CN101428050B - 一种用于治疗心脑血管系统疾病的活性组合物 - Google Patents
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Abstract
一种用于治疗心脑血管系统疾病的活性组合物涉及一种治疗心脑血管疾病的活性组合物,特别是涉及从五加科人参属植物三七中提取分离得到的含人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1的活性组合物。本发明由人参三醇组及人参二醇组化合物组合而成,由以下质量百分比组成:人参三醇组80~99%,人参二醇组1~20%。本发明经过科学研究发现:人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1组合物能改善血流动力学、改善血液质量、防止血管及神经炎症的发生,对于血栓、心脑血管疾病有良好的治疗作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗血栓、心脑血管疾病的活性组合物,特别是涉及从五加科人参属植物三七中提取分离得到的含人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1的活性组合物。
背景技术
随着人们生活水平的提高和生活方式的改变,血栓栓塞性疾病如心肌梗死、脑血管血栓形成、深静脉血栓形成、肺栓塞等是当前危害人类健康,导致死亡率最高的原因之一。目前,对于该疾病的西药品种较丰富,中药品种尚少,且多为传统的剂型或普通的剂型。
三七总皂苷为五加科人参属植物三七的主要有效活性成分,含有多种单体皂苷,其中所含人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1较多。研究资料证实,三七总皂苷具有扩张血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板凝集、延长凝血时间、降血脂、清除氧自由基、抗炎、抗氧化等作用。人参皂苷Rg1具有有效改善血液循环的血流动力学,降低血液粘度,降血脂,美容等功效。人参皂苷Rb1具有抗脂质过氧化作用,对脂质过氧化和超氧阴离子的产生均有抑制作用,同时还能增强肝脏抗氧化酶的活性;人参皂苷Rb1是人参促智作用的重要有效成分,对记忆的获得和再现过程有易化作用。
涉及三七总皂苷的专利申请较多,涉及治疗心脑血管疾病的有王先明等人发明的专利号为ZL02133464.1,其公开内容为“一种三七总皂苷分散片及其制备方法和应用”。张绍林发明的专利号为ZL200610134540.4,其公开内容为“本发明涉及一种治疗心脑血管疾病及其后遗症的中药,尤其涉及一种用于治疗冠心病、心绞痛、动脉硬化、脑血栓疾病及其后遗症的三七总皂苷冰片及其滴丸的制备方法”。张平发明的专利号为ZL 200410098412.X,其公开内容为“本发明属于中药制药技术领域,具体公开了一种治疗心脑血管疾病的药物组合物,其特征在于它是由三七总皂苷与人参提取物和水溶性注射液用药用辅料制备而成的”。方同华等发明的专利号为ZL200610011623.4,其公开内容为“本发明提供了一种用于治疗心脑血管疾病的胶囊,其有效成分三七总皂苷含有如下配比的成分:人参三醇组10.0~80.0%,人参二醇组10.0~87.0%,三七皂苷R1 2.0~75.0%,且这些成分的总含量为40.0~99.9%”。黄伟民发明的专利号为ZL200610200606.5,其公开内容为“本发明公开了一种用于防治心脑血管疾病的中药组合物,属中药领域。该药物组合物是由三七总皂苷为主要原料制成的,加以适宜的辅料后,被制成临床及药学可行的各种制剂”。
以上所述专利均以三七总皂苷为药物模型,三七总皂苷提取物对其中各组分的含量未进行严格规定,只要求其中人参皂苷Rg1含量不低于30%,人参皂苷Rb1含量不低于20%,人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1的比例约为3∶2。在本申请之前,尚未见与本发明活性物质相同且作用相同的文献。
发明内容
本发明旨在提供一种用于治疗血栓和心脑血管疾病,含人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1组合物。其综合疗效好,组方精炼,质量易控制,并提供该产品在制备药品上的用途。
本发明用于治疗心脑血管系统疾病的活性组合物,由人参三醇组及人参二醇组化合物组合而成,其特征是由以下质量百分比组成:人参三醇组80~99%,人参二醇组1~20%。
本发明所述的活性组合物,其特征是从五加科人参属植物三七(Panax Notoginsenosides)中提取分离得到的组分。人参三醇组中人参皂苷Rg1质量百分含量为:65~75%;人参二醇组中人参皂苷Rb1质量百分含量为:60~70%。进一步可以是人参三醇组中人参皂苷Rg1质量百分含量为:66~75%;人参二醇组中人参皂苷Rb1质量百分含量为:61~70%。
本发明的活性组合物中的人参三醇组化合物主要含有三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re;人参二醇组化合物主要含有人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd。
人参三醇组化合物的高效液相检测条件为:色谱柱:反相C18柱;流动相:乙腈-水,乙腈和水的体积比为20%∶80%;检测波长:203nm,柱温:室温。人参三醇组特征指纹图谱见附图1。
人参二醇组化合物的高效液相检测条件为:色谱柱:反相C18柱;流动相:乙腈-水梯度洗脱,0-20分钟乙腈体积浓度20%,20-40分钟乙腈体积浓度从20%升至40%;检测波长:203nm;柱温:室温。人参二醇组特征指纹图谱见附图2。
本发明通过药效学试验筛选出人参三醇组及人参二醇组抗血栓作用的最佳组合,即人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1按质量百分比4∶1-9∶1比例混合制成,其中优选比例为9∶1。
本发明的活性组合物可以用于治疗心脑血管系统疾病。
本发明的活性组合物可以用于抑制体内及体外血栓形成,降低血液粘度、减少脑梗死范围、保护局灶性脑缺血。
本发明的活性组合物可以配以适量药用辅料,制成医药上可以接受的剂型:粉针剂、颗粒剂、分散片、口腔崩解片、口服液、胶囊、鼻腔给药制剂。
血液是人体新陈代谢的载体,其具有运输、参与体液调节、保持内环境相对稳态以及防御功能。血液系统出现异常将会直接影响其功能的发挥。心脑血管系统的疾病,轻则影响人的新陈代谢,加快衰老;重则会引发心肌梗赛、脑卒中等危重疾病。本发明经过科学研究发现:人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1组合物能改善血流动力学、改善血液质量、防止血管及神经炎症的发生,对于血栓、心脑血管疾病有良好的治疗作用。
本发明的活性组合物中人参三醇组及人参二醇组化合物的制备方法:
1、三七总皂苷的制备:将五加科人参属植物三七(Panax Notoginsenosides)药材加水煎煮提取,提取液过大孔吸附树脂吸附,乙醇洗脱树脂柱,洗脱液回收溶剂,得三七总皂苷。或将三七的水提取液浓缩至清膏后,加乙醇使醇含量为60%~70%进行醇沉处理,取上清液,回收乙醇得三七总皂苷。
2、取三七总皂苷上氧化铝柱,先用15%~20%乙醇水溶液洗脱,收集洗脱液即得人参三醇组皂苷:主要含有人参皂苷Re、三七皂苷R1和人参皂苷Rg1;再用50%~60%的四氢呋喃水溶液洗脱,收集洗脱液即得人参二醇组皂苷:主要含有人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd。
分别取人参三醇组皂苷、人参二醇组皂苷经常规硅胶柱层析分离纯化制备人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1。
药理实验研究结果:
1.实验材料:
1.1药品与试剂
人参三醇组及人参二醇组化合物,云南白药研究院。对照组采用灯盏花素提取物,云南生物谷灯盏花药业有限公司,批号20060716。
1.2实验动物
雄性SD大鼠,清洁级,购自昆明医学院。合格证号:滇实动证SCXK滇2005-0008。
昆明种小鼠,清洁级,购自昆明医学院。合格证号:滇实动证SCXK滇2005-0003。
1.3统计方法
正态分布数据用t检验,偏态分布数据用秩和(u)检验。
2.研究方法与结果
人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1为三七总皂苷的主要成分,三七总皂苷具有扩张血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板凝集、延长凝血时间、降血脂、清除氧自由基、抗炎、抗氧化等作用。因此,对三七总皂苷人参三醇组、人参二醇组及人参三醇组及人参二醇组组合物抗血栓作用进行研究。
2.1对小鼠体内血栓形成的影响
20~22g昆明种小鼠60只,雌雄各半,按性别和体重随即分为6组:空白对照组给予生理盐水,阳性对照灯盏花素组按15mg/kg给药,实验组分别为:人参三醇组;人参二醇组;人参三醇组和人参二醇组按9∶1混合的活性组合物;人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1按9∶1比例混合的组合物I;三七总皂苷13mg/kg。各组动物按剂量每日灌胃给药一次,连续给药7天,给药体积均为10ml/kg。第4日灌胃后30min,各组小鼠背部皮下注射1%角叉菜胶40mg/kg,72h后,观察小鼠尾部血栓形成,测定尾部全长及血栓形成长度,计算血栓形成长度百分数。结果如表1:
表1活性组合物药物对小鼠体内血栓形成的影响
注:与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
实验结果表明:人参三醇组和人参二醇组组合物能有效抑制角叉菜胶诱发的小鼠尾部血栓形成。单独使用人参二醇组效果不明显,而将人参三醇组及人参二醇组混合使用后效果明显,且优于三七总皂苷组。
2.2对大鼠血液粘度的影响
通过初筛试验发现将人参三醇组及人参二醇组混合后的抗血栓作用均优于单独使用人参三醇组和人参二醇组的抗血栓作用。该试验对初筛的结果进行验证,以确认人参三醇组及人参二醇组组合物的抗血栓作用。
雄性大鼠72只,体重290~330g,随机分为6组,每组12只。正常对照组给予生理盐水,阳性对照组给予灯盏花素,三七总皂苷,人参三醇组及人参二醇组,人参三醇组∶人参二醇组=9∶1,人参皂苷Rg1和人参皂苷R1按9∶1比例混合的组合物I。各组动物按剂量每日灌胃给药一次,连续给药7天,给药体积均为10ml/kg。末次给药后1h,腹腔注射0.35g/kg水合氯醛麻醉,劲总动脉取血,EDTA抗凝,抗凝血用于测定全血粘度。结果如表2
表2活性组合物对大鼠血液粘度的影响
注:与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
实验结果表明:大鼠给予人参三醇组及人参二醇组组合物可以显著降低200-10S-1切变率下的全血粘度和全血还原粘度,效果优于单独使用人参三醇组和人参二醇组,且效果优于三七总皂苷组。
2.3对大鼠体外血栓形成的影响
以上试验结果表明人参三醇组及人参二醇组组合物抗血栓作用优于单独使用人参三醇组和人参二醇组。因此,对人参三醇组及人参二醇组组合物的有效比例进行研究。
雄性大鼠72只,体重275~340g,随机分为6组,每组12只。正常对照组给予生理盐水,阳性对照组给予灯盏花素60mg/kg,三七总皂苷,人参三醇组和人参二醇组以不同比例组合的活性组合物,表3中的A为95∶5,B为9∶1,C为8∶2,D为10∶1,E为7∶1,F为5;1,45mg/kg。各组动物按剂量每日灌胃给药一次,连续给药7天,给药体积均为10ml/kg。末次给药后1h,腹腔注射0.35g/kg水合氯醛麻醉,切开腹腔暴露腹主动脉,取血2ml用于体外血栓形成测定。结果见表3:
表3活性组合物对大鼠体外血栓形成的影响
注:与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
实验结果表明:与对照组相比,不同比例的人参三醇组及人参二醇组组合物A、B、C均能显著缩短血栓长度、减轻血栓湿重与干重,且B组效果优于三七总皂苷组。
2.4对大鼠脑梗塞范围的影响
雄性大鼠70只,体重290~330g,随机分为7组,每组10只。假手术组,正常对照组给予生理盐水,阳性对照组给予灯盏花素60mg/kg,三七总皂苷,人参三醇组和人参二醇组以不同比例组合的活性组合物,表4中的A为95∶5,B为9∶1,C为8∶2,D为10∶1,E为7∶1,F为5;1,45mg/kg。按Tamura氏方法,腹腔注射0.35g/kg水合氯醛麻醉,经颞下入路,打开颅窗,剥开软脑膜,暴露右侧大脑中动脉,电凝嗅束与大脑下静脉之间的一段大脑中动脉,电凝输出功率为5W,假手术组只开颅窗,不电凝大脑中动脉。手术后即刻十二指肠给予受试药物,给药体积为3ml/kg,对照组、假手术组给予等量生理盐水,伤口缝合后回笼饲养。试验及饲养室温均为23.0±1.0℃,相对湿度为50%。给药24h后,动物经腹主动脉取血、断头取出大脑,称重,手术显微镜下确认中动脉以阻断后平均切成五个脑片,置TTC染液中37℃避光温孵,10%福尔马林避光保存。用多媒体彩色病理图文分析系统(MPIAS-500)(固定取象的放大倍数)计算大鼠脑梗死范围、梗塞区重量,数据进行统计学处理。结果见表4:
表4活性组合物对大鼠脑梗塞范围的影响
注:与假手术组比较:#P<0.05;与模型组比:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
实验结果表明:与对照组相比,不同比例的人参三醇组及人参二醇组组合物A、B、C均能显著减少脑梗塞范围,提示不同比例的人参三醇组及人参二醇组组合物对大鼠局灶性脑缺血有保护作用,且B组对大鼠局灶性脑缺血保护作用效果优于三七总皂苷组。
综上实验结果,人参三醇组及人参二醇组组合物中人参三醇组在99~80%,人参二醇组在1~20%范围内具有明显的抗血栓作用,能有效抑制体内及体外血栓形成,有效降低血液粘度,显著减少脑梗死范围,对大鼠局灶性脑缺血有保护作用。
附图说明
图1为人参三醇组的HPLC特征指纹图谱。
图2为人参二醇组的HPLC特征指纹图谱。
具体实施方式
结合具体实施例仅是进一步说明本发明内容,但本发明并不限于此。
实施例1
取五加科人参属植物三七(Panax Notoginsenosides)药材加水煎煮提取,水提取液浓缩至清膏,密度为1.1~1.2,加乙醇使醇含量为60%~70%进行醇沉处理,静置使沉淀,取上清液,回收乙醇得三七总皂苷。取三七总皂苷上氧化铝柱色谱柱,先用15%~20%乙醇水溶液洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,即得人参三醇组皂苷,HPLC图谱见附图1,主要含有人参皂苷Re、三七皂苷R1和人参皂苷Rg1;氧化铝色谱柱再用50%~60%的四氢呋喃水溶液洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,即得人参二醇组皂苷,HPLC图谱见附图2,主要含有人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd。
分别取人参三醇组皂苷、人参二醇组皂苷经常规硅胶柱层析分离纯化制备人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1。
实施例2.
制备复方人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1皂苷粉针剂。
按实施例1的方法制备人参三醇组皂苷:人参皂苷Re、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参二醇皂苷:人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd。取人参三醇组皂苷128g,人参二醇组皂苷32g,混合均匀,粉碎后过200目筛,得到活性组合物160g,其中人参三醇组皂苷质量百分含量为80%,人参二醇组皂苷质量百分含量为20%,加40g甘露醇。按照普通冻干法制成的冻干粉针剂1000支,每支含人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1总量100mg。
实施例3.
制备复方人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1颗粒。
按实施例1的方法制备人参三醇组皂苷:人参皂苷Re、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参二醇皂苷:人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd。取人参三醇组皂苷138.6g,人参二醇组皂苷1.4g,混合均匀,粉碎并使之过80目筛,得到活性组合物140g,其中人参三醇组皂苷质量百分含量为99%,人参二醇组皂苷质量百分含量为1%,按下列配方制备成颗粒剂:
按普通制粒方法制粒,分装成1000袋,每袋重约3g,含人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1总量100mg。
实施例4.
制备复方人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1口腔崩解片。
按实施例1的方法制备人参三醇组皂苷。取人参三醇组皂苷119g,人参二醇组皂苷21g,混合均匀,粉碎后过80目筛,得到活性组合物140g,其中人参三醇组皂苷质量百分含量为85%,人参二醇组皂苷质量百分含量为15%,按下列配方制备成口腔崩解片:
填充剂的作用是使片子易成型。填充剂的选用甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖等各种制剂书上所提到的水溶性填充剂和微晶纤维素、淀粉、糊精等各种制剂书上所提到的水不溶性填充剂。
崩解剂的作用是加速药片崩解,以达到口崩片的要求。崩解剂可以选用低取代羟丙基纤维素、交联聚维酮、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠等各种制剂书上所提到的有崩解作用的崩解剂。崩解剂可以同时使用1种或1种以上。
矫味剂的作用是改善药物口感,使患者乐意接受。矫味剂可以选用甜菊苷、阿斯巴甜、α-乳糖等天然或人工矫味剂及各种制剂书上所提到的用于掩盖药物不良味觉的添加剂。矫味剂可以同时使用1种或1种以上。
润滑剂的作用是增加增加颗粒的润滑性,使得片子表明光洁。润滑剂可以选用乙醇、水、硬脂酸镁等各种制剂书上所提到的用于起润滑作用的润滑剂。润滑剂可以同时使用1种或1种以上。
粘合剂可以使口崩片具有一定的硬度和耐磨性。粘合剂可以选用甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等各种制剂书上所提到的有粘合作用的粘合剂。粘合剂可以同时使用1种或1种以上。
按照普通片剂制备方法制成口崩片,制得2000片,每片含50mg人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1。
实施例5.
制备复方人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1分散片。
按实施例1的方法制备人参三醇组皂苷:人参皂苷Re、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参二醇皂苷:人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd。取人参三醇组皂苷63g,人参二醇组皂苷7g,混合均匀,粉碎并使之过80目筛,得到活性组合物70g,其中人参三醇组皂苷质量百分含量为90%,人参二醇组皂苷质量百分含量为10%,按下列配方制备成:
按照普通片剂制备方法制成分散片1000片,每片含50mg人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1。
实施例6.
制备复方人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1胶囊。
配方:按人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1为9∶1比例:取63g人参皂苷Rg1及7g人参皂苷Rb1混合,过80目筛,加入乳糖150g,糊精100g按照胶囊制备方法制成1000粒,每粒含50mg人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1。
实施例7.
制备复方人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1口服液。
配方:按人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1为4∶1比例:取116g人参皂苷Rg1及29g人参皂苷Rb1混合,过80目筛,加入蜂蜜2000ml,混合均匀,加入蒸馏水至10L。
按照普通口服液制备方法制备1000支,每只10ml的口服液,每只含100mg人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1。
实施例8.
制备复方人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1鼻腔给药制剂。
配方:按人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1为6∶1比例:取120g人参皂苷Rg1及20g人参皂苷Rb1混合,过200目筛,加入羟丙基纤维素25g、壳聚糖2.5g、冰片2.5g、蒸馏水100ml,搅拌至完全溶解,-35℃冷冻干燥过夜,再在-10℃和4℃冻干,过180目筛,分装,供鼻腔吸入用。
实施例9.
制备复方人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1胶囊。
配方:按人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1为8∶1比例:取64g人参皂苷Rg1及8g人参皂苷Rb1混合,过80目筛,加入乳糖150g,糊精100g按照胶囊制备方法制成1000粒,每粒含50mg人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1。
实施例10.
制备复方人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1分散片。
按人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1为5∶1比例:取50g人参皂苷Rg1及10g人参皂苷Rb1混合,过80目筛,得到活性组合物60g,按下列配方制备成:
按照普通片剂制备方法制成分散片1000片,每片含50mg人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1。
实施例11.
制备复方人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1颗粒。
按实施例1的方法制备人参三醇组皂苷:人参皂苷Re、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参二醇皂苷:人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd。取人参三醇组皂苷95g,人参二醇组皂苷5g,混合均匀,粉碎并使过80目筛,得到活性组合物100g,其中人参三醇组皂苷质量百分含量为95%,人参二醇组皂苷质量百分含量为5%,按下列配方制备成颗粒剂:
按普通制粒方法制粒,分装成700袋,每袋重约3g,含人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1总量70mg。
Claims (8)
1.一种用于治疗心脑血管系统疾病的活性组合物,由人参三醇组及人参二醇组化合物组合而成,其特征是由以下质量百分比组成:人参三醇组80~99%,人参二醇组1~20%,所述的人参三醇组主要含有人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、人参皂苷Re;人参二醇组主要含有人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd,人参三醇组中人参皂苷Rg1质量百分含量为:65~75%;人参二醇组中人参皂苷Rb1质量百分含量为:60~70%。
2.如权利要求1所述的用于治疗心脑血管系统疾病的活性组合物,其特征是从五加科人参属植物三七中提取分离得到的活性组分。
3.如权利要求1所述的用于心脑血管系统疾病的活性组合物,其特征是由以下百分比含量的原料组成:人参三醇组中人参皂苷Rg1质量百分含量为:66~75%;人参二醇组中人参皂苷Rb1质量百分含量为:61~70%。
4.一种用于治疗心脑血管系统疾病的活性组合物,由人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1按9∶1的质量比混合制成。
5.如权利要求1或权利要求4所述的用于治疗心脑血管系统疾病的活性组合物在制备用于治疗心脑血管系统疾病的药物中的运用。
6.如权利要求1或权利要求4所述的用于治疗心脑血管系统疾病的活性组合物在制备用于治疗抑制体内及体外血栓形成,降低血液粘度、减少脑梗死范围、保护局灶性脑缺血疾病的药物中的运用。
7.如权利要求1或4所述的用于治疗心脑血管系统疾病的活性组合物的制剂,其特征是,在活性组合物中加入适量药用辅料,制成医药上可以接受的粉针剂、颗粒剂、分散片、口腔崩解片、口服液、胶囊、鼻腔给药制剂。
8.如权利要求1所述的用于治疗心脑血管系统疾病的活性组合物的检测方法,其特征是人参三醇组化合物的高效液相检测条件为:色谱柱:反相C18柱;流动相:乙腈-水,乙腈和水的体积比为20%∶80%;检测波长:203nm,柱温:室温,人参二醇组化合物的高效液相检测条件为:色谱柱:反相C18柱;流动相:乙腈-水梯度洗脱,0-20分钟乙腈体积浓度20%,20-40分钟乙腈体积浓度从20%升至40%;检测波长:203nm;柱温:室温。
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