CN103694364A - 一种青钱柳多糖和黄酮同步提取分离与纯化的方法 - Google Patents
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Abstract
一种同步分离提取与纯化青钱柳中多糖和黄酮的方法，其特征是将青钱柳叶预处理后，通过用30%乙醇提取，经过调节浓缩液预处理，稀醇上样、AB-8号大孔树脂及D301强酸型阳离子交换树脂的组合串联分离、浓乙醇、0.5mol/L氨水溶液洗脱，经浓缩、冷冻干燥分别得到纯度较高的黄酮、多糖两种生物活性物质。该方法克服了面前仅能同时提取单一成分或者提取的成分杂质较高纯度低等缺点，兼顾了黄酮和多糖的含量高，并可实现黄酮与多糖进行了有效的分离纯化，可获得纯度较高的目标活性物质，具有提取率高、产物纯度，青钱柳叶的综合利用率高的特点。
Description
技术领域
本发明属于天然产物提取领域，涉及从青钱柳叶中同步提取活性物质的一种方法。
背景技术
青钱柳(Cyclocarya paliurus (Batal.) Iljinskaja) 又名青钱李、摇钱树等，系胡桃科青钱柳属植物，是中国特有的单种属植物，也是国家重点保护的濒危植物之一。青钱柳是一种高大速生乔木，奇数羽状复叶，广泛分布于江西、浙江、江苏、安徽、福建、台湾、湖北、四川、贵州等地的海拔420 ～ 2500 m 的山区、溪谷或石灰岩山地。据《中国中药志要》记载，其树皮、树叶具有清热解毒，止痛功能，可用于治疗顽癣。现代研究证实青钱柳叶具有降血糖、降血压、降血脂作用、增强机体免疫功能等作用。其主要活性成分是黄酮类和多糖类化合物。青钱柳中含有丰富的黄酮类物质，具有降血压、降血糖等作用。现代药理研究表明青钱柳多糖类同样具有降血糖作用。目前，中国专利“从青钱柳提取多糖及有效成分的方法”（申请号为200810073472.4）公开了一种从青钱柳中提取青钱柳多糖的方法。另外，中国专利“果味青钱柳多糖咀嚼片的制备方法”（申请号为201010158487.8）公开了一种青钱柳黄酮提取物制备果味青钱柳果味青钱柳咀嚼片的方法。这些提取方法主要为水或者是有机溶剂（如乙醇）直接浸提或者回流提取，提取物纯度过低，技术含量不高，并且仅仅集中于单一地提取总多糖或者总黄酮成分，在提取这些成分的同时，舍弃了其它活性成分，难以实现青钱柳资源的高效利用与产业化。但本发明专利公开的一种采用稀醇提取，经组合树脂同时提取分离青钱柳叶总黄酮及总多糖，有效避免了单一提取所带来的资源浪费，并且采用组合树脂技术对黄酮与多糖进行了有效的分离纯化，可获得纯度较高的目标活性物质，提高了青钱柳叶的综合利用率，降低了青钱柳叶深加工的成本。同时制备方法更为简便，实用，易于工业化生产。
发明内容
本发明提供一种青钱柳多糖和黄酮同步提取分离与纯化的方法。
本发明所述原料青钱柳叶作为提取青钱柳叶总黄酮、总生物碱和总多糖的原料，可以是市售青钱柳叶饮片，也可以是此植物的茎、叶、根皮等任意部位，其中优选的部位为干燥青钱柳叶。通过用乙醇提取、稀醇上样、树脂串联分离、浓乙醇洗脱，简化工艺过程，提高产品总黄酮及总多糖含量，降低成本的一种组合树脂同时纯化青钱柳叶总黄酮和总多糖的方法。
一种青钱柳多糖和黄酮同步提取分离与纯化的方法，包括如下步骤： （1）原料预处理：净选新鲜青钱柳，将原料青钱柳叶粉碎至10~40 目待用； （2）稀醇提取：第一次加入8~10倍青钱柳重量的50% 的乙醇先浸泡2 ~3 h，微沸状态下保温1 h，第二次用 4~6 倍量50% 醇微沸状态下保温1~2 h，提取两次，合并提取液； （3）回收乙醇； （4）趁热过滤：将浓缩至适当浓度的提取液过300~400 目滤袋，滤除部分杂质； （5）浓缩液预处理：浓缩液用稀氨水调节成pH值8.5后过滤； （6）组合树脂分离：将滤液通过装有AB-8号大孔树脂及D301强酸型阳离子交换树脂的2节组合高压串联树脂； （7）洗脱：先用6~10 BV（柱体积，下同）水洗脱2节串联树脂，再分别用4~6BV 70%的乙醇洗脱大孔树脂柱、0.5 mol/L 氨水洗脱离子交换柱； （8）回收：分别将乙醇、氨水洗脱液减压浓缩，得浓缩液； （9）冷冻干燥：将减压回收的浓缩液分别置经-10至-20℃冷冻、过夜后经冷冻干燥成粉末，可得含量为50%以上的总多糖及60%以上的总黄酮。
步骤（3）回收乙醇：在真空度0.09MPa、50℃~70℃下蒸发浓缩，将提取液浓缩至0.05~0.1 g/mL 浓度，回收浸提液中的有机溶剂。
步骤（8）回收：分别将乙醇、氨水洗脱液在真空度0.09MPa、50℃~70℃下蒸发浓缩，得浓缩液。
本发明的有益效果是：
（1）一步法提取出多糖及黄酮，效率高；
（2）提取过程简单，适合工业化生产；可得含量为50%以上的总多糖及60%以上的总黄酮；
（3）本发明根据青钱柳的特点，上柱前调节pH，提取效率高，大大提高了总多糖总黄酮纯度。
具体实施方式
以下将通过实施例进一步描述本发明，但这些实施例仅是说明本发明，而不应理解为对本发明范围的任何限制。
实施例 1
将原料青钱柳叶粉碎至10~40 目，取青钱柳叶100 g，以50% 醇为提取溶剂，第一次加入800~1000 mL 50% 醇先浸泡2~3 h，微沸状态下保温1~2 h，第二次加入400~600 mL 50% 醇微沸状态下保温1~2 h，合并两次提取液，过滤，将提取液减压浓缩至300 mL。过300~400 目滤袋，得到澄清滤液，冷却至室温。浓缩液预处理：浓缩液用0.5 mol/L 氨水调节成pH值8.5后过滤。滤液先通过装有AB-8 号大孔树脂的高压柱，再通过D301 强酸型阳离子交换树脂高压柱后，收集通过两节高压柱后的未吸附液。上样量为原料（重量g）：树脂（重量g）=1:1 时，完成上样，流速为2 mL/min。先用6~10 BV体积水冲两串根联柱，后分别用4~6 BV体积70% 的乙醇洗脱大孔树脂柱、0.5 mol/L 氨水洗脱离子交换柱。再分别回收乙醇和0.5 mol/L 氨水洗脱液，再进一步浓缩，冷冻干燥后分别得到棕黄色青钱柳叶总黄酮1.53 g，纯度为75%；青钱柳总多糖1.42 g，纯度为85%。
实施例2
将原料青钱柳叶粉碎至10~40 目，取青钱柳叶100 g，以50% 醇为提取溶剂，第一次加入8~10 L 50% 醇先浸泡2~3 h，微沸状态下保温1 ~2h，第二次加入4~6 L 50% 醇微沸状态下保温1~2 h，合并两次提取液，过滤，将提取液减压浓缩至3 ~5L。过300~400 目滤袋，得到澄清滤液，冷却至室温。滤液先通过装有AB-8 号大孔树脂的高压柱，再通过D301 强酸型阳离子交换树脂高压柱后，收集通过两节高压柱后的未吸附液。上样量为原料（重量g）：树脂（重量g）=1:1 时，完成上样，流速为2 mL/min。先用6~10 BV 体积水冲两串根联柱，后分别用4~6 BV体积 70% 的乙醇洗脱大孔树脂柱、0.5 mol/L 氨水洗脱离子交换柱。再分别回收乙醇和0.5 mol/L 氨水洗脱液，再进一步浓缩，冷冻干燥后分别得到棕黄色青钱柳叶总黄酮1.28 g，纯度为60%；青钱柳总多糖1.45 g，纯度为82%。
实施例 3
将原料青钱柳叶粉碎至10~40 目，取青钱柳叶100 g，以50% 醇为提取溶剂，第一次加入800~1000 mL 50% 醇先浸泡2~3 h，微沸状态下保温1~2 h，第二次加入400~600 mL 50% 醇微沸状态下保温1~2 h，合并两次提取液，过滤，将提取液减压浓缩至300 mL。过300~400 目滤袋，得到澄清滤液，冷却至室温。浓缩液预处理：浓缩液用0.5 mol/L 氨水调节成pH值8.5后过滤。滤液通过装有AB-8 号大孔树脂的高压柱。上样量为原料（重量g）：树脂（重量g）=1:1 时，完成上样，流速为2 mL/min。先用6~10 BV体积水洗脱，后分别用4~6 BV体积70% 的乙醇、0.5 mol/L 氨水洗脱。再分别回收乙醇和0.5 mol/L 氨水洗脱液，再进一步浓缩，冷冻干燥后分别得到棕黄色青钱柳叶总黄酮1.59 g，纯度为74%；青钱柳总多糖1.63 g，纯度为60%。
实施例4
将原料青钱柳叶10 kg 粉碎至10~40 目，以50% 醇为提取溶剂，第一次加入80~100 L 60%醇先浸泡2~3h，微沸状态下保温1~2h，第二次加入40~60 L 50% 醇微沸状态下保温1~2h，合并两次提取液。将提取液减压浓缩至60~80 L。过300~400 目滤袋，得到澄清滤液。浓缩液预处理：浓缩液用0.5 mol/L 氨水调节成pH值8.5后过滤。滤液先通过装有AB-8号大孔树脂的高压柱，再通过D301 强酸型阳离子交换树脂高压柱后，收集通过两节高压柱后的未吸附液。上样量为原料（重量g）：树脂（重量g）=1:1 时，完成上样，流速为2 mL/min。先用6~10 BV 水冲两串根联柱，后分别用4~6 BV 70% 的乙醇洗脱大孔树脂柱、0.5 mol/L 氨水溶液洗脱离子交换柱。再分别回收乙醇和0.5 mol/L 氨水洗脱液，再进一步浓缩，冷冻干燥后分别得到棕黄色青钱柳叶总黄酮13.6 g，纯度为74%；青钱柳总多糖13.2 g，纯度为80%。
Claims (3)
1.一种青钱柳多糖和黄酮同步提取分离与纯化的方法，其特征在于包括如下步骤： （1）原料预处理：净选新鲜青钱柳，将原料青钱柳叶粉碎至10~40 目待用； （2）稀醇提取：第一次加入8~10倍青钱柳重量的50% 的乙醇先浸泡2 ~3 h，微沸状态下保温1 h，第二次用 4~6 倍量50% 醇微沸状态下保温1~2 h，提取两次，合并提取液； （3）回收乙醇； （4）趁热过滤：将浓缩至适当浓度的提取液过300~400 目滤袋，滤除部分杂质； （5）浓缩液预处理：浓缩液用稀氨水调节成pH值8.5后过滤； （6）组合树脂分离：将滤液通过装有AB-8号大孔树脂及D301强酸型阳离子交换树脂的2节组合高压串联树脂； （7）洗脱：先用6~10 BV水洗脱2节串联树脂，再分别用4~6BV 70%的乙醇洗脱大孔树脂柱、0.5 mol/L 氨水洗脱离子交换柱； （8）回收：分别将乙醇、氨水洗脱液减压浓缩，得浓缩液； （9）冷冻干燥：将减压回收的浓缩液分别置经-10至-20℃冷冻、过夜后经冷冻干燥成粉末，可得含量为50%以上的总多糖及60%以上的总黄酮。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）回收乙醇：在真空度0.09MPa、50℃~70℃下蒸发浓缩，将提取液浓缩至0.05~0.1 g/mL 浓度，回收浸提液中的有机溶剂。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（8）回收：分别将乙醇、氨水洗脱液在真空度0.09MPa、50℃~70℃下蒸发浓缩，得浓缩液。
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