CN105816471B - 一种三七总皂苷组合物及其制备方法和用途 - Google Patents
一种三七总皂苷组合物及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105816471B CN105816471B CN201610163772.6A CN201610163772A CN105816471B CN 105816471 B CN105816471 B CN 105816471B CN 201610163772 A CN201610163772 A CN 201610163772A CN 105816471 B CN105816471 B CN 105816471B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ginsenoside
- resin
- notoginseng
- ethyl alcohol
- saponin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
- A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明提供了一种三七总皂苷组合物及其制备方法和用途。本发明提供的三七总皂苷组合物,按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 30~50%、人参皂苷Rb125~40%、三七皂苷R1 7~16%、人参皂苷Re 2.7~8%、人参皂苷Rd 0.5~7.0%、人参皂苷Rf 0.5~2%、人参皂苷Rh2 0.3~2.0、人参皂苷Rc 1~3、人参皂苷Rb3 0.3~2.5和人参皂苷Rg30.5~2.5%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占活性成分总重量的70~95%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和不小于8倍的人参皂苷Rd的含量。本发明提供的三七总皂苷组合物与市售血栓通和血塞通制剂相比,具有更明显的抗动静脉血栓效果和低毒安全性。
Description
技术领域
本发明属于药物制剂领域,具体涉及一种三七总皂苷组合物及其制备方法和用途。
背景技术
三七又名田七,为伞形目五加科植物,主要分布于云南、广西、江西、四川等地。中药材三七是以其根部作为药用部分,其根茎中含有多种皂苷,具有扩张血管、抑制血小板聚集、散瘀止血和消肿定痛的作用,主治咯血,吐血,衄血,便血,崩漏,外伤出血,胸腹刺痛,跌仆肿痛。
皂苷是三七主要有效活性成分之一,也是研究的较为系统的化学物质。现已从三七的不同部位分离得到54种单体皂苷成分,如三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd,其次还含有20(S)-三七皂苷R2、20(S)-人参皂苷Rg2、20(S)-人参皂苷Rh1等。以三七总皂苷为主要有效成分制成的药物制剂的商品名有血塞通、血栓通,在临床上具有活血祛瘀,通脉活络的功能,可用于治疗心脑血管系统疾病,中风偏瘫、瘀血阻络症,脑栓塞,视网膜中央静脉阻塞;具有增加脑动脉及冠状动脉血流量,降血脂,降低血液粘度,改善微循环等功效。
近年来三七总皂苷的临床应用范围不断拓宽,目前临床应用较多的三七总皂苷产品有血塞通注射液、血塞通软胶囊、络泰粉针、正康脑明注射液、血栓通注射液、路路通注射液等。由于其显著的活血化瘀、消肿定痛、抗衰老、抗炎以及抗肿瘤功效,越来越多不同功效与组成的三七总皂苷制剂被开发研究。
中国专利申请CN200910175602公开了一种药物组合物,其组分包括:人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rc、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rg3,上述药物组合物各组分优选的重量百分比为:人参皂苷Rb1 30.0%~40.0%、人参皂苷Rg1 25.0%~35.0%、三七皂苷R1 7.0%~15.0%、人参皂苷Rd 7.0%~10.0%、人参皂苷Re 4.0%~7.0%、人参皂苷Rf 0.3%~2.0%、人参皂苷Rc0.5%~2.0%、人参皂苷Rh1 0.5%~3.0%、人参皂苷Rb2 0.5%~3.0%、人参皂苷Rg30.5%~2.0%。
中国专利申请CN200610066204公开了一种治疗心脑血管疾病的三七药物组合物,其活性成分由三七总皂苷组成,其中三七皂苷R1、人身皂苷Rg1、人身皂苷Re与人身皂苷Rb1的总量不低于55.0%,且人参皂苷Rd含量不得超过2.5%。
中国专利申请CN201010003434公开了一种三七提取物及其制剂,其含有三七皂苷R1 5~10%,人参皂苷Rg1 25~36%,人参皂苷Re 2.5~5%,人参皂苷Rb1 30~39%,人参皂苷Rd 5~10%,人参皂苷Rf、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2和人参皂苷Rg3不少于2%,且三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd 占总重量的75~ 95%。
尽管目前已经开发出众多以三七总皂苷为主要成分的药物制剂,但以三七总皂苷为主的药物制剂成分复杂,目前尚未研究清楚具体哪个成分发挥主要治疗作用,而哪些成分有毒副作用会导致不良反应,各个成分之间有无协同或拮抗作用以及相应作用机理也没有全面系统的研究。三七总皂苷制剂自临床使用以来,存在许多不良反应记录。
在江苏省人民医院2003年1月-2008年3月上报的不良反应分析报告中,检索出由于使用三七总皂苷所引起的不良反应共69例。其中皮肤及附件系统损害主要表现为皮疹、斑丘疹、红斑疹;全身性损害主要表现为高热、寒战;心外血管系统损害主要表现为静脉炎。根据惠州市区三家医院的统计结果,2009年-2011年共收到71份由于使用三七总皂苷制剂而引起的不良反应发生报告,其中注射用血塞通不良反应报告26份、血塞通注射液不良反应报告20份、血栓通注射液不良反应报告25份,不良反应的临床症状主要累及皮肤及附件、胃肠系统、神经系统、呼吸系统、消化系统、心血管系统、血液系统以及肌肉和关节等。对合肥市第三人民医院656份使用三七总皂苷注射剂的完整住院病历进行调查,共有67例不良反应发生报告,发生率为10.2%,其中以皮肤和附件损害为首,其次分别为神经系统和心血管系统损害。
本申请人长期致力于三七药物制剂的研发,经本申请人对目前市售的多种血塞通与血栓通制剂进行致敏性检验和综合分析,发现不良反应发生较多。
综上所述,开发出一种不良反应发生率低、治疗效果优异的三七总皂苷提取物,使包含其的药物制剂同时兼具治疗有效性和低毒安全性,是三七总皂苷药物制剂研发与实际应用中亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种兼具治疗有效性和低毒安全性的三七总皂苷组合物及其制备方法和用途。
一个方面,本发明提供了一种三七总皂苷组合物,按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg130~50%、人参皂苷Rb125~40%、三七皂苷R17~16%、人参皂苷Re 2.7~8%、人参皂苷Rd 0.5~7.0%、人参皂苷Rf 0.5~2%、人参皂苷Rh2 0.3~2.0、人参皂苷Rc 1.0~3、人参皂苷Rb3 0.3~2.5和人参皂苷Rg30.5~2.5%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占活性成分总重量的70~95%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和不小于8倍的人参皂苷Rd的含量。
本发明所述的三七总皂苷组合物优选为,按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg134.6~46%、人参皂苷Rb127~38%、三七皂苷R18~15%、人参皂苷Re 3~6%、人参皂苷Rd1~6%,人参皂苷Rf 0.8~2%、人参皂苷Rh2 0.6~1.8%、人参皂苷Rc 1.2~2.6%、人参皂苷Rb3 0.8~2.2和人参皂苷Rg3 0.8~2.4%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的75~90%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和不小于10倍的人参皂苷Rd的含量。
本发明所述的三七总皂苷组合物进一步优选为,按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg136.5~43%、人参皂苷Rb129~35%、三七皂苷R110~14%、人参皂苷Re 3.2~5.8%、人参皂苷Rd1~6%,人参皂苷Rf 1.2~2.0%、人参皂苷Rh2 1.2~1.8%、人参皂苷Rc 1.2~2.2%、人参皂苷Rb3 1.0~2.2和人参皂苷Rg31.0~2.4%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的85~90%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和不小于20倍的人参皂苷Rd的含量。
另一个方面,本发明还提供了上述三七总皂苷组合物的制备方法,该制备方法包括如下步骤:
⑴.前处理:将三七或三七剪口清洗干净后,于90~120℃烘干后破碎至粒度为0.5~5mm,得到提取前物料A;
⑵.提取:将步骤⑴所得提取前物料A称重,加入物料A重量1~3倍的65~75%乙醇浸泡12~24小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量1~2倍的80~95%乙醇后,在15~40℃浸泡12~24小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩8~10小时后,对浓缩液减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
⑶.大孔吸附树脂处理:将步骤⑵所得浓缩膏加纯化水稀释至250~400mg(生药)/mL,室温水沉12~24小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用1~2倍滤液体积的HPD300、D101或AB-8大孔吸附树脂以1.2~1.4BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用1~2倍树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1~1.5倍树脂体积的60~80%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1~1.5倍树脂体积的55~60%乙醇、1倍树脂体积的65~70%乙醇和1~2倍树脂体积的75~85%乙醇以0.8~1.2BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
⑷.D900树脂脱色:步骤⑶的洗脱液直接以2.0~5.0BV/h的流速过步骤⑶所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入1~3倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤⑵所得浓缩膏重量2~5%的药用炭于40~45℃保温脱色30~50分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后得到药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.06~1.08(60±5℃测定)后,于70℃干燥1.5~3.0小时后得到所述的三七总皂苷组合物。
本发明所述的制备方法优选包括以下步骤:
⑴.前处理:将三七或三七剪口清洗干净后,于90~120℃烘干后破碎至粒度为1~3mm,得到提取前物料A;
⑵.提取:将步骤⑴所得提取前物料A称重,加入物料A重量1~2倍的65~70%乙醇浸泡12~18小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量1.5~2倍的80~90%乙醇后,在20~30℃浸泡12~18小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩8~10小时后,对浓缩液减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
⑶.大孔吸附树脂处理:将步骤⑵所得浓缩膏加纯化水稀释至250~300mg(生药)/mL,室温水沉12~24小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用1.5~2倍滤液体积的D101大孔吸附树脂以1.2~1.4BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用1~1.5倍D101树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1~1.5倍D101树脂体积的70~80%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1~1.5倍D101树脂体积的55~58%乙醇、1倍D101树脂体积的65~68%乙醇和1.5~2倍D101树脂体积的75~80%乙醇以1.0~1.2BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
⑷.D900树脂脱色:步骤⑶的洗脱液直接以2.0~5.0BV/h的流速过步骤⑶所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入1~2倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤⑵所得浓缩膏重量3~4%的药用炭于40~45℃保温脱色40分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后的药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.06~1.08(60±5℃测定)后,于70℃干燥1.5~3.0小时后得到所述的三七总皂苷组合物。
以上制备方法中所用的乙醇浓度均指体积浓度。
另一方面,本发明还提供了一种治疗或预防血栓性疾病的药物组合物,其包含治疗有效量的上述三七总皂苷组合物和药学上可以接受的辅料,可以制成的注射液、冻干粉针剂、颗粒剂、丸剂、片剂或胶囊剂等。
再一个方面,本发明还提供所述的三七总皂苷组合物在制备治疗或预防血栓性疾病的药物中的应用。
本发明的有益效果:
⑴.本发明提供的三七总皂苷组合物的有效成分和含量比较明确,其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的总含量高,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和不小于8倍的人参皂苷Rd的含量,有效成分含量高,杂质成分少,质量可控性相对较高。
⑵.本发明提供的三七组合物,其中Rb1和R1的总含量不小于8倍的Rd含量。经毒理、药理学实验证明,本发明提供的三七总皂苷组合物与市售血栓通和血塞通制剂相比,最大耐受量与半数致死剂量均明显提高。本发明提供的三七总皂苷组合物对ICR小鼠的半数致死量(LD50)与最大耐受量(MTD)分别为431~834mg/kg以及228~329mg/kg;市售血栓通和血塞通制剂对ICR小鼠的MTD与半数致死量LD50分别为271~354mg/kg以及164~227mg/kg。
⑶.本发明提供的三七组合物,其中Rb1和R1的总含量不小于8倍的Rd含量。经类过敏反应研究证明,本发明提供的三七总皂苷组合物及其制剂与市售血栓通和血塞通制剂相比,引起类过敏反应的程度相对更低,因此具有相对更低的致敏风险和相对较高的安全性。
类过敏反应实验结果显示:市售血塞通和血栓通制剂引起受试部位皮肤血管通透性增高和组织液渗出的程度明显高于本发明提供的三七总皂苷组合物及其制剂;市售血塞通或血栓通制剂引起的细胞脱颗粒程度与β-氨基己糖苷酶释放明显高于本发明提供的三七总皂苷组合物及其制剂。
⑷.本发明提供的三七组合物,其中Rb1和R1的总含量不小于8倍的Rd含量,并且含有现有或市售三七提取物及其制剂中不含有的Rh2和Rb3等组分。多种血栓模型研究表明,本发明提供的三七总皂苷组合物及其制剂与市售血栓通和血塞通制剂相比,具有更明显的抗动静脉血栓作用。
对血流停滞导致的静脉血栓形成的影响实验证明:本发明提供的三七总皂苷组合物对抗凝参数TT、PT、APTT均无明显影响;并且对血栓形成的抑制率达到34.6~40.1%,而市售血栓通或血塞通制剂的抑制率为11.7~22.6%。这说明本发明提供的三七总皂苷组合物对血流停滞导致的静脉血栓形成的抑制效果相对更加优异。
对下腔静脉内皮损伤诱导的静脉血栓形成的影响实验证明:本发明提供的三七总皂苷组合物对凝血因子和抗凝系统无明显影响,并且能够激活内源性溶栓系统,部分通过增加PGI2和抑制TXA2来防止血栓形成;本发明提供的三七总皂苷组合物对血栓形成的抑制率达到50.0~58.9%,而市售血栓通或血塞通制剂的抑制率为7.4~26.1%。这说明本发明提供的三七总皂苷组合物对下腔静脉内皮损伤诱导的静脉血栓形成的抑制效果相对更加优异。
对动静脉旁路血栓形成的影响实验证明:本发明提供的三七总皂苷组合物对血栓形成的抑制率达到42.8~48.7%,而市售血栓通或血塞通制剂的抑制率为21.1~31.6%。这说明本发明提供的三七总皂苷组合物对动静脉旁路血栓形成的抑制效果相对更加优异。
对颈动脉血栓形成的影响实验证明:本发明提供的三七总皂苷组合物对血栓形成时间的延长率为22.0~32.8%,而市售血栓通或血塞通制剂对血栓形成时间的延长率为13.6~20.7%。这说明本发明提供的三七总皂苷组合物对颈动脉血栓形成的抑制效果相对更加优异。
综上所述,本发明提供的三七总皂苷组合物成分和含量相对明确,可控性相对较高;与市售血栓通和血塞通制剂相比,具有更明显的抗动静脉血栓效果和低毒安全性。
附图说明
图1为实验例1中小鼠注射部位的蓝染情况照片。
图2为实验例1中小鼠皮肤组织浸出液吸光度测定结果的柱状图。
图3为实验例2中RBL-2H3细胞脱颗粒情况的显微照片,图中未发生脱颗粒的细胞未被着色,发生脱颗粒的细胞则着色较深。
图4为实验例2中RBL-2H3细胞β-氨基己糖苷酶释放率的柱状图。
具体实施方式
以下实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行若干改进和修饰,这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。对所公开的实施例的下述说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例中,而是可以应用于符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的更宽的范围。
除非另外定义,本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
术语:
C48/80:Compound48/80,是N-甲基-对甲氧基苯乙胺和甲醛缩合产生的聚合物,能够促进肥大细胞脱颗粒,是常用的肥大细胞活化剂。
如无特殊说明,本发明中所述的溶液配制所使用的溶剂均为超纯水;如无特殊说明,本发明中所述的生理盐水均为质量浓度为0.9%的生理盐水。
高效液相色谱仪购自Agilent公司,型号为 1100;气相测谱仪购自山东鲁创公司,型号为AHS-6890;酶标仪购自BioTek公司,型号为Synergy H1;凝血因子分析仪购自北京世帝科学仪器公司,型号为LG-PABER;血小板聚集仪购自美国CHRONO-LOG 公司,型号为540VS;实验性体内血栓形成测定仪购自包头医学院心血管研究室,型号为BT87-2;电子分析天平购自北京赛多利斯天平有限公司,型号为Sartorius BT 125D;离心机购自北京医用离心机厂,型号为LD5-2A
Β-氨基己糖苷酶活性检测试剂盒购自上海杰美基因医药科技有限公司,货号为GMS50273.1;二磷酸腺苷二钠盐(ADP)购自美国Sigma 公司,批号116H810;花生四烯酸钠(AA)购自美国Sigma 公司,批号041M5204V;胶原(CG)购自美国Sigma 公司,批号3422;角叉菜胶( I 型)购自美国Sigma 公司,批号46H0910;活化部分凝血酶时间 (ActivatedPartial Thrombopastin Time, APTT)测定试剂盒购自美德太平洋科技有限公司产品,批号021408A;凝血酶原时间(Prothrombin Time, PT) 测定试剂盒购自美德太平洋科技有限公司,批号0114038;凝血酶时间(Thrombin Time, TT) 测定试剂盒购自美德太平洋科技有限公司,批号031404A;蛋白定量测试试剂盒购自南京建成生物技术有限公司,批号20141021;大鼠内皮素(ET)酶联免疫分析试剂盒购自Bio-Swamp公司,批号201412;大鼠组织纤溶酶原激活物(tPA)酶联免疫分析试剂盒购自Bio-Swamp 公司,批号201412;大鼠组织纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)酶联免疫分析试剂盒购自Bio-Swamp,批号201412;纤维蛋白原(FIB)测定试剂盒购自美德太平洋科技有限公司,批号:041403C;兔凝血因子Ⅱa(FⅡa)酶联免疫分析试剂盒购自上海通蔚实业有限公司,批号201502;兔凝血因子Ⅹa(FⅩa)酶联免疫分析试剂盒购自上海通蔚实业有限公司,批号201501;兔凝血因子Ⅺa(FⅪa)酶联免疫分析试剂盒购自上海通蔚实业有限公司,批号201501;兔抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)酶联免疫分析试剂盒购自上海通蔚实业有限公司,批号201501;兔凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)酶联免疫分析试剂盒购自上海通蔚实业有限公司,批号201501;兔活化蛋白C(APC)酶联免疫分析试剂盒购自上海通蔚实业有限公司,批号201501;兔纤溶酶原(PLG)酶联免疫分析试剂盒购自上海通蔚实业有限公司,批号201501;兔尿激酶原(proUK)酶联免疫分析试剂盒购自上海通蔚实业有限公司,批号201501;兔胰蛋白酶(trypsin)酶联免疫分析试剂盒购自上海通蔚实业有限公司,批号201501;兔组织型纤维溶酶激活剂(t-PA)酶联免疫分析试剂盒购自上海通蔚实业有限公司,批号201503;组织纤溶酶原激活物(t-PA)活性测定试剂盒购自美国Assaypro 公司,批号05691410;兔血栓素B2(TXB2)酶联免疫分析试剂盒购自上海通蔚实业有限公司,批号201503;兔6-酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)酶联免疫分析试剂盒购自上海通蔚实业有限公司,批号201503;超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒购自南京建成生物技术有限公司,批号20150610;丙二醛(MDA)测试盒购自南京建成生物技术有限公司,批号20150609。其余化学试剂均购自美国Sigma 公司。
实验用家兔由北京隆安实验动物养殖中心提供,动物生产许可证号SCXK(京)2009-0005;实验用C57BL/6小鼠和ICR小鼠由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,动物生产许可证号SCXK(京)2012-0001;实验用Wistar大鼠由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,动物生产许可证号SCXK(京)2012-0001。
实施例1一种三七总皂苷组合物
一、制备方法,包括以下步骤:
⑴.前处理:将三七剪口拣选去杂后于洗药机中,用纯化水清洗干净后,于120℃进行烘干,将烘干后的三七剪口进行破碎,至破碎粒度为3mm,得到提取前物料A;
⑵.提取:将步骤⑴所得提取前物料A称重,加入物料A重量1倍的65%乙醇浸泡12小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量1.5倍的80%乙醇后,在30℃浸泡12小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩8小时后,将浓缩液转移到单效外循环浓缩蒸发器减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
⑶.大孔吸附树脂处理:将步骤⑵所得浓缩膏加纯化水稀释至400mg(生药)/mL,室温水沉12小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用2倍滤液体积的D101大孔吸附树脂以1.2BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用1倍D101树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1倍D101树脂体积的60%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1倍D101树脂体积的55%乙醇、1倍D101树脂体积的65%乙醇和1倍D101树脂体积的75%乙醇以1.0BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
⑷.D900树脂脱色:步骤⑶的洗脱液直接以2.0BV/h的流速过步骤⑶所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入1倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤⑵所得浓缩膏重量4%的药用炭于40℃保温脱色40分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后得要药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.06(60±5℃测定)后,于70℃干燥1.5小时后得到本发明所述的三七总皂苷组合物。
二、三七总皂苷组合物中的有效成分及含量检测方法:
使用高效液相色谱作为检测系统,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以流动相A:乙腈,流动相B:水,按下表进行梯度洗脱;流速每分钟为1.5mL(色谱柱规格:4.6×250mm,5μm);检测波长为203nm;柱温25℃。
表1 梯度洗脱表
经检测,本实施例的三七总皂苷组合物中的成分及含量为:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 30.02%、人参皂苷Rb1 39.95%、三七皂苷R115.98%、人参皂苷Re2.71%、人参皂苷Rd 5.15%,人参皂苷Rf0.52%、人参皂苷Rh2 1.76%、人参皂苷Rc1.11%、人参皂苷Rb3 0.34%和人参皂苷Rg30.52%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的85.95%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和为人参皂苷Rd的含量的10.86倍。
三、三七总皂苷组合物的其他性状检测:
⑴.外观检查:
检查方法:目测。
检查结果:类白色粉末。
⑵.颜色检查:
检查方法:将本实施例的三七总皂苷组合物制成每1mL中含三七总皂苷25mg的溶液,照溶液颜色检查法(《中国药典》一部附录XI A) 检查,与黄色4号标准比色液比较。
检查结果:供试品管呈现的颜色不深于黄色4号标准比色液。
⑶.有害元素检查:
检查方法:取本实施例的三七总皂苷组合物0.1g,用1mL的70%乙醇和2%硝酸混合溶液溶解,超声30min,取1mL溶解后样品,用2%硝酸水溶液9mL稀释,超声10min,备用。以7%乙醇和2%硝酸混合溶液分别配制0、1、10和100ppb的混合元素标准;使用70%乙醇和2%硝酸混合溶液校准工作基线;电感耦合等离子体质谱仪进行检查。
检查结果:18 种重金属及有害元素的总量为0.69mg/kg。
⑷.有机残留物检查:
检查方法:
按照残留溶剂测定法(中国药典2005年版二部附录VIIIP第二法)测定。色谱条件与系统适用性试验以键合/交联聚乙二醇为固定相,采用弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm);氢火焰离子化检测器,柱温,程序升温,起始温度为60℃,维持16 分钟,再以每分钟20℃升温至200℃,维持2 分钟;检测器温度300℃,进样口温度240℃;载气为氮气,流速为每分钟1.0mL。顶空进样,顶空瓶平衡温度为90℃,平衡时间为30分钟。
对照品溶液的制备:精密称取正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯对照品适量,加N,N-二甲基乙酰胺制成每1mL中分别含20μg、4μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg的溶液,作为对照品储备液。精密吸取上述储备液2mL,置50mL容量瓶中,加25%N,N-二甲基乙酰胺溶液稀释至刻度摇匀后,精密量取5mL置于20mL顶空瓶中,密封瓶口,制得对照品溶液。
供试品溶液的制备:精密称取本实施例的三七总皂苷组合物0.1g,置于20mL顶空瓶中,加入25%N,N-二甲基乙酰胺溶液5mL,密封瓶口,摇匀,制得供试品溶液。
测定方法:精密量取顶空气体1mL,注入气相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算有机残留物含量。
检查结果:苯、正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯均未检出。
实施例2一种三七总皂苷组合物
一、制备方法,包括以下步骤:
⑴.前处理:将三七拣选去杂后于洗药机中,用纯化水清洗干净后,于90℃进行烘干,将烘干后的三七剪口进行破碎,至破碎粒度0.5mm,得到提取前物料A;
⑵.提取:将步骤⑴所得提取前物料A称重,加入物料A重量2倍的75%乙醇浸泡24小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量1倍的95%乙醇后,在15℃浸泡24小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩10小时后,将浓缩液转移到单效外循环浓缩蒸发器减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
⑶.大孔吸附树脂处理:将步骤⑵所得浓缩膏加纯化水稀释至300mg(生药)/mL,室温水沉24小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用1.5倍滤液体积的HPD300树脂以1.4BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用1.5倍HPD300树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1.5倍HPD300树脂体积的80%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1.5倍HPD300树脂体积的60%乙醇、1倍HPD300树脂体积的70%乙醇和1.5倍HPD300树脂体积的85%乙醇以0.8BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
⑷.D900树脂脱色:步骤⑶的洗脱液直接以5.0BV/h的流速过步骤⑶所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入2倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤⑵所得浓缩膏重量2%的药用炭于45℃保温脱色30分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后得要药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.08(60±5℃测定)后,于70℃干燥3.0小时后得到本发明所述的三七总皂苷组合物。
二、三七总皂苷组合物中的有效成分及含量检测方法:
检测方法同实施例1。
经检测,本实施例的三七总皂苷组合物中的成分及含量为:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 49.71%、人参皂苷Rb1 25.08%、三七皂苷R1 7.13%、人参皂苷Re 7.67%、人参皂苷Rd 2.21%,人参皂苷Rf 1.75%、人参皂苷Rh2 0.32%、人参皂苷Rc 2.95%、人参皂苷Rb3 0.81%和人参皂苷Rg3 0.83%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的81.92%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和为人参皂苷Rd的含量的14.57倍。
三、三七总皂苷组合物的其他性状检测:
⑴.外观检查:
检查方法:目测。
检查结果:类白色粉末。
⑵.颜色检查:
检查方法:同实施例1.
检查结果:供试品管呈现的颜色不深于黄色4号标准比色液。
⑶.有害元素检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:18 种重金属及有害元素的总量为0.64mg/kg。
⑷.有机残留物检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:苯、正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯均未检出。
实施例3一种三七总皂苷组合物
一、制备方法,包括以下步骤:
⑴.前处理:将三七剪口拣选去杂后于洗药机中,用纯化水清洗干净后,于115℃进行烘干,将烘干后的三七剪口进行破碎,至破碎粒度1mm,得到提取前物料A;
⑵.提取:将步骤⑴所得提取前物料A称重,加入物料A重量3倍的70%乙醇浸泡18小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量2倍的85%乙醇后,在20℃浸泡18小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩9小时后,将浓缩液转移到单效外循环浓缩蒸发器减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
⑶.大孔吸附树脂处理:将步骤⑵所得浓缩膏加纯化水稀释至250mg(生药)/mL,室温水沉18小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用1倍滤液体积的D101大孔吸附树脂以1.3BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用2倍D101树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1倍D101树脂体积的70%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1倍D101树脂体积的58%乙醇、1倍D101树脂体积的68%乙醇和2倍D101树脂体积的80%乙醇以1.1BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
⑷.D900树脂脱色:步骤⑶的洗脱液直接以3.0BV/h的流速过步骤⑶所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入3倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤⑵所得浓缩膏重量3%的药用炭于42℃保温脱色50分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后得要药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.07(60±5℃测定)后,于70℃干燥2.0小时后得到本发明所述的三七总皂苷组合物。
二、三七总皂苷组合物中的有效成分及含量检测方法:
检测方法同实施例1。
经检测,本实施例的三七总皂苷组合物中的成分及含量为:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 31.6%、人参皂苷Rb139.25%、三七皂苷R115.92%、人参皂苷Re 3.14%、人参皂苷Rd 3.42%,人参皂苷Rf 0.51%、人参皂苷Rh2 1.24%、人参皂苷Rc 1.05%、人参皂苷Rb3 2.19%和人参皂苷Rg30.63%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的86.77%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和为人参皂苷Rd的含量的16.13倍。
三、三七总皂苷组合物的其他性状检测:
⑴.外观检查:
检查方法:目测。
检查结果:类白色粉末。
⑵.颜色检查:
检查方法:同实施例1.
检查结果:供试品管呈现的颜色不深于黄色4号标准比色液。
⑶.有害元素检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:18 种重金属及有害元素的总量为0.72mg/kg。
⑷.有机残留物检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:苯、正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯均未检出。
实施例4一种三七总皂苷组合物
一、制备方法,包括以下步骤:
⑴.前处理:将三七剪口拣选去杂后于洗药机中,用纯化水清洗干净后,于118℃进行烘干,将烘干后的三七剪口进行破碎,至破碎粒度5mm,得到提取前物料A;
⑵.提取:将步骤⑴所得提取前物料A称重,加入物料A重量1.5倍的73%乙醇浸泡16小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量1倍的90%乙醇后,在40℃浸泡20小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩9小时后,将浓缩液转移到单效外循环浓缩蒸发器减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
⑶.大孔吸附树脂处理:将步骤⑵所得浓缩膏加纯化水稀释至250mg(生药)/mL,室温水沉20小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用2倍滤液体积的D101大孔吸附树脂以1.4BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用1倍D101树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1倍D101树脂体积的65%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1倍D101树脂体积的55%乙醇、1倍D101树脂体积的70%乙醇和1倍D101树脂体积的75%乙醇以1.2BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
⑷.D900树脂脱色:步骤⑶的洗脱液直接以4.0BV/h的流速过步骤⑶所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入1倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤⑵所得浓缩膏重量5%的药用炭于44℃保温脱色40分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后得要药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.07(60±5℃测定)后,于70℃干燥2.5小时后得到本发明所述的三七总皂苷组合物。
二、三七总皂苷组合物中的有效成分及含量检测方法:
检测方法同实施例1。
经检测,本实施例的三七总皂苷组合物中的成分及含量为:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 34.60%、人参皂苷Rb1 26.97%、三七皂苷R1 9.05%、人参皂苷Re 6.14%、人参皂苷Rd 3.63%,人参皂苷Rf 2.00%、人参皂苷Rh2 1.8%、人参皂苷Rc 2.45%、人参皂苷Rb3 2.44%和人参皂苷Rg32.47%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的70.62%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和为人参皂苷Rd的含量的9.92倍。
三、三七总皂苷组合物的其他性状检测:
⑴.外观检查:
检查方法:目测。
检查结果:类白色粉末。
⑵.颜色检查:
检查方法:同实施例1.
检查结果:供试品管呈现的颜色不深于黄色4号标准比色液。
⑶.有害元素检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:18 种重金属及有害元素的总量为0.59mg/kg。
⑷.有机残留物检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:苯、正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯均未检出。
实施例5一种三七总皂苷组合物
一、制备方法,包括以下步骤:
⑴.前处理:将三七剪口拣选去杂后于洗药机中,用纯化水清洗干净后,于120℃进行烘干,将烘干后的三七剪口进行破碎,至破碎粒度2mm,得到提取前物料A;
⑵.提取:将步骤⑴所得提取前物料A称重,加入物料A重量2.5倍的68%乙醇浸泡20小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量1.5倍的87%乙醇后,在35℃浸泡16小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩9小时后,将浓缩液转移到单效外循环浓缩蒸发器减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
⑶.大孔吸附树脂处理:将步骤⑵所得浓缩膏加纯化水稀释至280mg(生药)/mL,室温水沉18小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用2倍滤液体积的D101大孔吸附树脂以1.2BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用1倍D101树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1倍D101树脂体积的75%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1倍D101树脂体积的54%乙醇、1倍D101树脂体积的65%乙醇和1倍D101树脂体积的78%乙醇以1.1BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
⑷.D900树脂脱色:步骤⑶的洗脱液直接以3.5BV/h的流速过步骤⑶所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入1倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤⑵所得浓缩膏重量4%的药用炭于40℃保温脱色40分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后得要药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.06(60±5℃测定)后,于70℃干燥3.0小时后得到本发明所述的三七总皂苷组合物。
二、三七总皂苷组合物中的有效成分及含量检测方法:
检测方法同实施例1。
经检测,本实施例的三七总皂苷组合物中的成分及含量为:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg143.00%、人参皂苷Rb1 29.11%、三七皂苷R1 15.02%、人参皂苷Re 3.2%、人参皂苷Rd 4.45%,人参皂苷Rf 0.80%、人参皂苷Rh2 0.60%、人参皂苷Rc 1.00%、人参皂苷Rb3 0.30%和人参皂苷Rg31%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的87.13%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和为人参皂苷Rd的含量的9.92倍。
三、三七总皂苷组合物的其他性状检测:
⑴.外观检查:
检查方法:目测。
检查结果:类白色粉末。
⑵.颜色检查:
检查方法:同实施例1.
检查结果:供试品管呈现的颜色不深于黄色4号标准比色液。
⑶.有害元素检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:18 种重金属及有害元素的总量为0.61mg/kg。
⑷.有机残留物检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:苯、正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯均未检出。
实施例6一种三七总皂苷组合物
一、制备方法,包括以下步骤:
⑴.前处理:将三七剪口拣选去杂后于洗药机中,用纯化水清洗干净后,于90℃进行烘干,将烘干后的三七剪口进行破碎,至破碎粒度4mm,得到提取前物料A;
⑵.提取:将步骤⑴所得提取前物料A称重,加入物料A重量1倍的70%乙醇浸泡22小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量1.5倍的92%乙醇,在25℃浸泡15小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩9小时后,将浓缩液转移到单效外循环浓缩蒸发器减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
⑶.大孔吸附树脂处理:将步骤⑵所得浓缩膏加纯化水稀释至400mg(生药)/mL,室温水沉20小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用2倍滤液体积的D101大孔吸附树脂以1.3BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用1倍D101树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1倍D101树脂体积的72%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1倍D101树脂体积的56%乙醇、1倍D101树脂体积的70%乙醇和1倍D101树脂体积的82%乙醇以1.2BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
⑷.D900树脂脱色:步骤⑶的洗脱液直接以4.5BV/h的流速过步骤⑶所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入1倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤⑵所得浓缩膏重量4%的药用炭于45℃保温脱色40分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后得要药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.08(60±5℃测定)后,于70℃干燥3.0小时后得到本发明所述的三七总皂苷组合物。
二、三七总皂苷组合物中的有效成分及含量检测方法:
检测方法同实施例1。
经检测,本实施例的三七总皂苷组合物中的成分及含量为:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 46.00%、人参皂苷Rb1 35.00%、三七皂苷R1 10.21%、人参皂苷Re 2.75%、人参皂苷Rd 1.13%,人参皂苷Rf 0.63%、人参皂苷Rh2 0.75%、人参皂苷Rc 1.07%、人参皂苷Rb3 0.46%和人参皂苷Rg31.14%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的91.21%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和为人参皂苷Rd的含量的40.01倍。
三、三七总皂苷组合物的其他性状检测:
⑴.外观检查:
检查方法:目测。
检查结果:类白色粉末。
⑵.颜色检查:
检查方法:同实施例1.
检查结果:供试品管呈现的颜色不深于黄色4号标准比色液。
⑶.有害元素检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:18 种重金属及有害元素的总量为0.70mg/kg。
⑷.有机残留物检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:苯、正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯均未检出。
实施例7一种三七总皂苷组合物
一、制备方法,包括以下步骤:
⑴.前处理:将三七剪口拣选去杂后于洗药机中,用纯化水清洗干净后,于95℃进行烘干,将烘干后的三七剪口进行破碎,至破碎粒度1.5mm,得到提取前物料A;
⑵.提取:将步骤⑴所得提取前物料A称重,加入物料A重量1.2倍的72%乙醇浸泡13小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量1.8倍的81%乙醇,在38℃浸泡22小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩8.5小时后,将浓缩液转移到单效外循环浓缩蒸发器减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
⑶.大孔吸附树脂处理:将步骤⑵所得浓缩膏加纯化水稀释至270mg(生药)/mL,室温水沉13小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用1.2倍滤液体积的D101大孔吸附树脂以1.2BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用1.1倍D101树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1.1倍D101树脂体积的62%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1.1倍D101树脂体积的55%乙醇、1倍D101树脂体积的65%乙醇和1.2倍D101树脂体积的76%乙醇以0.8BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
⑷.D900树脂脱色:步骤⑶的洗脱液直接以2.2BV/h的流速过步骤⑶所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入2.7倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤⑵所得浓缩膏重量2.5%的药用炭于41℃保温脱色32分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后得要药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.06(60±5℃测定)后,于70℃干燥2.2小时后得到本发明所述的三七总皂苷组合物。
二、三七总皂苷组合物中的有效成分及含量检测方法:
检测方法同实施例1。
经检测,本实施例的三七总皂苷组合物中的成分及含量为:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 36.00%、人参皂苷Rb1 31.00%、三七皂苷R1 14.00%、人参皂苷Re 3.40%、人参皂苷Rd 3.00%,人参皂苷Rf 1.20%、人参皂苷Rh2 0.90%、人参皂苷Rc 1.30%、人参皂苷Rb31.00%和人参皂苷Rg31.00%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的81.00%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和为人参皂苷Rd的含量的15.00倍。
三、三七总皂苷组合物的其他性状检测:
⑴.外观检查:
检查方法:目测。
检查结果:类白色粉末。
⑵.颜色检查:
检查方法:同实施例1.
检查结果:供试品管呈现的颜色不深于黄色4号标准比色液。
⑶.有害元素检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:18 种重金属及有害元素的总量为0.61mg/kg。
⑷.有机残留物检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:苯、正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯均未检出。
实施例8一种三七总皂苷组合物
一、制备方法,包括以下步骤:
⑴.前处理:将三七剪口拣选去杂后于洗药机中,用纯化水清洗干净后,于100℃进行烘干,将烘干后的三七剪口进行破碎,至破碎粒度2.5mm,得到提取前物料A;
⑵.提取:将步骤⑴所得提取前物料A称重,加入物料A重量1.6倍的71%乙醇浸泡14小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量1.6倍的83%乙醇,在32℃浸泡19小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩8.8小时后,将浓缩液转移到单效外循环浓缩蒸发器减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
⑶.大孔吸附树脂处理:将步骤⑵所得浓缩膏加纯化水稀释至290mg(生药)/mL,室温水沉15小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用1.4倍滤液体积的D101大孔吸附树脂以1.3BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用1.2倍D101树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1.2倍D101树脂体积的64%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1.2倍D101树脂体积的56%乙醇、1倍D101树脂体积的66%乙醇和1.4倍D101树脂体积的77%乙醇以0.9BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
⑷.D900树脂脱色:步骤⑶的洗脱液直接以2.5BV/h的流速过步骤⑶所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入2.5倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤⑵所得浓缩膏重量3.6%的药用炭于41.5℃保温脱色36分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后得要药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.08(60±5℃测定)后,于70℃干燥2.4小时后得到本发明所述的三七总皂苷组合物。
二、三七总皂苷组合物中的有效成分及含量检测方法:
检测方法同实施例1。
经检测,本实施例的三七总皂苷组合物中的成分及含量为:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 38.00%、人参皂苷Rb1 33.00%、三七皂苷R1 8.00%、人参皂苷Re 4.00%、人参皂苷Rd 6.00%,人参皂苷Rf 1.90%、人参皂苷Rh2 1.20%、人参皂苷Rc 2.30%、人参皂苷Rb3 1.30%和人参皂苷Rg31.80%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的79.00%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和为人参皂苷Rd的含量的6.83倍。
三、三七总皂苷组合物的其他性状检测:
⑴.外观检查:
检查方法:目测。
检查结果:类白色粉末。
⑵.颜色检查:
检查方法:同实施例1.
检查结果:供试品管呈现的颜色不深于黄色4号标准比色液。
⑶.有害元素检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:18 种重金属及有害元素的总量为0.64mg/kg。
⑷.有机残留物检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:苯、正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯均未检出。
实施例9一种三七总皂苷组合物
一、制备方法,包括以下步骤:
⑴.前处理:将三七剪口拣选去杂后于洗药机中,用纯化水清洗干净后,于105℃进行烘干,将烘干后的三七剪口进行破碎,至破碎粒度3.5mm,得到提取前物料A;
⑵.提取:将步骤⑴所得提取前物料A称重,加入物料A重量1.8倍的69%乙醇浸泡15小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量1.3倍的88%乙醇,在27℃浸泡17小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩8.6小时后,将浓缩液转移到单效外循环浓缩蒸发器减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
⑶.大孔吸附树脂处理:将步骤⑵所得浓缩膏加纯化水稀释至310mg(生药)/mL,室温水沉17小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用1.6倍滤液体积的D101大孔吸附树脂以1.4BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用1.4倍D101树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1.3倍D101树脂体积的67%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1.3倍D101树脂体积的57%乙醇、1倍D101树脂体积的67%乙醇和1.6倍D101树脂体积的79%乙醇以1.0BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
⑷.D900树脂脱色:步骤⑶的洗脱液直接以2.8BV/h的流速过步骤⑶所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入1.8倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤⑵所得浓缩膏重量3.7%的药用炭于43℃保温脱色44分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后得要药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.08(60±5℃测定)后,于70℃干燥1.8小时后得到本发明所述的三七总皂苷组合物。
二、三七总皂苷组合物中的有效成分及含量检测方法:
检测方法同实施例1。
经检测,本实施例的三七总皂苷组合物中的成分及含量为:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 41.96%、人参皂苷Rb1 32.00%、三七皂苷R1 11.00%、人参皂苷Re 5.00%、人参皂苷Rd 0.50%,人参皂苷Rf 1.40%、人参皂苷Rh2 1.40%、人参皂苷Rc 1.50%、人参皂苷Rb3 1.90%和人参皂苷Rg31.20%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的84.96%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和为人参皂苷Rd的含量的86.00倍。
三、三七总皂苷组合物的其他性状检测:
⑴.外观检查:
检查方法:目测。
检查结果:类白色粉末。
⑵.颜色检查:
检查方法:同实施例1.
检查结果:供试品管呈现的颜色不深于黄色4号标准比色液。
⑶.有害元素检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:18 种重金属及有害元素的总量为0.71mg/kg。
⑷.有机残留物检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:苯、正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯均未检出。
实施例10一种三七总皂苷组合物
一、制备方法,包括以下步骤:
⑴.前处理:将三七剪口拣选去杂后于洗药机中,用纯化水清洗干净后,于110℃进行烘干,将烘干后的三七剪口进行破碎,至破碎粒度4.5mm,得到提取前物料A;
⑵.提取:将步骤⑴所得提取前物料A称重,加入物料A重量2.2倍的67%乙醇浸泡17小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量1.2倍的91%乙醇,在22℃浸泡14小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩8.4小时后,将浓缩液转移到单效外循环浓缩蒸发器减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
⑶.大孔吸附树脂处理:将步骤⑵所得浓缩膏加纯化水稀释至330mg(生药)/mL,室温水沉19小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用1.8倍滤液体积的D101大孔吸附树脂以1.2BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用1.6倍D101树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1.4倍D101树脂体积的73%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1.4倍D101树脂体积的58%乙醇、1倍D101树脂体积的68%乙醇和1.8倍D101树脂体积的81%乙醇以1.1BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
⑷.D900树脂脱色:步骤⑶的洗脱液直接以3.2BV/h的流速过步骤⑶所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入1.5倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤⑵所得浓缩膏重量4.5%的药用炭于43.5℃保温脱色46分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后得要药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.07(60±5℃测定)后,于70℃干燥1.9小时后得到本发明所述的三七总皂苷组合物。
二、三七总皂苷组合物中的有效成分及含量检测方法:
检测方法同实施例1。
经检测,本实施例的三七总皂苷组合物中的成分及含量为:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 43.20%、人参皂苷Rb1 37.00%、三七皂苷R1 8.01%、人参皂苷Re 3.01%、人参皂苷Rd 1.01%,人参皂苷Rf 0.86%、人参皂苷Rh2 0.51%、人参皂苷Rc 2.00%、人参皂苷Rb3 1.60%和人参皂苷Rg31.60%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的88.21%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和为人参皂苷Rd的含量的44.56倍。
三、三七总皂苷组合物的其他性状检测:
⑴.外观检查:
检查方法:目测。
检查结果:类白色粉末。
⑵.颜色检查:
检查方法:同实施例1.
检查结果:供试品管呈现的颜色不深于黄色4号标准比色液。
⑶.有害元素检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:18 种重金属及有害元素的总量为0.62mg/kg。
⑷.有机残留物检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:苯、正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯均未检出。
实施例11一种三七总皂苷组合物
一、制备方法,包括以下步骤:
⑴.前处理:将三七剪口拣选去杂后于洗药机中,用纯化水清洗干净后,于98℃进行烘干,将烘干后的三七剪口进行破碎,至破碎粒度2.3mm,得到提取前物料A;
⑵.提取:将步骤⑴所得提取前物料A称重,加入物料A重量2.8倍的66%乙醇浸泡19小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量1.1倍的94%乙醇,在17℃浸泡13小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩8.2小时后,将浓缩液转移到单效外循环浓缩蒸发器减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
⑶.大孔吸附树脂处理:将步骤⑵所得浓缩膏加纯化水稀释至370mg(生药)/mL,室温水沉23小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用2倍滤液体积的D101大孔吸附树脂以1.3BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用1.8倍D101树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1.5倍D101树脂体积的78%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1.5倍D101树脂体积的59%乙醇、1倍D101树脂体积的69%乙醇和1.7倍D101树脂体积的83%乙醇以1.2BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
⑷.D900树脂脱色:步骤⑶的洗脱液直接以4.7BV/h的流速过步骤⑶所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入1.2倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤⑵所得浓缩膏重量4.8%的药用炭于44.5℃保温脱色48分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后得要药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.08(60±5℃测定)后,于70℃干燥3.0小时后得到本发明所述的三七总皂苷组合物。
二、三七总皂苷组合物中的有效成分及含量检测方法:
检测方法同实施例1。
经检测,本实施例的三七总皂苷组合物中的成分及含量为:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 40.00%、人参皂苷Rb1 38.00%、三七皂苷R1 12.13%、人参皂苷Re 2.13%、人参皂苷Rd 2.17%,人参皂苷Rf 0.77%、人参皂苷Rh2 0.42%、人参皂苷Rc 1.67%、人参皂苷Rb3 0.59%和人参皂苷Rg30.73%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的90.13%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和为人参皂苷Rd的含量的23.10倍。
三、三七总皂苷组合物的其他性状检测:
⑴.外观检查:
检查方法:目测。
检查结果:类白色粉末。
⑵.颜色检查:
检查方法:同实施例1.
检查结果:供试品管呈现的颜色不深于黄色4号标准比色液。
⑶.有害元素检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:18 种重金属及有害元素的总量为0.69mg/kg。
⑷.有机残留物检查:
检查方法:同实施例1。
检查结果:苯、正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯均未检出。
实施例12
取实施例1制得的三七总皂苷组合物100g,用注射用水适量溶解,加0.5%针用活性炭脱色,过滤,加注射用水至2000mL,调pH 至6.5,过滤后灌装,灭菌即得小容量注射剂。
实施例13
取实施例2制得的三七总皂苷组合物100g,用注射用水适量溶解,加0.5%针用活性炭脱色,过滤,加注射用水至2000mL,调pH 至6.5,过滤后灌装,灭菌即得小容量注射剂。
实施例14
取实施例3制得的三七总皂苷组合物100g,用注射用水适量溶解,加0.5%针用活性炭脱色,过滤,加注射用水至2000mL,调pH 至6.5,过滤后灌装,灭菌即得小容量注射剂。
实施例15
取实施例4制得的三七总皂苷组合物100g,用注射用水适量溶解,加0.5%针用活性炭脱色,过滤,加注射用水至2000mL,调pH 至6.5,过滤后灌装,灭菌即得小容量注射剂。
实施例16
取实施例5制得的三七总皂苷组合物100g,用注射用水适量溶解,加0.5%针用活性炭脱色,过滤,加注射用水至2000mL,调pH 至6.5,过滤后灌装,灭菌即得小容量注射剂。
实施例17
取实施例6制得的三七总皂苷组合物100g,用注射用水适量溶解,加0.5%针用活性炭脱色,过滤,加注射用水至2000mL,调pH 至6.5,过滤后灌装,灭菌即得小容量注射剂。
实施例18
取实施例1制得的三七总皂苷组合物40g,用5%葡萄糖注射液适量溶解,加0.5%针用活性炭脱色,过滤,加5%葡萄糖注射液至1000mL,调pH6.5,过滤后灌装,灭菌即得大容量注射剂。
实施例19
取实施例2制得的三七总皂苷组合物40g,用5%葡萄糖注射液适量溶解,加0.5%针用活性炭脱色,过滤,加5%葡萄糖注射液至1000mL,调pH6.5,过滤后灌装,灭菌即得大容量注射剂。
实施例20
取实施例3制得的三七总皂苷组合物40g,用5%葡萄糖注射液适量溶解,加0.5%针用活性炭脱色,过滤,加5%葡萄糖注射液至1000mL,调pH6.5,过滤后灌装,灭菌即得大容量注射剂。
实施例21
取实施例4制得的三七总皂苷组合物40g,用5%葡萄糖注射液适量溶解,加0.5%针用活性炭脱色,过滤,加5%葡萄糖注射液至1000mL,调pH6.5,过滤后灌装,灭菌即得大容量注射剂。
实施例22
取实施例5制得的三七总皂苷组合物40g,用5%葡萄糖注射液适量溶解,加0.5%针用活性炭脱色,过滤,加5%葡萄糖注射液至1000mL,调pH6.5,过滤后灌装,灭菌即得大容量注射剂。
实施例23
取实施例6制得的三七总皂苷组合物40g,用5%葡萄糖注射液适量溶解,加0.5%针用活性炭脱色,过滤,加5%葡萄糖注射液至1000mL,调pH6.5,过滤后灌装,灭菌即得大容量注射剂。
实施例24
取实施例1制得的三七总皂苷组合物200g,用注射用水适量溶解,加0.5%针用活性炭脱,过滤,加注射用水至2000mL,调pH 至7.0,过滤后,冷冻干燥,即得冻干粉针剂。
实施例25
取实施例2制得的三七总皂苷组合物200g,用注射用水适量溶解,加0.5%针用活性炭脱,过滤,加注射用水至2000mL,调pH 至7.0,过滤后,冷冻干燥,即得冻干粉针剂。
实施例26
取实施例3制得的三七总皂苷组合物200g,用注射用水适量溶解,加0.5%针用活性炭脱,过滤,加注射用水至2000mL,调pH 至7.0,过滤后,冷冻干燥,即得冻干粉针剂。
实施例27
取实施例4制得的三七总皂苷组合物200g,用注射用水适量溶解,加0.5%针用活性炭脱,过滤,加注射用水至2000mL,调pH 至7.0,过滤后,冷冻干燥,即得冻干粉针剂。
实施例28
取实施例5制得的三七总皂苷组合物200g,用注射用水适量溶解,加0.5%针用活性炭脱,过滤,加注射用水至2000mL,调pH 至7.0,过滤后,冷冻干燥,即得冻干粉针剂。
实施例29
取实施例6制得的三七总皂苷组合物200g,用注射用水适量溶解,加0.5%针用活性炭脱,过滤,加注射用水至2000mL,调pH 至7.0,过滤后,冷冻干燥,即得冻干粉针剂。
实施例30
取实施例1制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加与其等量的淀粉以及纯化水混匀制成软材,采用挤出造粒法成粒,干燥,包装,即得颗粒剂。
实施例31
取实施例2制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加与其等量的淀粉以及纯化水混匀制成软材,采用挤出造粒法成粒,干燥,包装,即得颗粒剂。
实施例32
取实施例3制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加与其等量的淀粉以及纯化水混匀制成软材,采用挤出造粒法成粒,干燥,包装,即得颗粒剂。
实施例33
取实施例4制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加与其等量的淀粉以及纯化水混匀制成软材,采用挤出造粒法成粒,干燥,包装,即得颗粒剂。
实施例34
取实施例5制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加与其等量的淀粉以及纯化水混匀制成软材,采用挤出造粒法成粒,干燥,包装,即得颗粒剂。
实施例35
取实施例6制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加与其等量的淀粉以及纯化水混匀制成软材,采用挤出造粒法成粒,干燥,包装,即得颗粒剂。
实施例36
取实施例1制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加与其等量的淀粉以及纯化水混匀制成塑性团块,制丸条,分割及搓圆,干燥,包装,即得丸剂。
实施例37
取实施例2制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加与其等量的淀粉以及纯化水混匀制成塑性团块,制丸条,分割及搓圆,干燥,包装,即得丸剂。
实施例38
取实施例3制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加与其等量的淀粉以及纯化水混匀制成塑性团块,制丸条,分割及搓圆,干燥,包装,即得丸剂。
实施例39
取实施例4制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加与其等量的淀粉以及纯化水混匀制成塑性团块,制丸条,分割及搓圆,干燥,包装,即得丸剂。
实施例40
取实施例5制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加与其等量的淀粉以及纯化水混匀制成塑性团块,制丸条,分割及搓圆,干燥,包装,即得丸剂。
实施例41
取实施例6制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加与其等量的淀粉以及纯化水混匀制成塑性团块,制丸条,分割及搓圆,干燥,包装,即得丸剂。
实施例42
取实施例1制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加入三七总皂苷组合物量70%的糊精,混匀,制成颗粒,加入三七总皂苷组合物量1%滑石粉和三七总皂苷组合物量1%硬脂酸镁混和均匀后打片,包装,即得片剂。
实施例43
取实施例2制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加入三七总皂苷组合物量70%的糊精,混匀,制成颗粒,加入三七总皂苷组合物量1%滑石粉和三七总皂苷组合物量1%硬脂酸镁混和均匀后打片,包装,即得片剂。
实施例44
取实施例3制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加入三七总皂苷组合物量70%的糊精,混匀,制成颗粒,加入三七总皂苷组合物量1%滑石粉和三七总皂苷组合物量1%硬脂酸镁混和均匀后打片,包装,即得片剂。
实施例45
取实施例4制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加入三七总皂苷组合物量70%的糊精,混匀,制成颗粒,加入三七总皂苷组合物量1%滑石粉和三七总皂苷组合物量1%硬脂酸镁混和均匀后打片,包装,即得片剂。
实施例46
取实施例5制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加入三七总皂苷组合物量70%的糊精,混匀,制成颗粒,加入三七总皂苷组合物量1%滑石粉和三七总皂苷组合物量1%硬脂酸镁混和均匀后打片,包装,即得片剂。
实施例47
取实施例6制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,加入三七总皂苷组合物量70%的糊精,混匀,制成颗粒,加入三七总皂苷组合物量1%滑石粉和三七总皂苷组合物量1%硬脂酸镁混和均匀后打片,包装,即得片剂。
实施例48
取实施例1制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,过300目筛,加入三七总皂苷组合物量76%淀粉,混匀,制成颗粒,加入三七总皂苷组合物量4%滑石粉混和均匀后装入胶囊,即得胶囊剂。
实施例49
取实施例2制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,过300目筛,加入三七总皂苷组合物量76%淀粉,混匀,制成颗粒,加入三七总皂苷组合物量4%滑石粉混和均匀后装入胶囊,即得胶囊剂。
实施例50
取实施例3制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,过300目筛,加入三七总皂苷组合物量76%淀粉,混匀,制成颗粒,加入三七总皂苷组合物量4%滑石粉混和均匀后装入胶囊,即得胶囊剂。
实施例51
取实施例4制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,过300目筛,加入三七总皂苷组合物量76%淀粉,混匀,制成颗粒,加入三七总皂苷组合物量4%滑石粉混和均匀后装入胶囊,即得胶囊剂。
实施例52
取实施例5制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,过300目筛,加入三七总皂苷组合物量76%淀粉,混匀,制成颗粒,加入三七总皂苷组合物量4%滑石粉混和均匀后装入胶囊,即得胶囊剂。
实施例53
取实施例6制得的三七总皂苷组合物,将其进一步粉碎成细粉,过300目筛,加入三七总皂苷组合物量76%淀粉,混匀,制成颗粒,加入三七总皂苷组合物量4%滑石粉混和均匀后装入胶囊,即得胶囊剂。
实验例1基于C57BL/6小鼠模型的类过敏反应实验
样品编号:
样品1-53为本发明实施例1-48涉及的三七总皂苷组合物或其制剂;
样品54为血塞通注射液,生产厂家为昆药集团股份有限公司,规格为5mL:250mg;
样品55为血塞通软胶囊,生产厂家为昆药集团股份有限公司,规格为100mg;
样品56为注射用血栓通(冻干),生产厂家为昆药集团股份有限公司,规格为200mg;
样品57为血栓通注射液,生产厂家为广西梧州制药(集团)股份有限公司,规格为5mL:175mg(三七总皂苷);
样品58为注射用血栓通(冻干),生产厂家为广西梧州制药(集团)股份有限公司,规格为150mg;
样品59为血塞通注射液,生产厂家为徐州莱恩药业有限公司,规格为5mL:0.25g;
样品60为血栓通注射液,生产厂家为广东雷允上药业有限公司,规格为5mL:175mg。
实验内容:
考察不同样品对小鼠皮肤血管通透性的影响,判断不同样品诱导类过敏反应的程度。
实验方法:
128只C57BL/6小鼠,随机分为16组,所有小鼠腹腔注射1.5%戊巴比妥钠,注射体积为0.1 mL/20g,麻醉后,剃去背部毛发。小鼠尾静脉注射0.5%依文思蓝,注射体积为50μL/20g。15 min后,16组小鼠分别注射阳性对照、阴性对照、本发明涉及的样品1、3、6、18、24、36、42和样品54-60;阴性对照为质量浓度0.9%的生理;注射方式为在小鼠背部左右侧皮肤皮下注射50 μL样品及对照。样品或对照注射60 min后颈椎脱臼处死小鼠,剪下背部皮肤,对其蓝染情况进行拍照。将皮肤剪碎后加入1.5 mL组织浸出液(丙酮:生理盐水 = 7:3),避光浸泡48 h后,离心取上清,酶标仪595 nm处测量其吸光度值。
阴性对照为质量浓度0.9%的生理盐水,阳性对照为200μg/mL的C48/80,其余样品均配制成24mg/mL的溶液
实验结果:
蓝染情况结果:由于实验小鼠共128只,现以阳性对照组、阴性对照组、样品54组和样品1组为例,说明实验结果,以上四组小鼠的蓝染情况见图1,蓝染情况结果说明:除阴性对照外,所有供试样品均能引起引起类过敏反应,释放组胺,使小鼠受试部位皮肤血管的通透性增高,增加伊文思蓝局部的渗出及蓝染情况;但样品54造成的蓝染情况比样品1更加严重;样品55-60造成的蓝染情况与样品54程度类似;样品3、6、18、24、36和42造成的蓝染情况与样品1类似,但样品6造成的蓝染情况程度相对最低;说明市售市售血塞通或血栓通制剂引起的蓝染情况比本发明提供的三七组合物或其制剂更加严重。皮肤组织浸出液吸光度测定结果:如图2所示,实验结果显示市售血塞通和血栓通制剂(54-60)引起小鼠受试部位皮肤血管通透性增高,组织液渗出的程度高于本发明提供的三七总皂苷组合物及其制剂(1、3、6、18、24、36、42),两者差异显著。
因此,市售血塞通或血栓通制剂引起C57BL/6小鼠的类过敏反应程度比本发明提供的三七组合物更加严重。
实验例2基于RBL-2H3细胞的类过敏反应实验
样品编号:
样品编号同实验例1。
实验内容:
考察不同样品对RBL-2H3细胞释放β-氨基已糖苷酶的影响和细胞脱颗粒的影响。
实验方法:
分别将样品1-60按照终浓度为0.4mg/mL加入20mL RBL-2H3细胞培养液中并混合均匀,于37度下放置60min,取10mL放置后的细胞培养液利用试剂盒检测其中β-氨基己糖苷酶的活性,计算加入各样品后β-氨基己糖苷酶的释放率。取10mL放置后的细胞培养液弃上清,细胞中加入中性红染色后,显微拍照,检查细胞脱颗粒情况。
实验结果:
细胞脱颗粒实验结果:由于共有60组实验,现用样品4-6、19、37、54-60为例,说明实验结果,以上样品对于RBL-2H3细胞脱颗粒的影响如图3所示,其中样品54-60为市售血塞通或血栓通制剂;样品4-6、19和37 为本发明提供的三七总皂苷组合物及其制剂。图中未发生脱颗粒的细胞未被着色,发生脱颗粒的细胞则着色较深。样品54-60(市售血塞通或血栓通制剂)引起明显的脱颗粒现象;而样品4-6、19和37未能引起明显的细胞脱颗粒现象,样品1-3、7-13、15-31和33-48的实验结果与样品4-6、19和37类似。说明与市售血塞通或血栓通制剂相比,本发明提供的三七总皂苷组合物或其制剂引起细胞脱颗粒的程度相对较低。
对释放β-氨基已糖苷酶的影响:测定结果如图4所示,结果显示,本发明提供的三七总皂苷组合物及其制剂(样品1-53)对RBL-2H3细胞生长影响较小,细胞存活率大于70%,引起β-氨基己糖苷酶的释放率约在0.02~0.04%;市售血塞通和血栓通制剂(样品54-60)对RBL-2H3细胞生长影响较大,细胞存活率小于60%,引起β-氨基己糖苷酶的释放率约在0.08~0.1%。说明与市售血塞通和血栓通制剂相比,本发明提供的三七总皂苷组合物及其制剂引起相对较少的β-氨基己糖苷酶释放至细胞外。
因此,与市售血塞通和血栓通制剂相比,本发明提供的三七总皂苷组合物及其制剂引起的类过敏反应程度相对较低。
实验例3急性毒性试验
样品编号:
样品编号同实验例1。
实验内容:
考察不同样品对ICR小鼠的最大耐受量(MTD)与半数致死量(LD50)。
实验方法:
以样品1为例:实验动物为SPF 级ICR 小鼠,雌雄各50只,3~4周龄,体重18.0~22.0g。根据预实验结果,小鼠静脉注射以600mg/kg 体重的剂量为最高剂量,以0.85的剂间比向下设4个剂量,共5 组,试验过程中可根据动物死亡情况上下调整剂量。小鼠静脉注射给药后至少连续观察4 小时,以后每天至少观察一次,连续14 天。主要观察动物饮食、外观、行为、分泌物、排泄物、死亡情况及中毒反应症状及其起始时间、严重程度、持续时间、是否可逆及恢复时间等。给药前及给药后第3、7、14 天称体重。解剖观察:对观察期死亡的动物和观察结束后脱颈椎处死的动物进行解剖,观察各组织和器官的体积、颜色、质地等有无异常。组织病理学检查:如解剖观察到组织、器官出现异常时,及时取材进行组织病理学检查。
实验结果:样品1的小鼠单次静脉注射的LD50为687mg/kg,MTD为268mg/kg。
按照上述实验方案对样品1-11和54-60的MTD和LD50进行测定,结果如表2所示:
表2不同样品对ICR小鼠的MTD与LD50
实验例4不同样品的抗血栓实验
受试药物:本发明实验例1涉及的样品1-60,临用前用生理盐水溶解并稀释至所需浓度,供大鼠静脉给药用。
阳性药物:脉络宁注射液(以下简称脉络宁),金陵药业股份有限公司南京金陵制药厂生产,批号20140320。深棕色注射液,每瓶10 mL。供大鼠静脉给药用。
一、不同样品对血流停滞导致的静脉血栓形成的影响
动物造模:
Wistar大鼠,雌雄各半,体重240~300 g,腹腔注射12%的水和氯醛(0.36 g/kg)麻醉后,仰卧位固定,沿腹中线打开腹腔,暴露后腔静脉,在后腔静脉肾静脉分支以下主干部穿线,并依次于第三腰静脉、左髂腰静脉、第四腰静脉、右侧精索内静脉(雄) 或右侧子宫静脉(雌),右髂腰静脉等后腔静脉分支下穿线。手术结束后,稳定10 min 开始实验。先静脉注射凝血活酶(0.1 mL/kg)引起血栓前状态。静脉给药后5 min,近心端至远心端依次结扎静脉分支,并结扎腔静脉主干,造成静脉血流滞流,诱导静脉血栓形成。
分组与给药:
造模完成的Wistar大鼠随机分为16组,每组10 只,溶剂对照组静脉注射生理盐水;受试药组分别静脉注射本发明实验例1涉及的样品1、2、3、4、5、6、54、55、56、57、58、59、60,剂量为40mg/kg,注射体积均为2mL/kg,给药时间2min。阳性药组静脉注射脉络宁,剂量为2 mL(原液)/kg,注射体积均为2 mL/kg,给药时间2 min。
血栓测定和指标检测:
腔静脉结扎2 h 后,夹闭后腔静脉分叉后的两个分支,剖开血管取出血栓。用滤纸吸去血栓表面血液,纵向切开分成两份,分别称湿重,一份烤箱内烤至恒重,用于称量血栓干重;另一份用0.5 N NaOH 溶解,蛋白定量法测定纤维蛋白量。依据两份血栓的比例进行校正,计算全血栓的干重及总纤维蛋白量。
实验结束后,主动脉取血5mL,3.8%枸橼酸钠抗凝(全血:抗凝剂=9:1),3000 rpm离心10 min,制备血浆,分装后,-80℃保存。用于测定凝血酶时间 (TT)、凝血酶原时间(PT)、激活部分凝血活酶时间(APTT)等抗凝参数。
实验结果:
本发明提供的三七总皂苷组合物(样品1-6)对抗凝参数TT、PT、APTT均无明显影响。血栓测定结果如表3所示,下腔静脉血流停滞2 h 后,血管内均形成了明显的血栓,溶剂对照组血栓湿重约25.7 mg,干重约8.4 mg;本发明提供的三七总皂苷组合物(样品1-6)能够明显抑制静脉血栓形成,使得血栓湿重减少至15.4~16.8mg,血栓基质减少至1.0~1.2mg;而市售血塞通或血栓通制剂(样品54-60)使得血栓湿重减少至19.9~22.7mg,使血栓基质减少至1.8~2.1mg。说明本发明提供的三七总皂苷组合物的抑制血栓形成的效果优于市售血塞通或血栓通制剂。
表3不同样品对大鼠静脉血液停滞形成的血栓重量和基质量的影响
二、不同样品对家兔下腔静脉内皮损伤诱导的静脉血栓形成的影响
动物造模:
家兔戊巴比妥钠(40 mg/kg)麻醉后,仰卧位固定于试验台上。腹部手术野去毛,碘酊消毒后,无菌条件下沿腹中线开腹,分离左侧肾脏远心端的下腔静脉,结扎2cm静脉血管段,从静脉远端沿血管内壁插入1cm 电解阳极,阴极与兔身体相连形成环路。DC电流为3mA,连续通电20 min,阳极能产生大量活性氧,使静脉血管内膜损伤,从而慢慢形成静脉血栓。将电极取出,松开血管段两端的结扎线,在受损静脉血管近心端狭窄血管,至原先的1/5。分层缝合闭腹,待动物清醒后回笼饲养。术后肌注20 万单位的青霉素以预防感染。
分组与给药:
造模完成的家兔按体重随机分为16组,每组10 只。溶剂对照组静脉注射生理盐水,受试药组分别静脉注射本发明实验例1涉及的样品1、2、3、4、5、6、54、55、56、57、58、59、60,剂量为mg/kg,阳性药组静脉注射脉络宁,剂量分别为0.5 mL(原液)/kg,从血栓制备后第1天开始,每天给药1次,连续5天。
血栓测定和指标检测:
末次给药2 h,开腹,于下腔静脉狭窄处远心端,取一段血管段,剖开血管取出血栓。用滤纸吸去血栓表面血液,纵向切开分成两份,分别称湿重,其中,一份烤箱内烤至恒重,用于称量血栓干重;另一份用0.5 N NaOH 溶解,蛋白定量法测定纤维蛋白量。依据两份血栓的比例进行校正,计算全血栓的干重及总纤维蛋白量。
颈总动脉插管取血,3.8%枸橼酸钠抗凝(全血:抗凝剂=9:1),3000 rpm 离心10min后,取血浆、分装置于-80℃冰箱保存,用于试剂盒检测主要凝血因子(FG(FⅠ)、FⅡa、FXa、FXIa)、抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、活化蛋白C(APC)、纤溶酶原(PLG)、(组织型纤溶酶原激活剂)t-PA、尿激酶原(proUK)、胰蛋白酶原(trypsin)、血栓素TXA2稳定代谢产物(TXB2)、前列环素PGI2稳定代谢产物(6-keto-PGF1α)。
实验结果:
本发明提供的三七总皂苷组合物(样品1-6),对家兔血浆内主要凝血因子FⅠ(FG)水平及FⅡa、FⅩa、FⅪa 的活性无明显影响,表明对凝血因子无影响;不影响ATⅢ、TAT、APC,表明对抗凝系统无明显影响;不影响PLG、proUK、trypsin含量,但明显增加t-PA 活性,表明能激活内源性溶栓系统;使得TXB2明显下降,同时6-keto-PGF1α增加,表明能够通过增加PGI2和抑制TXA2来防止血栓形成。
血栓测定结果如表4所示,家兔下腔静脉腔内电解损伤后,能明显诱导静脉血栓形成,损伤5 天后所形成的静脉血栓湿重约为13.4 mg、干重约为7.8 mg、血栓内基质量约为2.5 mg。本发明提供的三七总皂苷组合物(样品1-6)能够明显抑制家兔慢性静脉血栓形成,使得血栓湿重减少至5.5~6.7mg,血栓基质减少至1.0~1.2mg;而市售血塞通或血栓通制剂(样品54-60)对家兔慢性静脉血栓形成的抑制效果不明显,使得血栓湿重减少至9.9~12.4mg,使血栓基质减少至1.9~2.1mg。说明本发明提供的三七总皂苷组合物的抑制血栓形成的效果优于市售血塞通或血栓通制剂。
表4不同样品对对家兔慢性静脉血栓形成的影响
三、不同样品对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响
动物分组和手术过程:
雄性大鼠随机分为16 组,每组10只。溶剂对照组静脉注射生理盐水,受试药组静脉注射本发明实验例1涉及的样品1、2、3、6、8、11、54、55、56、57、58、59、60,剂量为20 mg/kg;阳性药物组静脉注射脉络宁,脉络宁剂量为1 mL/kg。
大鼠12%水合氯醛(0.36 g/kg)麻醉后,动物仰卧位固定在手术台上,分离右侧颈总动脉及左侧颈外静脉,分别插入充满肝素生理盐水(50 U/mL)的聚乙烯管,通过另一聚乙烯管相连,两管接口处放置6 cm长的棉线。血塞通组和脉络宁组在给药15 min后,开放动静脉环路,循环15 min。
标本采集与血栓测定:
动静脉循环15 min后,中断血流,迅速取出包裹棉线的血栓称重,然后将部分血栓从丝线上取下用0.5 N 的NaOH 溶解,测定纤维蛋白量;另一部分再次称重后,烤箱内烤至恒重,用于称量血栓干重。最后根据初始分成的两部分比例进行结果校正,计算出全血栓的干重及血栓内纤维蛋白量。
实验结果:
血栓测定结果如表5所示,旁路中血液循环15 min 后,溶剂对照组大鼠丝线上形成明显血栓,血栓湿重约为15.2 mg、干重约为5.8 mg、血栓内基质量约为1.2mg。本发明提供的三七总皂苷组合物(样品1、2、3、6、8、11)能够明显抑制旁路血栓形成,使得血栓湿重减少至7.8~8.7mg,血栓基质减少至0.7~0.8mg;而市售血塞通或血栓通制剂(样品54-60)使得血栓湿重减少至10.4~12.0mg,使血栓基质减少至0.9~1.0mg。说明本发明提供的三七总皂苷组合物的抑制血栓形成的效果优于市售血塞通或血栓通制剂。
表5不同样品对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响
四、不同样品对大鼠颈动脉血栓形成的影响
动物分组和手术过程:
雄性大鼠按体重随机分成21组,每组10只。溶剂对照组静脉注射生理盐水;受试药组静脉注射本发明实验例1涉及的样品1-11和样品54-60,剂量为40 mg/kg;阳性药组静脉注射脉络宁,剂量为脉络宁1 mL(原液)/kg。
给药15 min 后,腹腔注射12%的水合氯醛(0.36 g/kg)麻醉,仰卧位固定,分离一段颈总动脉,长约2 cm,近心端放置BT87-2 型实验性体内血栓形成仪的刺激电极,远心端放置温度探头。稳定一段时间后,接通电源,开始刺激以便形成动脉血栓,刺激电流强度为2mA,温控电流强度80μA,刺激时间为5 min。
血栓形成时间测定:
开始刺激同时自动启动计时器,电刺激结束后,取下刺激电极,再等待3 min将温控电流强度调零。当血栓形成时,血流中断,温度发生骤变,被远心端温度探头感知,停止计时,据此测定动脉血栓形成时间。
实验结果:
实验结果如表6所示,溶剂对照组的血栓形成时间约为713.2s。本发明提供的三七总皂苷组合物(样品1-11)能够明显延长血栓形成时间,使得血栓形成时间延长至870.2~947.4s;而市售血塞通或血栓通制剂(样品54-60)使得血栓形成时间延长至810.4~861.2s。说明本发明提供的三七总皂苷组合物的抑制血栓形成的效果优于市售血塞通或血栓通制剂。
表6不同样品对大鼠动脉血栓形成时间的影响
综上所述,在多种血栓模型的实验中,本发明提供的三七总皂苷组合物及其制剂与市售血栓通和血塞通制剂相比,均表现出相对更加优异的抗动静脉血栓作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1. 一种三七总皂苷组合物,其特征在于:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 30-50%、人参皂苷Rb1 25-40%、三七皂苷R1 7-16%、人参皂苷Re 2.7-8%、人参皂苷Rd 0.5-7.0%、人参皂苷Rf0.5-2%、人参皂苷Rh2 0.3-2.0、人参皂苷Rc 1.0-3%、人参皂苷Rb3 0.3-2.5%和人参皂苷Rg3 0.5-2.5%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占活性成分总重量的70-95%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和不小于10倍的人参皂苷Rd的含量;
其中,所述组合物的制备方法包括以下步骤:
(1)前处理:将三七或三七剪口清洗干净后,于90-120℃烘干后破碎至粒度为1-3mm,得到提取前物料A;
(2)提取:将步骤(1)所得提取前物料A称重,加入物料A重量1-2倍的65-70%乙醇浸泡12-18小时后收集乙醇,再向药渣中加入物料A重量1.5-2倍的80-90%乙醇后,在20-30℃浸泡12-18小时后收集乙醇,合并两次乙醇收集液,加热回流提取并浓缩8-10小时后,对浓缩液减压浓缩至无醇味,得到浓缩膏;
(3)大孔吸附树脂处理:将步骤(2)所得浓缩膏加纯化水稀释至250-300mg生药/mL,室温水沉12-24小时后,用滤纸过滤后收集滤液,使用1.5-2倍滤液体积的D101大孔吸附树脂以1.2-1.4BV/h的流速对滤液进行过柱吸附后,用1-1.5倍D101树脂体积的纯化水冲洗树脂柱后,用1-1.5倍D101树脂体积的70-80%乙醇浸泡树脂45分钟后,先后用1-1.5倍D101树脂体积的55-58%乙醇、1倍D101树脂体积的65-68%乙醇和1.5-2倍D101树脂体积的75-80%乙醇以1.0-1.2BV/h的流速洗脱,得到洗脱液;
(4)D900树脂脱色:步骤(3)的洗脱液直接以2.0-5.0BV/h的流速过步骤(3)所述的滤液体积2/3的D900树脂并收集流出液,待露出树脂面时,加入1-2倍D900树脂体积的85%乙醇以相同流速冲洗树脂柱并收集流出液,合并两次流出液后,加入步骤(2)所得浓缩膏重量3-4%的药用炭于40-45℃保温脱色40分钟,冷却至室温后,用滤纸过滤脱炭后的药液A,减压浓缩至药液相对密度为1.06-1.08,于60±5℃测定后,于70℃干燥1.5-3.0小时后得到所述的三七总皂苷组合物。
2. 如权利要求1所述的三七总皂苷组合物,其特征在于:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 34.6-46%、人参皂苷Rb1 27-38%、三七皂苷R1 8-15%、人参皂苷Re 3-6%、人参皂苷Rd 1-6%,人参皂苷Rf 0.8-2%、人参皂苷Rh2 0.6-1.8%、人参皂苷Rc 1.2-2.6%、人参皂苷Rb3 0.8-2.2和人参皂苷Rg3 0.8-2.4%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的75-90%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和不小于10倍的人参皂苷Rd的含量。
3. 如权利要求1所述的三七总皂苷组合物,其特征在于:按照重量百分数,其含有人参皂苷Rg1 36.5-43%、人参皂苷Rb1 29-35%、三七皂苷R1 10-14%、人参皂苷Re 3.2-5.8%、人参皂苷Rd 1-6%,人参皂苷Rf 1.2-2.0%、人参皂苷Rh2 1.2-1.8%、人参皂苷Rc 1.2-2.2%、人参皂苷Rb3 1.0-2.2%和人参皂苷Rg3 1.0-2.4%;其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1占总重量的85-90%,且人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量之和不小于20倍的人参皂苷Rd的含量。
4.权利要求1-3中任意一项所述的三七总皂苷组合物在制备治疗或预防血栓性疾病的药物中的应用。
5.一种治疗或预防血栓性疾病的药物组合物,其特征在于:所述的药物组合物包含治疗有效量的权利要求1-3中任意一项所述的三七总皂苷组合物和任选的药学上可以接受的辅料,制成注射液、冻干粉针剂、颗粒剂、丸剂、片剂或胶囊剂。
6.一种制备权利要求1-3中任意一项所述的三七总皂苷组合物的方法,其特征在于:所述的制备方法包括以下步骤:(1)前处理;(2)提取;(3)大孔吸附树脂处理;(4)D900树脂脱色。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610163772.6A CN105816471B (zh) | 2016-03-22 | 2016-03-22 | 一种三七总皂苷组合物及其制备方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610163772.6A CN105816471B (zh) | 2016-03-22 | 2016-03-22 | 一种三七总皂苷组合物及其制备方法和用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105816471A CN105816471A (zh) | 2016-08-03 |
CN105816471B true CN105816471B (zh) | 2019-01-25 |
Family
ID=56524217
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610163772.6A Active CN105816471B (zh) | 2016-03-22 | 2016-03-22 | 一种三七总皂苷组合物及其制备方法和用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105816471B (zh) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106420871B (zh) * | 2016-09-28 | 2020-06-19 | 澳门大学 | 富含Fe、Fd的三七总皂苷及其单体Fe和Fd的制备方法 |
CN106550945B (zh) * | 2016-10-26 | 2019-03-22 | 中国中医科学院中药研究所 | 人参皂苷混合物及其在作为双向端粒调节剂中的应用 |
CN107764926A (zh) * | 2017-09-27 | 2018-03-06 | 哈尔滨珍宝制药有限公司 | 一种三七总皂苷提取物的指纹图谱及其建立方法 |
CN108721353A (zh) * | 2018-08-15 | 2018-11-02 | 云南龙发制药股份有限公司 | 一种三七口服液的制备方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1857352A (zh) * | 2006-03-29 | 2006-11-08 | 广西梧州制药(集团)股份有限公司 | 一种治疗心脑血管疾病的三七药物组合物 |
CN101732378A (zh) * | 2010-01-15 | 2010-06-16 | 黑龙江省珍宝岛制药有限公司 | 一种三七提取物及其制剂 |
-
2016
- 2016-03-22 CN CN201610163772.6A patent/CN105816471B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1857352A (zh) * | 2006-03-29 | 2006-11-08 | 广西梧州制药(集团)股份有限公司 | 一种治疗心脑血管疾病的三七药物组合物 |
CN101732378A (zh) * | 2010-01-15 | 2010-06-16 | 黑龙江省珍宝岛制药有限公司 | 一种三七提取物及其制剂 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105816471A (zh) | 2016-08-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105816471B (zh) | 一种三七总皂苷组合物及其制备方法和用途 | |
CN104435034B (zh) | 一种三七总皂苷及其制备方法 | |
CN100475219C (zh) | 脂溶性芪苷类化合物在制备治疗缺血性心脑血管疾病的药物中的用途及其制剂 | |
CN104147032B (zh) | 一种用于防治缺血性中风相关疾病的药物组合物及其制备方法和用途 | |
CN101279018B (zh) | 一种中药脑血疏制剂 | |
CN1943569B (zh) | 一种中药活性成分组合物及其制备方法和用途 | |
CN102233001A (zh) | 一种治疗心脑血管疾病的中药组合物及其制法和检测方法 | |
CN102357180B (zh) | 一种治疗癌症的中药组合物及其制备方法和用途 | |
CN100467025C (zh) | 积雪草总苷、积雪草苷或羟基积雪草苷在制备防治心、脑血管疾病药物中的用途 | |
WO2009076869A1 (zh) | 高纯度丹酚酸、制备方法及应用 | |
CN113101339B (zh) | 治疗慢性肝损伤汤剂及其制备方法和应用 | |
CN1935178A (zh) | 银杏叶提取物与淫羊藿提取物的组合物 | |
CN103933386B (zh) | 一种用于治疗血友病的复方血友胶囊及其制备方法 | |
CN101716253B (zh) | 一种活血化淤、益气养阴的中药制剂及其制备方法 | |
CN101697989A (zh) | 三七及其提取物在制备治疗和/或预防冠状动脉粥样硬化药物的用途 | |
CN100418534C (zh) | 一种治疗心脑血管疾病的中药有效部位复方制剂及其制备方法 | |
CN1582946B (zh) | 积雪草酸衍生物在制备防治心、脑血管疾病的药物中的用途 | |
CN109172624A (zh) | 一种治疗缺血性脑卒中的药物组合物及其应用 | |
CN104804077B (zh) | 胸腺肽的制备提取方法及其用药安全的产物 | |
CN104161799B (zh) | 一种复方丹参提取物及其制备方法 | |
CN103006575B (zh) | 丹酚酸a冻干粉针用于制备改善脑缺血后的神经功能症状药物的用途 | |
CN1969939A (zh) | 治疗心脑血管疾病的药物组合物及其制备方法和质控方法 | |
CN108743654B (zh) | 一种用于治疗缺血性心脏病的中药组合物及其制备方法和应用 | |
CN1931214B (zh) | 由红景天和葛根素制成的药用组合物 | |
CN100531740C (zh) | 一种辅助防治心、脑血管疾病的保健品 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |