CN102846784B - 鸡矢藤水提取物、其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种鸡矢藤水提取物，所述提取物含有环烯醚萜苷类化合物，其特征在于所述环烯醚萜苷类化合物含有8.00-60.0％的鸡矢藤苷酸。本发明还公开该鸡矢藤水提取物的制备方法，包括如下步骤：a)鸡矢藤药材或饮片经水提取得提取液；b)提取液浓缩后加甲醇或乙醇或静置沉淀，得上清液；c)上清液浓缩无醇味后上大孔吸附树脂层析，依次用水和不同浓度乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，减压干燥得鸡矢藤水提取物；d)任选地，c)步骤中所得的鸡矢藤水提取物再加入乙醇，过滤，浓缩，干燥。本发明所公开的鸡矢藤水提取物可用于制备治疗痛风的药物。本发明制备方法工艺简单、适合工业化生产。

Description

鸡矢藤水提取物、其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及鸡矢藤水提取物、其制备方法和用途。

背景技术

鸡矢藤为茜草科鸡矢藤属植物鸡矢藤Paederia scandens(Lour.)Merr.的地上部分或全草，为传统中草药，又名鸡屎藤、牛皮冻、解暑藤、狗屁藤、臭藤、清风藤等，鸡矢藤味苷酸、性平，入肝、胃、大肠经，有消食化积、祛风活血、止痛消肿的功效。分布于中国和东南亚多个国家，国内外对鸡矢藤的药理作用和鸡矢藤临床应用研究主要集中在抗炎、镇痛和治疗消化系统疾病。近年来的化学成分研究表明鸡矢藤中主要含有含硫的环烯醚萜苷类化合物，有鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸和多种含硫的环烯醚萜苷二聚体。

CN101129524涉及一种鸡矢藤提取物，该申请用含乙醇(20％～95％)溶剂提取鸡矢藤药材，并指出该方法的提取物中主要含有鸡屎藤苷(10-90％)和鸡屎藤苷酸甲酯(10-90％)。然而，该申请公开的方法操作繁琐、能耗高。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种鸡矢藤水提取物，所述提取物含有环烯醚萜苷类化合物，其特征在于所述环烯醚萜苷类化合物含有8.00-60.0％的鸡矢藤苷酸。

根据本发明的一个优选的实施方式，所述环烯醚萜苷类化合物含有15.0-50.0％，更优选18-40％的鸡矢藤苷酸。

根据本发明的一个优选的实施方式，所述环烯醚萜苷类化合物主要由0.015-5.00％的鸡矢藤次苷甲酯、0.05-8.00％的车叶草苷酸、0.005-8.00％的交让木苷、8.00-60.0％的鸡矢藤苷酸、0.10-9.0％鸡矢藤苷酸甲酯、0.10-10.0％的鸡矢藤苷和其它环烯醚萜类化合物组成。本发明鸡矢藤水提取物中鸡矢藤次苷甲酯、车叶草甘酸、交让木苷、鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯的含量测定可用常规的高效液相色谱法(HPLC)测定及控制。

本发明的第二个目的是提供所述鸡矢藤水提取物的制备方法，该方法包括如下步骤：

a)鸡矢藤药材或饮片经水提取得提取液；

b)提取液浓缩后加甲醇或乙醇或静置沉淀，得上清液；

c)上清液浓缩无醇味后上大孔吸附树脂层析，依次用水和不同浓度乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，减压干燥，得鸡矢藤水提取物；

d)任选地，c)步骤中所得的鸡矢藤水提取物再加入甲醇或乙醇，过滤，浓缩，干燥，从而得到纯化鸡矢藤水提取物。

根据本发明的一个优选的实施方式，b)步骤中所述甲醇或乙醇的浓度为90-100％。

根据本发明的一个优选的实施方式，b)步骤中所述大孔吸附树脂的重量为鸡矢藤药材或饮片重量的1-10倍。

根据本发明的一个优选的实施方式，c)步骤中依次用水、5-40％的乙醇(优选30％的乙醇)洗脱。根据本发明的一个更优选的实施方式，c)步骤中依次用水、40-95％的乙醇(优选50％的乙醇)洗脱。根据本发明的一个特别优选的实施方式，c)步骤中依次用水、30％乙醇、50％乙醇洗脱。根据本发明的一个最优选的实施方式，c)步骤中依次用水和30％乙醇洗脱。

根据本发明的一个优选的实施方式，c)步骤中所述洗脱中，水和乙醇分别洗脱大孔吸附树脂1-15柱体积。

根据本发明的一个优选的实施方式，c)步骤中所述洗脱中，水的洗脱流速为0.2-3柱体积/小时，乙醇的洗脱流速为0.5-3柱体积/小时。

本发明c)步骤中所述的大孔吸附树脂可以使用非极性大孔吸附树脂、中等极性大孔吸附树脂或极性大孔吸附树脂；优选使用非极性大孔吸附树脂或中等极性大孔吸附树脂。

所述非极性大孔吸附树脂的型号例如可以包括：AB-8、ADS-4、ADS-8(南开树脂)，SPD-100、SPD-300、SPD-400、SPD-450、SPD-500、SPD-600、SPD-700、SPD-850(宝恩公司)，D101、LSA-20、XAD-5、HP-10(蓝晓公司)和D101(天津市海光化工有限公司)。

所述中等极性大孔吸附树脂的型号例如可以包括：DM-130、DM-11(山东鲁抗)，LSA-40、LSA-10(蓝晓公司)，SPD-800(宝恩公司)，HZ-806(华震树脂)，ADS-17(南开树脂)和860021(山东鲁抗医药股份有限公司树脂分厂)。

根据本发明的一个优选的实施方式，c)步骤中所述大孔吸附树脂为D101或860021大孔吸附树脂。

根据本发明的一个优选的实施方式，d)步骤中所述甲醇或乙醇的浓度为90-100％，优选95％。

根据本发明的一个特别优选的实施方式，本发明所述鸡矢藤水提取物的制备方法包括如下具体步骤：

1)、鸡矢藤药材或饮片经过8～10倍(质量比)水回流提取1～3次，每次2～3小时，提取液静置沉淀或浓缩后用乙醇(体积含量90％～100％)沉淀；

2)、取静置后的上清液(乙醇沉淀的上清液须除去乙醇)经大孔吸附树脂吸附分离层析，大孔树脂的重量为原药材的重量1～10倍；

3)、用水洗脱大孔吸附树脂1～15体积，流速为0.2～3柱体积/小时；

4)、再用体积浓度为5％～40％的乙醇溶液洗脱1～15柱体积，流速为0.5～3柱体积/小时；

5)、收集步骤4)的洗脱液，减压浓缩干燥，再加入甲醇或乙醇(浓度为90-100％，优选95％)，过滤，浓缩，干燥，即得鸡矢藤水提取物，该提取物中主要由鸡矢藤次苷甲酯(上左)、车叶草苷酸(上中)、交让木苷(上右)、鸡矢藤苷酸(下左)、鸡矢藤苷酸甲酯(下中)、鸡矢藤苷(下右)组成，其结构式如下：

本发明的第三个目的是提供鸡矢藤水提取物在制备治疗痛风疾病的药物中的应用。

与CN101129524相比，本发明鸡矢藤水提取物在预防大鼠和小鼠痛风作用的药理模型上，显示出更好的预防大鼠和小鼠痛风的药效学作用；本发明鸡矢藤水提取物中环烯醚萜化合物组成和含量明确，药效物质基础明确。

本发明的鸡矢藤水提取物的制备方法工艺简单、设计合理，环境污染小。本发明的工艺主要涉及鸡矢藤药材经加工后，经水提取、浓缩、沉淀、经大孔吸附树脂吸附，后用不同浓度的乙醇溶液梯度洗脱，收集富含鸡矢藤环烯醚萜苷类化合物的洗脱液、经干燥即得鸡矢藤粗提物，粗提物再加入乙醇，过滤，浓缩，干燥，即得纯化的鸡矢藤环烯醚萜类化合物，其中主要由鸡矢藤次苷甲酯、车叶草苷酸、交让木苷、鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷酸甲酯和鸡矢藤苷组成。该方法操作简单，用量最大的溶剂为水，对环境无污染，乙醇用量也非常少(仅为大孔树脂柱体积的5倍左右)，成本较低，收率较高，适宜工业化生产。

附图说明

图1为实施例1所得30％乙醇洗脱鸡矢藤水提取物的HPLC图谱；

图2为实施例1所得50％乙醇洗脱鸡矢藤水提取物的HPLC图谱；

图3为实施例2所得30％乙醇洗脱鸡矢藤水提取物的HPLC图谱；

图4为实施例2所得50％乙醇洗脱鸡矢藤水提取物的HPLC图谱；

图5为实施例3所得鸡矢藤水提取物的HPLC图谱；

图6为实施例4所得鸡矢藤水提取物的HPLC图谱；

图7为实施例5所得鸡矢藤水提取物的HPLC图谱；

图8为实施例6所得鸡矢藤水提取物的HPLC图谱；

图9为实施例7所得鸡矢藤水提取物的HPLC图谱；

图10为实施例8所得鸡矢藤水提取物的HPLC图谱；

图11为以实施例3所得鸡矢藤水提取物的HPLC图谱为例，对6个环烯醚萜化合物的指认，其中1表示鸡矢藤次苷甲酯；2表示车叶草甘酸；3表示交让木苷；4表示鸡矢藤苷酸；5表示鸡矢藤苷；6表示鸡矢藤苷酸甲酯。

具体实施方式

实施例的HPLC分析方法条件如下：

流动相：乙腈：1‰甲酸水，梯度洗脱，检测波长325nm，流速1mL/min，柱温25℃，色谱柱Waters AtlantisTM C18，5u，250×4.6mm。

流动相梯度洗脱比例：

配制0.175mg/mL的鸡矢藤苷酸为对照品，计算鸡矢藤次苷甲酯、车叶草甘酸、交让木苷、鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷和鸡矢藤苷酸甲酯的含量。

实施例1

取1Kg鸡矢藤药材(产地四川，批号：100101)，加工成长1cm左右的饮片，置提取器内，加入8倍量的水，加热回流提取三次，所得提取液静置过夜，取上清液浓缩至无醇味上处理好的D101大孔树脂吸附层析(树脂预处理方法：使用前预先用95％乙醇浸泡过夜，然后逐步用高浓度到低浓度的乙醇过渡到纯水溶液状态，然后用水溶液装大孔树脂层析柱)，分别用水、含乙醇量为10％、30％和50％的溶剂进行洗脱，收集10％和30％合并部分的洗脱液，50％的洗脱液，经减压干燥即得鸡矢藤30％乙醇洗脱提取物11.75g(1003-2)，50％乙醇洗脱提取物5.5g(1003-3)。鸡矢藤30％乙醇洗脱提取物用HPLC分析，其中鸡矢藤次苷甲酯含量为0.0505％；车叶草苷酸含量为0.05％；交让木苷含量为0.20％；鸡矢藤苷酸含量为8.175％；鸡矢藤苷含量为0.73％；鸡矢藤苷酸甲酯含量为2.51％。

实施例2

取1Kg鸡矢藤药材(产地山东，批号：HP2010072018)，加工成长1cm左右的饮片，置提取器内，加入10倍量的水，加热回流提取三次，所得提取液浓缩至1.5L，加95％乙醇至含醇量为70％后静置过夜，取上清液浓缩至无醇味上处理好的D101大孔树脂吸附层析，分别用水，含乙醇量为30％、50％的溶剂进行洗脱，收集30％和50％的洗脱液，经减压干燥即得鸡矢藤30％乙醇洗脱提取物16.0g(1003-4)，50％提取物5.55g(1003-5)。鸡矢藤30％乙醇洗脱提取物用HPLC分析，其中鸡矢藤次苷甲酯含量为0.015％；车叶草苷酸含量为0.38％；交让木苷含量为0.005％；鸡矢藤苷酸含量为19.90％；鸡矢藤苷含量为0.58％；鸡矢藤苷酸甲酯含量为0.16％。

实施例3：

取1Kg鸡矢藤药材(产地：云南；批号：20110617)，加工成长1cm左右的饮片，置30L搪瓷缸中，加入8倍量的水，加热提取3小时，加入6倍量水，加热提取3小时，合并两次提取液，减压浓缩至约400ml，加入3倍体积的95％乙醇至含醇量约70％后静置过夜，取上清液浓缩至无醇味上处理好的D101大孔树脂吸附树脂层析(树脂预处理方法：使用前预先用含5％氢氧化钠的95％乙醇浸泡过夜，然后逐步用高浓度到低浓度的乙醇过渡到纯水溶液状态，洗至中性，再逐步用低浓度到高浓度的乙醇过渡到95％乙醇状态，用含3％盐酸的95％乙醇浸泡过夜，再逐步用高浓度到低浓度的乙醇过渡到纯水溶液状态，洗至中性，用水溶液装大孔树脂层析柱，下同)，分别用水、含乙醇量为30％的溶剂进行洗脱，收集30％部分的洗脱液，减压干燥至呈黏稠流体状，加入500ml95％乙醇，静置过夜，过滤，滤液浓缩干燥即得纯化提取物16.20g，用HPLC分析，其中鸡矢藤次苷甲酯含量为0.66％；车叶草苷酸含量为4.76％；交让木苷含量为6.12％；鸡矢藤苷酸含量为33.73％；鸡矢藤苷含量为5.14％；鸡矢藤苷酸甲酯含量为6.92％。

实施例4：

取1Kg鸡矢藤药材(产地：四川；批号：101201)，加工成长1cm左右的饮片，置30L搪瓷缸中，加入8倍量的水，加热提取3小时，加入6倍量水，加热提取3小时，合并两次提取液，减压浓缩至约300ml，加入3倍体积的95％乙醇至含醇量约70％后静置过夜，取上清液浓缩至无醇味上处理好的D101大孔树脂吸附树脂层析，分别用水、含乙醇量为30％的溶剂进行洗脱，收集30％部分的洗脱液，减压干燥至呈黏稠流体状，加入500ml95％乙醇，静置过夜，过滤，滤液浓缩干燥即得纯化提取物7.74g，用HPLC分析，其中鸡矢藤次苷甲酯含量为0.31％；车叶草苷酸含量为0.66％；交让木苷含量为0.17％；鸡矢藤苷酸含量为23.92％；鸡矢藤苷含量为5.71％；鸡矢藤苷酸甲酯含量为1.87％。

实施例5：

取1Kg鸡矢藤药材(产地：云南；批号：20110617)，加工成长1cm左右的饮片，置30L搪瓷缸中，加入8倍量的水，加热提取3小时，加入6倍量水，加热提取3小时，合并两次提取液，减压浓缩至约400ml，加入3倍体积的95％乙醇至含醇量约70％后静置过夜，取上清液浓缩至无醇味上处理好的Dl01大孔树脂吸附树脂层析，分别用水、含乙醇量为30％溶剂进行洗脱，收集30％部分的洗脱液，减压干燥得提取物19.9g。取该提取物约2g，置入250ml茄形瓶中，加入30％乙醇适量使其完全溶解，减压浓缩至密度在1.1-1.2g/ml，加入200ml 95％乙醇，静置过夜。过滤，滤液浓缩干燥即得纯化提取物1.72g，用HPLC分析，其中鸡矢藤次苷甲酯含量为0.08％；车叶草苷酸含量为1.58％；交让木苷含量为5.36％；鸡矢藤苷酸含量为29.44％；鸡矢藤苷含量为4.43％；鸡矢藤苷酸甲酯含量为5.78％。

实施例6

取1Kg鸡矢藤药材(产地：四川；批号：101201)，加工成长1cm左右的饮片，置30L搪瓷缸中，加入8倍量的水，加热提取3小时，加入6倍量水，加热提取3小时，合并两次提取液，减压浓缩至约400ml，加入3倍体积的95％乙醇至含醇量约70％后静置过夜，取上清液浓缩至无醇味上处理好的D101大孔树脂吸附树脂层析，分别用水、含乙醇量为30％的溶剂进行洗脱，收集30％部分的洗脱液，减压干燥得提取物10.1g。取该提取物约2g，置入250ml茄形瓶中，加入30％乙醇适量使其完全溶解，减压浓缩至密度在1.1-1.2g/ml，加入200ml 95％乙醇，静置过夜。过滤，滤液浓缩干燥即得纯化提取物1.59g，用HPLC分析，其中鸡矢藤次苷甲酯含量为0.10％；车叶草苷酸含量为0.48％；交让木苷含量为0.011％；鸡矢藤苷酸含量为22.35％；鸡矢藤苷含量为3.56％；鸡矢藤苷酸甲酯含量为1.14％。

实施例7：

取1Kg鸡矢藤药材(产地：云南；批号：20110617)，加工成长1cm左右的饮片，置30L搪瓷缸中，加入8倍量的水，加热提取3小时，加入6倍量水，加热提取3小时，合并两次提取液，减压浓缩至约300ml，加入3倍体积的95％乙醇至含醇量约70％后静置过夜，取上清液浓缩至无醇味上处理好的D101大孔树脂吸附树脂层析，分别用水、含乙醇量为30％的溶剂进行洗脱，收集30％部分的洗脱液，减压浓缩，干燥即水提取物19.9g，用HPLC分析，其中鸡矢藤次苷甲酯含量为0.07％；车叶草甘酸含量为1.49％，交让木苷含量为4.99％，鸡矢藤苷酸含量为27.40％；鸡矢藤苷含量为4.09％；鸡矢藤苷酸甲酯含量为5.43％。

实施例8

取1Kg鸡矢藤药材(产地：四川；批号：101201)，加工成长1cm左右的饮片，置30L搪瓷缸中，加入8倍量的水，加热提取3小时，加入6倍量水，加热提取3小时，合并两次提取液，减压浓缩至约300ml，加入3倍体积的95％乙醇至含醇量约70％后静置过夜，取上清液浓缩至无醇味上处理好的D101大孔树脂吸附树脂层析，分别用水、含乙醇量为30％的溶剂进行洗脱，收集30％部分的洗脱液，减压浓缩干燥即得水提取物16.2g，用HPLC分析，其中鸡矢藤次苷甲酯含量为0.10％；车叶草甘酸含量为0.43％，交让木苷含量为0.008％；鸡矢藤苷酸含量为18.49％；鸡矢藤苷含量为2.94％；鸡矢藤苷酸甲酯含量为0.92％。

药效预试验

本发明在前期筛选工艺进行了药效预试验，试验方法如下：

1：目的

观察本发明鸡矢藤水提取物对尿酸引起的小鼠痛风的药效学筛选

2：受试药物

2.1药物名称：1003-2为实施例1得到的10％和30％合并的乙醇洗脱部分；1003-3为实施例1得到的50％的乙醇洗脱部分；1003-4为实施例2得到的30％的乙醇洗脱部分；1003-5为实施例2得到的50％的乙醇洗脱部分；1003-6为根据CN101129524实施例1的方法得到的提取物。

3：实验动物

3.1名称：ICR小鼠

3.2来源：上海西普尔-必凯实验动物有限公司

3.3体重：18-20g左右

3.4性别：雄性

3.5合格证：SCXK(沪)2007-0005

4：实验剂量设计

设计低、高两个药效剂量组，药物剂量分别为10mg/kg和50mg/kg。以及模型组和正常组(模型组是指用药物造成试验所需的病理动物模型；正常组是指不用药物，正常的动物。)，共12组。每组10只小鼠。

5：药物配制

1mg/kg剂量组：将1mg药物用双蒸水(通过连续2次蒸馏得到的水)配至25ml。

10mg/kg剂量组：将10mg药物用双蒸水配至25ml

50mg/kg剂量组：将50mg药物用双蒸水配至25ml

6：给药途径及容量

6.1途径：口服

6.2给药容量：0.5ml/20g

7：实验制剂与仪器

7.1造模剂：尿酸，批号：WL20070529。

取1g尿酸用双蒸水配至40ml成0.025g/ml的尿酸。按0.2ml/20g的给药体积腹腔注射，剂量为250mg/kg。

7.2试剂盒：尿酸试剂盒，批号：20110504生产单位：南京建成生物工程研究所。

8：实验方法

将小鼠随机分组为各鸡矢藤提取物低、高剂量组、模型组、阳性药组和正常组，共12组，并按分组给予各剂量药物，连续3天。最后一次给药后1小时腹腔注射尿酸，正常组给予等剂量生理盐水，1小时后小鼠眼角采血，离心取上清，按尿酸试剂盒说明书操作测定血清尿酸浓度。

9：统计方法

数据以X±SD表示。统计学采用t-检验进行数据分析。P＜0.05认为具有显著性差异。

10：实验结果

表1药物对尿酸致小鼠痛风的药效学作用

^*P＜0.05，^**P＜0.01与模型组比较

^#P＜0.05，^##P＜0.01与正常组比较

实验结果见表1。与正常组相比，模型组的血清尿酸浓度明显升高，说明造模成功。

与模型组相比，提取物1003-2(H)的血清尿酸浓度明显降低(P＜0.01)，1003-3的血清尿酸浓度明显降低(P＜0.05，P＜0.01)，显示出一定的量效关系。1003-4的血清尿酸浓度明显降低(P＜0.01，P＜0.01)。1003-5的血清尿酸浓度明显降低(P＜0.01，P＜0.01)，显示出一定的量效关系。1003-6的血清尿酸浓度明显降低(P＜0.01，P＜0.05)。

11实验结论

提取物SPI-1003-2(H)，1003-3，1003-4，1003-5，1003-6都可以降低尿酸所致痛风小鼠的血清尿酸浓度，显示出较好的预防小鼠痛风的药效学作用；1003-3，1003-4，1003-5预防小鼠痛风作用优于1003-6。

正式药效试验

依据以上预试验结果，本发明做了鸡矢藤水提取物对尿酸致小鼠痛风的药效学筛选。方法如下：

1：目的

观察本发明鸡矢藤水提取物对尿酸引起的小鼠痛风的药效学筛选

2：受试药物

2.1药物名称：1003-2为实施例1得到的10％和30％合并的乙醇洗脱部分：1003-3为实施例1得到的50％的乙醇洗脱部分；1003-4为实施例2得到的30％的乙醇洗脱部分；1003-5为实施例2得到的50％的乙醇洗脱部分：3-8号样品分别为实施例3-8所得到的30％乙醇洗脱提取物。

阳性药：别嘌呤醇

3：实验动物

3.1名称：ICR小鼠

3.2来源：上海西普尔-必凯实验动物有限公司

3.3体重：18-20g左右

3.4性别：雄性

3.5合格证：SCXK(沪)2007-0005

4：实验剂量设计

设计低、高两个药效剂量组，药物剂量分别为10mg/kg和50mg/kg。以及模型组和正常组(模型组是指用药物造成试验所需的病理动物模型；正常组是指不用药物，正常的动物)，共12组。每组10只小鼠。

5：药物配制

1mg/kg剂量组：将1mg药物用双蒸水(通过连续2次蒸馏得到的水)配至25ml。

10mg/kg剂量组：将10mg药物用双蒸水配至25ml

50mg/kg剂量组：将50mg药物用双蒸水配至25ml

6：给药途径及容量

6.1途径：口服

6.2给药容量：0.5ml/20g

7：实验制剂与仪器

7.1造模剂：尿酸，批号：A0266745。

取1g尿酸用双蒸水配至40ml成0.025g/ml的尿酸。按0.2ml/20g的给药体积腹腔注射，剂量为250mg/kg。

7.2试剂盒：尿酸试剂盒，批号：20110504生产单位：南京建成生物工程研究所。

8：实验方法

将小鼠随机分组为各鸡矢藤提取物低、高剂量组、模型组、阳性药组和正常组，共12组，并按分组给予各剂量药物，连续3天。最后一次给药后1小时腹腔注射尿酸，正常组给予等剂量生理盐水，1小时后小鼠眼角采血，离心取上清，按尿酸试剂盒说明书操作测定血清尿酸浓度。

9：统计方法

数据以X±SD表示。统计学采用t-检验进行数据分析。P＜0.05认为具有显著性差异。

10：实验结果

表2鸡矢藤水提取物对尿酸致小鼠痛风的药效筛选

^*P＜0.05，^**P＜0.01与模型组比较

^#P＜0.05，^##P＜0.01与正常组比较

表3鸡矢藤水提取物对尿酸致小鼠痛风的药效筛选

^*P＜0.05，^**P＜0.01与模型组比较

^#P＜0.05，^##P＜0.01与正常组比较

表4鸡矢藤水提取物对尿酸致小鼠痛风的药效筛选

^*P＜0.05，^**P＜0.01与模型组比较

^#P＜0.05，^##P＜0.01与正常组比较

表2实验结果：与正常组相比，模型组的血清尿酸浓度明显升高，

说明造模成功。

与模型组相比，7号提取物高低剂量组明显具有降低小鼠血清尿酸浓度作用(P＜0.01，P＜0.05)。1003-2提取物高低剂量组具有显著的降低小鼠血清尿酸浓度作用(P＜0.01)，同样8号提取物也具有明显的降低小鼠血清尿酸浓度的作用(P＜0.05，P＜0.01)，显示出一定的量效关系。1003-4号提取物在高剂量是显示较好的降低小鼠血清尿酸浓度作用(P＜0.05)。

表3试验结果显示：与正常组相比，模型组的血清尿酸浓度显著升高，说明造模成功。

与模型组相比，7、3、5号提取物具有显著的降低小鼠血清尿酸浓度(P＜0.01)，而且3、5号提取物显示出一定的量效关系。

表4试验结果显示：与正常组相比，模型组的血清尿酸浓度显著升高，说明造模成功。

与模型组相比，4、6号提取物具有显著降低小鼠血清尿酸浓度的作用。

11实验结论

表2说明提取物1003-2、1003-4、7号、8号都具有降低由尿酸所致小鼠高尿酸血症的作用，显示出较好的预防小鼠痛风的药效学作用。由表3结果可知：提取物7、3、5号提取物具有很好的降小鼠血清尿酸作用，由表4可知提取物4、6号具有较好的降低小鼠血清尿酸作用。

根据药效筛选结果结合提取方法：我们可以得出以下结论：

说明30％乙醇洗脱提取部分药效优于50％乙醇洗脱提取部分，结合浸膏得率，我们优选30％乙醇洗脱部位。

Claims (14)

1.鸡矢藤水提取物，所述提取物含有环烯醚萜苷类化合物，其特征在于所述环烯醚萜苷类化合物主要由0.015％-5.0％的鸡矢藤次苷甲酯、0.05％-8.0％的车叶草苷酸、0.005％-8.00％的交让木苷、8.00％-60.0％的鸡矢藤苷酸、0.10％-9.0％鸡矢藤苷酸甲酯、0.10％-10.0％的鸡矢藤苷组成；

所述鸡矢藤水提取物按照如下方法制备：

a)鸡矢藤药材或饮片经水提取得提取液；

b)提取液浓缩后加甲醇或乙醇或静置沉淀，得上清液；

c)上清液浓缩至无醇味上大孔吸附树脂层析，依次用水和不同浓度乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，减压干燥，得鸡矢藤水提取物；

d)任选地，c)步骤中所得的鸡矢藤水提取物再加入甲醇或乙醇，过滤，浓缩，干燥；

其中c)步骤中依次用水、5-40％的乙醇洗脱。

2.权利要求1所述的鸡矢藤水提取物的制备方法，该方法包括如下步骤：

a)鸡矢藤药材或饮片经水提取得提取液；

b)提取液浓缩后加甲醇或乙醇或静置沉淀，得上清液；

c)上清液浓缩至无醇味上大孔吸附树脂层析，依次用水和不同浓度乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，减压干燥，得鸡矢藤水提取物；

d)任选地，c)步骤中所得的鸡矢藤水提取物再加入甲醇或乙醇，过滤，浓缩，干燥；

其中c)步骤中依次用水、5-40％的乙醇洗脱。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，b)步骤中所述甲醇或乙醇的浓度为90-100％。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，c)步骤中依次用水、30％乙醇洗脱。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，d)步骤中所述甲醇或乙醇的浓度为90-100％。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，d)步骤中所述甲醇或乙醇的浓度为95％。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，c)步骤中所述大孔吸附树脂的重量为鸡矢藤药材或饮片重量的1-10倍。

8.根据权利要求2或7所述的制备方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂选自非极性大孔吸附树脂或中等极性大孔吸附树脂。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述非极性大孔吸附树脂的型号选自AB-8、ADS-4、ADS-8、SPD-100、SPD-300、SPD-400、SPD-450、SPD-500、SPD-600、SPD-700、SPD-850、LSA-20、XAD-5、HP-10或D101。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述非极性大孔吸附树脂的型号为D101。

11.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述中等极性大孔吸附树脂的型号选自DM-130、DM-11、LSA-40、LSA-10、SPD-800、HZ-806、ADS-17或860021。

12.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，c)步骤所述洗脱中，水和乙醇分别洗脱大孔吸附树脂1-15柱体积。

13.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，c)步骤所述洗脱中，水的洗脱流速为0.2-3柱体积/小时，乙醇的洗脱流速为0.5-3柱体积/小时。

14.权利要求1所述的鸡矢藤水提取物在制备治疗痛风的药物中的应用。