CN101143160A - 一种肾茶提取物及制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从药用植物肾茶经化学方法提取获得水溶性酚酸提取物,该提取物经药理试验证实具有较强的生理活性,特别是对抑制尿酸的生成,用于痛虱的治疗,同时对尿路感染或尿路结石治疗也有较好的作用,毒副作用小。
Description
技术领域
本发明涉及一种药用原料的提取物及其制备方法和用途。具体地指,由药用原料肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU)经提取得到的水溶性酚酸提取物,该提取物经药理试验后具有良好的生理活性。
背景技术
肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU)为唇形科肾茶属lerodendranthus植物,又名猫须草,民间认为全草有利尿、抗菌、消炎、溶石、排石作用,常用于急、慢性肾炎、膀胱炎、尿路结石、咽炎及风湿性关节炎。肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU)的化学成分主要由脂溶性成分和水溶性成分两部分组成。其中脂溶性成分以总黄酮为代表,药理临床研究证实此类成分具有良好的生理活性。据报道,自二十世纪八十年代以来,不少学者对肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU)的水溶性成份进行了系统研究,分离得到现已从肾茶中分出咖啡酸、咖啡酸的二聚体迷迭香酸、咖啡酸与酒石酸的缩合物和4个咖啡酸四聚物等8个酚酸类成分。肾茶中所含的水溶性成分具有较强的抗炎、抗菌、利尿、免疫调节、抗血小板聚集及抗血栓、抗系膜细胞增殖等作用。迷迭香酸的活性最强,研究表明迷迭香酸能抑制血小板源性生长因子(PDGF)、肿瘤坏死因子a诱导的系膜细胞增殖的作用。但目前尚未见有关肾茶水溶性酚酸提取物在治疗痛风病方面的研究报道。
发明内容
本发明目的提供一种从肾茶中分离获得的水溶性酚酸提取物。
本发明另一目的是提供该提取物的制备方法。
本发明再一目的是提供该提取物用途。
本发明提供了由药用原料肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU)分离得到的水溶性酚酸提取物,该提取物含有咖啡酸、迷迭香酸、原儿茶酸三种酚酸在内的酚酸成分。其中所说的肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU)酚酸的总重量百分比为50-85%,优选的是使所说的肾茶总酚酸的总重量百分比为70-85%。
以药用原料肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU)为原料分离制取水溶性酚酸提取物的方法,包括:
A、将粉碎的肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU)原料用含水乙醇充分加热回流提取后,对加热回流提取得到的溶液过滤,并减压除去乙醇后得到的剩余的水提取溶液,浓缩,再用去离子水稀释,离心,取上清液备用。
B、将A步骤处理后得到的上清液再用大孔树脂进行吸附,然后依次分别用水和含水乙醇分别洗脱吸附树脂,合并洗脱液,除去溶液中的乙醇并浓缩,得到浸膏状提取物,干燥得干粉。
其中A步骤中回流提取液以体积含量为30-50%的乙醇水溶液为好。浸渍时所用乙醇水溶液的量为药材肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU)重量5-20倍,回流提取1-2次,每次提取至少为2-4小时。洗脱液一般可以使用体积含量为30-60%的含水乙醇,优选的是使用体积含量为40-50%的乙醇水溶液。
在上述的提取方法中,均可以采用常规的减压蒸馏方式除去乙醇,并得到剩余的水提取物部分。
在上述方法的基础上,对于所得到的该浸膏状的提取物,还可再经常规的真空或冷冻干燥处理后,进一步得到为干粉状的提取物。
用上述方法提取制备得到的浸膏状或干粉状的产物,即为含有所说的肾茶酚酸成分的棕红色水溶性提取物,味微苦。以原儿茶酸作为对照品,采用酚类化合物与铁氰化钾—三氯化铁为显色反应,比色法测定(方法参照文献《丹参及丹参制剂中水溶性酚酸总量的测定》)其中含有所说的肾茶总酚酸一般可为总重量的70-85%。其中该肾茶总酚酸提取物经硅胶柱正相层析分离和结构确定,其中含有迷迭香酸(a)、咖啡酸(b)、原儿茶酸(c)三种酚酸类成分,化学结构式如下:
原儿茶酸
咖啡酸
迷迭香酸(Rosmarinic Acid)
药理试验:
1.肾茶酚酸提取物T1抑制尿酸生成的活性试验
参照文献,选用氧嗪酸钾盐为尿酸酶抑制剂,抑制尿酸酶,增高血清尿酸水平,造成小鼠高尿酸血症模型。
昆明种小鼠,雄性,体重27-29g,清洁级,由上海中医药大学实验动物中心提供。实验动物随机进行分组,每组10只。正常实验分为5组即正常对照组、阳性对照组(别嘌呤醇)和T1高、中、低剂量组。模型实验分为6组,即正常对照组、模型组、阳性对照组(别嘌呤醇)和T1高、中、低剂量组。正常对照组及模型组小鼠给予等容积生理盐水,T1高、中、低剂量组每日分别灌胃给予T1溶液8g/kg、4g/kg、2g/kg,阳性对照组给予别嘌呤醇10mg/kg。连续灌胃6天。正常实验于末次给药后1h摘眼球取血,离心,分离血清待检;模型实验于末次给药前1h(取血样前2h)小鼠腹腔注射氧嗪酸钾盐按300mg/kg,给药后1h同上取血,分离血清采用尿酸酶偶联过氧化物酶比色法(酶法)用7020全自动生化分析仪测定血清尿酸。
2.肾茶酚酸提取物T2对尿酸钠致踝关节肿胀大鼠的影响(治疗痛风)
参照文献,选用关节腔内注射尿酸钠,所致大鼠的踝关节肿胀模型。
取Wistar大鼠,雄性,体重180-220g,随机分5组:空白对照组、秋水仙碱组、T2高、中、低剂量组,分别灌服蒸馏水、秋水仙碱及T2提取物,每日1次,连续3d。末次给药1.5h后,测量大鼠右后肢踝关节周径,然后关节腔内注射尿酸钠混悬液0.2ml/只,于注射后1、2、4h再次测定该踝关节周径,计算肿胀率。结果表明,SC水提物能明显抑制尿酸钠所致大鼠的踝关节肿胀,与空白对照组相比,有显著性差异。
现代医学证实痛风是白细胞介导的急性炎症,急性痛风的致炎因子是尿酸钠结晶(MSUC)″1,其主要病理改变是尿酸钠晶体在关节周围沉淀引起急性炎症反应。现代生物学研究证实,MSUC沉积到关节腔周围时,诱使单核一巨噬细胞吞噬晶体,肥大细胞,PMN聚集到其周围,并释放出致炎、致痛物质ffl,91,如组胺、前列腺素、LTB4,TNFα趋化因子等炎症介质,产生很强的炎症效应及致痛效应。因此,痛风急性发作时可表现为关节红肿热痛和活动受限。秋水仙碱为现代医学治疗急性痛风的首选用药,其作用为抑制炎症部位的趋化性白细胞增加,使白细胞吞噬作用减少,阻断趋化因子的释放,抑制LTB4的产生,从而减轻尿酸盐的释放,抑制LTB4的产生,从而减轻尿酸盐引起的局部炎性反应,对急性发作有特效,能迅速终止疼痛发作。动物实验同样证实SC能抑制尿酸钠所致大鼠的踝关节肿胀,可见T2能显著减轻痛风急性发作时关节红肿热痛及功能受限,因此具有治疗痛风和抗的作用。
3.肾茶酚酸提取物T3对治疗尿路感染及慢性肾炎的药理实验
1.参照文献,选用二甲苯20μl/只涂抹小鼠左耳两面致炎模型。
昆明种小鼠50只,雄性,体重18~22g,随机分为5组,每组10只,空白对照组给予等体积生理盐水,阳性对照组给予地塞米松30mg/kg,肾茶提取物T3高、中、低剂量组分别给予肾茶提取物T3100、50、25mg/kg,各组均灌胃给药连续7天。末次给药30min后,用二甲苯20μl/只涂抹左耳两面致炎。致炎2h后,颈椎脱臼处死小鼠,用直径7mm打孔器在每只小鼠左右耳相对称部位取下耳片,称重,记录其重量差为耳肿胀度,结果表明,肾茶提取物T3高、中、低剂量组对二甲苯所致小鼠耳肿胀具有明显的抑制作用,并呈一定的量效关系。
2.体外抑菌作用
最低抑菌浓度(MIC)测定:取肾茶酚酸提取物T3(2mg/ml)100ml,加溶化的MH琼脂400ml混匀;取出200ml再加200mlMH琼脂混匀;依次类推,即得药物浓度梯度培养基:0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.0032g/ml,制平板。分别在药液梯度平板琼脂表面均匀划线接种上金黄色葡萄球菌(1亿个/ml)、绿脓及大肠杆菌(300万个/ml)的新鲜菌液,37C培养20小时,观察结果。结果见表1。
2.2抑菌圈测定:取直径(Φ)10cm的小圆滤纸片100片,以2mg/ml的肾茶浸润,115C,灭菌20min,烘干。将MH琼脂加热溶化,制平板,并用消毒脱脂棉少许将新鲜菌液均匀涂布接种于平板表面,将药液滤纸片用小镊子轻贴在平板表面,放置于37℃培养17小时,测量抑菌圈。结果见表1。
表1肾茶的体外抑菌作用
菌种 | 抑菌范围(mg/ml) | MIC(mg/ml) | 抑菌圈(cm) |
金黄色葡萄球菌大肠杆菌绿脓杆菌 | 0.020~0.0060.1~0.0200.05~0.020 | 0.0200.10.05 | 15.0±1.610.1±0.111.5±1.5 |
结果表明:肾茶酚酸提取物T3具有抑菌抗炎的药理活性。
以上述所说的由药用原料肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU)分离得到的含有肾茶酚酸成分的水溶性提取物为有效药用成分,与药学上可接受的辅助添加性成分混合后,按相应的常规药物制剂方法,可以制各成相应的尿酸抑制剂类的药物。例如,与在口服制剂中可以被接受的如崩解剂、赋形剂、润滑剂、粘合剂、填充剂等常用的辅助添加成份混合后,按常规的操作方法和过程,可以制成为片剂、丸剂、胶囊剂或多种相应的缓释剂、控释剂等固体口服制剂形式的药物;与常规的增溶剂、乳化剂、润湿剂、起泡或消泡剂等表面活性剂、稀释剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂、增稠剂等混合后,按相应的常规方法,可以制成为如水剂、糖浆等液体制剂形式的口服药物。
本发明还提供了肾茶水溶性提取物在制备尿酸抑制剂类药物、治疗痛风、治疗尿路感染或尿路结石的药物中的用途。
本发明上述所说的可作为有效药用成分使用的肾茶酚酸类水提取物,其原料为天然药物肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU),药源充足,提取方法简便易行。实验结果显示,以该提取物在作为尿酸抑制剂药物的有效活性成分,可具有较强抑制尿酸的生成,不仅可用于痛风的治疗,还可用于尿路感染或尿路结石的治疗,疗效好,毒副作用小。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
实施例1 本发明肾茶酚酸提取物T1的制备 取1000克肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU),经粉碎后,依次用50%乙醇回流2次,每次2小时。将回流滤液合并,减压蒸馏除去乙醇,得浓缩水溶液,用去离子水稀释,离心,备用。取D-101型大孔树脂装柱,将上述水溶液以20毫升/分钟的流速通过该大孔树脂柱,然后用500毫升去离子水以20毫升/分钟的流速洗柱,再用10%乙醇洗脱,弃去,再用50%乙醇洗脱,合并洗脱液,减压浓缩,真空干燥,得肾茶酚酸提取物T1干粉39.8克(得率约4%)。以上制各的肾茶酚酸提取物,为棕黄色固体物质,味微苦。采用比色法,利用酚类化合物与铁氰化钾—三氯化铁为显色反应,用原儿茶酸作为对照品,测定其中所含肾茶总酚酸为总重量的85%。
实施例2本发明肾茶酚酸提取物T2的制备 取1000克肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU),经粉碎后,依次用30%乙醇回流2次,每次2小时。将回流滤液合并,减压蒸馏除去乙醇,得浓缩水溶液,用去离子水稀释,离心,备用。取D-101型大孔树脂装柱,将上述水溶液以20毫升/分钟的流速通过该大孔树脂柱,然后用500毫升去离子水以20毫升/分钟的流速洗柱,再用10%乙醇洗脱,弃去,再用30%乙醇洗脱,合并洗脱液,减压浓缩,真空干燥,得肾茶酚酸提取物T1干粉49.8克(得率约5%)。以上制各的肾茶酚酸提取物,为棕黄色固体物质,味微苦。采用比色法,利用酚类化合物与铁氰化钾—三氯化铁为显色反应,用原儿茶酸作为对照品,测定其中所含肾茶总酚酸为总重量的50%。
实施例3本发明肾茶酚酸提取物T3的制备取1000克肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU),经粉碎后,依次用50%乙醇回流2次,每次4小时。将回流滤液合并,减压蒸馏除去乙醇,得浓缩水溶液,用去离子水稀释,离心,备用。取D-101型大孔树脂装柱,将上述水溶液以20毫升/分钟的流速通过该大孔树脂柱,然后用500毫升去离子水以20毫升/分钟的流速洗柱,再用10%乙醇洗脱,弃去,再用40%乙醇洗脱,合并洗脱液,减压浓缩,真空干燥,得肾茶酚酸提取物T1干粉45.8克(得率约4.5%)。以上制各的肾茶酚酸提取物,为棕黄色固体物质,味微苦。采用比色法,利用酚类化合物与铁氰化钾—三氯化铁为显色反应,用原儿茶酸作为对照品,测定其中所含肾茶总酚酸为总重量的70%。
实施例4本发明肾茶酚酸提取物胶囊的制备
取1000克肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYWU),经粉碎后,依次用50%乙醇回流2次,每次2小时。将回流滤液合并,减压蒸馏除去乙醇,得浓缩水溶液,用去离子水稀释,离心,备用。取D-101型大孔树脂装柱,将上述水溶液以20毫升/分钟的流速通过该大孔树脂柱,然后用500毫升去离子水以20毫升/分钟的流速洗柱,再用10%乙醇洗脱,弃去,再用50%乙醇洗脱,合并洗脱液,减压浓缩,真空干燥,得肾茶酚酸提取物T1干粉39.8克(得率约4%)。加入糊精、微晶纤维素等辅料制成颗粒,并罐装制成胶囊。这以上制备的肾茶酚酸提取物胶囊,内容物为棕黄色固体物质,味微苦。采用比色法,利用酚类化合物与铁氰化钾—三氯化铁为显色反应,用原儿茶酸作为对照品,测定其中所含肾茶总酚酸为50mg/粒。
实施例5本发明肾茶酚酸提取物片剂的制备
取1000克肾茶(Clerodendranthus Spicatus(Thunb)CYW0),经粉碎后,依次用50%乙醇回流2次,每次2小时。将回流滤液合并,减压蒸馏除去乙醇,得浓缩水溶液,用去离子水稀释,离心,备用。取D-101型大孔树脂装柱,将上述水溶液以20毫升/分钟的流速通过该大孔树脂柱,然后用500毫升去离子水以20毫升/分钟的流速洗柱,再用10%乙醇洗脱,弃去,再用50%乙醇洗脱,合并洗脱液,减压浓缩,真空干燥,得肾茶酚酸提取物T1干粉39.8克(得率约4%)。加入淀粉、羧甲基纤维素钠等辅料制成颗粒,并压制成片剂。这以上制备的肾茶酚酸提取物片剂,为棕黄色固体物质,味微苦。采用比色法,利用酚类化合物与铁氰化钾—三氯化铁为显色反应,用原儿茶酸作为对照品,测定其中所含肾茶总酚酸为50mg/片。
Claims (8)
1.一种肾茶提取物含有咖啡酸、迷迭香酸、原儿茶酸的肾茶酚酸成分,其中肾茶酚酸的总重量百分比为50-85%.
2.根据权利要求1所述的肾茶提取物,其特征在于水溶性酚酸提取物中,肾茶酚酸的总重量百分比优先为70-85%。
3.根据权利要求1所述的肾茶提取物,其特征在于制备成片剂或胶囊其水溶性酚酸提取物含量50mg/片或50mg/粒。
4.如权利要求1所述的肾茶提取物的制备方法,包括下列步骤:
A、将粉碎的肾茶原料用含水乙醇充分加热回流提取后,对加热回流提取得到的溶液过滤并减压除去乙醇后得到的剩余的水提取溶液,浓缩,再用去离子水稀释,离心,取上清液备用。
B、将A步骤处理后得到的上清液再用大孔树脂进行吸附,然后依次分别用水和含水乙醇分别洗脱吸附树脂,合并洗脱液,除去溶液中的乙醇并浓缩,得到浸膏状提取物,干燥得干粉。
5.根据权利要求4所述的肾茶提取物得制备方法,其特征在于洗脱剂依次分别为水30%-60%含水乙醇。
6.如权利要求1所述的肾茶提取物的用途,在制备预防治疗痛风、尿路感染、慢性肾炎药物中应用。
7.根据权利要求6所述的肾茶提取物的用途,其特征在于在制备预防治疗痛风病药物中应用。
8.根据权利要求6所述的肾茶提取物的用途,在制备预防治疗尿路感染药物中应用。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20080319 |