纯度为93%的连翘酯苷A。
实施例3
以原料连翘叶40g为例，从连翘叶中连续提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法，由以下步骤组成：
（1）提取
将40g连翘叶粉碎至50目，用1600mL体积浓度为55%的乙醇70℃浸提50分钟，连翘叶与乙醇的料液比为1﹕40g/mL，过滤，滤渣再加入600mL体积浓度为55%的乙醇70℃浸提50分钟，合并2次的浸提液，静置12小时，过滤，55℃减压浓缩回收乙醇，得浓缩液，按照每100mL浓缩液中添加5mL无水乙醇的量向浓缩液中加入无水乙醇，室温静置12小时，过滤，得到连翘叶提取液。
（2）树脂分离
将连翘叶提取液通过2.6cm（直径）×25cm（柱高）的AB-8大孔吸附树脂柱吸附，连翘叶与大孔吸附树脂的质量比为1﹕2，用1000mL水洗杂质，用780mL体积浓度为30%的乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，得到馏分Ⅰ，用780mL体积浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，得到馏分Ⅱ。
（3）沉淀分离
将馏分Ⅰ50℃减压浓缩回收乙醇，得馏分Ⅰ浓缩液70mL，室温静置至沉淀物与水层分离，沉淀物为0.319g芦丁粗品，水层为70mL连翘酯苷A粗提液，用水饱和的正丁醇萃取2次，回收正丁醇，余液在50℃烘箱干燥，得到4.528g连翘酯苷A粗品；将馏分Ⅱ50℃减压浓缩回收乙醇，得馏分Ⅱ浓缩液70mL，室温静置，分离沉淀得到0.984g连翘苷粗品。
（4）纯化
将0.984g连翘苷粗品和0.319g芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶3次，干燥，得到纯度95%的0.168g连翘苷和93%的0.181g芦丁；将4.528g连翘酯苷A粗品用8cm（直径）×50cm（柱高）的C18反相硅胶柱层析分离，用体积浓度为30%的甲醇溶解粗品，用3倍反相硅胶柱柱床体积的浓度为30%的甲醇平衡，用体积浓度为40%的甲醇洗脱，经薄层层析法确定，当洗脱到7000mL时开始收集连翘酯苷A洗脱峰，收集体积为3280mL，38℃减压浓缩回收甲醇，余液冷冻干燥，得2.304g纯度为92%的连翘酯苷A。
实施例4
以原料连翘叶40g为例，从连翘叶中连续提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法，由以下步骤组成：
（1）提取
将40g连翘叶粉碎至50目，用800mL体积浓度为55%的乙醇70℃浸提50分钟，连翘叶与乙醇的料液比为1﹕20g/mL，过滤，滤渣再加入800mL体积浓度为55%的乙醇70℃浸提50分钟，合并2次的浸提液，静置12小时，过滤，55℃减压浓缩回收乙醇，得浓缩液，按照每100mL浓缩液中添加5mL无水乙醇的量向浓缩液中加入无水乙醇，室温静置12小时，过滤，得到连翘叶提取液。
其它的步骤与实施例1相同，连续提取出连翘苷、芦丁、连翘酯苷A。
实施例5
以原料连翘叶40g为例，从连翘叶中连续提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法，由以下步骤组成：
（1）提取
将40g连翘叶粉碎至50目，用600mL体积浓度为55%的乙醇70℃浸提50分钟，连翘叶与乙醇的料液比为1﹕15g/mL，过滤，滤渣再加入600mL体积浓度为55%的乙醇70℃浸提50分钟，合并2次的浸提液，静置12小时，过滤，55℃减压浓缩回收乙醇，得浓缩液，按照每100mL浓缩液中添加5mL无水乙醇的量向浓缩液中加入无水乙醇，室温静置12小时，过滤，得到连翘叶提取液。
其它的步骤与实施例1相同，连续提取出连翘苷、芦丁、连翘酯苷A。
实施例6
在上述实施例1～5的从连翘叶中连续提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法中，在步骤（1）中，将连翘叶粉碎至40目，60℃用体积浓度为55%的乙醇浸提60分钟，提取3次，合并浸提液，静置，过滤，50℃减压浓缩回收乙醇，按照每100mL浓缩液中添加4mL的量向浓缩液中添加无水乙醇，室温静置，过滤，得到连翘叶提取液。在步骤（2）中，将连翘叶提取液用大孔吸附树脂吸附，水洗杂质，用体积浓度为30%的乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，得到馏分Ⅰ，用体积浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，得到馏分Ⅱ。在步骤（3）中，将馏分Ⅰ减压浓缩回收乙醇，室温静置至沉淀物与水分离，得到沉淀物为芦丁粗品，水层为连翘酯苷A粗提液，用水饱和的正丁醇萃取1次，回收正丁醇，余液干燥，得到连翘酯苷A粗品；将馏分Ⅱ减压浓缩回收乙醇，室温静置，分离沉淀，得到连翘苷粗品。在步骤（4）中，将连翘苷粗品和芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶2次，干燥，分别得到连翘苷和芦丁；将连翘酯苷A粗品用体积浓度为30%的甲醇溶解，用C18反相硅胶柱层析分离，3倍反相硅胶柱柱床体积的浓度为30%的甲醇平衡，体积浓度为40%的甲醇洗脱，35℃减压浓缩回收甲醇，余液冷冻干燥，得连翘酯苷A。其它的操作与相应的实施例相同。
实施例7
在上述实施例1～5的从连翘叶中连续提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法中，在步骤（1）中，将连翘叶粉碎至60目，75℃用体积浓度为55%的乙醇浸提40分钟，提取3次，合并浸提液，静置，过滤，60℃减压浓缩回收乙醇，按照每100mL浓缩液中添加4mL的量向浓缩液中添加无水乙醇，室温静置，过滤，得到连翘叶提取液。在步骤（2）中，将连翘叶提取液用大孔吸附树脂吸附，水洗杂质，用体积浓度为30%的乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，得到馏分Ⅰ，用体积浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h，得到馏分Ⅱ。在步骤（3）中，将馏分Ⅰ减压浓缩回收乙醇，室温静置至沉淀物与水分离，得到沉淀物为芦丁粗品，水层为连翘酯苷A粗提液，用水饱和的正丁醇萃取3次，回收正丁醇，余液干燥，得到连翘酯苷A粗品；将馏分Ⅱ减压浓缩回收乙醇，室温静置，分离沉淀，得到连翘苷粗品。在步骤（4）中，将连翘苷粗品和芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶4次，干燥，分别得到连翘苷和芦丁；将连翘酯苷A粗品用体积浓度为30%的甲醇溶解，用C18反相硅胶柱层析分离，3倍反相硅胶柱柱床体积的浓度为30%的甲醇平衡，体积浓度为40%的甲醇洗脱，40℃减压浓缩回收甲醇，余液冷冻干燥，得连翘酯苷A。其它的操作与相应的实施例相同。
实施例8
在上述的实施例1～7的从连翘叶中连续提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法中，在步骤（1）中，按照每100mL浓缩液中添加3mL的量向浓缩液中添加无水乙醇，室温静置，过滤，其它的操作与相应的实施例相同，得到连翘叶提取液。其它的步骤与相应的实施例相同，分别提取出连翘苷、连翘酯苷A和芦丁。
实施例9
在上述的实施例1～7的从连翘叶中连续提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法中，在步骤（1）中，按照每100mL浓缩液中添加6mL的量向浓缩液中添加无水乙醇，室温静置，过滤，其它的操作与相应的实施例相同，得到连翘叶提取液。其它的步骤与相应的实施例相同，分别提取出连翘苷、连翘酯苷A和芦丁。
实施例10
在上述的实施例1～7的从连翘叶中连续提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法中，在步骤（2）中所用的AB-8大孔吸附树脂可以用型号为D101的大孔吸附树脂来替换。其它的操作与相应的实施例相同。
为了进一步确定本发明所提取分离的产物就是连翘酯苷A、连翘苷和芦丁，发明人将实施例1所提取的产物与标准制品通过高效液相色谱法（HPLC）进行检测，具体结果如下：
1、色谱条件：大连依利特色谱柱Hypersil BDS C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为甲醇（A）-水（含0.2%冰醋酸）（B），梯度洗脱：0～3分钟，32%A；3～25分钟，32%～55%A；25～30分钟，55%A，测定波长235nm，流速lmL/min，柱温30℃，进样量10μl。
2、标准对照品溶液的制备：精密称取连翘酯苷A标准品、芦丁标准品和连翘苷标准品，适量，加适量50%甲醇，分别制成每1mL含连翘酯苷A0.2mg、芦丁0.1mg和连翘苷0.24mg的溶液。
3、发明产物溶液的制备：精密吸取一定量制备所得的最终产物的置于容量瓶中，用50%甲醇定容，再经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液待用。
先将制备好的连翘酯苷A、芦丁和连翘苷标准对照品溶液取等量混合后通过色谱分析，再将各个发明产物溶液分别通过色谱分析，色谱峰的理论板数按连翘酯苷峰计算在5000以上，结果见色谱图1。
由图1可知，按照本实验的色谱条件，标准品混合样中的连翘酯苷A、芦丁和连翘苷能够得到很好的分离，见洗脱曲线1。与洗脱曲线1相比较，实施例1所提取的连翘酯苷A（洗脱曲线2）、芦丁（洗脱曲线3）和连翘苷（洗脱曲线4）的纯度很高，连翘酯苷A的相对含量为93%，芦丁的相对含量为94%，连翘苷的相对含量为95%。
再将制备好的连翘酯苷A、芦丁和连翘苷标准对照品溶液与实施例1提取的连翘酯苷A、芦丁和连翘苷分别通过紫外扫描进行比对，扫描结果分别见图2、图3和图4。
由图2可见，连翘酯苷A标准对照品的紫外扫描图曲线（曲线1）和实施例1的连翘酯苷A制品的紫外扫描图曲线（曲线2）峰形和吸收峰波长完全吻合，进一步说明发明制品确为连翘酯苷A。由图3可见，芦丁的标准对照品紫外扫描图曲线（曲线1）和实施例1提取的芦丁制品的紫外扫描图曲线（曲线2）峰形和吸收峰波长完全吻合，进一步说明发明制品确为芦丁。由图4可见，连翘苷标准对照品的紫外扫描图曲线（曲线1）和实施例1提取的连翘苷制品的紫外扫描图曲线（曲线2）峰形和吸收峰波长完全吻合，进一步说明发明制品确为连翘苷。
Claims (2)
1.一种从连翘叶中复合提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法，其特征在于该方法由以下步骤组成：
(1)提取
将连翘叶粉碎至40～60目，60～75℃用体积浓度为55％的乙醇浸提40～60分钟，每1g连翘叶对应添加20～30mL的乙醇，提取2～3次，合并浸提液，静置，过滤，50～60℃减压浓缩回收乙醇，按照每100mL浓缩液中添加4～5mL的量向浓缩液中添加无水乙醇，室温静置，过滤，得到连翘叶提取液；
(2)树脂分离
将连翘叶提取液用大孔吸附树脂吸附，连翘叶与大孔吸附树脂的质量比为1：1.8，水洗杂质，用体积浓度为30％的乙醇洗脱，洗脱流速为1～3BV/h，洗脱体积为5～8BV，得到馏分Ⅰ，用体积浓度为50％的乙醇洗脱，洗脱流速为1～3BV/h，洗脱体积为5～8BV，得到馏分Ⅱ；
(3)沉淀分离
将馏分Ⅰ减压浓缩回收乙醇，室温静置至沉淀物与水分离，得到沉淀物为芦丁粗品，水层为连翘酯苷A粗提液，用水饱和的正丁醇萃取1～3次，回收正丁醇，余液干燥，得到连翘酯苷A粗品；将馏分Ⅱ减压浓缩回收乙醇，室温静置，分离沉淀，得到连翘苷粗品；
(4)纯化
将步骤(3)中所得的连翘苷粗品和芦丁粗品分别用无水乙醇重结晶2～4次，干燥，分别得到连翘苷和芦丁；将连翘酯苷A粗品用体积浓度为30％的甲醇溶解，用C18反相硅胶柱层析分离，3倍柱床体积的浓度为30％的甲醇平衡，体积浓度为40％的甲醇洗脱，35～40℃减压浓缩回收甲醇，冷冻干燥，得连翘酯苷A。
2.根据权利要求1所述的从连翘叶中连续提取连翘苷、连翘酯苷A和芦丁的方法，其特征在于：所述大孔吸附树脂的型号是AB-8或D101。
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