CN104398619A - 鸡矢藤提取物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开鸡矢藤提取物,所述提取物含有环烯醚萜苷类化合物,其特征在于所述环烯醚萜苷类化合物主要由20.0%-50.0%的鸡矢藤苷酸、2.0%-25.0%的鸡矢藤苷和1.0%-10.0%鸡矢藤苷酸甲酯组成;所述鸡矢藤提取物按照如下方法制备:a)鸡矢藤药材经乙醇提取得提取液;b)提取液浓缩至无醇味上大孔吸附树脂层析,依次用水和80-90%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压干燥,即得鸡矢藤提取物。本发明也提供所述的鸡矢藤提取物在制备治疗、预防或减少肾脏损伤的药物中的用途。
Description
技术领域
本发明涉及鸡矢藤提取物及其用途。
背景技术
鸡矢藤为茜草科鸡矢藤属植物鸡矢藤Paederia scandens(Lour.)Merr.的地上部分或全草,为传统中草药,又名鸡屎藤、牛皮冻、解暑藤、狗屁藤、臭藤、清风藤等,鸡矢藤味苷酸、性平,入肝、胃、大肠经,有消食化积、祛风活血、止痛消肿的功效。分布于中国和东南亚多个国家,国内外对鸡矢藤的药理作用和鸡矢藤临床应用研究主要集中在抗炎、镇痛和治疗消化系统疾病。近年来的化学成分研究表明鸡矢藤中主要含有含硫的环烯醚萜苷类化合物,有鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸和多种含硫的环烯醚萜苷二聚体。
CN101129524涉及一种鸡矢藤提取物,该申请用含乙醇(20%~95%)溶剂提取鸡矢藤药材,并指出该方法的提取物中主要含有鸡屎藤苷(10-90%)和鸡屎藤苷酸甲酯(10-90%)。然而,该申请公开的方法操作繁琐、能耗高。
发明内容
本发明的第一个目的是提供鸡矢藤提取物,所述提取物含有环烯醚萜苷类化合物,其特征在于所述环烯醚萜苷类化合物主要由20.0%-50.0%的鸡矢藤苷酸、2.0%-25.0%的鸡矢藤苷和1.0%-10.0%鸡矢藤苷酸甲酯组成;所述鸡矢藤提取物按照如下方法制备:
a)鸡矢藤药材经乙醇提取得提取液;
b)提取液浓缩至无醇味上大孔吸附树脂层析,依次用水和80-90%乙醇(优选85%乙醇)洗脱,收集洗脱液,减压干燥,即得鸡矢藤提取物。
根据一个优选的实施方式,所述药材与树脂重量之比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的大孔树脂。
根据另一个优选的实施方式,所述大孔吸附树脂的型号为D101。
根据一个优选的实施方式,所述树脂柱径高比为1∶8~1∶12。
根据另一个优选的实施方式,所述上样流速为1.0~2.0BV/h,洗脱流速为4~6BV/h。
根据本发明的一个特别优选的实施方式,本发明所述鸡矢藤提取物的制备方法包括如下具体步骤:
取鸡矢藤药材Wkg,加入8倍量95%乙醇回流提取3小时,过滤提取液,药渣再加入8倍量95%乙醇回流提取3小时,过滤提取液,药渣再加入8倍量95%乙醇回流提取3小时,过滤提取液,合并三次提取液,60℃减压浓缩,至无醇味,加入4倍药材量的去离子水溶液使溶解,离心,离心上清液上D101大孔吸附树脂,药材与树脂量比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的D101大孔树脂,树脂柱径高比为1∶8~1∶12,上样流速为1.0~2.0BV/h,洗脱流速为4~6BV/h。上样结束后,先用去离子水洗脱树脂柱2BV,弃去流穿液及水洗脱液,再用85%乙醇洗脱树脂柱6BV,收集85%乙醇的洗脱液,60℃减压浓缩,干燥,即得鸡矢藤提取物。
本发明的第二个目的是提供鸡矢藤提取物在制备治疗、预防或减少肾脏损伤的药物中的用途。
本发明的第三个目的是提供鸡矢藤提取物在制备降尿酸同时具有肾脏保护作用的抗痛风关节炎药物中的用途。
本发明的第四个目的是提供鸡矢藤提取物在制备治疗痛风关节炎的药物中的用途。
本发明的第五个目的是提供鸡矢藤提取物在制备治疗高尿酸血症的药物中的用途。
本发明的第六个目的是提供鸡矢藤提取物在制备防止尿酸盐沉积的药物中的用途。
本发明鸡矢藤提取物能够有效的降低高尿酸大鼠的血尿酸水平,同时还能对腺嘌呤致大鼠肾损伤模型有明显的改善作用,综上所述,鸡矢藤提取物在降尿酸的同时具有肾保护活性。
本发明的鸡矢藤提取物的制备方法工艺简单、设计合理,环境污染小。该方法对环境无污染,乙醇用量少,成本较低,收率较高,适宜工业化生产。
附图说明
图1为实施例1所得鸡矢藤提取物的HPLC图谱,其中1表示鸡矢藤苷酸;2表示鸡矢藤苷;3表示鸡矢藤苷酸甲酯;
图2为实施例2所得鸡矢藤提取物的HPLC图谱,其中1表示鸡矢藤苷酸;2表示鸡矢藤苷;3表示鸡矢藤苷酸甲酯;
图3为慢性高尿酸血症模型大鼠肾脏图。
具体实施方式
实施例的HPLC分析方法条件如下:
流动相:乙腈:1‰甲酸水,梯度洗脱,检测波长245nm,流速0.5ml/min,柱温30℃,色谱柱Waters AtlantisTM C18,5u,250×4.6mm。
流动相梯度洗脱比例:
以鸡矢藤苷酸为标准品,外标法计算鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷和鸡矢藤苷酸甲酯的含量。
实施例1
取云南药材(批号:131110)1.0kg,加入8倍量95%乙醇回流提取3小时,提取3次,过滤合并提取液,60℃减压浓缩,至无醇味,加入去离子水至4L使溶解,离心,取上清液上D101大孔吸附树脂(药材与树脂量比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的D101大孔树脂),树脂柱径高比为1∶8,上样流速为1.0BV/h,上样结束后,洗脱流速为5BV/h,先用去离子水洗脱树脂柱2BV,弃去流穿液及水洗脱液,再用85%乙醇洗脱树脂柱6BV,收集85%乙醇的洗脱液,60℃减压浓缩,干燥,即得鸡矢藤提取物16.43g,批号131110,得率为1.64%,以鸡矢藤苷酸为标准品外标法计算鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯的含量分别为27.33%、4.56%、6.53%。
实施例2
取云南药材(批号:131226)1.0kg,加入8倍量95%乙醇回流提取3小时,提取3次,过滤合并提取液,60℃减压浓缩,至无醇味,加入去离子水至4L使溶解,离心,取上清液上D101大孔吸附树脂(药材与树脂量比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的D101大孔树脂),树脂柱径高比为1∶8,上样流速为1.0BV/h,上样结束后,洗脱流速为5BV/h,先用去离子水洗脱树脂柱2BV,弃去流穿液及水洗脱液,再用85%乙醇洗脱树脂柱6BV,收集85%乙醇的洗脱液,60℃减压浓缩,干燥,即得鸡矢藤提取物15.79g,批号131226,得率为1.58%,以鸡矢藤苷酸为标准品外标法计算鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯的含量分别为27.65%、18.23%、2.20%。
对比例
将1公斤洗净、破碎的鸡矢藤全草用体积浓度为70%的乙醇溶液回流提取2小时,收集该乙醇溶液并将其减压浓缩至干,得到约100g浸膏。用2升体积浓度为10%的乙醇溶液于45℃的温度下将步骤1的浸膏溶解,再将所得的溶液离心分离后取上液。将所得上清液通过大孔树脂(D101)层析柱,所述大孔树脂的重量为所得浸膏重量的20倍。用体积浓度为20%的乙醇溶液洗此大孔树脂柱至溶液颜色变淡,所述乙醇用量为该大孔树脂柱体积的10倍,流速为1柱体积/小时。再用体积浓度为60%的乙醇溶液洗此大孔树脂柱至溶液颜色变淡,所述乙醇用量为该大孔树脂柱体积的12倍,流速为1柱体积/小时,收集洗脱液。使得到的洗脱液经过减压浓缩干,得到鸡矢藤提取物10.32g。
药效试验结果
1.实验材料和方法:
1.1 样品与试剂
实施例1鸡矢藤提取物批号131110;对比例样品。
苯溴马隆(德国赫曼大药厂,1207062);腺嘌呤(上海源叶生物科技有限公司);尿酸(美国Sigma公司,批号:LOT#BCBJ8674V);尿酸检测试剂盒(日本世诺临床诊断制品株式会社,批号YZB/JAP 6068-2012);肌酐检测试剂盒(日本和光纯药工业株式会社,批号YZB/JAP 0519-2012);尿素氮检测试剂盒(日本和光纯药工业株式会社,批号YZB/JAP 0627-2012)。
1.2 实验动物:
雄性SD大鼠,体重130-150g,由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供动物中心提供。合格证号:SCXK 2008-0016。
1.3 仪器
分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司,型号:PL601-L);鼠称(南京以马内利医药仪器有限公司);全自动血清生化分析仪(日本日立公司,型号:7080)。
1.4方法:
(1)长期预防给药对大鼠高尿酸血症模型
70只大鼠随机分为正常组、模型组、鸡矢藤提取物剂量不同组、阳性药组,每组10只。鸡矢藤提取物的剂量组设为25、50、100、200、400mg·kg·d-1,以上药物均用0.5%CMC-Na溶液配制成溶液或混悬液。空白组和模型组每日灌服生理盐水1ml/d,其余各组灌服等体积相应药物,连续灌胃7天,每日1次。第7天,除空白组外,余各组在灌胃给药后1小时腹腔注射剂量为250mg/kg尿酸混悬液造模。1小时后大鼠眼底静脉丛插管取血0.5mL,冰浴保存,离心,血清在一小时内全自动血清生化分析仪检测尿酸含量,结果见表1。
(2)单次治疗给药对大鼠高尿酸血症模型
33只大鼠随机分为正常组、模型组、鸡矢藤提取物组和对比例样品组,每组10只。两个给药组剂量均为400mg·kg·d-1,以上药物均用0.5%CMC-Na溶液配制成溶液或混悬液。空白组和模型组每日灌服生理盐水1ml,其余各组灌服等体积相应药物,除空白组外,余各组在灌胃给药后1小时腹腔注射剂量为250mg/kg尿酸混悬液造模。1小时后大鼠眼底静脉丛插管取血0.5mL,冰浴保存,离心,血清在一小时内全自动血清生化分析仪检测尿酸含量,结果见表2
(3)对腺嘌呤致大鼠肾损伤模型
24只雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、预防组和治疗组,每组6只。除正常组外,其余各组均给与腺嘌呤造模(按0.5%拌入饲料,自由饮食),持续14日。其中预防组从造模开始当日开始灌胃给与鸡矢藤提取物(200mg/kg),治疗组从造模开始第7日开始给与鸡矢藤提取物(200mg/kg),均为每日一次,直至造模结束。大鼠饮食、体质量等一般情况监测:每日观察各组大鼠进食情况、精神状态的改变情况,每周定期称重。定期对大鼠眼底静脉丛插管取血,分离血清,在全自动生化分析仪上测定血尿酸(UA),肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)等指标,并与14天处死动物,取肾脏,观察对肾脏损伤的作用。
所有数据均用SPSS 20.0软件进行统计处理,以表示,采用T检验。
1.5结果
1)长期预防给药对高尿酸血症大鼠血清尿酸的影响:由表1可知,高尿酸血症模型组大鼠血清尿酸水平明显高于正常组(P<0.01),与模型组比较,当阳性药给予50mg/kg时能显著地降低高尿酸血症大鼠的血清尿酸水平(P<0.05);当鸡矢藤提取物给予50、100、200、400mg/kg时能显著地降低高尿酸血症大鼠的血清尿酸水平(P<0.05,0.01),且呈浓度依赖性。
表1长期预防给药对大鼠高尿酸血症的影响
与正常组比较:##P<0.01;与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
(2)单次治疗给药对高尿酸血症大鼠血清尿酸的影响:由表2可知,高尿酸血症模型组大鼠血清尿酸水平明显高于正常组(P<0.01),与模型组比较,当对比例样品给予400mg/kg时,大鼠血尿酸无显著性改变;当鸡矢藤提取物给予400mg/kg时能显著地降低高尿酸血症大鼠的血清尿酸水平(P<0.05)。说明鸡矢藤提取物降尿酸作用优于对比例样品。
表2单次治疗给药对大鼠高尿酸血症的影响
与正常组比较:##P<0.01;与模型组比较:*P<0.05
(3)对慢性高尿酸血症大鼠体重的影响:由表3可知,在腺嘌呤造模过程中,各组大鼠体重均不断下降,模型组从第3天起与正常组相比即开始出现极显著差异(P<0.001),持续到造模结束时两者相差近一倍。鸡矢藤提取物预防组从第7天开始与模型组相比有明显差异(P<0.01),第10天有差异(P<0.05),第14天有显著差异(P<0.01);鸡矢藤提取物治疗组在第14天时与模型组相比有差异(P<0.05)。
表3对腺嘌呤所致慢性高尿酸血症的大鼠体重的影响
与正常组比较:#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001;与模型组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
(4)对慢性高尿酸血症大鼠各血尿指标的影响:由表4可知,与空白组比较,腺嘌呤造模过程中UA、BUN、CR均显著性升高(P<0.01),通过预防给药,在第一周治疗过程中没有明显效果,从第10天开始预防组的血尿酸水平与模型组相比出现极为显著地下降(P<0.001),BUN和CR与模型组相比也有小幅下降,给药两周后,血尿酸、尿素氮和肌酐均呈现显著性降低(P<0.05);治疗组在第3天血尿酸水平与模型相比有明显下降(P<0.01),第14天有极显著差异(P<0.001),但是BUN和CRE与模型比变化不明显。
表4对慢性高尿酸血症大鼠各血尿指标的影响
与正常组比较:#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001;与模型组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
(5)对慢性高尿酸血症大鼠肾脏损伤的影响:通过图3可知,模型组大鼠的肾脏颜色为暗黄色或棕黄色,表面颗粒明显;预防组肾脏颜色较模型组略深,为深棕色,略偏向暗红;表明更光滑一些,治疗组的肾脏鉴于前两组之间。各组大鼠的脏器指数无显著差异。
高尿酸血症是痛风性关节炎的重要生化基础,维持正常的血清尿酸水平,对于防止尿酸盐沉积有重要的生化基础意义,同时,血清肌酐和尿素氮含量的高低是衡量肾功能的敏感指标之一,可以直接反应肾小球滤过功能以及肾小管吸收、酸化的功能。本实验结果表明,鸡矢藤提取物在同等剂量下能够有效的降低高尿酸大鼠的血尿酸水平,同时还能对腺嘌呤致大鼠肾损伤模型有明显的改善作用,综上所述,鸡矢藤提取物在降尿酸的同时具有肾保护作用。
Claims (11)
1.鸡矢藤提取物,所述提取物含有环烯醚萜苷类化合物,其特征在于所述环烯醚萜苷类化合物主要由20.0%-50.0%的鸡矢藤苷酸、2.0%-25.0%的鸡矢藤苷和1.0%-10.0%鸡矢藤苷酸甲酯组成。
所述鸡矢藤提取物按照如下方法制备:
a)鸡矢藤药材经乙醇提取得提取液;
b)提取液浓缩至无醇味上大孔吸附树脂层析,依次用水和80-90%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压干燥,即得鸡矢藤提取物。
2.根据权利要求1所述的鸡矢藤提取物,其特征在于,所述药材与树脂重量之比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的大孔树脂。
3.根据权利要求1所述的鸡矢藤提取物,其特征在于,b)步骤中依次用水和85%乙醇洗脱。
4.根据权利要求1所述的鸡矢藤提取物,其特征在于,所述大孔吸附树脂的型号为D101。
5.根据权利要求1所述的鸡矢藤提取物,其特征在于,所述树脂柱径高比为1∶8~1∶12。
6.根据权利要求1所述的鸡矢藤提取物,其特征在于,所述上样流速为1.0~2.0BV/h,洗脱流速为4~6BV/h。
7.权利要求1-6任一项所述的鸡矢藤提取物在制备治疗、预防或减少肾脏损伤的药物中的用途。
8.权利要求1-6任一项所述的鸡矢藤提取物在制备降尿酸同时具有肾脏保护作用的抗痛风关节炎药物中的用途。
9.权利要求1-6任一项所述的鸡矢藤提取物在制备治疗痛风关节炎的药物中的用途。
10.权利要求1-6任一项所述的鸡矢藤提取物在制备治疗高尿酸血症的药物中的用途。
11.权利要求1-6任一项所述的鸡矢藤提取物在制备防止尿酸盐沉积的药物中的用途。
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Legal Events
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---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
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