CN101698637B - 一种高纯度大黄素的分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高纯度大黄素的分离方法，其步骤是：A、将大黄干燥茎块切片，粉碎后过筛，装入三角瓶，超声，回收过滤溶液中的溶剂，得到干浸膏；B、将干浸膏和另一溶剂倒入三角瓶里萃取超声，过滤，再将回收的溶剂重新倒入装浸膏的瓶里超声萃取、过滤、浓缩，得到提取物；C、将溶剂萃取后的渣置入三角瓶中，用硫酸和溶剂在水浴上回流，过滤，分离出溶剂层，得到提取液；D、大黄素的分离：向游离蒽醌中加缓冲液，超声，静置，得到大黄素粗品；E、将大黄素的粗品分离：将大黄素粗品用混合溶剂溶解，过滤后置入到玻璃柱内，收集洗脱液。工艺简单，容易被掌握，成本低，且含量在98％以上的高纯度大黄素。
Description
技术领域
本发明涉及从药用植物中提取分离有效成分的技术领域，更具体涉及一种从植物大黄的根茎中提取高纯度大黄素的方法。高纯度的大黄素能改变中药制剂的剂型，提高中药大黄的药效和附加值。
技术背景
大黄(英文名：Rhubarb，拉丁名：Radix et Rhizoma Rhei Palmati)为蓼科(Polygonaceae)大黄属(Rheum)，目前从大黄属分离出成分160多种，主要包括蒽醌类、蒽酚酮及其酯衍生物、双蒽酮类等。
大黄蒽醌类主要物质包括芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚以及它们与糖苷生成的结合型蒽醌。随着科学工作者对其研究的不断深入，其主要药用部位基本明确，如何最大限度地保留其有效成分，除去无效成分，提高大黄药用的附加值，已成为大黄制剂研究的重点。
目前，对大黄蒽醌成分的提取纯化方法有较多的研究报道，但实际操作中，不易分离得到高纯度的药用成分，试验方法也不易重复，本专利提供的分离方法，是在大量的试验中总结出来的一种优良的提取分离工艺，能获得纯度较高的有效成分。
发明内容
本发明的目的是在于提供了一种高纯度大黄素的分离方法，具体为从大黄根茎中提取含量在98％以上大黄素，该方法的工艺简单，容易被掌握，且成本低，该方法分离出的大黄素不仅能用作标准品，还能提高大黄医药产品的药用价值。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：
提取分为3步，第一步为提取乙醇浸膏，第二部为提取游离蒽醌，第3步将大黄中的羟基蒽醌苷经酸水解成游离蒽醌苷元提取。一种高纯度大黄素的提取分离方法，其步骤是：
1、将大黄干燥茎块切片，粉碎后过2号筛，装入三角瓶，加入量为三角瓶容量的1/5，倒入95％的乙醇(乙醇∶水＝95∶5)，乙醇倒入量为药材重量的5～10倍。置入超声仪中超声30～50min，再将超声后的物质过滤，回收过滤溶液中的溶剂。将回收的溶剂再倒入三角瓶，继续超声，重复以上操作3～5次，得到乙醇提取干浸膏。
2、将乙醇干浸膏和干浸膏重量4～5倍的氯仿倒入三角瓶里萃取超声30～50min，再将超声后的物质过滤，回收过滤溶液中的溶剂、即浓缩萃取液，再将回收的氯仿重新倒入装乙醇浸膏的瓶里继续超声萃取、过滤、浓缩。重复本步骤3～5次，得到游离蒽醌。
3、将氯仿萃取后的渣置入三角瓶中，用渣重量的4～5倍的20％的硫酸(硫酸∶水＝1∶5)和氯仿(硫酸水∶氯仿＝1∶2)在水浴上回流4～5h，放至20～25℃，过滤，分离出氯仿层，用水将氯仿层洗至中性。继续将氯仿按比例加入三角瓶中超声30～50min，分离出氯仿层，用水将氯仿层洗至中性，重复本步骤3～5次，合并这3～5次氯仿液，回收氯仿，得到酸水解后的游离蒽醌，并与第2步骤得到游离蒽醌合并，得到总游离蒽醌。
4、大黄素的分离：向总游离蒽醌中加1/2量的pH9缓冲液(缓冲液为：取0.1mol碳酸钠溶液500ml与0.1mol碳酸氢钠溶液500ml混合既得)，超声30～50min，静置，充分分层后分离出缓冲液层，用盐酸调缓冲液的pH值至3，可析出大黄素沉淀，静置后过滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，在45℃干燥3~4h后，得到大黄素粗品。
5、将大黄素的粗品过柱进一步分离，分离方法：将规格为40*300mm玻璃柱填充树脂至满，用流速为50～60ml/min去离子水冲洗柱子，排除柱内气泡(并且压紧柱子后，看柱子上端是否留有空隙，如有继续填满树脂，直至柱子装紧)。将大黄素粗品用丙酮溶解。过滤后置入到玻璃柱内，将2种溶剂A(甲酸∶水＝0.2∶99.8)和B(乙醇∶乙酸乙酯＝4∶1)，对树脂洗脱，收集洗脱液，每500～600ml收集一瓶，共收集10瓶，编号为1～10号；其收集结果见表1：
表1：大黄素不同时间洗脱溶剂的比例及收集瓶号：
注意：洗脱液A和B是同步洗脱，A与B含量的和为100％，当B的含量为5％，此时的A含量为95％。
根据TCL检测，合并成分相同的组分，合并4～9瓶，浓缩后出现橙色结晶，再用混合溶剂重结晶，混合溶剂为乙酸乙酯∶石油醚＝8∶5对晶体热熔后重结晶，得到橙色细针晶。经液相色谱检测，含量达到98％以上，大黄素重结晶后液相色谱图附后。
本发明与现有大黄素分离技术相比，本技术提取工艺流程短，技术方法容易掌握，分离效果佳，适合中小企业。此方法能在短时间获得高纯度的大黄素晶体，经液相色谱检测，纯度在98％以上，本方法生产的大黄素产品，能改变大黄素产品的剂型。由于纯度高，可生产为针剂类，还可在分析测试中作为标准品使用，极大提高中药大黄的产品附加值。
附图说明
图1为一种大黄素重结晶后液相色谱图；从液相色谱图中可以看到；大黄素的出峰时间为11min，没有什么杂质峰，用标准品对照分析，其含量为98.81％。
具体实施方式
一种高纯度大黄素的分离方法，其具体步骤是：
A、将10kg大黄干燥茎块切片，粉碎后过2号筛，装入5000ml三角瓶，加入量为三角瓶容量的1/5，倒入95％的乙醇(乙醇∶水＝95∶5)，乙醇倒入量为药材重量的5～10倍。置入超声仪中超声30～50min过滤出溶液，回收溶剂。将回收的溶剂再倒入三角瓶，继续超声，重复以上操作3～5次，得到乙醇提取干浸膏2050g，大黄乙醇浸膏得率为20.50％。
B、将1025g乙醇干浸膏和干浸膏重量4～5倍的氯仿倒入三角瓶里萃取超声30～50min，再将超声后的物质过滤，回收过滤溶液中的溶剂、即浓缩萃取液，再将回收的溶剂重新倒入装乙醇浸膏的瓶里，继续超声萃取、抽滤、浓缩，重复本步骤3～5次，得到游离蒽醌109.8g。
C、将氯仿萃取后剩下的渣置入三角瓶中，用渣重量4～5倍的20％的硫酸(硫酸∶水＝1∶5)和氯仿(硫酸水∶氯仿＝1∶2)在水浴上回流4～5h，稍放冷，过滤，分离出氯仿层，用水洗至中性。继续将氯仿按比例加入三角瓶中超声30～50min，分离出氯仿层，用水洗至中性，重复本步骤3～5次，合并这3～5次氯仿液，回收氯仿，得到游离蒽醌39.1克。
以上2次提取游离蒽醌的量为148.9克，得率为大黄干燥茎块的2.978％。
D、大黄素的分离：取100g氯仿提取的游离蒽醌，加1/2量的pH9缓冲液(取0.1mol碳酸钠溶液500ml与0.1mol碳酸氢钠溶液500ml混合既得)，超声30～50min，静置，充分分层后分离出缓冲液层，用盐酸调缓冲液的pH值至3，可析出大黄素沉淀，静置后过滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，在45℃干燥3~4h后，得到大黄素粗品8.1g。
E、将8.1g大黄素的粗品过色谱柱进一步分离；分离方法为将规格为40*300mm玻璃柱填充HPD-100树脂至满，用流速为50～60ml/min去离子水冲洗柱子，排除柱内气泡(并且压紧柱子后，看柱子上端是否留有空隙，如有继续填满树脂，直至柱子装紧)。将大黄素粗品用丙酮溶解。过滤后置入到玻璃柱内，将2种溶剂A(甲酸∶水＝0.2∶99.8)和B(乙醇∶乙酸乙酯＝4∶1)，按表1所述比例的洗脱溶剂对树脂梯度洗脱，收集洗脱液，每500～600ml收集一瓶，共收集10瓶，编号为1～10号；其收集结果见表2：
表2：大黄素不同时间洗脱溶剂的比例及收集瓶号：
注意：洗脱液A和B是同步洗脱，A与B含量的和为100％，当B的含量为5％，此时的A含量为95％。
根据TCL检测，合并成分相同的组分，合并4～9瓶，浓缩后出现橙色结晶，再用混合溶剂重结晶，混合溶剂为乙酸乙酯∶石油醚＝8∶5对晶体热熔后重结晶，得到3.15g橙色细针晶，用标准品对照测试，图谱上的峰为大黄素，含量为98.57％。
Claims (1)
1.一种高纯度大黄素的提取分离方法，其步骤是：
A、将大黄干燥茎块切片，粉碎后过2号筛，装入三角瓶，加入量为三角瓶容量的1/5，倒入95％的乙醇，其中乙醇∶水＝95∶5，乙醇倒入量为药材重量的5～10倍，置入超声仪中超声30～50min，再将超声后的物质过滤，回收过滤溶液中的溶剂；将回收的溶剂再倒入三角瓶，继续超声，重复以上操作3～5次，得到乙醇提取干浸膏；
B、将乙醇干浸膏和干浸膏重量4～5倍的氯仿倒入三角瓶里萃取超声30～50min，再将超声后的物质过滤，回收过滤溶液中的溶剂、即浓缩萃取液，再将回收的氯仿重新倒入装乙醇浸膏的瓶里继续超声萃取、过滤、浓缩，重复本步骤3～5次，得到游离蒽醌；
C、将氯仿萃取后的渣置入三角瓶中，用渣重量的4～5倍的硫酸溶液和氯仿在水浴上回流4～5h，放至20～25℃，过滤，分离出氯仿层，用水将氯仿层洗至中性，其中硫酸溶液为硫酸∶水＝1∶5，硫酸水∶氯仿＝1∶2；继续将氯仿按比例加入三角瓶中超声30～50min，分离出氯仿层，用水将氯仿层洗至中性，重复本步骤3～5次，合并这3～5次氯仿液，回收氯仿，得到酸水解后的游离蒽醌，并与B步骤得到游离蒽醌合并，得到总游离蒽醌；
D、大黄素的分离：向总游离蒽醌中加1/2量的pH9缓冲液，其中缓冲液为：取0.1mol碳酸钠溶液500ml与0.1mol碳酸氢钠溶液500ml混合既得，超声30～50min，静置，充分分层后分离出缓冲液层，用盐酸调缓冲液的pH值至3，可析出大黄素沉淀，静置后过滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，在45℃干燥3～4h后，得到大黄素粗品；
E、将大黄素的粗品过柱进一步分离，分离方法：将规格为40*300mm玻璃柱填充树脂至满，用流速为50～60ml/min去离子水冲洗柱子，排除柱内气泡，并且压紧柱子后，看柱子上端是否留有空隙，如有继续填满树脂，直至柱子装紧；将大黄素粗品用丙酮溶解，过滤后置入到玻璃柱内，将2种溶剂A和B，对树脂洗脱，其中溶剂A为甲酸∶水＝0.2∶99.8，溶剂B为乙醇∶乙酸乙酯＝4∶1；收集洗脱液，每500～600ml收集一瓶，共收集10瓶，编号为1～10号，收集结果如下：
大黄素不同时间洗脱溶剂的比例及收集瓶号：
其中：洗脱液A和B是同步洗脱，A与B含量的和为100％，当B的含量为5％，此时的A含量为95％；
根据TLC检测，合并成分相同的组分，合并4～9瓶，浓缩后出现橙色结晶，再用混合溶剂重结晶，混合溶剂为乙酸乙酯∶石油醚＝8∶5，对晶体热熔后重结晶，得到橙色细针晶，经液相色谱检测，含量达到98％以上。
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