CN104739923B - 一种用于治疗慢性肾炎的肾茶总酚及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于民族医药技术领域,尤其涉及一种制备肾茶总酚的方法及其应用。所述方法包括如下步骤:(1)提取;(2)采用离子交换树脂进行分离纯化;(3)采用大孔吸附树脂进行脱盐及再纯化。本发明首次采用离子交换树脂‑大孔吸附树脂联用方法提取获得了肾茶总酚,所述肾茶总酚既包括肾茶酚酸类有效成分,也包括肾茶黄酮类有效成分。制备获得的肾茶总酚中酚类成分总重量百分比为大于50%,有效成分含量高,治疗慢性肾炎效果显著。
Description
技术领域
本发明属于民族医药技术领域,尤其涉及一种制备肾茶总酚的方法及其应用。
背景技术
慢性肾小球肾炎(Chronic glomerulonephritis,CGN),简称慢性肾炎,是多病因的慢性肾小球疾病,也是导致慢性肾功能衰竭的重要原因之一,发病率居肾脏疾病首位。其早期临床表现为乏力、疲倦、腰痛等症状,随病变进展表现为长期持续性尿异常,出现蛋白尿或血尿,可能伴有高血压和水肿,最终导致肾衰。
传统民族医药治疗慢性肾炎具有良好的前景。在众多传统民族医药中,傣族药肾茶(Clerodendranthusspicatus.(Thunb.)C.Y.Wu)具有清火解毒、利尿排石、凉血止血之功效,用于治疗急性肾炎、慢性肾炎、膀胱炎、尿路结石等,使用历史悠久。现代研究表明,可用该药水煎煮治疗慢性肾炎,能有效消除水肿和蛋白尿。临床上还常常以肾茶为主药,配伍补气、利水、清热、止血、滋阴等传统药物用于慢性肾炎,取得较好治疗效果。据已公开发表的文献(柳丹萍,黄荣桂.肾茶研究新进展,海峡药学,2013年25卷11期,56-58),目前从全球各地肾茶中分离、鉴定了近200种化学成分,主要包括黄酮、酚酸、二萜、挥发油、三萜类成分,此外还有糖、有机酸、氨基酸和矿物质。药理实验表明,肾茶总酚为肾茶发挥药效的重要有效部位之一。
然而,现有技术中只有提取肾茶黄酮的方法(专利申请公布号:CN103127214 A),而无法同时得到肾茶酚酸和肾茶黄酮,亦即没有提取获得肾茶总酚的方法。
发明内容
针对现有技术中所存在的问题,本发明的目的在于提供一种制备肾茶总酚的方法及其应用。
本发明是通过以下技术方案实现的:
本发明的第一方面提供了一种制备肾茶总酚的方法,所述方法包括如下步骤:
(1)提取:取肾茶,加入乙醇,浸泡,回流,过滤,合并滤液,减压浓缩,得肾茶粗提液,然后将所得肾茶粗提液离心,取上清液,调节pH,作为上样液;
(2)采用离子交换树脂进行分离纯化:将步骤(1)中所得上样液经过弱碱型阴离子交换树脂进行静态吸附,然后水洗上述树脂,再采用解析剂对树脂柱进行静态解吸附得解析液,将所得解吸液调节pH至中性并回收乙醇后作为待脱酸液;
(3)采用大孔吸附树脂进行脱盐及再纯化:将步骤(2)中的待脱酸液经大孔吸附树脂进行干法吸附,吸附完毕后,装柱,用水洗涤,弃去洗涤液,加入乙醇对树脂柱进行动态解吸得解吸液;解吸液回收溶剂,真空干燥后即得到肾茶总酚。
优选的,步骤(1)中,所述提取的具体方法为:取肾茶,加入8-15倍量的乙醇,浸泡,回流1-3次,每次1-3h,过滤,合并滤液,减压浓缩至0.2-0.5g生药/mL,得肾茶粗提液,然后将所得肾茶粗提液离心,取上清液,调节pH至2~6,作为上样液。
优选的,步骤(1)中,所述乙醇浓度为30~90%。更优选为50%。
优选的,步骤(2)中,所述解析剂为含盐酸的乙醇。
更优选的,所述含盐酸的乙醇中,乙醇浓度为50~90%,所含盐酸的体积浓度为1~10%。
最优选的,所述含盐酸的乙醇中,乙醇浓度为70%,所含盐酸的体积浓度为5%。
优选的,步骤(2)中,所述离子交换树脂选自D301R、D392、ADS-7、D296R、717、D315、DEAE-650M。更优选为D301R型离子交换树脂。
优选的,步骤(2)中,所述上样液与所述弱碱型阴离子交换树脂的重量比为1:1~1:10;所述弱碱型阴离子交换树脂制成的树脂柱径和柱高比为1:4~1:12。
优选的,步骤(2)中,所述静态吸附的时间为3~8h,所述静态解吸附的时间为3~8h。
优选的,步骤(3)中,所述大孔吸附树脂选自NKA-9、ADS-21、DM-301、HPD400、AB-8、DM-130、D101、D4020。更优选为DM130型大孔吸附树脂。
优选的,步骤(3)中,所述乙醇浓度为30%-90%。
优选的,步骤(3)中,所述动态解析的速度为1BV/h-4BV/h;乙醇用量为10BV-20BV。
本发明的第二方面提供了一种由前述制备方法获得的肾茶总酚。
优选的,所述肾茶总酚中,酚类成分的总重量百分比为50%~60%,所述肾茶总酚包括咖啡酸、迷迭香酸、香草酸、龙胆酸、绿原酸、紫草酸、对羟基苯甲酸、秦皮乙素、以及6-甲氧基菀花素。
进一步优选的,所述肾茶总酚中,咖啡酸的总重量百分比为0.5%~0.8%,迷迭香酸的总重量百分比为0.5%~0.8%。
本发明的第三方面提供了前述肾茶总酚在制备慢性肾炎治疗药物中的用途。
本发明的第四方面还提供了一种用于治疗慢性肾炎的药物组合物,所述药物组合物包括前述肾茶总酚。
优选的,所述药物组合物的有效成份为前述肾茶总酚。
进一步的,本发明的用于治疗慢性肾炎的药物组合物还包括一种或多种常规的药学上可接受的辅料。主药药效成分与药学上可接受载体的总重量比例可为1∶0.1~10。
药学上可接受的辅料包括(但并不限于):药物可接受的载体、稀释剂、填充剂、结合剂及其它赋形剂。本领域枝术人员已知的治疗惰性的无机或有机的载体包括(但不限于)乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、植物油、蜡、脂肪、多羟基化合物例如聚乙二醇、水、蔗糖、乙醇、甘油,诸如此类,各种防腐剂、润滑剂、分散剂、矫味剂。保湿剂、抗氧化剂、甜味剂、着色剂、稳定剂、盐、缓冲液诸如此类也可加入其中,这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。
本发明的药物组合物可以为口服制剂,如胶囊、片剂、分散片、口含片、咀嚼片、泡腾片、缓释片、颗粒剂等。可有效改变传统汤剂外观差、不便携带、服用不便、服用量大的缺点,为研制治疗慢性肾炎的剂量小、药效强、稳定性好的新剂型提供了新途径。
本发明的药物组合物可采用常规方法制备,如将各有效成分混匀,或者根据各种制剂的常规制法,将药效成分与相应辅料混配后制备获得。本发明的药物组合物还可与其他治疗剂一起使用。
本发明的药物组合物可用于治疗慢性肾炎。
本发明的药物组合物的有效治疗剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素,这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明的有益效果为:
(1)本发明经过广泛而深入的研究,首次采用离子交换树脂-大孔吸附树脂联用方法提取获得了肾茶总酚,所述肾茶总酚既包括肾茶酚酸类有效成分,也包括肾茶黄酮类有效成分。
(2)采用本发明的方法,制备获得的肾茶总酚中酚类成分的总重量百分比为大于50%,有效成分含量高,治疗慢性肾炎效果显著。
(3)采用本发明的方法,无需使用有机溶剂,既降低了使用成本,又保护了环境;洗脱液选用乙醇,回收方便,无毒环保;整个提取过程经济无污染,适合工业化大生产。
附图说明
图1:为本发明的实施例所制备的肾茶总酚中有效成分的HPLC图谱(A.咖啡酸B.迷迭香酸)。
图2:为负离子模式下香草酸C8H8O44的UPLC/Q-TOF-MS/MS鉴定的质谱图:
图2A:一级质谱图;图2B:二级质谱图。
图3:为负离子模式下龙胆酸C7H6O4的UPLC/Q-TOF-MS/MS鉴定的质谱图:
图3A:一级质谱图;图3B:二级质谱图。
图4:为负离子模式下绿原酸C16H18O9的UPLC/Q-TOF-MS/MS鉴定质谱图:
图4A:一级质谱图;图4B:二级质谱图。
图5:为负离子模式下紫草酸C16H18O9的UPLC/Q-TOF-MS/MS鉴定质谱图:
图5A:一级质谱图;图5B:二级质谱图。
图6:负离子模式下对羟基苯甲酸C7H6O3的UPLC/Q-TOF-MS/MS鉴定质谱图:
图6A:一级质谱图;图6B:二级质谱图。
图7:为负离子模式下秦皮乙素C9H6O4的UPLC/Q-TOF-MS/MS鉴定质谱图:
图7A:一级质谱图;图7B:二级质谱图。
图8:为负离子模式下6-甲氧基菀花素C17H14O6的UPLC/Q-TOF-MS/MS鉴定质谱图:
图8A:一级质谱图;图8B:二级质谱图。
具体实施方式
在进一步描述本发明具体实施方式之前,应理解,本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案;还应当理解,本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案,而不是为了限制本发明的保护范围。
当实施例给出数值范围时,应理解,除非本发明另有说明,每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义,本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外,根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载,还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
实施例1:肾茶总酚的制备
取肾茶,加入8倍量的50%乙醇,回流1次,每次1h,过滤,合并提取液,浓缩至相0.2g生药/mL,调节pH为2,作为上样液;
上样液经过弱碱型阴离子交换树脂D301R进行吸附静态吸附,吸附完毕后,树脂先用水洗涤以除去水溶性杂质;弃去洗涤液,然后加入2%盐酸-30%乙醇对树脂柱进行静态解吸附;解吸液回收乙醇,调解pH=5,作为待脱酸液。
待脱酸液经大孔吸附树脂DM130进行干法吸附,吸附完毕后,装柱,树脂用水洗涤以除去氯化钠及部分杂质,弃去洗涤液,加入50%乙醇对树脂柱进行动态解吸;解吸液回收溶剂,真空干燥后得到肾茶总酚,其中酚类成分含量由亚硝酸钠-硝酸钠铝-氢氧化钠显色法测定,为43%,咖啡酸、迷迭香酸含量由高效液相色谱法测定,分别0.5%、5.2%。
实施例2:肾茶总酚的制备
取肾茶,加入10倍量的50%乙醇,回流2次,每次1.5h,过滤,合并提取液,浓缩至0.2g生药/mL,调节pH为4,作为上样液;
上样液经过弱碱型阴离子交换树脂D301R进行吸附静态吸附,吸附完毕后,树脂先用水洗涤以除去水溶性杂质;弃去洗涤液,然后加入5%盐酸-70%乙醇对树脂柱进行静态解吸附;解吸液回收乙醇,调解pH=5,作为待脱酸液。
待脱酸液经大孔吸附树脂DM130进行干法吸附,吸附完毕后,装柱,树脂用水洗涤以除去氯化钠及部分杂质,弃去洗涤液,加入30%乙醇对树脂柱进行动态解吸;解吸液回收溶剂,真空干燥后得到肾茶总酚,其中酚类成分含量由亚硝酸钠-硝酸钠铝-氢氧化钠显色法测定,为57%,咖啡酸、迷迭香酸含量由高效液相色谱法测定,分别为0.8%、5.9%。
实施例3:肾茶总酚的制备
取肾茶,加入15倍量的50%乙醇,回流3次,每次3h,过滤,合并提取液,浓缩至0.5g生药/mL,调节pH为4,作为上样液;
上样液经过弱碱型阴离子交换树脂D301R进行吸附静态吸附,吸附完毕后,树脂先用水洗涤以除去水溶性杂质;弃去洗涤液,然后加入5%盐酸-90%乙醇对树脂柱进行静态解吸附;解吸液回收乙醇,调解pH=5,作为待脱酸液。
待脱酸液经大孔吸附树脂DM130进行干法吸附,吸附完毕后,装柱,树脂用水洗涤以除去氯化钠及部分杂质,弃去洗涤液,加入90%乙醇对树脂柱进行动态解吸;解吸液回收溶剂,真空干燥后得到肾茶总酚,其中酚类成分含量由亚硝酸钠-硝酸钠铝-氢氧化钠显色法测定,为43%,咖啡酸、迷迭香酸含量由高效液相色谱法测定,分别0.7%、5.3%。
实施例4:肾茶总酚的制备
取肾茶,加入15倍量的50%乙醇,回流3次,每次3h,过滤,合并提取液,浓缩至0.5g生药/mL,调节pH为4,作为上样液;
上样液经过弱碱型阴离子交换树脂D392进行吸附静态吸附,吸附完毕后,树脂先用水洗涤以除去水溶性杂质;弃去洗涤液,然后加入5%盐酸-90%乙醇对树脂柱进行静态解吸附;解吸液回收乙醇,调解pH=5,作为待脱酸液。
待脱酸液经大孔吸附树脂DM130进行干法吸附,吸附完毕后,装柱,树脂用水洗涤以除去氯化钠及部分杂质,弃去洗涤液,加入90%乙醇对树脂柱进行动态解吸;解吸液回收溶剂,真空干燥后得到肾茶总酚,其中酚类成分含量由亚硝酸钠-硝酸钠铝-氢氧化钠显色法测定,为32%,咖啡酸、迷迭香酸含量由高效液相色谱法测定,分别0.2%、4.3%。
实施例5:肾茶总酚的制备
取肾茶,加入15倍量的50%乙醇,回流3次,每次3h,过滤,合并提取液,浓缩至0.5g生药/mL,调节pH为4,作为上样液;
上样液经过弱碱型阴离子交换树脂D301R进行吸附静态吸附,吸附完毕后,树脂先用水洗涤以除去水溶性杂质;弃去洗涤液,然后加入5%盐酸-90%乙醇对树脂柱进行静态解吸附;解吸液回收乙醇,调解pH=5,作为待脱酸液。
待脱酸液经大孔吸附树脂NKA-9进行干法吸附,吸附完毕后,装柱,树脂用水洗涤以除去氯化钠及部分杂质,弃去洗涤液,加入90%乙醇对树脂柱进行动态解吸;解吸液回收溶剂,真空干燥后得到肾茶总酚,其中酚类成分含量由亚硝酸钠-硝酸钠铝-氢氧化钠显色法测定,为32%,咖啡酸、迷迭香酸含量由高效液相色谱法测定,分别0.2%、4.3%。
实施例6:肾茶总酚对大鼠Heyman肾炎模型的影响
建立大鼠Heymann肾小球肾炎模型,将模型动物随机分为模型组、上述实施例所制备的肾茶总酚组、阳性对照组(选用醋酸泼尼松,0.1mg/kg)和空白对照组,每组动物不少于15只。灌胃给药8周,按每天给药的频度或药物浓度确定剂量。观察指标包括定性定量尿蛋白、血肌酐及血尿素氮、免疫球蛋白、胆固醇、甘油三酯及病理学检查等。将所有数据用软件SPSS(V11.5)进行统计学处理,测定值以(X±SD)表示,多组间比较用单因素方差分析。
表1 给药后各组大鼠指标数据
*表示各组与模型组比较,P<0.05;**表示与模型组比较,P<0.01。
表2 大鼠病理切片检查结果
各组指标数据显示,肾茶总酚可显著降低模型动物的血清肌苷、尿素氮含量和24h尿蛋白量;大鼠病理切片检查结果表明,肾茶总酚能减轻肾小球病变程度。
本发明的发明人还将上述实施例制备获得肾茶总酚,与药学上可接受的辅料混配,根据各种制剂的常规制法,获得含有肾茶总酚提取物的胶囊、片剂、分散片、口含片、咀嚼片、泡腾片、缓释片、颗粒剂等。药效实验表明,治疗慢性肾炎的效果显著。
以上所述,仅为本发明的较佳实施例,并非对本发明任何形式上和实质上的限制,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员,在不脱离本发明方法的前提下,还将可以做出若干改进和补充,这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明的精神和范围的情况下,当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化,均为本发明的等效实施例;同时,凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变,均仍属于本发明的技术方案的范围内。
Claims (8)
1.一种制备肾茶总酚的方法,所述方法包括如下步骤:
(1)提取:取肾茶,加入8-15倍量的乙醇,浸泡,回流1-3次,每次1-3h,过滤,合并滤液,减压浓缩至0.2-0.5g生药/mL,得肾茶粗提液,然后将所得肾茶粗提液离心,取上清液,调节pH至2~6,作为上样液;
(2)采用离子交换树脂进行分离纯化:将步骤(1)中所得上样液经过弱碱型阴离子交换树脂进行静态吸附,然后水洗所述树脂,再采用解析剂对所述树脂柱进行静态解吸附得解析液,将所得解吸液调节pH至中性并回收乙醇后作为待脱酸液,所述上样液与所述弱碱型阴离子交换树脂的重量比为1:1~1:10;所述弱碱型阴离子交换树脂制成的树脂柱径和柱高比为1:4~1:12;
(3)采用大孔吸附树脂进行脱盐及再纯化:将步骤(2)中的待脱酸液经大孔吸附树脂进行干法吸附,吸附完毕后,装柱,用水洗涤,弃去洗涤液,加入乙醇对所述树脂柱进行动态解吸得解吸液;解吸液回收溶剂,真空干燥后即得到肾茶总酚,所述动态解析的速度为1BV/h-4BV/h;乙醇用量为10BV-20BV。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述解析剂为含盐酸的乙醇。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述离子交换树脂选自D301R、D392、ADS-7、D296R、717、D315、DEAE-650M。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,所述大孔吸附树脂选自NKA-9、ADS-21、DM-301、HPD400、AB-8、DM-130、D101、D4020。
5.由权利要求1~4任一权利要求所述的方法制备获得的肾茶总酚。
6.根据权利要求5所述的肾茶总酚,其特征在于,所述肾茶总酚中,酚类成分的总重量百分比为50%~60%,所述肾茶总酚包括咖啡酸、迷迭香酸、香草酸、龙胆酸、绿原酸、紫草酸、对羟基苯甲酸、秦皮乙素及6-甲氧基菀花素。
7.根据权利要求5或6所述的肾茶总酚在制备慢性肾炎治疗药物中的用途。
8.一种用于治疗慢性肾炎的药物组合物,所述药物组合物包括如权利要求5或6所述的肾茶总酚。
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