CN100455291C - 一种治疗心脑血管疾病的三七药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于治疗心脑血管等疾病的三七总皂苷组合物，其特征在于其活性成分由三七总皂苷组成，其中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re与人参皂苷Rb₁的总量不低于55.0%，且人参皂苷Rd含量不得超过2.5%。所述的组合物制成注射液、注射用粉针剂、肠溶片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂、胶囊剂、滴丸剂等制剂。本发明的药物具有活血祛瘀，通脉活络功效，用于瘀血阻络，中风偏瘫，胸痹心痛及视网膜中央静脉阻塞症，不良反应发生率明显下降。

Description

一种治疗心脑血管疾病的三七药物组合物

技术领域

本发明涉及一种治疗心脑血管疾病的由三七提取的三七总皂苷活性成份，具体地说，本发明提供了一种具有治疗心脑血管等疾病的三七总皂苷活性成份组合物及其应用。

背景技术

心脑血管病是三大疾病之一，根据中医理论，视网膜中央静脉阻塞，内眼出血性疾病，眼前房出血，脑血栓等脑血管疾病及其后遗症等，属中医血瘀和出血证范畴。目前用于治疗心脑血管疾病的三七总皂苷注射制剂有：注射用血塞通、血塞通注射液、注射用血栓通、血栓通注射液。

三七是一种独具多功能的中药材，而且这些功效都具有独立性，集若干重要生物活性，能发挥若干种临床功能于一药。所有的这些功能里，有的功能是相对立的，矛盾的。使用三七为原料提取而制成的三七总皂苷注射制剂，成份亦十分复杂，目前尚未能真正明确具体什么成份起主要治疗作用，什么成份有毒会导致不良反应，成份之间的作用机理也没有人作过全面的研究。除药物本身成份外，提取过程使用的有机溶剂等均可引起不良反应，另外在制剂过程中杂质难以除尽，也可能是发生不良反应的原因。三七总皂苷注射制剂自临床应用以来，已发生许多不良反应。广西壮族自治区食品药品监督管理局药品不良反应监测中心提供的不良反应统计结果显示：经检索《中国生物医学文数据库》(中国医学科学院医学信息研究所)1978-2004年5月文献资料，有4篇血栓通注射液致过敏反应的报道，9篇血塞通注射制剂不良反应的报告，注射用血栓通未发现有不良反应。上述检索的不良反应结果只占实际发生不良反应中极少一部分，由于国内目前的不良反应监测体系还不是很完善，绝大部分不良反应没有报道或按不良反应监测体系上报。本申请人于1983年开始生产血栓通注射液，近三年该品种不良反应发生率约为2％。

据国家药品不良反应中心检索结果：

应用血栓通注射液出现的主要不良反应有：1、全身皮肤瘙痒、出现红色或玫瑰色斑丘疹。2、发冷、全身寒战、体温升高。3、皮肤出现红肿、疼痛明显，有烧灼感，皮肤颜色变紫。

应用血塞通注射液及注射用血塞通主要有以下三种不良反应：1、严重过敏反应，患者出现寒战、发热、胸闷、哮喘等，并且诱发急性左心衰。2、出现血尿。3、出现过敏性皮疹，呈红色斑、丘疹，有头晕症状。4、出现心悸、气短、胸闷、面色苍白，头晕，视物模糊，口舌干燥。5、患者突感四肢麻木无力，寒战，面色苍白。6、病人出现剧烈头痛，头晕，大汗，心慌等症状。

使用注射用血栓通也出现过与上述症状相似的不良反应。

发明内容

经本申请人对血栓通注射液产生不良反应较多的批次进行综合分析，发现发生不良反应与三七总皂苷注射制剂的异常毒性有直接关系，不良反应发生率越高的产品批次，异常毒性相对较大。血栓通注射液异常毒性越大，出现不良反应反馈的次数也越多。经对市场上三七总皂苷注射制剂进行检验分析，有较多不良反应报道的厂家，该产品异常毒性相对较大。

对使三七总皂苷注射制剂产生不良反应(异常毒性)的组分进行筛选，经过多年的试验，找到了主要导致不良反应的组分，在三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁与人参皂苷Rd含量测定的高效液相色谱图中，这些主要导致不良反应的杂质出峰时间在36分-56分间，人参皂苷Rd的出峰时间约在46分，由于这些杂质的理化性质与人参皂苷Rd相近，在除去该杂质组分时，会连同人参皂苷Rd一并除去，因此，人参皂苷Rd可以作为上述导致不良反应的杂质含量指标，人参皂苷Rd含量高，代表了杂质成分含量也较高，反之，则较低。(附：高效液相色谱图。见附图1、2、3)

根据目前的研究结果，人参皂苷Rd能抑制癌细胞生长，更多被作为一种具有抗肿瘤作用的中药提取物使用。其药理作用为：提高N K细胞活性和干扰素γ的产生水平，增强免疫机能，增强小鼠抑瘤率，减轻瘤重；能促进T细胞增殖，提高天然杀伤细胞(N K)的活性，从而提高机体免疫力，并具有促进副肾皮质荷尔蒙分泌作用。因此，人参皂苷Rd在治疗心脑血管疾病上并无明显药理作用，故除去人参皂苷Rd对本发明在心脑血管方面的治疗效果没有明显影响。

血塞通注射液和注射用血塞通质量标准规定，取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含三七总皂苷5.0mg的溶液；血栓通注射液质量标准规定，取本品适量，加灭菌生理盐水制成每1ml含7.0mg(以人参皂苷Rg₁计)的溶液(按重量折算约为每1ml含三七总皂苷10.0mg)；注射用血栓通质量标准规定，取本品，加氯化钠注射液制成每1ml含三七总皂苷8.0mg的溶液；取以上样品进行异常毒性试验。

按《中国药典》2005版异常毒性检查法对本发明、注射用血塞通、血栓通注射液、血塞通注射液进行异常毒性试验。当以上四品种浓度为每ml溶液含三七总皂苷不超过10mg时，异常毒性试验结果均为合格；浓度为每ml溶液含三七总皂苷10mg至15mg时，异常毒性试验结果为部分合格；当浓度为每ml溶液含三七总皂苷超过15mg时，仅本发明异常毒性试验结果为合格，本发明异常毒性试验结果可达到29mg。

异常毒性指数越小，表明受试药物毒性越低。如在上述试验中，当结果均保证合格时，在给药体积相同的前提下，能承受的给药浓度越高，表明药物的毒性越低，以上几种三七总皂苷注射制剂的毒性由低到高排列为：本发明、注射用血栓通、注射用血塞通、血栓通注射液、血塞通注射液。

结合我公司多年生产血栓通注射液的经验，统计反馈发生不良反应信息与产品实际检验结果，可以清楚看到：发生不良反应的批次，异常毒性多在12mg/ml以下。

出现不良反应反馈次数越多的产品批次，在制剂中相应检查出人参皂苷Rd的含量相对较高，且异常毒性指数也相对较高。

我们认为，使三七总皂苷注射制剂异常毒性增大的原因与临床中引起不良反应的原因是相同的，且异常毒性(急性毒性)与三七皂苷中人参皂苷Rd的含量成正比例关系。因此，三七总皂苷注射制剂中人参皂苷Rd的含量与不良反应发生率亦成正比例关系。在使用高效液相色谱法测定三七皂苷成份时发现，在高效液相色谱图中，人参皂苷Rd峰的左右有些不明成分，这些成分在三七药材高效液相色谱图中是没有的。人参皂苷Rd在三七药材的含量约占三七总皂苷含量的4％，约占三七药材重量的0.2-0.4％。三七药材经过生产加工，如对生产加工过程中的某些过程控制不严谨，会产生或带入一些副产物(即上述所提及的“不明成分”)，这些成分的存在，是引起不良反应的主要原因。(附：三七药材高效液相色谱图。见附图4、5、6)

经药效研究、急性毒性研究及临床统计证明，去除该杂质组分后，与其他三七总皂苷注射制剂相比，本发明药效相当，但急性毒性、异常毒性大幅降低，不良反应发生率亦随之大为下降。

本发明与市场上现有三七总皂苷注射剂的组成有明显不同，保留了三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re与人参皂苷Rb₁等活性成分，并针对以人参皂苷Rd为特征的其他杂质进行去除操作，有效地控制了该三七总皂苷活性成份组合物的毒性，且药效保持不降低。所述的三七总皂苷活性成份组合物，是在三七中提取出三七总皂苷，控制严格提取物中人参皂苷Rd含量小于2.5％。

根据现有三七总皂苷注射剂的国家药品质量标准，不同的三七总皂苷注射剂对三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re与人参皂苷Rb₁等活性成分的要求仅略有差异，注射用血栓通含三七皂苷R₁应不低于2.0％，人参皂苷Rg₁应不低于28.0％、人参皂苷Rb₁应不低于25.0％，以上三者相加应不低于55.0％，没有对人参皂苷Re作出含量要求；注射用血塞通含三七皂苷R₁应为5.0-15.0％，人参皂苷Rg₁应为25.0-45.0％、人参皂苷Rb₁应30.0-40.0％，以上三者相加应不低于65.0％，没有对人参皂苷Re作出含量要求；血塞通注射液含三七皂苷R₁应不低于5.0％，人参皂苷Rg₁应不低于20.0％、人参皂苷Rb₁应不低于30.0％，以上三者相加应不低于60.0％，没有对人参皂苷Re作出含量要求；血栓通注射液含三七总皂苷以人参皂苷Rg₁计，不得少于60.0％(比色法测定)。以高效液相法测定，约分别含人参皂苷Rg₁25％、人参皂苷Rb₁21％，三七皂苷R₁5％、人参皂苷Re4％，以上相加约55.0％)。

由上述标准含量规定可知，三七皂苷R₁最低含量为2.0％，人参皂苷Rg₁最低含量为20.0％、人参皂苷Rb₁最低含量为25.0％，人参皂苷Re实测约为4.0％左右，即上述几个组份总含量达到51.0％以上，才符合三七总皂苷注射剂的最低要求。本发明人经过多年的潜心研究，开发出新的制备治疗心脑血管等疾病的三七总皂苷组合物的工艺，制备得到的三七总皂苷活性成分不仅符合上述要求，而且，三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re与人参皂苷Rb₁的总量不低于55％，且该活性成份组合物中人参皂苷Rd含量小于2.5％。

因此，本发明的目的是提供一种治疗心脑血管等疾病的三七总皂苷活性成份组合物；

本发明的另一目的是提供了一种制备该三七总皂苷活性成份组合物的方法。

由于各个三七总皂苷注射制剂的厂家在实际生产时的制备工艺各不相同，因此不同三七总皂苷注射制剂，含以人参皂苷Rd为特征的杂质含量不尽相同，使患者易出现不良反应，严重的甚至威胁患者的生命。本发明中的三七皂苷注射剂中人参皂苷Rd含量控制在2.5％以下，能确保最大限度除去引起不良反应的杂质，降低了药物的异常毒性，减轻了不良反应的发生率，而药效保持不变。

本发明公开了一种用于治疗心脑血管疾病的三七总皂苷活性成份组合物及其制备方法，其特征在于活性成分由三七总皂苷组成，其中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re与人参皂苷Rb₁的总重量不低于活性成分总重量的55％，优选65％，更优选80％，且人参皂苷Rd含量不得超过活性成分总重量的2.5％，优选不得超过活性成分总重量的2.0％，更优选不得超过活性成分总重量的1.0％。

本发明优选的实施方案是其中活性成分中的三七皂苷R1含量为8％～15％、人参皂苷Rg1含量为35％～50％、人参皂苷Re含量为3％～10％、人参皂苷Rb1含量为20％～35％，且三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re与人参皂苷Rb1的含量总和不低于55％，人参皂苷Rd小于2.5％；

优选地，所述的有效成分组合物的含量是：三七皂苷R19％～14％、人参皂苷Rg135％～50％、人参皂苷Re4％～8％、人参皂苷Rb125％～35％，且三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re与人参皂苷Rb1的总和不低于65％，人参皂苷Rd小于2.0％；

更优选地，所述的有效成分组合物的含量是：三七皂苷R110％～13％、人参皂苷Rg136％～46％、人参皂苷Re 5％～8％、人参皂苷Rb126％～33％，且三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re与人参皂苷Rb1的总和不低于80％，人参皂苷Rd1小于1.0％。

本发明三七总皂苷活性成份组合物的剂型可以制成各种剂型，如制成注射液、注射用粉针剂，注射用冻干粉针剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂、胶囊剂、滴丸剂制剂，优选制成注射液、注射用冻干粉针剂。

以下是本发明中药制剂的药材来源：

三七：为五加科植物Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根。

本发明还公开了一种制备所述的三七总皂苷活性成份组合物的方法，它包括如下步骤：

(1)取三七粉碎成粗粉1000g，加体积比为5-30倍，优选8倍的45-95％的乙醇，优选60％的乙醇8000ml提取0.5～10小时，优选3小时，收集提取液，过滤。

(2)取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液。

(3)溶液通过D型大孔树脂柱吸附，用乙醇-水的混合液进行梯度洗脱，流速，4.5BV/h(每小时树脂体积的倍数)，洗脱液中乙醇浓度逐步由5％调整至95％，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液(主含三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁与人参皂苷Rb₁、人参皂苷Re等成分的洗脱液)，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液(含以人参皂苷Rd为特征的其他杂质成分洗脱液)，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)的清膏，低温干燥得三七总皂苷活性成份组合物。

(4)将三七总皂苷活性成份组合物根据制药领域中的常规方法，制成各种制剂。

上述过程获得的三七总皂苷活性成份组合物中各成份含量约为：三七皂苷R₁为10.6％、人参皂苷Rg₁为42.7％、人参皂苷Re为4.3％、人参皂苷Rb₁为26.5％，以上四成份总量为84.1％；人参皂苷Rd为0.5％。

本发明治疗心脑血管疾病的三七总皂苷活性成份组合物与其他三七总皂苷注射制剂相比，药效相当，通过下列药理或者药效学实验证明。

三七总皂苷注射制剂主要药效作用比较试验研究

一、对大鼠局灶性脑缺血的影响

摘要应用大鼠局灶性脑缺血模型及心肌缺血模型，比较研究了本发明与血栓通注射液的药理作用。初步结果表明：两种制剂均可明显改善动物脑梗塞后神经症状、局灶性脑缺血后的脑梗塞范围，增加SOD活力，对实验性大鼠局灶性脑缺血有治疗作用，本发明在降低血清MDA含量方面优于另两个制剂；同时，两个制剂亦能明显减轻心肌梗塞程度，缩小梗塞范围，对心肌缺血有明显的改善作用，本发明并能降低血清LDH含量，对心肌缺血的保护作用优于其它三七总皂苷制剂。

目的观察本发明与其他三七总皂苷注射制剂对局灶性脑缺血及心肌缺血的治疗作用，比较药物的作用特点。

试验材料

药物本发明实施例1制备的粉针剂，150mg/瓶、本发明实施例2制备的注射液，50mg/ml、本发明实施例3制备的粉针剂，150mg/瓶；血栓通注射液，70mg/支(约相当于50mg/ml)，由广东永康药业有限公司生产，批号：0312018；注射用血塞通，200mg/支，由黑龙江珍宝岛制药有限公司生产，批号：20031002；0.9％氯化钠注射液：北京双鹤药业股份有限公司生产，批号：050121612。

试验方法

1分组SD种雄性大鼠(280～320g)随机分为14组：假手术组；模型组；本发明实施例1制备的粉针剂45.0mg/kg组；本发明实施例2制备的注射液45.0mg/kg组；本发明实施例3制备的粉针剂45.0mg/kg组；血栓通注射液45.0mg/kg组；注射用血塞通45.0mg/kg组。

2方法按Tamura氏方法，动物用3.5％水合氯醛腹腔注射麻醉(35mg/100g体重)，经颞下入路，打开颅窗，剥开软脑膜，暴露右侧大脑中动脉，电凝嗅束与大脑下静脉之间的一段大脑中动脉(电凝输出功率为4W)，假手术组只开颅窗，不电凝大脑中动脉。手术后即刻尾静脉注射受试药物(3ml/kg，假手术组及模型组静脉给予等量生理盐水)，伤口缝合后回笼饲养。试验及饲养室温均为22.0±1.0℃。

术后4小时，参考文献，采用单盲法按下列标准观测各组动物神经症状，进行行为综合评分。评分标准为：(1)提起鼠尾离开地面，观察两前肢活动情况，左前肢屈曲、左肩内收者按程度评为0-4分，(正常大鼠)两前肢对称伸向前方者评为0分；(2)轻提鼠尾，推动左肩向右移动10cm，再推动右肩向左移动10cm，以左侧阻力下降程度，评为0-3分；(3)牵拉两前肢，视左侧肌力下降程度评为0-3分。三项分数相加，并以分数之和进行分级，I级：0分；II：1-3分；III：4-6分；IV：7-10分。级别越高则动物行为障碍越严重。术后24小时，按上述标准再对各组动物进行行为综合评分。结果按等级序值法进行统计学处理。

末次评分后，动物麻醉，腹主动脉取血，断头取出大脑，手术显微镜下确认中动脉已阻断后冠状切4刀，平均切成5个脑片，TTC染色，10％福尔马林避光保存。用多媒体彩色病理图文分析系统(MPIAS-500)(固定取像的放大倍数)计算大鼠脑梗塞范围。分离血清，测定超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量。结果进行统计学处理。

试验结果：

1.对大鼠神经症状的影响

表1.三七总皂苷注射制剂对大鼠脑中动脉阻断后神经症状的影响(等级序值法)

由表1可见，手术后4小时、24小时假手术组动物神经行为未发现异常，模型组动物可见明显的行为障碍，主要表现为左肩内收、屈曲，前肢无力等，与假手术组比较差异显著(P＜0.01)。本发明实施例1、实施例2、实施例3制备的制剂给药后4小时动物神经行为障碍比模型组有所减轻，但无统计学意义；24小时后本发明实施例1、实施例2、实施例3制备的制剂动物行为障碍明显改善，与模型组比较有明显差异(P＜0.05)。血栓通注射液组给药后4小时神经行为障碍明显改善，与模型组比较有明显差异(P＜0.01)；但给药后24小时神经行为障碍有所加重，与模型组比较无明显差异。两种三七总皂苷注射制剂组间比较无明显差异。

2、对脑梗塞范围的影响

表2.三七总皂苷注射制剂对大鼠脑梗塞范围的影响(X±SD)

由表2可见，手术后24小时，模型组大鼠术侧局部缺血严重，形成明显的梗塞灶；与模型组比较，本发明实施例1、实施例2、实施例3制备的制剂，脑梗塞范围显著缩小(P＜0.05)；血栓通注射液组脑梗塞范围明显缩小(P＜0.05)；注射用血塞通组脑梗塞范围显著缩小(P＜0.01)。

二、对心肌缺血的影响

摘要实验观察到本发明及血栓通注射液均可明显减轻心肌梗塞程度，减少心肌梗塞面积减轻梗塞区重量，降低梗塞区占心室及心脏百分比，本发明能够降低血清LDH含量，同时根据心梗面积绝对值分析，本发明对心肌缺血所致心肌梗塞的保护作用优于血栓通注射液。

目的观察本发明及其他三七总皂苷注射剂对心肌缺血的治疗作用，比较药物的作用特点。

试验材料

药物本发明实施例1制备的粉针剂，实施例2制备的注射液，实施例3制备的粉针剂，；血栓通注射液，2ml/支，广东永康药业有限公司生产，批号：0312018；注射用血塞通(干粉)，200mg/支，黑龙江省珍宝岛制药有限公司生产，批号：20031002。

试验方法

1.分组SD种雄性大鼠(体重240～260g)随机分为6组：模型组，本发明实施例1制备的粉针剂45mg/kg组，实施例2制备的注射液45mg/kg组，实施例3制备的粉针剂45mg/kg组，血栓通注射液45mg/kg组，注射用血塞通45mg/kg组。药物以生理盐水配至所需浓度，给药体积为3ml/kg，给药途径为左股静脉。

2.方法动物以戊巴比妥钠腹腔麻醉(45mg/kg)，仰位固定，切开气管，插入气管插管，接呼吸机(SC-3型，上海医疗设备厂)行人工呼吸(32次/分，呼吸比值1∶3)；开胸，断3～4肋，打开心包膜，暴露心脏，于冠状动脉左前降支根部穿线(0号缝合线)，备结扎用；分离左股静脉准备给药；穿线后稳定10分钟，结扎，给入受试药物后缝合胸壁，恢复自主呼吸。

150min后，腹主动脉取血，测定血清CK、LDH含量；心脏结扎线以下横切5片，N-BT染色，采用多媒体彩色病理图文分析系统(MPIAS-500)，以固定象距测量总心肌面积及梗塞心肌面积，观察心肌梗塞程度；结果进行统计学处理(t检验)。

试验结果

三七总皂苷注射制剂对心肌梗塞程度的影响

表3各给药组对心肌梗塞范围的影响

分组	剂量/kg	n	心肌总面积mm<sup>2</sup>	梗塞心肌面积mm<sup>2</sup>	梗塞区重量g	梗塞区占心室％	梗塞区占心脏％
								模型		8	304.95±33.08	87.68±17.87	0.209±0.029	28.7±4.4	24.4±3.7
本发明实	45.0mg	8	312.31±26.86	53.97±19.05<sup>**</sup>	0.123±0.046<sup>**</sup>	17.0±5.5<sup>**</sup>	14.6±4.8<sup>*</sup>

施例1
								本发明实施例2	45.0mg	8	309.59±25.83	57.26±25.77<sup>*</sup>	0.133±0.065<sup>**</sup>	18.2±7.3<sup>**</sup>	15.4±6.1<sup>*</sup>
本发明实施例3	45.0mg	8	310.97±13.63	61.76±19.68<sup>*</sup>	0.143±0.043<sup>**</sup>	19.8±6.2<sup>**</sup>	16.8±5.0<sup>*</sup>
								血栓通注射液	45.0mg	8	309.59±25.83	57.26±25.77<sup>*</sup>	0.133±0.065<sup>**</sup>	18.2±7.3<sup>**</sup>	15.4±6.1<sup>*</sup>
注射用血塞通	45.0mg	8	304.15±30.99	59.27±9.82<sup>**</sup>	0.135±0.019<sup>**</sup>	19.4±2.1<sup>**</sup>	16.4±1.9<sup>*</sup>

注：与模型组比较，^*P＜0.01

试验结果证实，模型组梗塞区占心室及心脏百分比分别为28.7及24.4％；本发明实施例1、实施例2、实施例3制备的制剂、血栓通注射液及注射用血塞通各三个剂量组作用相似，心肌梗塞程度均有明显减轻，梗塞面积减小，梗塞区重量减轻，梗塞区占心室及心脏百分比降低，与模型组比较有显著性差异(P＜0.01)，并基本可见其量效关系。

结论

不同病因所致冠脉狭窄或闭塞使血流中断，缺血心肌早期结构的改变尚属可逆性变化，长时间的冠脉分支闭塞，心肌结构发生不可逆性变化，导致心肌梗塞，在心肌缺血缺氧的坏死过程中，细胞膜的完整性受到破坏，心肌不可逆性损伤的特征之一是心肌酶释放增加，含量明显升高。

本试验以大鼠心肌缺血所致心肌梗塞模型观察药物作用。试验观察到，心肌缺血导致心肌梗塞发生，N-BT染色后心梗斑块明显，占心室总面积的28.7％；同时CK、LDH含量增高，显示了病理模型的特征。

三种三七总皂苷注射制剂均可明显减轻心肌梗塞程度，梗塞面积减小，梗塞区重量减轻，梗塞区占心室及心脏百分比降低，本发明能够降低血清LDH含量，同时根据心梗面积绝对值分析。

三七总皂苷注射制剂毒性比较

参照2005年版《中国药典》异常毒性检查法及参照急性毒性试验法对本发明及相关三七总皂苷注射剂进行毒性试验比较。

受试药物：

实施例1制成的粉针剂、实施例2制成的注射液、实施例3制成的粉针剂、血栓通注射液(广东永康药业有限公司生产)注射用血塞通(黑龙江省珍宝岛制药有限公司)共5个受试药物。

各受试药物成分检验结果：

急性毒性试验结果(LD₅₀)

受试药物	实施例1粉针剂	实施例2注射液	实施例3粉针剂	血栓通注射液	注射用血塞通
						LD<sub>50</sub>	539mg/Kg	516mg/Kg	502mg/Kg	355mg/Kg	364mg/Kg

异常毒性试验结果

受试药物	实施例1粉针剂	实施例2注射液	实施例3粉针剂	血栓通注射液	注射用血塞通
						药物浓度	30.0mg/ml	26.0mg/ml	23.0mg/ml	11.0mg/ml	11.0mg/ml

注：异常毒性试验按《中国药典》2005年版方法试验，上述实施例1粉针剂，30.0mg/ml，是指试验药液在该浓度下，异常毒性试验符合规定要求。

洗脱液异常毒性试验：

实施例洗脱液样品制法：分别收集实施例1、实施例2、实施例3制备过程中的乙醇洗脱液(含以人参皂苷Rd为代表的杂质)，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.05～1.15(60℃)的清膏，加注射用水调节每1ml含固形物100mg～150mg，加针用活性炭适量(0.30％，重量比)，80℃以下保温搅拌30分钟，滤过，冷冻干燥，压塞，压盖，制成样品。

实验方法：

健康小鼠(体重18-20g)，雌雄各半，试验前检疫5天，根据预试验结果，随机分组，每组各10只，雌雄各半。采用尾静脉注射给药，一次性等容量注射，试液浓度间距为0.5mg/ml。注射容量为每鼠0.50ml。

洗脱液成分检验结果：

实施例1洗脱液

实施例2洗脱液

实施例3洗脱液

三七皂苷R<sub>1</sub>	＜0.5％	＜0.5％	＜0.5％
				人参皂苷Rg<sub>1</sub>	5.0％	4.5％	4.2％
人参皂苷Re	0.7％	0.8％	0.6％
				人参皂苷Rb<sub>1</sub>	15.0％	15.5％	14.6％
人参皂苷Rd	38.0％	36.4％	34.8％
				急性毒性LD<sub>50</sub>	105mg/Kg	110mg/Kg	115mg/Kg
异常毒性药物浓度	4.0mg/ml	4.5mg/ml	4.5mg/ml

结果小结：人参皂苷Rd含量由低由高的顺序为：实施例1制成的粉针剂、实施例2制成的注射液、实施例3制成的粉针剂、注射用血塞通、血栓通注射液。异常毒性(急性毒性)由按小到大排序为实施例1制成的粉针剂、实施例2制成的注射液、实施例3制成的粉针剂、注射用血塞通、血栓通注射液。

上述实验结果表明：三七有效成分组合物中随着以人参皂苷Rd为特征的相关其他成分的增加，其异常(急性)毒性试验结果明显不同，差异非常显著，结果提示三七有效成分组合物中，以人参皂苷Rd为特征的相关其他成分总含量越低，异常(急性)毒性指数越低。

附图说明

附图1：注射用血栓通高效液相色谱图(高效液相色谱图在常规条件下测定，下同)

附图2：注射用血栓通高效液相色谱图

附图3：注射用血栓通高效液相色谱图

附图4：三七药材高效液相色谱图

附图5：三七药材高效液相色谱图

附图6：三七药材高效液相色谱图

附图7：实施例1总皂苷活性成分高效液相色谱图

附图8：实施例2总皂苷活性成分高效液相色谱图

附图9：实施例3总皂苷活性成分高效液相色谱图

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的百分数是重量百分数，BV/h表示以树脂体积为V计，溶液每小时的洗脱体积为树脂体积B×V。

实施例1：本发明药物组合物的制备

取三七粉碎成粗粉1000g，加60％乙醇8000ml提取7小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱，乙醇浓度在6小时内由5％调整至95％，流速4.5BV/h，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.13(60℃)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每1ml含固形物100mg，超滤，灌装，冷冻干燥，制成注射用粉针剂。

检验结果：上述提取物中各成份含量：三七皂苷R₁为10.6％、人参皂苷Rg₁为42.7％、人参皂苷Re为4.3％、人参皂苷Rb₁为26.5％，以上四成份总量为84.1％；人参皂苷Rd为0.5％。

实施例2：本发明药物组合物的制备

取三七粉碎成粗粉1000g，加50％乙醇10000ml提取6小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.4g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱(乙醇浓度在5.5小时内由5％调整至95％)，流速5.0BV/h，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.15(60℃)的清膏，干燥，得三七总皂苷活性成份，加注射用水调节每1ml含固形物50mg～55mg，超滤，灌装，制成注射液。

检验结果：上述提取物中各成份含量：三七皂苷R₁为7.8％、人参皂苷Rg₁为38.5％、人参皂苷Re为3.1％、人参皂苷Rb₁为24.5％，以上四成份总量为73.9％；人参皂苷Rd为1.1％。

实施例3：本发明药物组合物的制备

取三七粉碎成粗粉1000g，加75％乙醇7500ml提取8小时，收集提取液，过滤，取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.6g生药的溶液，用大孔树脂柱(D类大孔树脂、树脂体积3000ml，树脂床高与直径比约为8)及氧化铝吸附，用不同浓度的乙醇液进行梯度洗脱(乙醇浓度在6.5小时内由5％调整至95％)，流速4.0BV/h，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至相对密度为1.16(60℃)的清膏，得三七总皂苷活性成份，加针用活性炭0.30％(重量比)，80℃以下保温搅拌30分钟，滤过，加注射用水调节每1ml含固形物150mg，冷冻干燥，分装，制成注射用粉针剂。

检验结果：上述提取物中各成份含量：三七皂苷R₁为7.6％、人参皂苷Rg₁为34.5％、人参皂苷Re为3.3％、人参皂苷Rb₁为25.1％，以上四成份总量为70.5％；人参皂苷Rd为2.1％。

实施例4：片剂

取实施例1制得的三七总皂苷活性成份，根据常规制剂方法制备成片剂。

实施例5：胶囊剂

取实施例1制得的三七总皂苷活性成份，根据常规制剂方法制备成胶囊剂。

实施例6：滴丸剂

取实施例1制得的三七总皂苷活性成份，根据常规制剂方法制备成滴丸剂。

实施例7：丸剂

取实施例1制得的三七总皂苷活性成份，根据常规制剂方法制备成丸剂。

实施例8：糖浆剂

取实施例1制得的三七总皂苷活性成份，根据常规制剂方法制备成糖浆剂。

实施例9：合剂

取实施例1制得的三七总皂苷活性成份，根据常规制剂方法制备成合剂。

实施例10：颗粒剂

取实施例1制得的三七总皂苷活性成份，根据常规制剂方法制备成颗粒剂。

实施例11：胶囊剂

取实施例2制得的三七总皂苷活性成份，根据常规制剂方法制备成胶囊剂。

Claims (5)

1、一种用于治疗心脑血管疾病的三七总皂苷组合物，其特征在于活性成分由三七提取的三七总皂苷活性成份组成，其中三七皂苷R₁含量为8％～15％、人参皂苷Rg₁含量为35％～50％、人参皂苷Re含量为3％～10％、人参皂苷Rb₁含量为20％～35％，其中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re与人参皂苷Rb₁的总重量不低于活性成分总重量的55％，且人参皂苷Rd含量不得超过活性成分总重量的2.5％，所述组合物通过下述方法制备：

(1)取三七粉碎成粗粉1000g，加体积比为5-30倍的45-95％的乙醇8000ml提取0.5～10小时，收集提取液，过滤；

(2)取滤液回收乙醇至无醇味，加水制成每1ml含0.5g生药的溶液；

(3)溶液通过D型大孔树脂柱吸附，用乙醇-水的混合液进行梯度洗脱，流速按每小时树脂体积的倍数计为4.5BV/h，洗脱液中乙醇浓度逐步由5％调整至95％，收集含乙醇浓度在30％以上至70％以下的洗脱液，弃去含乙醇浓度在30％至70％以外的洗脱液，65℃以下减压回收溶剂并浓缩至在60℃下相对密度为1.10～1.20的清膏，低温干燥得三七总皂苷组合物。

2、根据权利要求1的组合物，其中三七皂苷R₁含量为9％～14％、人参皂苷Rg₁含量为35％～50％、人参皂苷Re含量为4％～8％、人参皂苷Rb₁含量为25％～35％，其中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re与人参皂苷Rb₁的总重量不低于活性成分总重量的65％，且人参皂苷Rd含量小于2.0％。

3、根据权利要求1的组合物，其中三七皂苷R₁含量为10％～13％、人参皂苷Rg₁含量为36％～46％、人参皂苷Re含量为5％～8％、人参皂苷Rb₁含量为26％～33％，其中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re与人参皂苷Rb₁的总重量不低于活性成分总重量的80％，且人参皂苷Rd含量小于1.0％。

4、根据权利要求1-3之一的组合物，其制成注射液、注射用粉针剂，注射用冻于粉针剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂、胶囊剂、滴丸剂制剂。

5、根据权利要求4的组合物，其制成注射液、注射用冻干粉针剂。

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