CN101974012B

CN101974012B - 一种具有药用活性的新化合物灯盏细辛酸乙酯

Info

Publication number: CN101974012B
Application number: CN2010105190131A
Authority: CN
Inventors: 杜江; 林艳和; 林炎海
Original assignee: YUNNAN BIOVALLEY DENGZHANHUA PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: YUNNAN BIOVALLEY PHARMACEUTICAL CO., LTD.
Priority date: 2010-10-26
Filing date: 2010-10-26
Publication date: 2012-01-04
Anticipated expiration: 2030-10-26
Also published as: CN101974012A

Abstract

本发明涉及一种具有结构式(I)的新化合物，该化合物可以自菊科飞蓬属植物灯盏细辛Erigeron breviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.的干燥全草中提取分离得到。所述的化合物具有抗炎性反应、抗血小板聚集、抗血栓及扩血管作用，可用于制备用于心脑血管疾病治疗的药物。

Description

一种具有药用活性的新化合物灯盏细辛酸乙酯

技术领域

本发明涉及一种具有抗炎性反应、抗血小板聚集、抗血栓及扩血管作用的新化台物，以及含该化合物作为活性成分的治疗心脑血管疾病的药用组合物。具体的说是从灯盏细辛中提取的新化合物灯盏细辛酸乙酯(Ethyl brevicate)、制备方法及其在制药中的应用。

背景技术

迄今为止，以冠心病、脑卒中(脑中风)为代表的心脑血管疾病发病率居高不下，其病死率位居人类各类疾病死亡率首位。寻找新的、有效的治疗心脑血管疾病药物是当今制药及临床医学界非常关注的难点及热点。

灯盏细辛又名灯盏花，系菊科飞蓬属值物Erigeron Breviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.的干燥全草，具有散寒解表，祛风除湿，活络止痛的功效。云南药物研究所张人伟等首次从灯盏细辛中分离到黄酮类活性成分灯盏乙素，并把灯盏乙素为主、含少量灯盏甲素(芹菜素苷)的混合物称为灯盏花系(breviscapin)[张人伟，杨生元，林永月，药学学报(1981)，16(1)，68-6]。除了灯盏乙素外，专利CN1136434公开了二咖啡酸奎宁酸酯类化合物3，5-二咖啡酰基奎宁酸和3，4-二咖啡酰基奎宁酸(3，4-dicaffeoylquinic acid)]。CN1064236C则公开了焦袂康酸(promenonic acid)及飞蓬苷(erigenoide)在治疗心脑血管疾病方面应用。张卫东等申请了从灯盏细辛中分离到的活性成分1-(2’-γ-吡喃酮)-6-咖啡酰基-β-D-葡萄糖苷的制剂和制备方法的专利CN1252276。专利CN1462750公开了从灯盏细辛中分离到的活性成分飞蓬酯乙及其制备方法和在制药中的应用。除此之外，尚未见其他自灯盏细辛中发现的新化合物公开。

迄今为止，自灯盏细辛中提取的、具有治疗心脑血管疾病活性的药物很多。其中大部分为多种化合物的混合物，这些药物虽然具有治疗作用，但多种成分必然造成如下的问题：疗效的均一性差、质量控制难、副作用难以控制(注射剂尤其明显)。单类化合物有效的药物仅有灯盏花素制剂，难以满足复杂的临床医学需求。

鉴于如上原因，本发明人经过深入研究，从灯盏细辛中提取分离出新的化合物：灯盏细辛酸乙酯(Ethyl brevicate)。经试验证明其具有抗炎性反应、抗血小板聚集、抗血栓及扩张血管作用，可用于制备用于治疗心脑血管疾病的药物。并提供了灯盏细辛酸乙酯的提取制备方法。

发明内容

本发明针对现有技术空白，公开新活性成分灯盏细辛酸乙酯(以下简称“本发明化合物”或“灯盏细辛酸乙酯”)。本发明提供了如下技术方案：

具有如下的结构式化合物灯盏细辛酸乙酯：

本发明化合物结构数据如下：

HRESIMS：m/z 521.1428[M+Na]⁺(cal for C₂₆H₂₆O₁₀Na.521.1423)，[α]_D ^19.1，-92.05°(0.088，甲醇)；

IR(KBr压片)：3565，2997，2967，1720，1607，1520，1458，1316，1155，1090，1047，1024，831，716cm^-1；

UVλmax(MeOH)：228.8(19162)，315.8(17264)nm；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d6，ppm)：1.24(3H，t，J＝7.2Hz，OAc)，2.29-2.58(2H，m，H-2α，H-2β)，3.96，4.14(each 1H，m，H-9)，4.18(1H，m，H-6)，4.21(2H，q，J＝7.2Hz，OAc)，4.75(1H，t，J＝4.0Hz，H-5)，5.36(1H，t，J＝5.2Hz，H-4)，5.70(1H，t，J＝5.6Hz，H-3)，6.23(1H，d，J＝16Hz，H-3”)，6.73(2H，d，J＝8.0Hz，H-6”，H-8”)，7.31(2H，d，J＝8.0Hz，H-5”，H-9”)，7.36(1H，d，J＝16Hz，H-2”)，7.54(2H，m，H-4’，H-6’)，7.66(1H，m，H-5’)，8.01(2H，m，H-3’，H-7’)。

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d6，ppm)：102.8(C-1)，38.3(C-2)，65.2(C-3)，67.1(C-4)，74.4(C-5)，83.3(C-6)，59.1(C-9)，167.3(C-10)，165.6(C-1’)，130.0(C-2’)，129.9(C-3’，C-7’)，129.3(C-4’，C-6’)，133.3(C-5’)，165.3(C-1”)，146.1(C-2”)，113.5(C-3”)，125.1(C-4”)，130.8(C-5”，C-9”)，116.2(C-6”，C-8”)，160.6(C-7”)，14.4，62.1(OAc)。

该化合物为新化合物，与专利CN1462750中公开的飞蓬酯乙骨架相同，但取代基及位置均不同。飞蓬酯乙是分别在3，5位形成咖啡酸酸酯，而本专利涉及的灯盏细辛酸乙酯则3位上由苯甲酰基取代形成苯甲酸酯，而4位上则形成对羟基苯丙烯酸酯。

本发明所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；黏合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂黏土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其他辅剂如香味剂、甜味剂等。

本发明提供了制备权利要求1的本发明化合物的方法：取灯盏细辛的全草或地上部分，粉碎，用0-95％乙醇或0-95％丙酮水溶液提取三次，合并三次提取液，减压浓缩。浓缩液用聚酰胺树脂层析，先用水洗脱，再用50-90％的乙醇洗脱，收集50-90％乙醇洗脱液后减压浓缩。此部分浓缩液至少可用如下方法分离制备得到灯盏细辛酸乙酯：

1、用硅胶反复层析制备；

2、用增/减压反相(Rp-18)柱层析制备；

3、用葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)反复纯化制备；

4、用上述1结合2和/或3的方法制备。

除上述制备方法，本领域技术人员熟知的一些方法也可以用于制备灯盏细辛酸乙酯，比如前述灯盏细辛全草用乙酸乙酯提取、浓缩液用溶剂分配萃取后用各种正反相层析方法制备本发明化合物。

药效学试验研究

一.心脑血管方面的药理作用

1.对不同诱导剂诱导血小板凝集的影响

1.1材料

灯盏细辛酸乙酯：20mg/kg灌胃；

空白对照组：生理盐水；

阳性对照：阿司匹林。

1.2实验方法

豚鼠分组(每组8只)，灌胃5天，空白对照用生理盐水。末次给药1小时后颈动脉采血，以枸橼酸钠抗凝，混匀，离心，合并上清液作为PRP(富血小板血浆)，血小板计数；余下血浆离心，取上清液作为PPP(贫血小板血浆)；以PPP调零，取PRP300μl加入比浊管，37℃温育，加入诱导剂PAF(血小板活化因子)，聚集不同时间，记录数据。结果见表1。

与空白对照组比较**p＜0.01

用ADP诱导剂的试验结构与上述实验结果类似。

由上述结果可知，灯盏细辛酸乙酯能抑制不同诱导剂诱导的血小板聚集(凝集)、降低最大聚集率，效果与阿司匹林类似。

2.对大鼠体外血栓形成的影响

按照药理学公知方法取下分别测定血栓湿重及血栓干重。

结果表明，在大鼠动脉-静脉血流旁路术血栓形成的实验中，与模型对照组比较，灯盏细辛酸乙酯组P＜0.01；在大鼠体外血栓形成过程中，灯盏细辛酸乙酯使血栓湿重较对照组比较有显著性差异(P＜0.01)。

二.抗炎性方面的药理作用：对二甲苯致小鼠皮肤毛细血管通透性的影响

本发明化合物物：20mg/kg灌胃；

对照组：生理盐水；

实验方法

参照陈奇主编的《中药药理研究方法学》制作动物炎症模型，结果见下表：

与对照组比较**P＜0.01

三.血管活性试验

表2.灯盏细辛酸乙酯对苯肾上腺素诱导兔主动脉收缩的影响(n＝10)

**P＜0.01vs给药前对照

鉴于灯盏细辛酸乙酯具有以上药理活性，因此预想灯盏细辛酸乙酯可用于治疗心脑血管疚病，尤其是冠心病、脑卒中(中风)。

本发明化合物可单独或与其它药用许可的辅料按现有技术制成片剂、胶囊、滴丸、颗粒剂等口服剂型或注射液、冻干剂等注射用剂型。

实施例

实施例1：灯盏细辛酸乙酯的提取制备工艺

取灯盏细辛的全草10kg，粉碎，用70％丙酮水溶液提取三次，合并三次提取液，减压浓缩。浓缩液上聚酰胺树脂层析，先用水洗脱，再用60％的乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液后后减压浓缩，此部分用硅胶反复层析，制备得到灯盏细辛酸乙酯(Ethylbrevicate)50g。

实施例2：灯盏细辛酸乙酯的提取制备工艺

取灯盏细辛的全草10kg，粉碎，用70％乙醇水溶液提取三次，合并三次提取液，减压浓缩。浓缩液上聚酰胺树脂层析，先用水洗脱，再用80％的乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液后后减压浓缩，此部分用减压反相(Rp-18)柱层析分离制备得到灯盏细辛酸乙酯(Ethyl brevicate)60g。

实施例3：灯盏细辛酸乙酯的提取制备工艺

取灯盏细辛的全草10kg，粉碎，用水溶液提取三次，合并三次提取液，减压浓缩。浓缩液上聚酰胺树脂层析，先用水洗脱，再用50％的乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液后后减压浓缩，此部分用葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)反复纯化制备得到灯盏细辛酸乙酯(Ethyl brevicate)40g。

实施例4、灯盏细辛酸乙酯的片剂的制备工艺

将灯盏细辛酸乙酯10g与淀粉混合均匀后，加入10％的淀粉浆10g制成软材，过14目筛制粒，在70-80℃温度下干燥，过12目筛整粒，加硬脂酸镁2g混合后，压制成1000片，即得。每片含灯盏细辛酸乙酯10mg。

实施例5、灯盏细辛酸乙酯的胶囊剂制备工艺

加10g灯盏细辛酸乙酯，加80℃干燥的淀粉30g和硬脂酯镁2g混合均匀后，分装成1000粒胶囊，每粒胶囊含灯盏细辛酸乙酯10mg。

实施例6.灯盏细辛酸乙酯的注射液制备

10g灯盏细辛酸乙酯溶解在5000ml冷的注射用蒸馏水中，85g氯化钠、2g亚硫酸钠混合溶解在1000ml热的注射用蒸馏水中。将两种溶液混合，加水至10000ml，调节pH值在5.0-7.0滤棒过滤，膜过滤，澄明度检查合格后加氮气封瓶，在115℃，10atm压力下灭菌25分钟。

实施例7.灯盏细辛酸乙酯的注射用冻干剂制备

取适量辅料亚硫酸钠、氯化钠、甘露醇，加注射用水1600毫升溶解，加活性炭3.2g，吸收30分钟陈热原，过滤除去活性碳，在滤液中加入灯盏细辛酸乙酯10g，调节pH为6.0～7.3，微孔滤膜滤过，加注射用水至2000ml，分装为1000支，冷冻干燥，即得。

Claims

1.具有如下的结构式化合物灯盏细辛酸乙酯：

2.一种制备权利要求1的化合物的制备方法，其特征在于取灯盏细辛的全草或地上部分，粉碎，用0-95％乙醇或0-95％丙酮水溶液提取三次，合并三次提取液，减压浓缩，浓缩液用聚酰胺树脂层析，先用水洗脱，再用50-90％的乙醇洗脱，收集50-90％乙醇洗脱液后减压浓缩，此部分用硅胶反复层析，制备得到灯盏细辛酸乙酯。

3.如权利要求2的一种制备权利要求1的化合物的制备方法，其特征在于取灯盏细辛的全草或地上部分，粉碎，用0-95％乙醇或0-95％丙酮水溶液提取三次，合并三次提取液，减压浓缩，浓缩液用聚酰胺树脂层析，先用水洗脱，再用50-90％的乙醇洗脱，收集50-90％乙醇洗脱液后减压浓缩，此部分用硅胶反复层析，结合增/减压反相Rp-18柱层析、Sephadex LH-20反复纯化，制备得到灯盏细辛酸乙酯。

4.药物组合物，其含有权利要求1的化合物作为活性成分以及药学上可接受的载体。

5.权利要求1的化合物在制备治疗心脑血管疾病的药物中的应用。