CN107412430A - 一种玄参水提物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种玄参水提物及其应用，属于药物提取技术领域。一种玄参水提物，包括30种环烯醚萜苷类化合物，更加明确该中药中有效活性部位，所述玄参水提物主要具有脑神经保护功效，可用于治疗脑缺血、脑卒中；临床上能够用于治疗由脑缺血引起的脑血管病、偏头痛，也能用于短暂性脑缺血所致脑血管痉挛、突发性耳聋、视力障碍、头痛等症的治疗，因此，本发明有望为临床提供一种具有脑神经保护作用的现代中药制剂。所述玄参水提物在制备预防和治疗缺血性导致的疾病的药物中的应用。进一步的，所述玄参水提物在制备辅助治疗临床因脑缺血导致相关疾病的脑神经保护保健品中的应用。

Description

一种玄参水提物及其应用
技术领域
本发明属于药物提取技术领域，具体涉及一种玄参水提物及其应用。
背景技术
脑血管疾病是一种严重危害人类健康的常见病，是导致人类死亡的第二大原因，我国发病率为120/10万-180/10万，每年死亡80-100万人。脑血管疾病也是全球导致残疾的首要原因，我国存活患者中75％以上留有不同程度的残疾，给家庭和社会带来沉重的负担。缺血性脑血管疾病是脑血管疾病中最常见的类型(占60-70％)，是临床医学亟待解决的难题，近年呈现出明显的年轻化趋势，临床以溶栓为主治疗中存在出血的限制和危险。根据中药独特的诊疗和恢复优势，从传统中药中挖掘具有安全、高效抗脑缺血的新型药物具有重大的临床价值和社会意义。
玄参为玄参科(Scrophulariaceae)玄参属(Scrophularia)植物玄参(Scrophularia ningpoensis Hemsl.)的干燥根，为我国常用中药，收载历版《中华人民共和国药典》，其性微寒，味甘、苦、咸，具有凉血滋阴、泻火解毒的功效。玄参在临床上应用广泛，通常用于抗炎、抗肿瘤、解热等。近些年来研究发现，玄参提取物对心脑血管系统具有显著的作用，包括给予玄参提取物后缺血脑组织表现出自由基损伤、炎症反应等复杂的病理生理改变，玄参提取物具有很抗炎、清除自由基活性；玄参提取物能明显减少脑缺血24h后脑梗死体积，改善神经功能；能明显改善缺血2h后皮层CBF，提高血流量；还具有抗动脉粥样硬化、抑制血小板聚集等作用。但是玄参提取物中起药效作用的活性成分并不清楚，尽管王晖等人于2008年报道了从中药玄参中提取分离新化合物，但是所报道的新化合物并没有明确的命名和生物学特性。此外，专利公开号为CN1679810的专利公开了采用乙醇提取的玄参总苷提取物，并且公开了所述提取物在制备治疗脑中风的药物中的应用。迄今为止，尚未见有关玄参活性物质的具体成分及其应用的报道和专利。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种玄参水提物，能够清楚明确玄参中发挥药效的具体活性成分。本发明的目的还在于提供所述玄参水提取在制备预防和治疗缺血性脑损伤的药物中的应用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种玄参水提物，包括以下30种环烯醚萜苷类化合物，包括哈巴苷，哈巴俄苷，斩龙剑苷A，毛蕊花糖苷，安格洛苷C，梓醇，6-肉桂酰-β-D-吡喃葡萄糖，6-肉桂酰-α-D-吡喃葡萄糖，6-O-甲基梓醇，异玄参苷A，3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖，4-O-乙酰基-2-O-阿魏酰基-α-L-鼠李糖，土可玄参苷A，异玄参苷B，京尼平苷，桃叶珊瑚苷，化合物17为阿克替苷，赛斯坦苷D，赛斯坦苷F，8-O-对酰基哈巴苷，6”-O-咖啡酰基哈巴苷，6”-O-阿魏酰基哈巴苷，6’-O-乙酰基哈巴苷，6”-O-β-吡喃葡萄糖基哈巴苷，3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖苷，玄参变异环烯醚萜B4，6”-O-α-半乳吡喃糖基哈巴苷，小米草糖，6”-O-对酰基哈巴苷，8-O-阿魏酰基哈巴苷；所述30种化学成分占水提物质量百分含量的50％～60％。
优选的，所述玄参水提物的提取分离方法包括以下步骤：
1)将玄参根经水提取1～2h，浓缩，得到提取液；
2)将所述步骤1)得到的提取液经非极性大孔树脂层析，用体积浓度为65％乙醇水溶液进行洗脱，得到洗脱物；
3)所述步骤2)得到的洗脱物经过MCI柱色谱层析，分别以体积浓度为10％、30％、60％和90％甲醇水溶液进行洗脱，分别得到10％、30％、60％和90％乙醇洗脱物；
4)将所述步骤3)得到的体积浓度为10％的乙醇洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为2:1的条件下进行薄层检测，示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为15:85条件下分离，得到化合物赛斯坦苷F、6-肉桂酰-β-D-吡喃葡萄糖、6-肉桂酰-α-D-吡喃葡萄糖、3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖、4-O-乙酰基-2-O-阿魏酰基-α-L-鼠李糖和3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖苷；
5)将所述步骤3)得到的体积浓度为30％乙醇洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为8:1的条件下进行薄层检测示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为40:60的条件分离，得到化合物毛蕊花糖苷，安格洛苷C、阿克替苷、赛斯坦苷D和土可玄参苷A；
6)将所述步骤3)得到的体积浓度为60％洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为15:1的条件下进行薄层检测，示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为65:35条件下分离，得到6”-O-咖啡酰基哈巴苷，6”-O-阿魏酰基哈巴苷、8-O-阿魏酰基哈巴苷、斩龙剑苷A、哈巴苷，哈巴俄苷、小米草糖，6”-O-对酰基哈巴苷、异玄参苷B、异玄参苷A、京尼平苷、桃叶珊瑚苷、8-O-阿魏酰基哈巴苷、6”-O-β-吡喃葡萄糖基哈巴苷、6”-O-α-半乳吡喃糖基哈巴苷、6’-O-乙酰基哈巴苷和玄参变异环烯醚萜B4；
7)体积浓度为90％洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为30:1的条件下进行薄层检测，示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为90:10条件下分离，得到化合物梓醇和6-O-甲基梓醇；
所述步骤4)～7)之间没有时间顺序的限制。
优选的，所述步骤1)中提取的温度为60℃～100℃。
优选的，所述步骤1)浓缩在相对密度达到2.0～3.0时结束。
优选的，所述步骤4)～7)中凝胶柱的种类为LH-20。
本发明还提供了所述玄参水提物在制备预防和治疗缺血性导致的疾病的药物中的应用。
优选的，所述缺血性导致的疾病包括短暂性脑缺血引起的痉挛、突发性耳聋、视力障碍或头痛。
优选的，所述药物的剂型包括胶囊、颗粒剂、片剂、溶液剂、丸剂或者注射剂。
本发明还提供了所述玄参水提物在制备辅助治疗临床因脑缺血导致相关疾病的脑神经保护保健品中的应用。
本发明提供了一种玄参水提物，包括30种活性物质，通过深入进行研究开发，明确该中药有效部位的中药组合物及其制剂的临床应用，所述玄参水提物主要具有脑神经保护功效，可用于治疗脑缺血、脑卒中；临床上能够用于治疗由脑缺血引起的脑血管病、偏头痛，也能用于短暂性脑缺血所致脑血管痉挛、突发性耳聋、视力障碍、头痛等症的治疗。本发明有望为临床提供一种具有脑神经保护作用的现代中药制剂。
附图说明
图1为本发明中玄参水提物的提取分离流程；
图2为实施例1中10种化合物的结构图；
图3为实施例1中2种化合物的结构图；
图4为实施例1中3种化合物的结构图；
图5为实施例1中4种化合物的结构图；
图6为实施例1中11种化合物的结构图。
具体实施方式
本发明提供了一种玄参水提物，包括以下30种环烯醚萜苷类化合物，包括哈巴苷，哈巴俄苷，斩龙剑苷A，毛蕊花糖苷，安格洛苷C，梓醇，6-肉桂酰-β-D-吡喃葡萄糖，6-肉桂酰-α-D-吡喃葡萄糖，6-O-甲基梓醇，异玄参苷A，3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖，4-O-乙酰基-2-O-阿魏酰基-α-L-鼠李糖，土可玄参苷A，异玄参苷B，京尼平苷，桃叶珊瑚苷，化合物17为阿克替苷，赛斯坦苷D，赛斯坦苷F，8-O-对酰基哈巴苷，6”-O-咖啡酰基哈巴苷，6”-O-阿魏酰基哈巴苷，6’-O-乙酰基哈巴苷，6”-O-β-吡喃葡萄糖基哈巴苷，3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖苷，玄参变异环烯醚萜B4，6”-O-α-半乳吡喃糖基哈巴苷，小米草糖，6”-O-对酰基哈巴苷，8-O-阿魏酰基哈巴苷；所述30种化学成分占水提物质量百分含量的50～60％。
本发明中，所述玄参水提物的提取分离方法优选包括以下步骤：
1)将玄参根经水提取1～2h，浓缩，得到提取液；
2)将所述步骤1)得到的提取液经非极性大孔树脂层析，用体积浓度为65％乙醇水溶液进行洗脱，得到洗脱物；
3)所述步骤2)得到的洗脱物经过MCI柱色谱层析，分别以体积浓度为10％、30％、60％和90％甲醇水溶液进行洗脱，分别得到10％、30％、60％和90％乙醇洗脱物；
4)将所述步骤3)得到的体积浓度为10％的乙醇洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为2:1的条件下进行薄层检测，示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为15:85条件下分离，得到化合物赛斯坦苷F、6-肉桂酰-β-D-吡喃葡萄糖、6-肉桂酰-α-D-吡喃葡萄糖、3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖、4-O-乙酰基-2-O-阿魏酰基-α-L-鼠李糖和3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖苷；
5)将所述步骤3)得到的体积浓度为30％乙醇洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为8:1的条件下进行薄层检测示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为40:60的条件分离，得到化合物毛蕊花糖苷，安格洛苷C、阿克替苷、赛斯坦苷D和土可玄参苷A；
6)将所述步骤3)得到的体积浓度为60％洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为15:1的条件下进行薄层检测，示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为65:35条件下分离，得到6”-O-咖啡酰基哈巴苷，6”-O-阿魏酰基哈巴苷、8-O-阿魏酰基哈巴苷、斩龙剑苷A、哈巴苷，哈巴俄苷、小米草糖，6”-O-对酰基哈巴苷、异玄参苷B、异玄参苷A、京尼平苷、桃叶珊瑚苷、8-O-阿魏酰基哈巴苷、6”-O-β-吡喃葡萄糖基哈巴苷、6”-O-α-半乳吡喃糖基哈巴苷、6’-O-乙酰基哈巴苷和玄参变异环烯醚萜B4；
7)将所述步骤3)得到的体积浓度为90％洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为30:1的条件下进行薄层检测，示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为90:10条件下分离，得到化合物梓醇和6-O-甲基梓醇；
所述步骤4)～7)之间没有时间顺序的限制。
本发明玄参水提物的提取分离方法见图1。
本发明将玄参根经水提取1～2h，浓缩，得到提取液。所述玄参根在提取前优选进行干燥，所述干燥的温度优选为80℃～120℃，更优选为100℃。本发明中，所述提取的温度优选为60℃～100℃，更优选为80℃。所述提取的时间优选为1h。本发明中，所述浓缩在相对密度优选达到2.0～3.0时结束，更优选为3.0。本发明对所述浓缩的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的浓缩方法即可。
得到提取液，本发明对将所述提取液经非极性大孔树脂层析，用体积浓度为65％乙醇水溶液进行洗脱，得到洗脱物。
本发明中，所述非极性大孔树脂的种类为AB-8。所述层析的方法没有特殊限制采用本领域技术人员所熟知的层析方法即可。
得到洗脱物后，本发明对所述洗脱物经过MCI柱色谱层析，分别以体积浓度为10％、30％、60％和90％甲醇水溶液进行洗脱，分别得到10％、30％、60％和90％乙醇洗脱物。
本发明中，所述凝胶柱的种类优选为LH-20。所述色谱层析的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的色谱层析的方法即可。
得到10％、30％、60％和90％乙醇洗脱物后，本发明分别用体积浓度为10％，30％，60％和90％的乙醇洗脱物经凝胶柱层析，薄层检测示踪结合高效液相分离，得到30种化合物。
本发明还提供了所述玄参水提物在制备预防和治疗缺血性导致的疾病的药物中的应用。
本发明中，所述缺血性导致的疾病优选包括短暂性脑缺血引起的痉挛、突发性耳聋、视力障碍或头痛。
本发明中，所述药物的剂型优选包括胶囊、颗粒剂、片剂、溶液剂、丸剂或者注射剂。
本发明中，所述药物针对上述疾病的用法为口服，3.0g/天，共用20～30天。提取物在药物中的质量含量优选为60％。
本发明还提供了所述玄参水提物在制备辅助治疗临床因脑缺血导致相关疾病的脑神经保护保健品中的应用。
本发明中，所述保健品针对上述疾病的用法为口服，2.0g/天，共用30～60天。提取物在药物中的含量为50％。
下面结合实施例对本发明提供的一种玄参水提物及其在制备预防和治疗缺血性脑损伤的药物中的应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
1)将玄参根进行干燥80℃～120℃，经在60℃～100℃条件下水提取1～2h，进行减压浓缩，浓缩液相对密度优选达到2.0～3.0时结束，得到提取液；
2)将提取液经非极性大孔树脂层析，用体积浓度为65％乙醇水溶液进行洗脱，得到洗脱物；
3)所述洗脱物经过MCI柱色谱层析，分别以体积浓度为10％、30％、60％和90％甲醇水溶液进行洗脱，分别得到10％、30％、60％和90％乙醇洗脱物；
4)体积浓度为10％的乙醇洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为2:1的条件下进行薄层检测，示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为15:85条件下分离，得到化合物赛斯坦苷F、6-肉桂酰-β-D-吡喃葡萄糖、6-肉桂酰-α-D-吡喃葡萄糖、3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖、4-O-乙酰基-2-O-阿魏酰基-α-L-鼠李糖和3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖苷；
5)体积浓度为30％乙醇洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为8:1的条件下进行薄层检测示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为40:60的条件分离，得到化合物毛蕊花糖苷，安格洛苷C、阿克替苷、赛斯坦苷D和土可玄参苷A；
6)体积浓度为60％洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为15:1的条件下进行薄层检测，示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为65:35条件下分离，得到6”-O-咖啡酰基哈巴苷，6”-O-阿魏酰基哈巴苷、8-O-阿魏酰基哈巴苷、斩龙剑苷A、哈巴苷，哈巴俄苷、小米草糖，6”-O-对酰基哈巴苷、异玄参苷B、异玄参苷A、京尼平苷、桃叶珊瑚苷、8-O-阿魏酰基哈巴苷、6”-O-β-吡喃葡萄糖基哈巴苷、6”-O-α-半乳吡喃糖基哈巴苷、6’-O-乙酰基哈巴苷和玄参变异环烯醚萜B4；
7)体积浓度为90％洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为30:1的条件下进行薄层检测，示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为90:10条件下分离，得到化合物梓醇和6-O-甲基梓醇。
本发明分离得到的30种化合物均属于环烯醚萜苷类化合物，其结构式如图2～6所示。其中30种化合物的名称如下：哈巴苷(1)，哈巴俄苷(2)，斩龙剑苷A(3)，毛蕊花糖苷(4)，安格洛苷C(5)，梓醇(6)，6-cinnamoyl-β-D-glucopyranose(6-肉桂酰-β-D-吡喃葡萄糖)(7)，6-cinnamoyl-α-D-glucopyranose(6-肉桂酰-α-D-吡喃葡萄糖)(8)，6-O-甲基梓醇(9)，异玄参苷A(10)，ningposideA(3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖)(11)，ningposideB(3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖)(12)，土可玄参苷A(13)，异玄参苷B(14)，京尼平苷(15)，桃叶珊瑚苷(16)，阿克替苷(17)，赛斯坦苷D(18)，赛斯坦苷F(19)，8-O-p-coumaroyl-harpagide(8-O-对酰基哈巴苷)(20)，6”-O-caffeoylharpagide(6”-O-咖啡酰基哈巴苷)(21)，6”-O-feruloylharpagide(6”-O-阿魏酰基哈巴苷)(22)，6'-O-acetylharpagide(6’-O-乙酰基哈巴苷)(23)，6”-O-β-glucopyranosylharpagoside(6”-O-β-吡喃葡萄糖基哈巴苷)(24)，ningposdieC(3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖苷)(25)，scrophulosideB4(玄参变异环烯醚萜B4)(26)，6”-O-α-D-galactopyranosylharpagoside(6”-O-α-半乳吡喃糖基哈巴苷)(27)，eurostoside(小米草糖)(28)，6”-O-(p-coumaroyl)harpagide(6”-O-对酰基哈巴苷)(29)，8-O-feruloylharpagide(8-O-阿魏酰基哈巴苷)(30)。经测定，所述30种化学成分总质量占水提物总质量的50％～60％。
将得到的提取液进行60℃条件下干燥，得到玄参提取物粉末。将玄参提取物粉末与辅料淀粉混合，使玄参提取物粉末占药品总质量的为60％，经过制粒，形成颗粒剂。
实施例2
将实施例1制备的颗粒剂用于有脑缺血性引起的痉挛、突发性耳聋、视力障碍或头痛症状的小鼠中
1、模型的建立和给药方案
取体质量10～20g雄性小鼠160只，按文献方法进行大鼠脑中动脉电凝术，造成有脑缺血性引起的痉挛、突发性耳聋、视力障碍或头痛症状的模型小鼠。将小鼠随机分为8组,分别为假手术组、模型组、血塞通组、长春西汀组、脉络宁组、玄参颗粒剂高、中、低3个剂量组，另假手术组为找到大脑中动脉而不电凝，每天尾静脉给药1次，连续7d。
2、检测指标
梗死指数测定：
脑含水量的测定：
3、实验结果
(1)对小鼠脑梗死率的影响
表1结果显示，小鼠栓塞再灌注后，脑组织出现明显梗死,模型组小鼠脑梗死率占12.86％左右；各给药组小鼠经药物作用后脑梗死率均出现降低趋势，其中高、中剂量与模型组比较经统计学处理，差异有显著性(P<0.05,P<0.01)，提示玄参颗粒剂可以明显减轻模型小鼠的脑梗死面积、降低梗死率,随着剂量的加大，效应表现明显，表现出一定的量效关系。
表1玄参颗粒剂对电凝中动脉小鼠脑梗死率的影响(x±s)
与模型组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
(2)对脑含水量和脑指数的影响
从表2数据看，电凝造成的小鼠中动脉阻断致小鼠脑缺血在脑含水量方面有明显的变化，脑部出现水肿特征，玄参颗粒剂15、7.5mg/kg对于水肿特征出现改善作用，其脑组织含水量与模型组比较表现显著性差异(P<0.05)。
表2玄参颗粒剂对电凝中动脉小鼠脑指数及脑含水量的影响(x±s,n＝10)
组别 剂量(mg/Kg) 含水量(％) 脑指数
假手术组 - 0.7751±0.0123 0.463±0.044
模型组 - 0.7965±0.0110## 0.475±0.050
低剂量组 3.8 0.7975±0.0054 0.417±0.056
中剂量组 7.5 0.7915±0.0080* 0.452±0.033
高剂量组 15.0 0.7911±0.0067* 0.465±0.069
血塞通组 36.0 0.7984±0.0141 0.458±0.076
长春西汀组 2.2 0.7812±0.0056** 0.435±0.035
脉络宁组 1.8 0.7854±0.0060** 0.463±0.021
与假手术组比较，#P<0.05,##P<0.01；与模型组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
4总结
玄参颗粒剂对于中动脉阻断脑缺血模型小鼠有明显的改善作用，可以明显缩小模型小鼠的脑梗死面积，降低梗死率；同时对于缺血引起的脑组织水肿，表现出一定的调节作用，可以降低模型小鼠的脑组织含水量。从玄参颗粒剂在改善小鼠脑缺血方面表现较好，整体效应优于注射用血塞通。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种玄参水提物，其特征在于，包括以下30种环烯醚萜苷类化合物，包括哈巴苷，哈巴俄苷，斩龙剑苷A，毛蕊花糖苷，安格洛苷C，梓醇，6-肉桂酰-β-D-吡喃葡萄糖苷，6-肉桂酰-α-D-吡喃葡萄糖苷，6-O-甲基梓醇，异玄参苷A，3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖苷，4-O-乙酰基-2-O-阿魏酰基-α-L-鼠李糖苷，土可玄参苷A，异玄参苷B，京尼平苷，桃叶珊瑚苷，阿克替苷，赛斯坦苷D，赛斯坦苷F，8-O-对酰基哈巴苷，6”-O-咖啡酰基哈巴苷，6”-O-阿魏酰基哈巴苷，6’-O-乙酰基哈巴苷，6”-O-β-吡喃葡萄糖基哈巴苷，3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖苷，玄参变异环烯醚萜B4，6”-O-α-半乳吡喃糖基哈巴苷，小米草糖，6”-O-对酰基哈巴苷，8-O-阿魏酰基哈巴苷；所述30种化学成分占水提物质量百分含量的50％～60％。
2.根据权利要求1所述的玄参水提物，其特征在于，所述玄参水提物的提取分离方法包括以下步骤：
1)将玄参根经水提取1～2h，浓缩，得到提取液；
2)将所述步骤1)得到的提取液经非极性大孔树脂层析，用体积浓度为65％乙醇水溶液进行洗脱，得到洗脱物；
3)所述步骤2)得到的洗脱物经过聚苯乙烯合成吸附树脂柱色谱层析，分别以体积浓度为10％、30％、60％和90％甲醇水溶液进行洗脱，分别得到10％、30％、60％和90％甲醇洗脱物；
4)将所述步骤3)得到的体积浓度为10％的甲醇洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为2:1的条件下进行薄层检测，示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为15:85条件下分离，得到化合物赛斯坦苷F、6-肉桂酰-β-D-吡喃葡萄糖、6-肉桂酰-α-D-吡喃葡萄糖、3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖、4-O-乙酰基-2-O-阿魏酰基-α-L-鼠李糖和3-O-乙酰基-2-O-对羟基肉桂酰基-α-L-鼠李糖苷；
5)将所述步骤3)得到的体积浓度为30％乙醇洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为8:1的条件下进行薄层检测示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为40:60的条件分离，得到化合物毛蕊花糖苷，安格洛苷C、阿克替苷、赛斯坦苷D和土可玄参苷A；
6)将所述步骤3)得到的体积浓度为60％洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为15:1的条件下进行薄层检测，示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为65:35条件下分离，得到6”-O-咖啡酰基哈巴苷、6”-O-阿魏酰基哈巴苷、8-O-阿魏酰基哈巴苷、斩龙剑苷A、哈巴苷、哈巴俄苷、小米草糖、6”-O-对酰基哈巴苷、异玄参苷B、异玄参苷A、京尼平苷、桃叶珊瑚苷、8-O-阿魏酰基哈巴苷、6”-O-β-吡喃葡萄糖基哈巴苷、6”-O-α-半乳吡喃糖基哈巴苷、6’-O-乙酰基哈巴苷和玄参变异环烯醚萜B4；
7)将所述步骤3)得到的体积浓度为90％洗脱物经凝胶柱层析，在二氯甲烷与甲醇的体积比为30:1的条件下进行薄层检测，示踪结合高效液相，在甲醇与水的体积比为90:10条件下分离，得到化合物梓醇和6-O-甲基梓醇；
所述步骤4)～7)之间没有时间顺序的限制。
3.根据权利要求2所述的玄参水提物，其特征在于，所述步骤1)中提取的温度为60℃～100℃。
4.根据权利要求2所述的玄参水提物，其特征在于，所述步骤1)浓缩在相对密度达到2.0～3.0时结束。
5.根据权利要求2～4任意一项所述的玄参水提物，其特征在于，所述步骤4)～7)中凝胶柱的种类为LH-20。
6.权利要求1～5任意一项所述玄参水提物在制备预防和治疗缺血性导致的疾病的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述缺血性导致的疾病包括短暂性脑缺血引起的痉挛、突发性耳聋、视力障碍或头痛。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包括胶囊、颗粒剂、片剂、溶液剂、丸剂或者注射剂。
9.权利要求1～5任意一项所述玄参水提物在制备辅助治疗临床因脑缺血导致相关疾病的脑神经保护保健品中的应用。
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