CN112457282A - 一种制备2`-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮的方法 - Google Patents

一种制备2`-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种制备2'‑羟基‑7‑(3‑羟丙基)‑6‑甲氧基‑黄酮的方法，步骤如下：S1，提取物粗品的制备：将山楂粉碎用乙醇水溶液热回流提取，浓缩后上样于大孔吸附树脂层析柱中，依次用25％乙醇、70％乙醇进行洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩得提取物粗品；S2，提取物粗品HSCCC分离：以体积比为3:5:3:5的环己烷/乙酸乙酯/甲醇/水为溶剂系统，以上相为固定相，下相为流动相，主机转速为850r/min，流动相流速为2mL/min，注入提取物粗品的溶液进行分离，收集125min～140min洗脱液，减压浓缩至干即得。该方法步骤简单。

Description

一种制备2’-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮的方法
技术领域
本发明属于化学领域，具体涉及一种制备2’-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮的方法。
背景技术
2’-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮是一种最早从山楂中分离得到的黄酮类化合物(山楂中一个具有抗菌活性的黄酮类新化合物，天然产物研究与开发，2018年)，其化学结构如下。
Figure BDA0002819296060000011
在上述文献中，2’-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮的分离纯化方法极为繁琐，需要借助于有机溶剂萃取、MCI微孔树脂、反复硅胶柱层析、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析等多种技术手段，步骤非常繁琐，难以推广使用。
高速逆流色谱是一种连续高效的液-液分配色谱技术。由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在互不相溶的两相液体中的分配系数的差异而实现，因而避免了固体固定相不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等问题，样品回收率高，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然产物中有效成分的分离。
发明内容
本发明旨在提供一种制备2’-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮的方法。
实现本发明目的的技术方案为：
一种制备2’-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮的方法，步骤如下：
S1，提取物粗品的制备：取干燥的山楂，粉碎，加入乙醇水溶液，热回流提取，过滤，减压浓缩至无醇味，得大孔树脂上样液；将上样液湿法上样于大孔吸附树脂层析柱中，依次用25％乙醇、70％乙醇进行洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至干，得提取物粗品；
S2，提取物粗品HSCCC分离：以体积比为3:5:3:5的环己烷/乙酸乙酯/甲醇/水为溶剂系统，按照比例配制，充分混匀后在常温下静置，将上相、下相分开，超声脱气；以上相为固定相，下相为流动相，先将固定相泵入HSCCC的分离管中，待上相充满整个分离管后，调节主机的转速为850r/min，待转速稳定后，以2mL/min的流速泵入流动相。待两相平衡后，取用流动相溶解的提取物粗品溶液注入HSCCC，同时开始记录色谱图，收集125min～140min洗脱液，减压浓缩至干即得。
优选地，热回流提取的溶剂为70％乙醇水溶液。
优选地，热回流提取步骤中料液比为1kg/5L。
优选地，热回流提取步骤中提取3次，每次2h。
优选地，大孔树脂优选D101大孔吸附树脂。
优选地，大孔吸附树脂层析柱的径高比为1:5。
优选地，25％乙醇、70％乙醇洗脱体积均为10BV。
优选地，HSCCC分离的紫外检测波长为254nm。
优选地，HSCCC分离温度为30℃。
有益效果：
本发明提供的方法借助于D101大孔吸附树脂—高速逆流色谱即可从山楂中分离得到高纯度的2’-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮，比现有技术步骤简单，优于现有技术。
附图说明
图1为高速逆流色谱图；
图2为HPLC色谱图。
具体实施方式
一、仪器和试剂
TBE-300B型高速逆流色谱仪为上海同田生物技术有限公司产品。
Agilent-1260型高效液相色谱仪为安捷伦公司产品。
色谱柱Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)为迪马科技产品。
D101大孔吸附树脂购自天津波鸿树脂科技有限公司，按常规方法活化后备用。
高速逆流所用有机溶剂均为常规的分析纯溶剂，高效液相色谱所用有机溶剂均为常规的色谱纯溶剂，水为去离子水。
2’-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮对照品按照文献方法自制，纯度99.5％。
二、方法和结果
1、提取物粗品的制备
取干燥的山楂，粉碎过40目筛，按照料液比1kg/5L加入70％乙醇水溶液，热回流提取2h，重复提取2次，合并3次提取液，过滤，减压浓缩至无醇味，得大孔树脂上样液。
将上样液湿法上样加入到径高比为1:5的D101大孔吸附树脂层析柱中，上样流速为1BV/h，依次用10BV 25％乙醇、10BV 70％乙醇进行洗脱，洗脱流速为3BV/h，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至干，得提取物粗品。
2、提取物粗品HSCCC分离
以体积比为3:5:3:5的环己烷/乙酸乙酯/甲醇/水为溶剂系统，按照比例配制，充分混匀后在常温下静置12h，将上相、下相分开，超声脱气30min备用。
以上相为固定相，下相为流动相，先将固定相泵入HSCCC的分离管中，待上相充满整个分离管后，调节主机的转速为850r/min，待转速稳定后，以2mL/min的流速泵入流动相。待两相平衡后，取10mL用流动相溶解的、浓度为30mg/mL的提取物粗品溶液注入HSCCC，同时开始记录色谱图，紫外检测波长为254nm，分离温度为30℃。
根据HSCCC色谱图(如图1所示)收集125min～140min洗脱液，减压浓缩至干，得2’-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮。mp.238℃；HR-ESI-MS m/z:349.1087[M+Na]+，根据HR-ESI-MS确定分子式为C19H18O5。13C NMR(CDCl3,125MHz)δppm:162.6(s,C-2),106.4(d,C-3),177.2(s,C-4),113.5(d,C-5),152.8(s,C-6),130.2(s,C-7),116.4(d,C-8),149.5(s,C-9),122.6(s,C-10),119.2(s,C-1’),158.5(s,C-2’),116.5(d,C-3’),131.2(d,C-4’),121.4(d,C-5’),128.6(d,C-6’),28.6(t,C-1”),37.5(t,C-2”),63.3(t,C-3”),56.1(q,-OMe).
使用HPLC测定2’-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮的纯度，HPLC色谱条件如下：
色谱仪：Agilent-1260型高效液相色谱仪
色谱柱：Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)；
流动相：乙腈(A)-0.1％甲酸水(B)，二元梯度洗脱(0～60min，5％A→100％A)；
流速：1.0mL/min；
检测波长：254nm；
柱温：30℃；
进样量：10μL。供试品溶液为HSCCC制备的2’-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮，浓度为1mg/mL；对照品溶液为2’-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮对照品，浓度为0.1mg/mL。
HPLC色谱图如图2所示，供试品溶液与对照品溶液于相同保留时间出峰，基本未见杂质峰，HPLC归一化纯度99.2％。
上述方法仅借助于D101大孔吸附树脂—高速逆流色谱即可从山楂中分离得到高纯度的2’-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮，比现有技术步骤简单，优于现有技术。

Claims (9)

1.一种制备2'-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮的方法，其特征在于，步骤如下：
S1，提取物粗品的制备：取干燥的山楂，粉碎，加入乙醇水溶液，热回流提取，过滤，减压浓缩至无醇味，得大孔树脂上样液；将上样液湿法上样于大孔吸附树脂层析柱中，依次用25％乙醇、70％乙醇进行洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至干，得提取物粗品；
S2，提取物粗品HSCCC分离：以体积比为3:5:3:5的环己烷/乙酸乙酯/甲醇/水为溶剂系统，按照比例配制，充分混匀后在常温下静置，将上相、下相分开，超声脱气；以上相为固定相，下相为流动相，先将固定相泵入HSCCC的分离管中，待上相充满整个分离管后，调节主机的转速为850r/min，待转速稳定后，以2mL/min的流速泵入流动相。待两相平衡后，取用流动相溶解的提取物粗品溶液注入HSCCC，同时开始记录色谱图，收集125min～140min洗脱液，减压浓缩至干即得。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：热回流提取的溶剂为70％乙醇水溶液。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：热回流提取步骤中料液比为1kg/5L。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：热回流提取步骤中提取3次，每次2h。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：大孔树脂优选D101大孔吸附树脂。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：大孔吸附树脂层析柱的径高比为1:5。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：25％乙醇、70％乙醇洗脱体积均为10BV。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：HSCCC分离的紫外检测波长为254nm。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：HSCCC分离温度为30℃。
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