CN101698637A - 一种高纯度大黄素的分离方法 - Google Patents

一种高纯度大黄素的分离方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高纯度大黄素的分离方法,其步骤是:A、将大黄干燥茎块切片,粉碎后过筛,装入三角瓶,超声,回收过滤溶液中的溶剂,得到干浸膏;B、将干浸膏和另一溶剂倒入三角瓶里萃取超声,过滤,再将回收的溶剂重新倒入装浸膏的瓶里超声萃取、过滤、浓缩,得到提取物;C、将溶剂萃取后的渣置入三角瓶中,用硫酸和溶剂在水浴上回流,过滤,分离出溶剂层,得到提取液;D、大黄素的分离:向游离蒽醌中加缓冲液,超声,静置,得到大黄素粗品;E、将大黄素的粗品分离:将大黄素粗品用混合溶剂溶解,过滤后置入到玻璃柱内,收集洗脱液。工艺简单,容易被掌握,成本低,且含量在98%以上的高纯度大黄素。

Description

一种高纯度大黄素的分离方法
技术领域
本发明涉及从药用植物中提取分离有效成分的技术领域,更具体涉及一种从植物大黄的根茎中提取高纯度大黄素的方法。高纯度的大黄素能改变中药制剂的剂型,提高中药大黄的药效和附加值。
技术背景
大黄(英文名:Rhubarb,拉丁名:Radix et Rhizoma Rhei Palmati)为蓼科(Polygonaceae)大黄属(Rheum),目前从大黄属分离出成分160多种,主要包括蒽醌类、蒽酚酮及其酯衍生物、双蒽酮类等。
大黄蒽醌类主要物质包括芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚以及它们与糖苷生成的结合型蒽醌。随着科学工作者对其研究的不断深入,其主要药用部位基本明确,如何最大限度地保留其有效成分,除去无效成分,提高大黄药用的附加值,已成为大黄制剂研究的重点。
目前,对大黄蒽醌成分的提取纯化方法有较多的研究报道,但实际操作中,不易分离得到高纯度的药用成分,试验方法也不易重复,本专利提供的分离方法,是在大量的试验中总结出来的一种优良的提取分离工艺,能获得纯度较高的有效成分。
发明内容
本发明的目的是在于提供了一种高纯度大黄素的分离方法,具体为从大黄根茎中提取含量在98%以上大黄素,该方法的工艺简单,容易被掌握,且成本低,该方法分离出的大黄素不仅能用作标准品,还能提高大黄医药产品的药用价值。
为了达到上述目的,本发明采用以下技术措施:
提取分为3步,第一步为提取乙醇浸膏,第二部为提取游离蒽醌,第3步将大黄中的羟基蒽醌苷经酸水解成游离蒽醌苷元提取。一种高纯度大黄素的提取分离方法,其步骤是:
1、将大黄干燥茎块切片,粉碎后过2号筛,装入三角瓶,加入量为三角瓶容量的1/5,倒入95%的乙醇(乙醇∶水=95∶5),乙醇倒入量为药材重量的5~10倍。置入超声仪中超声30~50min,再将超声后的物质过滤,回收过滤溶液中的溶剂。将回收的溶剂再倒入三角瓶,继续超声,重复以上操作3~5次,得到乙醇提取干浸膏。
2、将乙醇干浸膏和干浸膏重量4~5倍的氯仿倒入三角瓶里萃取超声30~50min,再将超声后的物质过滤,回收过滤溶液中的溶剂、即浓缩萃取液,再将回收的氯仿重新倒入装乙醇浸膏的瓶里继续超声萃取、过滤、浓缩。重复本步骤3~5次,得到游离蒽醌。
3、将氯仿萃取后的渣置入三角瓶中,用渣重量的4~5倍的20%的硫酸(硫酸∶水=1∶5)和氯仿(硫酸水∶氯仿=1∶2)在水浴上回流4~5h,放至20~25℃,过滤,分离出氯仿层,用水将氯仿层洗至中性。继续将氯仿按比例加入三角瓶中超声30~50min,分离出氯仿层,用水将氯仿层洗至中性,重复本步骤3~5次,合并这3~5次氯仿液,回收氯仿,得到酸水解后的游离蒽醌,并与第2步骤得到游离蒽醌合并,得到总游离蒽醌。
4、大黄素的分离:向总游离蒽醌中加1/2量的pH9缓冲液(缓冲液为:取0.1mol碳酸钠溶液500ml与0.1mol碳酸氢钠溶液500ml混合既得),超声30~50min,静置,充分分层后分离出缓冲液层,用盐酸调缓冲液的pH值至3,可析出大黄素沉淀,静置后过滤,沉淀用蒸馏水洗至中性,在45℃干燥3~4h后,得到大黄素粗品。
5、将大黄素的粗品过柱进一步分离,分离方法:将规格为40*300mm玻璃柱填充树脂至满,用流速为50~60ml/min去离子水冲洗柱子,排除柱内气泡(并且压紧柱子后,看柱子上端是否留有空隙,如有继续填满树脂,直至柱子装紧)。将大黄素粗品用丙酮溶解。过滤后置入到玻璃柱内,将2种溶剂A(甲酸∶水=0.2∶99.8)和B(乙醇∶乙酸乙酯=4∶1),对树脂洗脱,收集洗脱液,每500~600ml收集一瓶,共收集10瓶,编号为1~10号;其收集结果见表1:
表1:大黄素不同时间洗脱溶剂的比例及收集瓶号:
Figure G2009102725086D0000031
注意:洗脱液A和B是同步洗脱,A与B含量的和为100%,当B的含量为5%,此时的A含量为95%。
根据TCL检测,合并成分相同的组分,合并4~9瓶,浓缩后出现橙色结晶,再用混合溶剂重结晶,混合溶剂为乙酸乙酯∶石油醚=8∶5对晶体热熔后重结晶,得到橙色细针晶。经液相色谱检测,含量达到98%以上,大黄素重结晶后液相色谱图附后。
本发明与现有大黄素分离技术相比,本技术提取工艺流程短,技术方法容易掌握,分离效果佳,适合中小企业。此方法能在短时间获得高纯度的大黄素晶体,经液相色谱检测,纯度在98%以上,本方法生产的大黄素产品,能改变大黄素产品的剂型。由于纯度高,可生产为针剂类,还可在分析测试中作为标准品使用,极大提高中药大黄的产品附加值。
附图说明
图1为一种大黄素重结晶后液相色谱图;从液相色谱图中可以看到;大黄素的出峰时间为11min,没有什么杂质峰,用标准品对照分析,其含量为98.81%。
具体实施方式
一种高纯度大黄素的分离方法,其具体步骤是:
A、将10kg大黄干燥茎块切片,粉碎后过2号筛,装入5000ml三角瓶,加入量为三角瓶容量的1/5,倒入95%的乙醇(乙醇∶水=95∶5),乙醇倒入量为药材重量的5~10倍。置入超声仪中超声30~50min过滤出溶液,回收溶剂。将回收的溶剂再倒入三角瓶,继续超声,重复以上操作3~5次,得到乙醇提取干浸膏2050g,大黄乙醇浸膏得率为20.50%。
B、将1025g乙醇干浸膏和干浸膏重量4~5倍的氯仿倒入三角瓶里萃取超声30~50min,再将超声后的物质过滤,回收过滤溶液中的溶剂、即浓缩萃取液,再将回收的溶剂重新倒入装乙醇浸膏的瓶里,继续超声萃取、抽滤、浓缩,重复本步骤3~5次,得到游离蒽醌109.8g。
C、将氯仿萃取后剩下的渣置入三角瓶中,用渣重量4~5倍的20%的硫酸(硫酸∶水=1∶5)和氯仿(硫酸水∶氯仿=1∶2)在水浴上回流4~5h,稍放冷,过滤,分离出氯仿层,用水洗至中性。继续将氯仿按比例加入三角瓶中超声30~50min,分离出氯仿层,用水洗至中性,重复本步骤3~5次,合并这3~5次氯仿液,回收氯仿,得到游离蒽醌39.1克。
以上2次提取游离蒽醌的量为148.9克,得率为大黄干燥茎块的2.978%。
D、大黄素的分离:取100g氯仿提取的游离蒽醌,加1/2量的pH9缓冲液(取0.1mol碳酸钠溶液500ml与0.1mol碳酸氢钠溶液500ml混合既得),超声30~50min,静置,充分分层后分离出缓冲液层,用盐酸调缓冲液的pH值至3,可析出大黄素沉淀,静置后过滤,沉淀用蒸馏水洗至中性,在45℃干燥3~4h后,得到大黄素粗品8.1g。
E、将8.1g大黄素的粗品过色谱柱进一步分离;分离方法为将规格为40*300mm玻璃柱填充HPD-100树脂至满,用流速为50~60ml/min去离子水冲洗柱子,排除柱内气泡(并且压紧柱子后,看柱子上端是否留有空隙,如有继续填满树脂,直至柱子装紧)。将大黄素粗品用丙酮溶解。过滤后置入到玻璃柱内,将2种溶剂A(甲酸∶水=0.2∶99.8)和B(乙醇∶乙酸乙酯=4∶1),按表1所述比例的洗脱溶剂对树脂梯度洗脱,收集洗脱液,每500~600ml收集一瓶,共收集10瓶,编号为1~10号;其收集结果见表2:
表2:大黄素不同时间洗脱溶剂的比例及收集瓶号:
Figure G2009102725086D0000041
注意:洗脱液A和B是同步洗脱,A与B含量的和为100%,当B的含量为5%,此时的A含量为95%。
根据TCL检测,合并成分相同的组分,合并4~9瓶,浓缩后出现橙色结晶,再用混合溶剂重结晶,混合溶剂为乙酸乙酯∶石油醚=8∶5对晶体热熔后重结晶,得到3.15g橙色细针晶.,用标准品对照测试,图谱上的峰为大黄素,含量为98..57%。

Claims (1)

1.一种高纯度大黄素的分离方法,其步骤是:
A、将大黄干燥茎块切片,粉碎后过筛,装入三角瓶,加入量为三角瓶容量的1/5,倒入纯度为95%的乙醇,乙醇倒入量为药材重量的5~10倍,置入超声仪中超声30~50min,再将超声后的物质过滤,回收过滤溶液中的溶剂,将回收的溶剂再倒入三角瓶,继续超声,重复以上操作3~5次,得到乙醇提取干浸膏;
B、将乙醇干浸膏和干浸膏重量4~5倍的氯仿倒入三角瓶里萃取超声30~50min,再将超声后的物质过滤,回收过滤溶液中的溶剂、即浓缩萃取液,再将回收的氯仿重新倒入装乙醇浸膏的瓶里继续超声萃取、过滤、浓缩,重复操作3~5次,得到游离蒽醌;
C、将氯仿萃取后的渣置入三角瓶中,用渣重量的4~5倍的20%的硫酸和氯仿在水浴上回流4~5h,放至20~25℃,过滤,分离出氯仿层,用水将氯仿层洗至中性,继续将氯仿按比例加入三角瓶中超声30~50min,分离出氯仿层,用水将氯仿层洗至中性,重复操作3~5次,合并这3~5次氯仿液,得到酸水解后的游离蒽醌氯仿提取液,回收氯仿,得到酸水解后的游离蒽醌,并与第B步骤得到游离蒽醌合并混匀,得到总游离蒽醌;
D、大黄素的分离:向氯仿提取液中加1/2量的pH9缓冲液,缓冲液为:取0.1mol碳酸钠溶液500ml与0.1mol碳酸氢钠溶液500ml混合,超声30~50min,静置,充分分层后分离出缓冲液层,用盐酸调缓冲液的pH值至3,析出大黄素沉淀,静置后过滤,沉淀用蒸馏水洗至中性,在45℃干燥3~4h后,得到大黄素粗品;
E、将大黄素的粗品过色谱柱进一步分离:分离方法:将规格为40*300mm玻璃柱填充HPD-100树脂至满,用流速为50~60ml/min纯净水冲洗柱子,排除柱内气泡,将大黄素粗品用丙酮溶解,过滤后置入到玻璃柱内,将2种溶剂A和B对树脂梯度洗脱,收集洗脱液。
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