CN109001336A

CN109001336A - 秦皮配方颗粒特征图谱、其建立方法以及质量检测方法

Info

Publication number: CN109001336A
Application number: CN201811099819.2A
Authority: CN
Inventors: 方同华; 韩冰; 周艳谋; 江敏; 贾文娟
Original assignee: HEILONGJIANG ZBD PHARMACEUTICAL CO Ltd; HAERBIN ZHENBAO PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: HEILONGJIANG ZBD PHARMACEUTICAL CO Ltd; HAERBIN ZHENBAO PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2018-09-20
Filing date: 2018-09-20
Publication date: 2018-12-14

Abstract

本发明涉及药品检测技术领域，提供了一种秦皮配方颗粒特征图谱、其建立方法以及质量检测方法。该建立方法包括：取秦皮甲素对照品和秦皮乙素对照品配制成对照品溶液；取秦皮配方颗粒配制成供试品溶液；用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试品溶液，色谱条件为：选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲醇为流动相A，以磷酸溶液为流动相B，分别对对照品溶液和供试品溶液进行梯度洗脱，并且在梯度洗脱的过程中控制甲醇的体积，使得流动相A的体积占流动相总量的百分比由13％‑17％增加至78％‑82％，接着降低至13％‑17％。其能够建立并提供一种简单可靠的秦皮配方颗粒特征图谱的检测方法，全面的控制成品质量。

Description

秦皮配方颗粒特征图谱、其建立方法以及质量检测方法

技术领域

本发明涉及药品检测技术领域，具体而言，涉及一种秦皮配方颗粒特征图谱、其建立方法以及质量检测方法。

背景技术

秦皮，中药名。为木犀科植物苦枥白蜡树、白蜡树、尖叶白蜡树或宿柱白蜡树的干燥枝皮或干皮。秦皮配方颗粒中含量指示性成分为秦皮甲素和秦皮乙素，药典中秦皮药材和饮片均是检测二者含量，无特征图谱或指纹图谱的相关标准，但由于中药配方颗粒已经不具备饮片性状鉴别的特征，但是，对于秦皮配方颗粒的定性检测目前还是一个空白，如何提高秦皮配方颗粒的检测标准，全面的控制成品质量是本发明需要解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法，其能够建立并提供一种简单可靠的秦皮配方颗粒特征图谱的检测方法，提高检测标准，全面的控制成品质量。

本发明的另一目的在于提供一种秦皮配方颗粒特征图谱，其能够一次测定多个指标成分，可以比较全面的反映成分的种类和数量，反映制剂的一致性、稳定性，从而综合的在整体上反映成品的质量。

本发明的另一目的在于提供一种秦皮配方颗粒的质量检测方法，该检测方法简单可靠，使待测秦皮配方颗粒的主要成分在特征图谱中尽可能得到指认，达到有效质控的目的。

本发明的实施例是这样实现的：

一种秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法，其包括：取秦皮甲素对照品和秦皮乙素对照品配制成对照品溶液；取秦皮配方颗粒配制成供试品溶液；用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试品溶液，色谱条件为：选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲醇为流动相A，以磷酸溶液为流动相B，分别对对照品溶液和供试品溶液进行梯度洗脱，并且在梯度洗脱的过程中控制甲醇的体积，使得流动相A 的体积占流动相总量的百分比由13％-17％增加至78％-82％，接着降低至13％-17％。

一种秦皮配方颗粒特征图谱，其是由上述秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法检测构建而成。

一种秦皮配方颗粒特征图谱，其包括7个特征峰，1号峰为秦皮甲素峰，2号峰为秦皮乙素峰，以1号峰为参照峰，各特征峰的相对保留时间为：1号峰：相对保留时间为1.00；2号峰：相对保留时间为1.72；3号峰：相对保留时间为2.05；4号峰：相对保留时间为2.45； 5号峰：相对保留时间为3.51；6号峰：相对保留时间为3.59；7号峰：相对保留时间为3.67，相对保留时间应在规定值的±3％以内。

一种秦皮配方颗粒的质量检测方法，将待测秦皮配方颗粒的 HPLC特征图谱与上述秦皮配方颗粒特征图谱进行比较，与秦皮配方颗粒特征图谱中的7个特征峰相对应，且1号峰与对照品参照物峰保留时间相一致。

本发明实施例的有益效果例如包括：

本发明实施例提供的秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法，其建立的特征图谱系统地反映了秦皮配方颗粒的化学成分全貌，共有峰相对保留时间较为稳定，并且该检测方法精密度高、重复性好、稳定性好，可为评价或控制秦皮配方颗粒的质量提供依据。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实施例1提供的3批次秦皮配方颗粒供试品的高效液相特征图谱；

图2为本发明实施例1建立的秦皮配方颗粒的标准图谱；

图3为本发明实施例1提供的重复性实验的第一次进样的高效液相特征图谱；

图4为本发明实施例1提供的重复性实验的第二次进样的高效液相特征图谱；

图5为本发明实施例1提供的重复性实验的第三次进样的高效液相特征图谱；

图6为本发明实施例1提供的重复性实验的第四次进样的高效液相特征图谱；

图7为本发明实施例1提供的重复性实验的第五次进样的高效液相特征图谱；

图8为本发明试验例3提供的洗脱参数的选择实验的高效液相特征图谱。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的秦皮配方颗粒特征图谱、其建立方法以及质量检测方法进行具体说明。

本发明实施例采用的主要实验仪器、试药和样品信息见表1。

表1主要实验仪器、试药及样品信息表

本发明实施例提供的秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法包括以下步骤：

S1、配制对照品溶液

取秦皮甲素对照品和秦皮乙素对照品配制成对照品溶液。具体地，取秦皮甲素对照品、秦皮乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含秦皮甲素0.05-0.15mg，秦皮乙素15-25μg的混合溶液，即得。

S2、配制供试品溶液

取秦皮配方颗粒配制成供试品溶液。具体地，取秦皮配方颗粒约 0.15g，精密称定，置25ml量瓶中，加60～80Vol％甲醇适量作为提取溶剂，超声提取20-40min后放冷，加60～80Vol％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

优选地，甲醇的体积百分数例如为60％、65％、70％、75％和80％中的一者或任意两者之间的范围值，超声提取的时间例如为20、25、 30、35和40中的一者或任意两者之间的范围值。

S3、高效液相色谱分析

用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。

其中，色谱条件为：选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲醇为流动相A，以磷酸溶液为流动相B，分别对对照品溶液和供试品溶液进行梯度洗脱，并且在梯度洗脱的过程中控制甲醇的体积，使得流动相A的体积占流动相总量的百分比由13％-17％增加至 78％-82％，接着降低至13％-17％。

优选地，色谱条件还包括：检测波长330～340nm，检测波长优选为334nm。流速0.8～1.2mL/min，流速优选为0.9～1.1mL/min，更优选为1mL/min。柱温25～35℃。色谱柱的理论板数按秦皮乙素峰计算应不低于5000。

在梯度洗脱对照品和供试品时：

t＝0min～15min时，流动相A为13％-17％，流动相B为83％-87％；

t＝15min～30min时，流动相A为13％-17％→23％-27％，流动相 B为83％-87％→73％-77％；

t＝30min～45min时，流动相A为23％-27％→38％-42％，流动相 B为73％-77％→58％-62％；

t＝45min～50min时，流动相A为38％-42％→58％-62％，流动相 B为58％-62％→38％-42％；

t＝50min～55min时，流动相A为58％-62％→78％-82％，流动相B为38％-42％→18％-22％；

t＝55min～60min时，流动相A为78％-82％→13％-17％，流动相 B为18％-22％→83％-87％；

t＝60min～60min时，流动相A为13％-17％，流动相B为83％-87％。

优选地，在梯度洗脱对照品和供试品时：

t＝0min～15min时，流动相A为15％，流动相B为85％；

t＝15min～30min时，流动相A为15％→25％，流动相B为85％→75％；

t＝30min～45min时，流动相A为25％→40％，流动相B为75％→60％；

t＝45min～50min时，流动相A为40％→60％，流动相B为60％→40％；

t＝50min～55min时，流动相A为60％→80％，流动相B为40％→20％；

t＝55min～60min时，流动相A为80％→15％，流动相B为20％→85％；

t＝60min～60min时，流动相A为15％，流动相B为85％。

需要说明的是，t＝0min～15min，本实施例中，表示为t＝[0，15)，其中，t为时间范围值，也即是，该时间段的最小值可取端点值，而最大值不包含t＝15这一端点值，以下梯度的时间范围相同，这里不再赘述。

此外，本发明实施例还提供了一种秦皮配方颗粒特征图谱，其是由上述的秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法检测构建而成。

该秦皮配方颗粒特征图谱包括7个特征峰，各特征峰的保留时间为：1号峰为秦皮甲素峰，2号峰为秦皮乙素峰；

以1号峰为参照峰，各特征峰的相对保留时间为：1号峰：相对保留时间为1.00；2号峰：相对保留时间为1.72；3号峰：相对保留时间为2.05；4号峰：相对保留时间为2.45；5号峰：相对保留时间为3.51；6号峰：相对保留时间为3.59；7号峰：相对保留时间为3.67，相对保留时间应在规定值的±3％以内。

此外，本发明实施例提供的秦皮配方颗粒的质量检测方法，其包括将待测秦皮配方颗粒的HPLC特征图谱与上述秦皮配方颗粒特征图谱进行比较，与秦皮配方颗粒特征图谱中的7个特征峰相对应，且 1号峰与对照品参照物峰保留时间相一致。

具体地：按照本发明实施的检测方法建立待测秦皮配方颗粒样品的HPLC特征图谱。将待检测的颗粒样品按照本发明实施例的检测方法进行检测，获得液相图谱。将待检测的颗粒样品的特征图谱与标准图谱进行对比，通过图谱中的色谱峰出峰时间、各个特征峰的相对保留时间等参数来评价或控制秦皮配方颗粒的各个节点的产品的质量。

以下结合实施例对本发明的秦皮配方颗粒特征图谱、其建立方法以及质量检测方法进一步进行阐述。

实施例1

本实施例中提供了一种秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法，其包括以下步骤：

S1、配制对照品溶液

取秦皮甲素对照品、秦皮乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含秦皮甲素0.1mg，秦皮乙素20μg的混合溶液，即得。

S2、配制供试品溶液

取秦皮配方颗粒约0.15g，精密称定，置25ml量瓶中，加70Vol％甲醇适量作为提取溶剂，超声提取30min后放冷，加70Vol％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

S3、高效液相色谱分析

本实施例的特征图谱是按照高效液相色谱法(《中国药典》2015 年版四部通则0512)测定的。

色谱条件：选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以流动相A：甲醇，流动相B：0.1％磷酸溶液(V/V，体积比)，按下表2 进行梯度洗脱，流速1.0ml/min，检测波长为334nm，柱温30℃。理论板数按秦皮乙素峰计算应不低于5000。

表2.实施例1的洗脱参数

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，获得秦皮配方颗粒的特征图谱，利用对照品的测定结果，对秦皮配方颗粒的特征图谱的特征峰进行指认，其中，1号峰为秦皮甲素峰，2号峰为秦皮乙素峰。

S4、构建秦皮配方颗粒的特征图谱

取秦皮配方颗粒3批(S20170601、S20170602和S20170603)，按照上述方法进行测定，得到3批次样品HPLC特征图谱，如图1 所示。其中，参照峰为1号峰(秦皮甲素峰)。

以1号峰(秦皮甲素)为参照峰，各特征峰的相对保留时间为： 1号峰：相对保留时间为1.00；2号峰：相对保留时间为1.72；3号峰：相对保留时间为2.05；4号峰：相对保留时间为2.45；5号峰：相对保留时间为3.51；6号峰：相对保留时间为3.59；7号峰：相对保留时间为3.67，相对保留时间应在规定值的±3％以内。

S5、秦皮配方颗粒的质量检测方法

将待测秦皮配方颗粒按实施例1的条件进行测定，得到待测秦皮配方颗粒的HPLC特征图谱，与上述秦皮配方颗粒特征图谱进行比较，与秦皮配方颗粒特征图谱中的7个特征峰相对应，且1号峰与对照品参照物峰保留时间相一致。采用中药色谱指纹图谱相似度评价对待测秦皮配方颗粒特征图谱与对照特征图谱进行分析，相似度大于 0.90为合格产品。

实施例2-5

实施例2-5与实施例1基本相同，区别点在于，洗脱参数不同。

实施例2的洗脱参数请参阅表3：

表3.实施例2的洗脱参数

实施例3的洗脱参数请参阅表4：

表4.实施例3的洗脱参数

实施例4的洗脱参数请参阅表5：

表5.实施例4的洗脱参数

实施例5的洗脱参数请参阅表6：

表6实施例5的洗脱参数

实施例6-8

实施例6-8与实施例1基本相同，区别点在于，对照品溶液中秦皮甲素和秦皮乙素的含量不同：

实施例6中，每1ml对照品溶液中含有秦皮甲素0.05mg，秦皮乙素15μg。

实施例7中，每1ml对照品溶液中含有秦皮甲素0.12mg，秦皮乙素21μg。

实施例8中，每1ml对照品溶液中含有秦皮甲素0.15mg，秦皮乙素25μg。

实施例9-11

实施例9-11与实施例1基本相同，区别点在于，检测波长不同。实施例9中，检测波长为330nm；实施例10中，检测波长为335nm；实施例11中，检测波长为339nm。

实施例12-13

实施例12-13与实施例1基本相同，区别点在于，流动相的流速不同。实施例12中，流动相的流速为0.8mL/min；实施例13中，流动相的流速为1.2mL/min。

试验例1：重复性试验。

取秦皮配方颗粒(批号：S20170601)，按实施例1中的S2步骤配制成供试品溶液6份，按照实施例1提供的检测方法进行色谱分析，进样体积10μl，记录60min内的特征图谱，请参阅图2-图7，检测结果见表7。

表7重复性试验的特征峰相对保留时间比值

如表7所记录的结果，所得各特征峰的相对保留时间RSD均小于0.1％，说明本发明实施例的检测方法重复性好。

试验例2：耐用性试验。

3.1改变色谱柱的柱温

将实施例1中的色谱条件中色谱柱的柱温30℃改变为25℃和 35℃，分别进行色谱分析。

3.2改变流动相的速度

将实施例1中的色谱条件中色谱柱的流动相的流速为1ml/min改变为0.9ml/min和1.1ml/min，分别进行色谱分析。

结果各特征峰均能有效分离，表明本方法对不同柱温及不同流速的流动相的耐用性良好。

试验例3：洗脱参数的选择实验

对比例1：对比例1与实施例1基本相同，区别点在于：洗脱参数不同，对比例1的洗脱参数请参阅表8。获得的色谱图请参阅图8。

表8对比例1的洗脱参数

从图8可以明显看出，按照对比例1提供的洗脱参数进行洗脱，洗脱效果差，尤其是后面峰堆积，不能有效分离。

综上所述，本发明的秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法，其建立的特征图谱系统地反映了秦皮配方颗粒的化学成分全貌，共有峰相对保留时间较为稳定，并且该检测方法精密度高、重复性好、稳定性好，可为评价或控制秦皮配方颗粒的质量提供依据。通过此特征图谱方法的检测可以区分不同品质的秦皮配方颗粒，提高了中药配方颗粒的质量控制手段，达到有效质控的目的。

以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法，其特征在于，其包括：

取秦皮甲素对照品和秦皮乙素对照品配制成对照品溶液；

取秦皮配方颗粒配制成供试品溶液；

用高效液相色谱法测定所述对照品溶液和所述供试品溶液，色谱条件为：选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲醇为流动相A，以磷酸溶液为流动相B，分别对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行梯度洗脱，并且在所述梯度洗脱的过程中控制所述甲醇的体积，使得所述流动相A的体积占流动相总量的百分比由13％-17％增加至78％-82％，接着降低至13％-17％。

2.根据权利要求1所述的秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法，其特征在于，在梯度洗脱所述对照品和所述供试品时：

t＝0min～15min时，所述流动相A为13％-17％，所述流动相B为83％-87％；

t＝15min～30min时，所述流动相A为13％-17％→23％-27％，所述流动相B为83％-87％→73％-77％；

t＝30min～45min时，所述流动相A为23％-27％→38％-42％，所述流动相B为73％-77％→58％-62％；

t＝45min～50min时，所述流动相A为38％-42％→58％-62％，所述流动相B为58％-62％→38％-42％；

t＝50min～55min时，所述流动相A为58％-62％→78％-82％，所述流动相B为38％-42％→18％-22％；

t＝55min～60min时，所述流动相A为78％-82％→13％-17％，所述流动相B为18％-22％→83％-87％；

t＝60min～60min时，所述流动相A为13％-17％，所述流动相B为83％-87％。

3.根据权利要求2所述的秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法，其特征在于，在梯度洗脱所述对照品和所述供试品时：

t＝0min～15min时，所述流动相A为15％，所述流动相B为85％；

t＝15min～30min时，所述流动相A为15％→25％，所述流动相B为85％→75％；

t＝30min～45min时，所述流动相A为25％→40％，所述流动相B为75％→60％；

t＝45min～50min时，所述流动相A为40％→60％，所述流动相B为60％→40％；

t＝50min～55min时，所述流动相A为60％→80％，所述流动相B为40％→20％；

t＝55min～60min时，所述流动相A为80％→15％，所述流动相B为20％→85％；

t＝60min～60min时，所述流动相A为15％，所述流动相B为85％。

4.根据权利要求1-3任一项所述的秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法，其特征在于，每1ml所述对照品溶液中含有所述秦皮甲素0.05-0.15mg，所述秦皮乙素15-25μg。

5.根据权利要求1-3任一项所述的秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备包括：取供试品，以60～80Vol％的甲醇溶液为提取溶剂，超声提取20-40min后放冷，并用60～80Vol％的甲醇溶液稀释，摇匀，滤过，取续滤液，制得所述供试品溶液。

6.根据权利要求1-3任一项所述的秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法，其特征在于，所述色谱条件还包括：检测波长330～340nm；流速0.8～1.2mL/min；柱温25～35℃。

7.根据权利要求1-3任一项所述的秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法，其特征在于，所述色谱柱的理论板数按秦皮乙素峰计算应不低于5000。

8.一种秦皮配方颗粒特征图谱，其特征在于，其是由如权利要求1-7任一项所述的秦皮配方颗粒特征图谱的建立方法检测构建而成。

9.一种秦皮配方颗粒特征图谱，其特征在于，其包括7个特征峰，1号峰为秦皮甲素峰，2号峰为秦皮乙素峰，以1号峰为参照峰，各特征峰的相对保留时间为：1号峰：相对保留时间为1.00；2号峰：相对保留时间为1.72；3号峰：相对保留时间为2.05；4号峰：相对保留时间为2.45；5号峰：相对保留时间为3.51；6号峰：相对保留时间为3.59；7号峰：相对保留时间为3.67，相对保留时间应在规定值的±3％以内。

10.一种秦皮配方颗粒的质量检测方法，其特征在于，将待测秦皮配方颗粒的HPLC特征图谱与权利要求8或9所述的秦皮配方颗粒特征图谱进行比较，与所述秦皮配方颗粒特征图谱中的7个特征峰相对应，且1号峰与对照品参照物峰保留时间相一致。