CN103301200A - 一种黄芪散药物、提取方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种黄芪散药物、提取方法及用途,制备黄芪散的原料重量份组分为:黄芪为1~100份、葛根为1~100份、桑白皮为1~100份;制备的药物中包含有异戊烯基类黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷、总生物碱及总多糖;用于内分泌系统疾病的预防和治疗,以及用于2-型糖尿病的预防和治疗。其优点是:药物为纯中药制剂,用于2型糖尿病的预防和治疗用量少、效果好;采用本发明的方法同步得到了黄芪散中黄酮类成分—总异戊烯基黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷、总生物碱及总多糖,有效避免了单一提取所带来的资源浪费,提高了复方中药黄芪散的综合利用率,降低了深加工的成本,同时制备方法更为简便,实用,易于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种黄芪散药物、提取方法及用途,属于中药及天然药物技术领域。
背景技术
糖尿病(Diabetes mellitus,简称DM)通常指2型糖尿病(T2DM),占DM总数的90%以上,是世界发病率和死亡率最高的三大非传染性疾病之一。目前全球糖尿病患病率呈上升的趋势。尤以中国、印度、非洲等发展中国家上升最为明显,据世界卫生组织最新数据显示,全世界有2.46亿糖尿病患者,中国的糖尿病患者人数为3980万,是世界上仅次于印度(4090万)的第二大糖尿病发病国。专家预计到2025年,全球糖尿病患者总数将达到3亿人,中国的糖尿病患者总数将达5930万人左右。与糖尿病直接或间接相关的治疗费用占整个国家健康保健费用的2%~6%,对个人及国家都是很大的负担。因此对糖尿病及其并发症的治疗至关重要。
目前市场上口服抗糖尿病药物,主要有磺脲类、双胍类和α-葡萄糖苷抑制剂等降糖药物。从临床所用降糖药物来看,各种西药都有一定的局限性和不良反应,如胰岛素抵抗、低血糖、乳酸性酸中毒,长期使用引起并发症等。
中医药治疗糖尿病的历史源远流长,中医将多饮、多食、多尿,久则身体消瘦为主要症状的一类病症成为“消渴”。中医认为消渴病的主要病机为阴虚热盛,气阴两虚,其治则主要为滋阴清热,益气养阴,重视补肾、健脾及活血化瘀等。中药根据上述治则组方后,可以发挥整体调节优势,起到标本兼治的治疗作用。
黄芪散方源自《圣济总录》,组方为:葛根、黄芪、桑白皮,其主治三消渴疾,肌肤瘦弱、饮水不休,小便不止。用法为黄耆锉 桑根白皮锉细各一两 葛根锉二两 捣罗为散,每服三钱匕(引自原文),煎杀猪汤,澄清调下,不拘时。在《普济方》消渴门的渴利附论中转录了本方。消渴病的病机特点为始于阴虚热盛,继则气阴两虚。方中葛根甘凉生津止渴,升脾中清阳,输津液以溉五脏而滋阴清热,为方中君药;黄芪甘温益气健脾,取其气复津还之意,用为臣药,君臣相配,既可益脾气,又可滋脾阴,清中焦之热而生津止渴以治中消之症;脾胃本虚,土不能生金,肺中伏火灼津以致上消,无内水以润肾,肾与膀胱相表里,故饮水即溲而致下消,因此佐以桑白皮甘寒泻肺中伏火,滋阴润燥以疗上消之症,兼调下消,且其甘寒之性以制黄芪其气稍热之性。三药相伍,共奏益气健脾,滋阴清热,生津止渴,三消并治,标本兼顾之效。现代药理研究表明此方主要药效部分有黄酮类、皂苷类、生物碱类和多糖类等四大类成分。黄芪中的黄酮类成分具有抗辐射损伤、清除氧自由基、调控离子通道蛋白、增强免疫、抗病毒,黄芪多糖在免疫性疾病、血液病、内分泌性疾病、心血管疾病等方面有独特的生物活性。葛根总黄酮和葛根素可以明显地扩张正常和痉挛的冠状血管,从而改善缺血区的心肌血供。葛根素还有防治动脉硬化和促使血管软化的作用。桑白皮黄酮类化学成分结构中均连有异戊烯基,具有降血压、降血糖、抗HIV活性、抗菌、抗癌等作用。1-脱氧野尻霉素(DNJ)是存在于桑白皮中的一种多羟基哌啶类生物碱,因其可以抑制α-葡萄糖苷酶抑制活性,进而具有降血糖、抗病毒等的活性。黄芪散方中三药均对糖尿病及其并发症具有良好的疗效,该方在干预糖尿病过程中具有积极作用。
随着现代中医药技术的发展,将中药原料的有效部位进行提取,制造出纯度高、用量少、药效强的中药制剂,以成为现代中药研究和发展的必然趋势。但目前现有的对治疗糖尿病的中药的有效部位的提取一般是单一药物的提取,不仅提取效率低,而且资源浪费高。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够将黄芪散中的所有药物的有效部位同步提取出来制成中药制剂、提取效率高,避免资源浪费的一种黄芪散药物、提取方法及用途。
本发明的黄芪散,制备药物的原料重量份组分为:黄芪为1~100份、葛根为1~100份、桑白皮为1~100份;制备的药物中包含有异戊烯基类黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷、总生物碱及总多糖;
所述的异戊烯基类黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷、总生物碱及总多糖中包含有桑素(Mulberrin)、桑酮(Kuwanon)A-V、桑酮醇( Kuwanol)、桑根酮A-L(Sanggenon A-L)、 桑根酮醇( Sanggenol)、桑根白皮素(Morusin)、环桑根皮素(Cyclomorusin)、桑根皮醇(Morusinol)、桑色烯(Mulberrochromene)、环桑素(Cyclomulberrin)、环桑色烯素(Cyclomulberrochromene)、羟基二氢桑根皮素(Oxydiphydromorusin)、桑根皮素-4-葡萄糖苷(Morusin-4-glucoside)、桑皮根素氢过氧化物(Morusinhydroperoxide)、Chalomoracin、 morusignins(A-K)、环桑色醇(Mulberranol)、Moranoline、桑苷A-D(Moracenin A-D)、摩查尔酮A(Morachalone A)、Morusenin A-B、5,7-二羟基色酮(5,7-dihydroxychromone)、fagomine、GAL-DNJ(2-0-d-D-galac-Topyranosyl-DNJ)、1-deoxynojirimycin;黄芪皂苷Ⅰ~Ⅷ、异黄芪苷、大豆皂苷Ⅰ、槲皮素、芦丁、山奈黄素、异鼠李素、羟基异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、胆碱、芒柄花素、染料木苷;大豆苷元、大豆苷、葛根素、大豆素、金雀异黄素、金雀花异黄素8-c芹糖葡萄糖苷、异甘草素 芒柄黄花素、葛根素7-木糖苷、6-二乙酰基葛根素、葛根苷A、B、槐二醇、大豆苷醇、大豆皂醇、Cantoniensistro、Kundz apogenol B、氯化胆碱、乙酰胆碱、黄芪多糖Ⅰ~Ⅲ、杂多糖AH-1,杂多糖AH-2、葡萄糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖及鼠李糖。
所述黄芪散药物中异戊烯基类黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷、总生物碱及总多糖的纯度均大于50%。
所述原料黄芪来源豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.var.mongholicus (Bge.) Hsiao或膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。葛根来源为豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd.)Ohwi的干燥根。桑白皮来源为桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮。
黄芪中的黄酮类成分具有抗辐射损伤、清除氧自由基、调控离子通道蛋白、增强免疫、抗病毒,黄芪多糖在免疫性疾病、血液病、内分泌性疾病、心血管疾病等方面有独特的生物活性。现已制成黄芪注射液在临床上广泛用于治疗糖尿病、冠心病等。葛根总黄酮和葛根素可以明显地扩张正常和痉挛的冠状血管,从而改善缺血区的心肌血供。葛根素还有防治动脉硬化和促使血管软化的作用。现已制成葛根素注射药物在临床上广泛用于治疗冠心病、心绞痛等。桑白皮黄酮类化学成分结构中均连有异戊烯基,具有降血压、降血糖、抗HIV活性、抗菌、抗癌等作用。1-脱氧野尻霉素(DNJ)是存在于桑白皮中的一种多羟基哌啶类生物碱,因其可以抑制α-葡萄糖苷酶抑制活性,进而具有降血糖、抗病毒等的活性。因此本方将三药联合应用具有协调作用。
本发明的提取方法依次通过如下步骤来实现:
(1)原料的制备:净选新鲜黄芪散药物原料中各药材,将各原料药材粉碎至10~120目待用;(2)原料的处理:采用乙醇浸泡提取1~5次(以2次为最佳),合并提取液;第一次加入1~10倍(以8倍量为最佳)原料药材重量的60%~95%(v/v)的乙醇浸泡2~3 h,在80~100℃(以90℃为最佳)微沸状态下保温1~2 h,过滤出提取液;后续的提取以前次的滤渣为原料用 1~10 倍滤渣重量的20%~60% (v/v)乙醇微沸状态下保温1~2 h;(3)趁热过滤:提取液过300~400目滤袋,滤除部分杂质;(4)树脂分离:将滤液通过装有第一大孔树脂、HPD-500大孔树脂及强酸型阳离子交换树脂的三节串联树脂柱;(5)洗脱:先用10 ~15BV水洗脱三节串联树脂柱,后分别用6~10 BV 80%(v/v)的乙醇洗第一大孔树脂柱,用6~10 BV 40%(v/v)、70%(v/v)的乙醇先后洗脱HPD-500大孔树脂柱,用6~10BV 0.5~1mol/L氨水洗脱强酸型阳离子交换树脂柱;(6)回收:分别将乙醇、氨水洗脱液及通过三节串联树脂柱后的未吸附流出液减压回收得浓缩液;(7)冷冻干燥:将减压回收的浓缩液冷冻干燥成粉末。
所述第一大孔树脂选用PIPO-00、D101、XDA-5、AB-8、HPD-500、HPD-600中的一种。
所述强酸型阳离子交换树脂选用001×7、001×4中的一种。
所述浓缩液是将洗脱液及未吸附流出液减压在真空度0.06 Mpa ~0.10Mpa、温度 70 ℃~ 80 ℃条件下浓缩至初体积的20%得到的液体。
所述浓缩液的冷冻干燥是将浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20pa,冷冻温度 -45℃~ -60℃条件下完成的。
本发明的黄芪散药物用于内分泌系统疾病的预防和治疗,以及用于2-型糖尿病的预防和治疗。
本发明的优点是:药物为纯中药制剂,用于2型糖尿病的预防和治疗用量少、效果好;采用本发明的方法同步得到了黄芪散中黄酮类成分—总异戊烯基黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷、总生物碱及总多糖,有效避免了单一提取所带来的资源浪费,提高了复方中药黄芪散的综合利用率,降低了深加工的成本,同时制备方法更为简便,实用,易于工业化生产。
具体实施方式
以下将通过实施例进一步描述本发明,但这些实施例仅是说明本发明,而不应理解为对本发明范围的任何限制。
实施例 1
将原料黄芪散药材按比例混合后,总重为100 g,粉碎至10~120目,第一次加入6~10倍黄芪散重量的60%~95%的乙醇先浸泡2~3 h,微沸状态下保温1~2 h,第二次用 6~10 倍量20%~60% 醇微沸状态下保温1~2 h,提取1~5次,合并提取液。趁热过300~400目滤袋,得到澄清滤液。将滤液通过装PIPO-00大孔树脂、HPD-500大孔树脂及强酸型阳离子交换树脂的三节高压串联树脂。上样量为原料(重量g):树脂(重量g)=1:1时,完成上样,流速为1/10BV/min。先用10 ~15BV水洗脱三节串联树脂,后分别用6~10 BV 80%的乙醇洗脱PIPO-00大孔树脂柱,用6~10 BV 40%、70%的乙醇先后洗脱HPD-500大孔树脂柱,6~10 BV 0.5~1mol/L氨水洗脱离子交换柱。最后回收乙醇、氨水洗脱液及通过三节高压串联树脂未吸附流出液,干燥后分别得到黄芪散总异戊烯基类黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷、总生物碱及总多糖粗品。
实施例2
将原料黄芪散药材按适当比例混合后,总重为1 kg,粉碎至10~120目,第一次加入6~10倍黄芪散重量的60%~95%的乙醇先浸泡2~3 h,微沸状态下保温1~2 h,第二次用 6~10 倍量20%~60% 醇微沸状态下保温1~2 h,提取1~5次,合并提取液。趁热过300~400目滤袋,得到澄清滤液。将滤液通过装PIPO-00大孔树脂、HPD-500大孔树脂及强酸型阳离子交换树脂的三节高压串联树脂。上样量为原料(重量g):树脂(重量g)=1:1时,完成上样,流速为1/10BV/min。先用10 ~15BV水洗脱三节串联树脂,后分别用6~10BV 80%的乙醇洗脱PIPO-00大孔树脂柱,用6~10 BV 40%、6~10 BV 70%的乙醇先后洗脱HPD-500大孔树脂柱,6~10 BV 0.5~1mol/L氨水洗脱离子交换柱。最后回收乙醇、氨水洗脱液及通过三节高压串联树脂未吸附流出液,干燥后分别得到黄芪散总异戊烯基类黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷、总生物碱及总多糖粗品。
实施例3
将原料黄芪散药材按适当比例混合后,总重为10 kg,粉碎至10~120目,第一次加入6~10倍黄芪散重量的60%~95%的乙醇先浸泡2~3 h,微沸状态下保温1~2 h,第二次用 6~10 倍量20%~60% 醇微沸状态下保温1~2 h,提取1~5次,合并提取液。趁热过300~400目滤袋,得到澄清滤液。将滤液通过装PIPO-00大孔树脂、HPD-500大孔树脂及强酸型阳离子交换树脂的三节高压串联树脂。上样量为原料(重量g):树脂(重量g)=1:1时,完成上样,流速为1/10BV/min。先用10 ~15BV水洗脱三节串联树脂,后分别用6~10BV 80%的乙醇洗脱PIPO-00大孔树脂柱,用6~10 BV 40%、6~10BV 70%的乙醇先后洗脱HPD-500大孔树脂柱,6~10 BV 0.5~1mol/L氨水洗脱离子交换柱。最后回收乙醇、氨水洗脱液及通过三节高压串联树脂未吸附流出液,干燥后分别得到黄芪散总异戊烯基类黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷、总生物碱及总多糖粗品。
实施例4
黄芪散有效部位提取物对2-型糖尿病模型动物血糖的影响
1受试药物与仪器
黄芪散异戊烯基类黄酮,纯度60%;除异戊烯基外的总黄酮,纯度60%;总皂苷,纯度60%;总生物碱,纯度60%;及总多糖,纯度60%。阳性对照药:优降糖(格列美脲),规格:4mg/片,扬子江药业生产,批号121104,临用前研碎用0.5%CMC(羧甲基纤维素钠)配制成0.1mg/ml溶液,备用。葡萄糖、柠檬酸、柠檬酸钠均为分析纯;链脲佐菌素(STZ),美国sigma公司生产;血糖试剂盒;酶标仪。
2实验动物
KM小鼠,雄性,体重(20±2)g,SPF级。
3实验方法
取KM种小鼠约150只,入室适应性饲养2天,取16只作为正常对照组,其余小鼠禁食12h,于次日腹腔注射STZ160mg/kg(STZ由柠檬酸缓冲液配制,PH值为4.4),72h后,小鼠禁食12h,用毛细玻管眼底静脉取血,并测定FBG(空腹血糖),选择FBG≧11.1mmol/L的小鼠作为糖尿病小鼠,将动物随机分为8组,每组16只,分别为模型组和各药物组,其中,受试用药组以高剂量灌胃黄芪散5个有效部位,灌胃剂量见表1。每天1次,连续15天,末次给药后,动物禁食12h,检测糖耐量(OGTT)。方法:分别于小鼠灌胃葡萄糖溶液(1g/kg)后0min、30min、60min、120min,眼底静脉丛取血,用葡萄糖氧化酶法测定个时间点的血糖值,并计算血糖曲线下面积(AUC),计算方法:mmol·h/L=(A+B)×15/60+(B+C) ×15/60+(C+D) ×30/60(A、B、C、D分别为0、30、60、120min血糖值)。
4实验结果
结果显示,腹腔注射相同剂量的葡萄糖后,所有小鼠血糖均先升高,后逐步下降,呈现葡萄糖吸收代谢的过程。各组与正常组比较,各时间点血糖值及AUC均具有粉尘显著性差异(P<0.001),表明糖尿病小鼠造模成功。给糖负荷0min时,优降糖组、与模型组相比,其FBG(空腹血糖)具有显著性差异(P<0.05);给糖负荷后30min时,优降糖组血糖值明显低于模型组(P<0.05),其余各组药物虽有降低趋势,但无显著性差异;给糖负荷后60min时,有效部位组血糖值明显较低(P<0.05);给糖负荷后120min时,各组药物组血糖值与模型组相比,均无显著性差异;计算各组糖耐量曲线下面积(AUC),发现优降糖组、各有效部位组AUC值明显低于模型组(P<0.05)。结果表明优降糖、黄芪散各有效部位均可降低糖尿病小鼠的FBG,改善糖尿病小鼠的糖耐量。
表1 黄芪散有效部位对STZ所致糖尿病小鼠糖耐量的影响()
注:与正常组比较 *P<0.001 ; 与模型组比较 ΔP<0.05,ΔΔP<0.01
4小结
黄芪散各有效部位均可降低糖尿病小鼠的FBG,改善糖尿病小鼠的糖耐量。
Claims (9)
1.一种黄芪散,其特征是:制备药物的原料重量份组分为:黄芪为1~100份、葛根为1~100份、桑白皮为1~100份;制备的药物中包含有异戊烯基类黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷、总生物碱及总多糖。
2.根据权利要求1所述的黄芪散,其特征是:所述的异戊烯基类黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷、总生物碱及总多糖中包含有桑素(Mulberrin)、桑酮(Kuwanon)A-V、桑酮醇( Kuwanol)、桑根酮A-L(Sanggenon A-L)、 桑根酮醇( Sanggenol)、桑根白皮素(Morusin)、环桑根皮素(Cyclomorusin)、桑根皮醇(Morusinol)、桑色烯(Mulberrochromene)、环桑素(Cyclomulberrin)、环桑色烯素(Cyclomulberrochromene)、羟基二氢桑根皮素(Oxydiphydromorusin)、桑根皮素-4-葡萄糖苷(Morusin-4-glucoside)、桑皮根素氢过氧化物(Morusinhydroperoxide)、Chalomoracin、 morusignins(A-K)、环桑色醇(Mulberranol)、Moranoline、桑苷A-D(Moracenin A-D)、摩查尔酮A(Morachalone A)、Morusenin A-B、5,7-二羟基色酮(5,7-dihydroxychromone)、fagomine、GAL-DNJ(2-0-d-D-galac-Topyranosyl-DNJ)、1-deoxynojirimycin;黄芪皂苷Ⅰ~Ⅷ、异黄芪苷、大豆皂苷Ⅰ、槲皮素、芦丁、山奈黄素、异鼠李素、羟基异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、胆碱、芒柄花素、染料木苷;大豆苷元、大豆苷、葛根素、大豆素、金雀异黄素、金雀花异黄素8-c芹糖葡萄糖苷、异甘草素 芒柄黄花素、葛根素7-木糖苷、6-二乙酰基葛根素、葛根苷A、B、槐二醇、大豆苷醇、大豆皂醇、Cantoniensistro、Kundz apogenol B、氯化胆碱、乙酰胆碱、黄芪多糖Ⅰ~Ⅲ、杂多糖AH-1,杂多糖AH-2、葡萄糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖及鼠李糖。
3.根据权利要求1所述的黄芪散,其特征是:黄芪散中异戊烯基类黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷、总生物碱及总多糖的纯度均大于50%。
4.一种根据权利要求1所述黄芪散的提取方法,其特征是:将各原料药材粉碎至10~120目,采用乙醇浸泡提取1~5次,合并提取液;第一次加入1~10倍原料药材重量的60%~95%(v/v)的乙醇浸泡2~3 h,在80~100℃微沸状态下保温1~2 h,过滤出提取液;后续的提取以前次的滤渣为原料用 1~10 倍滤渣重量的20%~60% (v/v)乙醇微沸状态下保温1~2 h;提取液过300~400目滤袋,滤除部分杂质;将滤液通过装有第一大孔树脂、HPD-500大孔树脂及强酸型阳离子交换树脂的三节串联树脂柱;先用10 ~15BV水洗脱三节串联树脂柱,后分别用6~10 BV 80%(v/v)的乙醇洗第一大孔树脂柱,用6~10 BV40%(v/v)、70%(v/v)的乙醇先后洗脱HPD-500大孔树脂柱,用6~10BV 0.5~1mol/L氨水洗脱强酸型阳离子交换树脂柱;分别将乙醇、氨水洗脱液及通过三节串联树脂柱后的未吸附流出液减压回收得浓缩液;将减压回收的浓缩液冷冻干燥成粉末。
5.根据权利要求4所述黄芪散的提取方法,其特征是:所述第一大孔树脂选用PIPO-00、D101、XDA-5、AB-8、HPD-500、HPD-600中的一种。
6.根据权利要求4所述黄芪散的提取方法,其特征是:所述强酸型阳离子交换树脂选用001×7、001×4中的一种。
7.根据权利要求4所述黄芪散的提取方法,其特征是:所述浓缩液是将洗脱液及未吸附流出液减压在真空度0.06 Mpa ~ 0.10Mpa、温度 70 ℃~ 80 ℃条件下浓缩至初体积的20%得到的液体。
8.根据权利要求4所述黄芪散的提取方法,其特征是:所述浓缩液的冷冻干燥是将浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20pa,冷冻温度 -45℃~-60℃条件下完成的。
9.一种根据权利要求1所述黄芪散的用途,其特征是:用于内分泌系统疾病的预防和治疗,以及用于2-型糖尿病的预防和治疗。
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