CN102342970A - 一种野菊花提取物、制备方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种野菊花提取物，其是通过野菊花乙醇提取，得乙醇提取液；提取液正丁醇萃取，取正丁醇萃取层减压浓缩制备得到；本发明还提供了该提取物的制备方法及用途，该提取物对镇痛有很好的疗效。

Description

一种野菊花提取物、制备方法及用途

技术领域

本发明涉及一种植物提取物，尤其是涉及一种野菊花提取物、制备方法和用途。

背景技术

野菊花为菊科植物野菊(Chrysanthemum indicum L.北野菊C.borealeMak.)的头状花序。别名：野黄菊花、苦薏、山菊花、甘菊花。性状：花序呈类球形，直径0.3～1cm，棕黄色。总苞由4～5层苞片组成。舌状花一轮，黄色，皱缩卷曲；管状花多数，深黄色。体轻。气芳香，味苦，性微寒，味苦、辛。

【化学成分】：

花含挥发油0.1％～0.2％，油中含白菊醇(chrysol)、白菊酮(chrysantone)，尚含dl-樟脑、β-3-蒈烯(β-3-carene)、桧烯(sabinene)及香草醇(carvol).此外，花中分离得野菊花内酯(yejuhualactone)约0.1％，密蒙花甙(acacetin-7-rhamnoglucoside)约0.72％.另含木犀草素葡萄糖甙(luteolinglucoside)、菊红甙(chrysanthemin，asterin)菊黄质(chrysanthemaxanthin)、环氧叶黄素(xanthophyllepoxide)、木犀草素、野菊花酮(没药烷酮二醇)，及野菊花醇、胡萝卜甙、豚草素、金合欢素、山俞酸甘油酯、棕榈酸等。

【药理作用】

现代研究证明，野菊花是中草药中的″广谱抗生素″，对多数皮肤真菌、金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌和流感病毒等均有较强的抑制作用。野菊花为菊科植物野菊的头状花序，主要成分为野菊花内酯、野菊花醇、黄酮苷等，性微寒，具疏散风热、消肿解毒、抗感染、抗病毒的功效。中医认为，野菊花性凉，有疏风清热、解毒消肿、健脑明目等功效，可治疗治疗冠心病、高血压、风热感冒、肺炎、鼻炎、支气管炎、咽喉肿痛、目赤模糊、淋巴腺炎、痈疖疔毒、湿疹、皮肤瘙痒、口疮、丹毒等症。

1.抗菌：

50％花煎剂用平板挖沟法，对金黄色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、伤寒杆菌等有抑制作用；去乙醇浸膏用试管衡释法，1∶5对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌等有抑制作用.

2.抗病毒：

花去乙醇提取物的浸膏对流行性感冒病毒在体外有抑制作用.

3.对心血管的作用：

花去乙醇提取物的浸膏6～10g/kg腹腔注射或15g/kg灌胃，对正常大鼠有降压作用；16g/kg腹腔注射或十二指肠给药亦有降压作用，降压作用可能系通过抗肾上腺素和扩张外周血管以及中枢抑制的结果：花乙醇提取物(包括野菊花内酯、黄酮甙、苦味素等)50～100mg/kg小肠给药，对麻醉猫呈降压作用；100～200mg/kg灌胃，对正常狗及肾型高血压狗均呈降压作用.野菊花注射液2g/kg静脉注射，对犬实验性心肌缺血有保护作用，野菊花水提醇沉法制得的注射液静脉注射1.5-2.0g(生药)/kg于麻醉猫，冠脉流量立即增加93％，持续观察40分钟冠脉流量均较给药前增加，有显著性差异。心率给药后显著减慢，给药后即刻较给药前降低12％。动静脉的氧分压差较给药前降低，说明心肌耗氧量降低。对于离体兔心，注入野菊花注射液后，冠脉流量明显增加，心肌收缩振幅明显降低。兔肾和兔耳血管给野菊花注射液后也见明显扩张作用。野菊花制剂用于实验性心肌梗塞或供血不足的犬，能显著提高心肌对铯的摄取量。野菊花水煎醇沉乙酸乙酯提取物，80mg/kg静脉注射于健康麻醉犬，可使冠脉流量增加49.6％，冠脉阻力下降45.8％，作用持续约10分钟同时心率减慢，血压同总外周阻力下降，心输出量及每搏输出量增加，左心作功量减少，较之给药前均有显著差异。野菊花注射液2g(生药)/kg静脉注射，对犬实验性心肌缺血也有明显保护作用，效应强度大于心得安1mg/kg。

4.对血小板聚集的影响：

取雄性家兔的颈动脉血制备成富血小报血浆，0.9ml于聚集管中，加入0.1ml含1g(生药)/ml的野菊花注射液，室温下放置3分钟后于37℃搅拌保温2分钟，加ADP 5μl，利用回归法计算对ADP诱导的家兔血小板聚集能力。其抑制作用是丹参的2.3倍，党参的3.2倍，其50％的解聚剂量相当于丹参的60％，党参的50％左右。

5.降压作用：

野菊花乙醇流浸膏水溶液腹腔注射或灌胃，对不麻醉大鼠，麻醉猫和麻醉犬均有明显的降压作用。野菊花乙醇浸膏精制提取物50-100mg肠内注射，可使麻醉猫2h内的降压面积百分比达-19到-22％，对心率与呼吸均无明显影响。；给正常犬1次灌胃100-150mg/kg，或给慢性肾型高血压犬每日灌胃100-200mg/kg，连给3周，均有一定的降压效果。其降压特点为缓慢而持久，且无严重毒性反应。值得注意的是其水提取者基本不降压，说明降压活性成分存在于酯溶性部分。野菊花流浸膏水溶液腹腔注射对猫仍有降压作用，且能抑制阻断颈总动脉的加压反应。试验还证明野菊花对神经节及M-胆碱受体无明显影响，但有抗肾上腺素作用。麻醉犬腹腔注射，不减少心输出量，而血管扩张，总外周阻力降低，血压下降。综合以上各点，认为野菊花的降压机理不是降低心输出量或阻滞交感神经节，也不是通过迷走神经反射机制，而是通过抗肾上腺素和扩张外周血管，以及可能还和抑制血管运动中枢有关。

6.抗病原微生物

野菊花水煎剂对强毒人型结核分枝杆菌的最低抑菌浓度为2.5mg/ml，对堪萨斯分枝杆菌的最低抑菌浓度为10mg/ml，对胞内分枝杆菌无作用，其抑菌原理是使细菌胞壁发生改变，破坏或消失，并使其超微结构明显破坏。野菊花或野菊花枝叶1∶5煎剂在试管内有抑制痢疾杆菌的功效，枝叶尚有抑制伤寒杆菌的功效。野菊花煎剂对其它多种致病菌亦有抑制作用，MIC约在1∶10-1∶80之间，高浓度时对多种皮肤真菌也有不同程度的抑制作用。野菊花全草的抑菌作用强于花，鲜品强于干品，加热(如经高压消毒)则效价降低。野菊花煎剂还有延缓ECHO11病毒，疱疹病毒及流感病毒京科68-1株所致人胚肾或人胚肺原代单层上皮细胞病变的作用，但对副流感病毒(仙台株)，腺病毒(3型)及鼻病毒(17型和20型)均无效。此外，野菊花在试管内对钩端螺旋体也有抑制作用，不同菌型无明显区别，而水煎剂强于醇浸制剂。

7、促进白细胞吞噬功能：

体外试验，1∶1280浓度的野菊花煎剂，有促进人体白细胞吞噬金黄色葡萄球菌的作用，但其水煎剂液则无此作用。

8.其它作用：

野菊花水煎醇沉制取物，50或150mg腹腔注射于银环蛇或眼镜蛇蛇毒中毒的小鼠，与对照组比较，死亡率有所降低；但对尖吻蝮蛇毒中毒的小鼠，无治疗作用.

我国野菊花资源丰富，大量文献或综述报道了野菊花的上述药理活性，一般与其他中药合用发挥其药效作用，但其药效活性部位，尤其在镇痛发面的用途鲜少报道，因此开发野菊花的医药用途是迫不及待所要解决的问题。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种野菊花提取物，该提取物能够有很好镇痛作用。

本发明还有一个发明目的是提供了野菊花提取物的制备方法。

本发明另一个发明目的是提供了野菊花提取物的用途。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明通过大量的试验发现通过正丁醇提取后，正丁醇层有非常显著的镇痛疗效。

本发明的正丁醇提取物可以为现有技术的提取方法，如回流提取法、萃取法、超声波振荡法、树脂提取法等，为了更好的实现本发明优选如下方法：

本发明的野菊花提取物，通过以下步骤得到：

(1)野菊花采用乙醇提取，得乙醇提取液；

(2)上述提取液正丁醇萃取，取正丁醇萃取层减压浓缩即可

上述步骤(2)正丁醇萃取前还有用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取步骤。

优选本发明提取物是通过以下步骤得到的：

(1)野菊花采用乙醇提取，得乙醇提取液；

(2)上述提取液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取；

(3)取正丁醇萃取层减压浓缩即可。

上述步骤(1)中优选野菊花用6-10倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取2-4小时，提取1-3次。最佳用8倍量的药材，水浴提取2次，每次2小时。

上述的步骤(2)优选乙醇提取液依次用2-4倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取1-3次，弃之，再用2-4倍量正丁醇萃取萃取1-3次，收集正丁醇层备用。

最佳乙醇提取液依次用3倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取2次，弃之，再用2-4倍量正丁醇萃取萃取1-3次，收集正丁醇层备用。

最佳本发明的提取物是通过下述制备步骤得到的：

(1)野菊花采用8倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取3小时，提取2次；

(2)上述乙醇提取液依次用3倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取2次，弃之，再用3倍量正丁醇萃取2次，收集正丁醇层备用；

(3)取正丁醇萃取层减压浓缩至60℃时相对密度1.30，干燥，粉碎成细粉即得。本发明提供的野菊花提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)野菊花采用乙醇提取，得乙醇提取液；

(2)上述提取液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取；

(3)取正丁醇萃取层减压浓缩即可。

本发明优选的制备方法步骤如下

(1)野菊花采用6-10倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取2-4小时，提取1-3次；

(2)上述乙醇提取液依次用2-4倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取1-3次，弃之，再用2-4倍量正丁醇萃取萃取1-3次，收集正丁醇层备用；

(3)取正丁醇萃取层减压浓缩至50-70℃时相对密度1.05-1.40，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物。

本发明最佳的制备方法步骤如下：

(1)野菊花采用8倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取3小时，提取2次；

(2)上述乙醇提取液依次用3倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取2次，弃之，再用3倍量正丁醇萃取2次，收集正丁醇层备用；

(3)取正丁醇萃取层减压浓缩至60℃时相对密度1.30，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物。

上述野菊花提取物中包含化合物木犀草素、蒙花苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

本发明还提供用本发明的提取物作为药物活性成分制备成的药物制剂或药物组合物。本发明的药物制剂，包括按重量百分比组合物为0.1-99.9％，其余为药学上可接受的载体。

本发明的药物制剂可以是任何可药用的剂型，按照常规方法制备，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂，优选的是口服剂型，如：胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等。

本发明所述的载体为药学上常用的载体选自甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。

对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。

本发明还提供了该提取物有很好的镇痛效果，为了更好的证明本发明的有益效果，通过下述动物实验来阐述本发明提取物的疗效。

试验例

试验例一本发明提取物镇痛作用

1、方法和材料

野菊花于2008年10月在湖北省采集。由沈阳药科大学鉴定。野菊花凭证标本(#67)储藏于沈阳药科大学生药标本馆。

1.1动物

每个试验组包括10icr老鼠(18～22g)。室温21±1℃它们饲养在低于12小时光线和12小时黑暗循环并自由饮食固体饲料和自来水。实验前15小时禁食可自由饮水。试验中每只动物只用一次。试验设计符合沈阳北方医院动物照料和管理委员会规定，符合国际疼痛研究协会要求。

1.2药物和化学试剂

使用试剂：乙醇(AR)、石油醚(AR)、二氯甲烷(AR)、乙酸乙酯(AR)、正丁醇(AR)、醋酸(AR)，(国药集团)，吗啡、阿司匹林、安定、格列本脲、毛果芸香碱、阿托品、亚甲蓝、(成都制药厂，成都，中国)辣椒素、育亨宾、二氮嗪(Sigma，USA)

吗啡、阿托品、亚甲蓝、毛果芸香碱、育亨宾、二氮嗪、阿司匹林、格列本脲、安定、纳洛酮用生理盐水溶解(0.9％NaCl)。

辣椒素用1％乙醇和1％吐温80盐水(1∶1∶8)溶解。溶剂对老鼠疼痛试验没有影响。

试验药：按照实施例一制备(简称正丁醇层)，正丁醇层浸膏口服，25mg/kg，50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg和400mg/kg。

2方法

2.1醋酸扭体实验：

前夜禁食的老鼠(十只)在注入醋酸(0.7％，10ml/kg，i.p.)前60min口服正丁醇层和空白。实验前1h口服阿司匹林250mg/kg作为阳性对照组。注入醋酸后记录12min内老鼠扭体次数。

2.2福尔马林试验：

给药组和空白组老鼠60min后给予右后脚掌注射25μl的5％甲醛溶液(溶于0.9％的生理盐水)。0～5min(早期，神经性)和30～40min(后期，炎症性)测定舔足持续时间作为福尔马林直通反应指标。吗啡作为阳性对照，实验前30min皮下给予10mg/kg吗啡。

2.3辣椒素实验：

右后足皮下注射辣椒素(1.6μg，25μl)60min前给药正丁醇层和空白组。给吗啡(10mg/kg s.c.实验前30min)实验组作为阳性对照组。记录每只老鼠前5min舔足次数。

2.4甩尾试验：

使用一个具有循环注入热水的仪器装置。恒温箱温度调整到水温在54±1℃。实验前每只老鼠尾部后3.5cm浸入水中，并按秒记录其摆动尾部时间。温度试验：老鼠基部潜伏期每隔25min有三次。只有老鼠显示前处理反应少于或等于3秒的被选用。在试验开始前给药正丁醇层和空白组然后立即测定摆尾时间。给予吗啡(10mg/kg s.c.实验前30min)作为阳性对照组。停止时间为7秒以减少组织损伤。

2.5热板实验：

一组雌鼠在温度维持在54±1℃热板装置(model YLS-6B，中国)上试验。只有老鼠在5到30秒内出现初始伤害性疼痛的被选用。潜伏期到首次出现舔足或者突然跳起防止疼痛上海的作为致痛指标。本次试验中，预处理的潜伏期定为每个25min三次。各组老鼠提前60min给药正丁醇层和空白组。吗啡(10mg/kg s.c.实验前30min)作为阳性对照组。停止时间为60秒减少皮肤伤害。

2.6用旷场试验测试野菊花正丁醇层对老鼠的自发行为以及探求行为的影响(Tsuda，et al，1996)。

光电本能自发行为装置(型号ZZ-6，中国)，圆形场(34厘米直径)用木板分隔成21个相等的区域。直接评价，每只老鼠转移到其他装置然后观察5min。足转圈的数量和停止在某一固定点的时间被记录。实验前1小时，老鼠给予正丁醇层和空白组给予空白载体。给予安定(1.0mg/kg，i.p.)老鼠作为阳性对照组。

2.7正丁醇层对机体温度的影响

给予400mg/kg正丁醇层的和空白组的每只老鼠分别测定其机体温度。固定老鼠，将滑动电阻插入直肠内3cml0到20秒直到仪器(YSI Model 432A)读数稳定。一旦稳定，记录机体温度接近1℃的。观察80min内正丁醇层对机体温度的影响。

3统计：数据都以mean±S.E.M表达。数据输入ANOVA跟随Dunnett’s多重比较。P≤0.05认为有显著性差异。

4结果：

4.1醋酸扭体试验中，给予正丁醇层剂量100，200，400mg/kg能产生明显的不同扭体次数(见表1，图2)ED50时99.996mg/kg。

表1本发明药物和对照药在不同试验中的镇痛活性

每个小组代表平均±S.E.M.(n＝10).星号表示与控制组显著差异。**P＜0.01，***P＜0.001。

4.2福尔马林致痛正丁醇层和吗啡对福尔马林致痛的小鼠作用。

在福尔马林实验中，给予200和400mg/kg的BF老鼠明显减少了第一相和第二相疼痛现象，并且第一相(0～5min)和第二相(30～40min)ED50时162.58和180.14mg/kg。吗啡也能明显抑制福尔马林致痛的两相反应(第一相，6.67±1.38Ss和第二相，0.17±0.17s)，见表2和图3。

表2本发明药物在福尔马林试验中的镇痛活性

每个小组代表平均±S.E.M.(n＝10).星号表示与控制组显著差异。**P＜0.01，***P＜0.001。

4.3正丁醇层和吗啡对辣椒素致痛作用影响。

图表1显示了正丁醇层和吗啡抗辣椒素致痛作用。相对于空白组，适当剂量的正丁醇层组舔足次数明显减少。并且ED50是166.94mg/kg(见表1，图4)

4.4正丁醇层和吗啡对热致痛甩尾实验作用。给予正丁醇(200和400mg/kg)和吗啡阳性对照组(10mg/kg)相对于空白组有很强的活性(见表1，图5)，ED50为308.75mg/kg。

4.5正丁醇层和吗啡对热致痛的热板实验的作用。正丁醇组，阳性对照组(吗啡，10mg/kg)和控制组图表1显示。结果表明正丁醇组(200和400mg/kg)和吗啡阳性对照组有很强的镇痛作用。ED50为281.48mg/kg(见表1，图6)

4.6用旷场试验测试野菊花正丁醇层对老鼠的自发行为以及探求行为的影响.

正丁醇层(100，200.400mg/kg)不能影响老鼠的运动协调性。5min内给药动物在仪器中平均持续时间和路线长度，与空白组在统计学上几乎没有什么不同。仅有给予安定的(1mg/kg，i.p.)明显影响(P＜0.01)老鼠的移动行为.

4.7正丁醇层对机体温度的影响

正丁醇(400mg/kg，o.p.)层与空白组相比80min内不影响老鼠机体温度。(图7)

综上所述，乙醇提取的野菊花正丁醇层对化学和热致痛小鼠模型的镇痛活性。口服给药，正丁醇层在200-400mg/kg剂量对腹腔注射醋酸和足底注射福尔马林和辣椒素化学致痛产生明显抑制作用。同时对热致痛的甩尾实验和热板实验有明显抑制活性。正丁醇层不能减少机制性能表明明显的镇痛未必由机制异常引起。在测量核心机体体温中，正丁醇层在80分钟内对其没有影响。

本发明上述药效学数据不限于具体实施例一，申请文件中所有具体实施例及权利要求1保护范围内的提取物均有同具体实施例一相同的镇痛效果，本发明秉着简明清楚的原则省略其他具体实施例的药效学实验数据。

试验例二

本发明野菊花提取物的检测方法，其步骤如下：

(1)对照品溶液的制备：取木犀草素、蒙花苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品各10mg，分别用10ml甲醇定容到10ml容量瓶中备用；

(2)供试品溶液的制备：取野菊花提取物10mg用10ml甲醇溶解备用；

(3)色谱条件：检测器：waters2996PAD；色谱柱：C18柱(Diamonsil 5μ；200×4.6mm)；波长：362nm，洗脱溶剂：甲醇/水(0.1％醋酸)，流速1.0ml/min，洗脱程序

结果：见图1，正丁醇层色谱图显示了对黄酮以及黄酮苷由很好的分离。其保留时间分别为木犀草素-7O-β-D葡萄糖苷12.948min，木犀草素20.756min，蒙花苷为22.156min。另外，三个化合物总峰面积达到62.85％。

附图说明

附图1正丁醇层色谱峰

峰1为木犀草素-7O-β-D葡萄糖苷峰2为木犀草素，峰3为蒙花苷。

附图2口服正丁醇层和阿司匹林对醋酸扭体实验的作用

空白组(Control，10ml/kg o.p.)和正丁醇层(Control，10ml/kg o.p.)在腹腔注射醋酸前60min给药。阿司匹林(250mg/kg o.p.)实验开始一小时前给药，记录12min内小鼠扭体次数。每一柱条代表±S.E.M(n＝10)。星号表示与控制组明显不同。**P＜0.01，***P＜0.001

附图3正丁醇层和吗啡对福尔马林致痛的小鼠作用

白色柱形图表示前相舔足时间(0～5min)黑色柱条表示后相舔足时间。皮下注射空白载体(控制组，10ml/kg))部分注射(25，50，100，200and 400mg/kg)正丁醇层，注射吗啡(10mg/kg)。正丁醇层实验前60min给药，吗啡实验30min给药。每一柱条代表±S.E.M(n＝10)。星号表示与控制组明显不同。**P＜0.01，***＜0.001。

附图4正丁醇层和吗啡对辣椒素致痛作用影响

空白组(控制组，10ml/kg)或者部分口服正丁醇层(25，50，100，200and400mg/kg)皮下注射吗啡(10mg/kg)。足下注射辣椒素(1.6μg，25μl)前60min给予正丁醇层，前30min给予吗啡。记录5min舔足时间。每一柱条代表±S.E.M(n＝10)。星号表示与控制组明显不同。**P＜0.01，***P＜0.001

附图5正丁醇层和吗啡对热致痛甩尾实验作用。

空白组(控制组，10ml/kg)或者部分口服正丁醇层(25，50，100，200and400mg/kg)皮下注射吗啡(10mg/kg)。正丁醇层实验前60min给药，吗啡实验30min给药。记录甩尾时间，停止时间7秒。每一柱条代表±S.E.M(n＝10)。星号表示与控制组明显不同。**P＜0.01，***P＜0.001。

附图6正丁醇层和吗啡对热致痛的热板实验的作用。

空白组(控制组，10ml/kg)或者部分口服正丁醇层(25，50，100，200and400mg/kg)皮下注射吗啡(10mg/kg)。正丁醇层实验前60min给药，吗啡实验30min给药。记录前段较明显舔足时间和跳跃时间。停止时间60秒。每一柱条代表±S.E.M(n＝10)。星号表示与控制组明显不同。**P＜0.01，***P＜0.001。

附图780min内正丁醇层对小鼠机体核心温度影响。

空白(控制组，10ml/kg)和正丁醇层(400mg/kg)实验前60min口服给药，记录小鼠体温。每一点代表±S.E.M(n＝10)。

下述具体实施方式仅是更好的理解本发明，对本发明的保护范围没有限制作用。

具体实施方式

实施例1

取3gk野菊花采用8倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取3小时，提取2次，乙醇液减压浓缩的浸膏459.6g，乙醇提取液浸膏依次用3倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取2次，弃之，再用3倍量正丁醇萃取萃取2次，收集正丁醇层，取正丁醇萃取层减压浓缩至60℃时相对密度1.30，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物156.7g。

实施例2

取3gk野菊花采用6倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取2小时，提取3次，乙醇液减压浓缩的浸膏438.7g，乙醇提取液浸膏依次用2倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取3次，弃之，再用3倍量正丁醇萃取萃取2次，收集正丁醇层，取正丁醇萃取层减压浓缩至60℃时相对密度1.30，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物146.2g。

实施例3

取3gk野菊花采用10倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取4小时，提取1次，乙醇液减压浓缩的浸膏467.2g，乙醇提取液浸膏依次用4倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取1次，弃之，再用4倍量正丁醇萃取萃取1次，收集正丁醇层，取正丁醇萃取层减压浓缩至60℃时相对密度1.30，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物146.5g。

实施例4

取3gk野菊花采用6倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取4小时，提取1次，乙醇液减压浓缩的浸膏450.7g，乙醇提取液浸膏依次用2倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取3次，弃之，再用3倍量正丁醇萃取萃取2次，收集正丁醇层，取正丁醇萃取层减压浓缩至60℃时相对密度1.30，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物148.2g。

实施例5

取3gk野菊花采用6倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取3小时，提取2次，乙醇液减压浓缩的浸膏455.7g，乙醇提取液浸膏依次用3倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取2次，弃之，再用3倍量正丁醇萃取萃取2次，收集正丁醇层，取正丁醇萃取层减压浓缩至60℃时相对密度1.30，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物144.2g。

实施例6

取3gk野菊花采用8倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取4小时，提取2次，乙醇液减压浓缩的浸膏448.9g，乙醇提取液浸膏依次用4倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取2次，弃之，再用4倍量正丁醇萃取萃取2次，收集正丁醇层，取正丁醇萃取层减压浓缩至60℃时相对密度1.30，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物156.2g。

实施例7

取3gk野菊花采用10倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取2小时，提取2次，乙醇液减压浓缩的浸膏439.6g，乙醇提取液浸膏依次用3倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取1次，弃之，再用3倍量正丁醇萃取萃取1次，收集正丁醇层，取正丁醇萃取层减压浓缩至60℃时相对密度1.30，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物136.9g。

实施例8

取3gk野菊花采用8倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取3小时，提取2次，乙醇液减压浓缩的浸膏459.6g，乙醇提取液浸膏用3倍量正丁醇萃取萃取3次，收集正丁醇层，取正丁醇萃取层减压浓缩至60℃时相对密度1.30，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物256.9g。

实施例9

取3gk野菊花采用6倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取4小时，提取1次，乙醇液减压浓缩的浸膏439.6g，乙醇提取液浸膏用4倍量正丁醇萃取萃取2次，收集正丁醇层，取正丁醇萃取层减压浓缩至60℃时相对密度1.30，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物246.5g。

实施例10

取3gk野菊花采用10倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取2小时，提取3次，乙醇液减压浓缩的浸膏441.6g，乙醇提取液浸膏用2倍量正丁醇萃取萃取3次，收集正丁醇层，取正丁醇萃取层减压浓缩至60℃时相对密度1.30，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物253.2g。

实施例11

取实施例1的提取物，用糊精改性后喷雾干燥，粉碎成细粉，加入蔗糖、糊精、甘露醇、矫味剂等辅料喷雾制粒，60℃干燥，加入适量硬脂酸镁，制成1000片，即得咀嚼片。

实施例12

取实施例1的提取物加乙醇、蔗糖适量制成糖浆剂。

实施例13

取实施例1的提取物100g，氢氧化钠16g，枸橼酸那50g，枸橼酸29g，单糖浆400ml，4％尼泊金乙酯溶液10ml，蒸馏水加至100ml即得混悬剂。

实施例14

取实施例1的提取物加生理盐水稀释，滤过，灭菌，备用，加无水碳酸钠调PH值6.5，精滤，分装，热压灭菌105℃45min即得注射剂。

实施例15

取实施例2的提取物48g，半合成脂肪酸酯34型98g，按照栓剂制备得50粒。

实施例16

取实施例2的提取物1000g，碳酸钙21000g，淀粉2100g，将碳酸钙与淀粉混匀，过筛，再与乙醇适量稀释的浸膏混匀，过七号筛，于60-70℃烘干，装胶囊，共制成10万粒胶囊。

实施例17

明胶100g，甘油30g，水130g，取明胶加入适量水使其膨胀成明胶液。取实施例1的提取物1000g与食用植物油3000g混合，充分搅拌得油液；将制备好的明胶液置明胶液贮槽中控制在60℃，将油液放入药液贮槽内，液状石蜡温度以10-17℃为宜。室温10-20℃，滴头温度为40-50℃，开始滴丸，干燥，擦丸、包装即得软胶囊剂。

实施例18

取实施例3的提取物650g，干燥粉碎成细粉，过筛，混匀，用水泛丸，干燥即得水泛丸。

实施例19

取实施例3的提取物1000g，粉碎成稀饭，过筛，混匀，用清膏泛称丸，低温干燥，再用清膏适量打光，约得1000g，即得浓缩丸。

实施例20

取实施例3的提取物450g，聚乙二醇6000，基质熔融欧加入药物细粉混合均匀，在80℃左右保温，用内径为3.3mm，外径为5.1mm的滴管，以60-70di7/fenzhong滴速滴入甲基硅油中，收集滴丸，用滤纸吸出冷却液即得滴丸剂。

实施例21

取实施例1的提取物500g，微晶纤维素125g，淀粉30g，微粉硅胶20g，滑石粉15g，硬脂酸镁10g，混合均匀压制1000片。

实施例22

实施例1的提取物500g，碳酸氢钠、柠檬酸、富马酸、甜蜜素、聚乙二醇、乳糖适量制成泡腾片。

实施例23

分别取实施例5-8的提取物230克，甘露醇90克、EDTA15克和蒸馏水15ml，上述组分混合均匀后，冷冻干燥，分装1000支。

Claims (10)

1.一种野菊花提取物，其特征在于，通过以下步骤得到：

(1)野菊花采用乙醇提取，得乙醇提取液；

(2)上述提取液正丁醇萃取，取正丁醇萃取层减压浓缩即可。

2.如权利要求(1)所述的野菊花提取物，其特征在于，通过以下制备方法得到：

(1)野菊花采用乙醇提取，得乙醇提取液；

(2)上述提取液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取；

(3)取正丁醇萃取层减压浓缩即可。

3.如权利要求2所述的提取物，其特征在于，所述步骤(1)中野菊花用6-10倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取2-4小时，提取1-3次：所述的步骤(2)乙醇提取液依次用2-4倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取1-3次，弃之，再用2-4倍量正丁醇萃取1-3次，收集正丁醇层备用。

4.如权利要求1-3任意一项所述的提取物，其特征在于：所述的提取物包含化合物木犀草素、蒙花苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

5.如权利要求1-4任意一项提取物制成药学上可接受的药剂或药物组合物。

6.权利要求2所述的提取物的制备方法，其制备方法步骤如下：

(1)野菊花采用乙醇提取，得乙醇提取液；

(2)上述提取液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取；

(3)取正丁醇萃取层减压浓缩即可。

7.如权利要求6所述的制备方法，其制备方法步骤如下

(1)野菊花采用6-10倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取2-4小时，提取1-3次；

(2)上述乙醇提取液依次用2-4倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取1-3次，弃之，再用2-4倍量正丁醇萃取1-3次，收集正丁醇层备用；

(3)取正丁醇萃取层减压浓缩至50-70℃时相对密度1.05-1.40，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物。

8.如权利要求7所述的制备方法，其制备方法步骤如下

(1)野菊花采用8倍药材量的乙醇索式提取，水浴连续提取3小时，提取2次；

(2)上述乙醇提取液依次用3倍量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取2次，弃之，再用3倍量正丁醇萃取2次，收集正丁醇层备用；

(3)取正丁醇萃取层减压浓缩至60℃时相对密度1.30，干燥，粉碎成细粉即本发明提取物。

9.权利要求1所述的提取物检测方法，其步骤如下：

(1)对照品溶液的制备：取木犀草素、蒙花苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品各10mg，分别用10ml甲醇定容到10ml容量瓶中备用；

(2)供试品溶液的制备：取野菊花提取物10mg用10ml甲醇溶解备用；

(3)色谱条件：检测器：waters2996PAD；色谱柱：C18柱(Diamonsil 5μ；200×4.6mm)；波长：362nm，洗脱溶剂：甲醇/水(0.1％醋酸)，流速1.0ml/min，洗脱程序如下。

10.如权利要求1-4任意一项所述的提取物在制备抗镇痛药物中的应用。

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