CN104910240A

CN104910240A - 光叶子花中三萜皂苷,以其为活性成分的降血糖药物,及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN104910240A
Application number: CN201510212087.3A
Authority: CN
Inventors: 张玉梅; 宋启示; 范青飞
Original assignee: Xishuangbanna Tropical Botanical Garden of CAS
Current assignee: Xishuangbanna Tropical Botanical Garden of CAS
Priority date: 2015-04-29
Filing date: 2015-04-29
Publication date: 2015-09-16
Anticipated expiration: 2035-04-29
Also published as: CN104910240B

Abstract

光叶子花中三萜皂苷类化合物，是指骨架含有一个齐墩果酸，齐墩果酸3位与一个β-D-吡喃葡萄糖醛酸的1’位通过氧原子相连接的三萜皂苷和其他两个同骨架结构的衍生物，优选式(I)所示的化合物，式(I)中，R₁＝氢或甲基；R₂＝氢或β-D-吡喃木糖。其中叶子花三萜皂苷化合物1-3为新型植物来源的降血糖药物。提供以此类化合物为活性成分的药物组合物，它们的制备方法及在制备降血糖药物中的应用。

Description

光叶子花中三萜皂苷,以其为活性成分的降血糖药物,及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体地涉及一类光叶子花中三萜皂苷，该类化合物可用作为降血糖活性化合物，以其为有效成分的药物组合物，其制备方法及其在制备降血糖药物中的应用。

背景技术

2型糖尿病在全球范围内持续高发，已经成为继心脑血管病和恶性肿瘤之后第三大严重威胁人们健康和生命的非传染性疾病。糖尿病人长期的高血糖状态会导致大血管病变(心脏病、高血压、脑血管意外及下肢血管病变)、微血管病变(糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病)，和神经病变等，危及心、脑、肾等生命器官。目前，临床上使用的降血糖药物主要有胰岛素增敏类(如双胍类及噻唑烷二酮类)，促胰岛素分泌剂磺脲类(如格列美脲等)，α-葡萄糖苷酶抑制剂(如阿卡波糖和伏格列波糖等)，肠促胰岛素类似物(如艾塞那肽等)、DPP-4抑制剂(如西格列汀等)，但这些药物基本都为化学合成药物，存在长期使用后血糖浓度无法有效控制，以及长期使用会对肾脏、肝脏及造血功能等造成损害等问题，如临床用药曲格列酮被发现具有严重的肝脏毒性风险,而吡咯列酮则具有增加水肿和心率衰竭发生率等危害。天然产物是大自然经过长期进化并选择优化过的化合物，也是人类防治疾病药物的主要来源，具有结构丰富、疗效确切、安全低毒以及无依耐性等优点。在过去几十年上市的小分子新化学实体(NCE)中，近60％是直接或间接来源于天然产物，天然产物仍然是药物或先导化合物研发的重要源泉。所以从植物中发现更加安全有效的降血糖药物具有十分重要的学术意义和很好的应用前景。

2型糖尿病是一种代谢性综合疾病，其形成与现代人高糖高脂以及运动不足的生活方式密切相关。链脲佐菌素(STZ)对小鼠的胰岛β细胞有选择性破坏作用，诱导其产生糖尿病。小鼠高热量饲料饲养一定时间并禁食,按一定量腹腔注射STZ，可制备Ⅱ型糖尿病动物模型，且按该法制备出的模型具有超重、糖耐量减低、血脂升高、血清胰岛素升高及胰岛素受体结合力降低伴胰岛素抵抗的特点，类似于Ⅱ型糖尿病病人的临床特征。STZ诱导的小鼠糖尿病因其周期较短，方法简便，是研究人类II型糖尿病治疗新药的理想模型。

现有技术中未见有光叶子花中三萜皂苷作为降血糖药物的报道。

三萜皂苷在紫茉莉科叶子花属植物中存在种类不多，目前仅从紫茉莉科叶子花属光叶子花和叶子花中分离得到3个。本类的三萜皂苷因其含量较低和无紫外吸收等原因较难分离。现有技术中，从叶子花属植物中分离三萜皂苷成分已公开发表如下方法：光叶子花干燥粉碎地上部分用甲醇提取，用乙醚和正丁醇萃取，得乙醚、正丁醇和水三个部位。正丁醇部分经sephadex LH-20柱层析，以甲醇洗脱，其中7–13管三萜皂苷部分再经RP-18柱层析，以甲醇/水洗脱，其中48％甲醇部位最后经sephadex LH-20纯化得到化合物β-D-glucopyranosyl3-O-(β-D-xylopyranosyl-(1→3)-O-β-D-glucopyranosyluronic acid)oleanolate。参见：Simon,A.；Toth,G.；Duddeck,H.；Soliman,H.S.M.；Mahmoud I.I.；Samir H.,Glycosides from Bougainvillea glabra.Natural Product Research 2006，20(1),63–67。现有技术中，从牛膝(Achyranthes bidentata)中分离化合物(1)已公开发表如下方法：牛膝干燥根7kg,用甲醇浸提回流3次(10L*3),合并滤液,减压回收溶剂得甲醇浸膏1.2kg。取浸膏(500g)混悬于水中,依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取。正丁醇萃取液减压浓缩得浅黄色固体约28g。取正丁醇提取物25g湿法上硅胶柱,用氯仿-甲醇(VBV,10：1—5：5)梯度洗脱,得5个组分Ⅰ(0.5g)、Ⅱ(6.10g)、Ⅲ(2.5g)、Ⅳ(6.0g)、Ⅴ(5.0g)。组分Ⅱ用Cosmosil 75C-OPN柱,以甲醇-水(V:V＝4:1)洗脱,得组分Ⅱ-1(500mg)、Ⅱ-2(1.2g)、Ⅱ-3(2.5g)、Ⅱ-4(1.4g)。将化合物组分Ⅱ-1反复用Cosmosil 75C-OPN柱分离,用甲醇-水(VBV＝4B1)洗脱得化合物(1)(25mg),参见：祈乃喜,贾淑萍,郝志芳,李建新,怀牛膝成分的分离与鉴定.中国药物化学杂志,2005,15(3),162-165。从地肤子中分离化合物(2)和(3)的已公开发表方法如下：地肤子10.0kg，用8倍量体积分数70％乙醇提取3次，每次2h。合并提取液，减压浓缩得浸膏约3.75kg。取其中3500g，硅藻土拌样，依次以石油醚、三氯甲烷、甲醇索氏提取，得到石油醚部分520g，三氯甲烷部分130g，甲醇部分1420g。甲醇部分经大孔树脂吸附，依次用水、75％和95％乙醇洗脱，回收乙醇洗脱液，75％乙醇洗脱液得干浸膏127g，95％乙醇洗液得干浸膏23g，薄层检测发现两者化学成分重叠较多，将二者合并。总浸膏经Sephadex LH－20柱色谱，甲醇洗脱，得总皂苷36g和总黄酮苷5g。总皂苷经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇(含3％水)梯度洗脱，薄层色谱检测，得4个流分。其中第2流分经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇(含3％水)(82∶18)洗脱，再经RPC18硅胶柱色谱，甲醇-水(77∶23)洗脱，得化合物(2)(17mg)和(3)(229mg)，参见：卢向红，徐向东，付红伟，陈波，田景奎，张琳，地肤子化学成分的研究。中国药学杂志，2012,47(5)，338-342。其缺点是化合物(1)、(2)、(3)的含量低，分离纯化中多次用到有机溶剂和水的混合溶剂系统，该混合溶剂回收温度高，不利于溶剂的回收利用,不利于工业化大量生产。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足之处，本发明的目的在于提供一类光叶子花三萜皂苷化合物，本发明涉及的有降血糖活性的三萜皂苷类化合物在叶子花属植物中为首次分离得到；提供制备该类化合物的方法，该提取分离方法可控性和重现性好，样品损失少，成本较低，操作方便，可较易分离得到三萜皂苷，溶剂可以反复回收利用，也适用于工业生产。本发明的目的还在于提供以光叶子花三萜皂苷化合物为有效成分的降血糖药物组合物；该类化合物及其组合物在制备降血糖药物中的应用。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下技术方案：

光叶子花中三萜皂苷化合物，是指骨架含有一个齐墩果酸，齐墩果酸3位与一个β-D-吡喃葡萄糖醛酸的1’位通过氧原子相连接的三萜皂苷和其他两个同骨架结构的衍生物。

本发明的三萜皂苷，优选具有下述结构式的化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)，

R₁＝氢或甲基；R₂＝氢或β-D-吡喃木糖

制备本发明上述光叶子花三萜皂苷化合物的方法，取光叶子花枝叶，经干燥、粉粹后，用90％甲醇室温冷浸充分提取，甲醇浸膏；将甲醇浸膏加水混悬后，依次用乙酸乙酯和正丁醇充分萃取；乙酸乙酯部分和正丁醇部分反复用硅胶、Sephadex LH-20、RP-18各种层析柱分离纯化，再结合三萜皂苷的TLC检测方法即得到光叶子花三萜皂苷。

制备如下结构式所示光叶子花三萜皂苷化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)的方法，取光叶子花枝叶，经干燥、粉粹后，用90％甲醇室温冷浸提取3次，时间分别为每次7、3、3天，提取液经减压浓缩得甲醇浸膏；将甲醇浸膏加水混悬后，依次用乙酸乙酯和正丁醇充分萃取，等体积各萃取三次，回收溶剂得到乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水部分；将正丁醇部分经硅胶柱层析，用100:0，20:1，10:1，8:1，6:1，2:1，0:100的氯仿/甲醇梯度洗脱，薄层层析，结合三萜皂苷TLC检测方法合并其中的10:1,8:1和6:1含有三萜皂苷的部分；以下的每一步骤都须结合三萜皂苷TLC检测方法来进行分离纯化；合并后的浸膏再次经硅胶柱层析，先用20:1的氯仿/甲醇等度洗脱去除非三萜皂苷部分，再以90:10:1的氯仿/甲醇/甲酸等度洗脱，根据三萜皂苷点的不同合并为三个组分Fr.1-Fr.3；Fr.1组分经SephadexLH-20凝胶柱层析，1:1的氯仿/甲醇洗脱，合并得到三个亚组分Fr.1-1–Fr.1-3；Fr.1-2再经反相RP-18柱层析，先以50:50的甲醇/水洗脱去除杂质，再以100:0的甲醇/水洗脱得到化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)；Fr.2组分经SephadexLH-20凝胶柱层析，用1:1氯仿/甲醇为洗脱剂除去色素；富集得到的叶子花三萜皂苷再经反相RP-18柱层析，先以50:50的甲醇/水洗脱去除杂质；所得三萜皂苷最后经硅胶柱层析，以90:10:1的氯仿/甲醇/甲酸等度洗脱，经TLC检测合并为Fr.2-1和Fr.2-2，减压蒸干后得到化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)。

式中，R₁＝氢或甲基；R₂＝氢或β-D-吡喃木糖，

以本发明的上述光叶子花三萜皂苷或其药理学上容许的盐为有效成分的降血糖药物。

用于降血糖药物组合物，其中含有治疗有效量的本发明的上述光叶子花三萜皂苷或其药理学上容许的盐和药学上可接受的载体。

本发明还提供了含有治疗有效量的上述结构式所示的光叶子花三萜皂苷墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)或其药理学上容许的盐和药学上可接受的载体的药物组合物。

本发明同时提供了光叶子花三萜皂苷或其药理学上容许的盐在制备降血糖中的应用。

以化合物墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)或其药理学上容许的盐为有效成分的降血糖药物。

化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)在制备降血糖药物中的应用。

化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)用于制备降血糖药物。

化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)用作为降血糖药物。

本发明对紫茉莉科叶子花属植物光叶子花进行系统的三萜皂苷化学成分研究，利用多种分离纯化手段，包括正反相硅胶柱层析，Sephadex LH-20凝胶层析，RP-18等，从中获得了一系列光叶子花三萜皂苷。之后，对主要三萜皂苷成分齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)在小鼠高血糖体内模型上检测其降血糖作用，发现齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)在体内显示出优于阳性对照药二甲双胍(同浓度给药)的降血糖活性，为新型植物来源的降血糖活性化合物，可用于制备降血糖药物。

本发明的所述光叶子花三萜皂苷或其药理学上容许的盐，可以列举例如与盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、氢溴酸等无机酸，或者马来酸、富马酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、甲磺酸、对-苯甲磺酸、己二酸、棕榈酸、单宁酸等有机酸，锂，钠、钾等碱金属，钙、镁等碱土金属，赖氨酸等碱性氨基酸成的盐。

本发明所述的治疗糖尿病相关疾病的药物组合物，由光叶子花三萜皂苷化合物与药学上可接受的载体制备的药物剂型包括片剂、胶囊、口服液、针剂、注射用冻干剂或粉针剂等。由于光叶子花三萜皂苷化合物可从地肤皮、牛膝、光叶子花及其同属属植物中提取分离，而片剂、胶囊、口服液、针剂、注射用冻干剂或粉针剂等药物剂型的制备也是本领域的常规知识。因此，由光叶子花三萜皂苷与相应载体制备的各种药物剂型也能够由本领域技术人员实现。

上文中所述的药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；黏合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂黏土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和硬脂酸镁、以及聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。

本发明化合物可以以组合物的形式通过口服、鼻吸入、直肠或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其他液体制剂如糖浆、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。

本发明的药物组合物优选含有重量比为0.1％～99.5％的活性成分，最优选含有重量比为0.5％～95％的活性成分。

本发明化合物的施用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01～10mg/kg体重，优选0.1～5mg/kg体重。可以一次或多次施用。

本发明光叶子花三萜皂苷提取方法的优越性在于，首先提取分离思路具有新颖性，成功利用色谱层析技术将其他小分子和光叶子花三萜皂苷分离，得到较为集中的光叶子花三萜皂苷，再利用正向及反向柱色谱技术等分离得到纯化的光叶子花三萜皂苷。概括地说，因光叶子花的主要化学成分还有其它类型的三萜皂苷，在光叶子花三萜皂苷分离过程中，有大量的其它类型的三萜皂苷化合物干扰，尤其28位链接糖的三萜皂苷，常常和光叶子花三萜皂苷混杂在一起不易分离。

本发明首先利用Sephadex LH-20的分子筛原理，可分开一部分与光叶子花三萜皂苷分子量相差很大的三萜类成分，再利用正相柱色谱柱的吸附层析原理，成功分离得到含色素较少的光叶子花三萜皂苷部分，再结合各种层析材料包括正向硅胶以及反向RP-18等多种分离手段包括重结晶等，分离纯化到光叶子花三萜皂苷纯品。其次，仅利用实验室或工业上常规的层析材料，包括正反相硅胶、Sephadex LH-20等，不必运用特殊层析材料如氨丙基键和硅胶，也避免运用吸附性较强的活性碳和氧化铝等层析材料；最后，光叶子花三萜皂苷的分离过程中必须结合光叶子花三萜皂苷的TLC检测方法。总之，本发明提取分离方法可控性和重现性好，样品损失少，成本较低，操作方便，可分离得到微量三萜皂苷，溶剂可以反复回收利用，也适用于工业生产。

具体实施方式：

下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。根据本发明的实质对本发明进行的改进都属于本发明的范围。

实施例1：

光叶子花中三萜皂苷化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)的制备及结构鉴定：

取光叶子花枝叶(50公斤)，经干燥、粉粹后，用90％甲醇室温冷浸提取3次，时间分别为每次7、3、3天，提取液经减压浓缩得甲醇浸膏；将甲醇浸膏加水混悬后，依次用乙酸乙酯和正丁醇充分萃取，等体积各萃取三次，回收溶剂得到乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水部分；将正丁醇部分经硅胶柱层析，用100:0，20:1，10:1，8:1，6:1，2:1，0:100的氯仿/甲醇梯度洗脱，薄层层析，结合三萜皂苷TLC检测方法合并其中的10:1,8:1和6:1含有三萜皂苷的部分；以下的每一步骤都须结合三萜皂苷TLC检测方法来进行分离纯化；合并后的浸膏再次经硅胶柱层析，先用20:1的氯仿/甲醇等度洗脱去除非三萜皂苷部分，再以90:10:1的氯仿/甲醇/甲酸等度洗脱，根据三萜皂苷点的不同合并为三个组分Fr.1-Fr.3；Fr.1组分经SephadexLH-20凝胶柱层析，1:1的氯仿/甲醇洗脱，合并得到三个亚组分Fr.1-1–Fr.1-3；Fr.1-2再经反相RP-18柱层析，先以50:50的甲醇/水洗脱去除杂质，再以100:0的甲醇/水洗脱得到化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)

Fr.2组分经SephadexLH-20凝胶柱层析，用1:1氯仿/甲醇为洗脱剂除去色素；富集得到的光叶子花三萜皂苷再经反相RP-18柱层析，先以50:50的甲醇/水洗脱去除杂质；所得三萜皂苷最后经硅胶柱层析，以90:10:1的氯仿/甲醇/甲酸等度洗脱，经TLC检测合并为Fr.2-1和Fr.2-2，减压蒸干后得到化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)。

R₁＝氢或甲基；R₂＝氢或β-D-吡喃木糖。

齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)的结构鉴定数据为：

齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1):白色粉末，C₃₆H₅₆O₉,ESI-MS:655[M+Na]⁺；¹HNMR(600MHz,Pyr-d₅)δ:5.48(1H，brs，H-12)，4.95(1H，d，J＝12.0Hz,H-1′)，3.32(1H,m,H-3),1.30(3H，s，H-23)，1.27(3H，s，H-29)，1.02(3H，s，H-26)，0.99(3H，s，H-24)，0.98(3H，s，H-30),0.93(3H，s，H-27)，0.80(3H，s，H-25)。¹³C NMR(150MHz,Pyr-d₅)δ:39.1(C-1)，26.7(C-2)，89.6(C-3)，39.9(C-4)，56.3(C-5)，18.9(C-6)，33.6(C-7)，40.2(C-8)，48.4(C-9)，37.4(C-10)，24.2(C-11)，123.0(C-12)，145.4(C-13)，42.5(C-14)，28.8(C-15)，24.3(C-16)，46.9(C-17)，42.6(C-18)，42.6(C-19)，31.0(C-20)，34.7(C-21)，33.7(C-22)，28.8(C-23)，17.6(C-24)，15.9(C-25)，17.9(C-26)，26.9(C-27)，177.0(C-28)，33.8(C-29)，24.2(C-30)，106.6(C-1′)，75.9(C-2′)，79.0(C-3′)，74.4(C-4′)，75.9(C-5′)，172.6(C-6′)。

齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)的结构鉴定数据为：

齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)，白色粉末，C₄₁H₆₄O₁₃,ESI-MS:787[M+Na]⁺；¹H NMR(600MHz,Pyr-d₅)δ:5.49(1H，brs，H-12)，4.15(1H，d，J＝7.48Hz,H-1′),4.60(1H，d，J＝8.0Hz,H-1″),3.29(1H,m,H-3),1.20(3H，s，H-23)，1.18(3H，s，H-29)，1.02(3H，s，H-26)，0.98(3H，s，H-24)，0.97(3H，s，H-30)，0.91(3H，s，H-27)，0.79(3H，s，H-25)。¹³C NMR(150MHz,Pyr-d₅)δ:39.0(C-1),26.7(C-2),89.6(C-3),39.0(C-4),56.1(C-5),17.9(C-6),33.6(C-7),40.0(C-8),47.1(C-9),37.4(C-10),24.2(C-11),123.0(C-12),145.3(C-13),42.6(C-14),28.6(C-15),24.4(C-16),46.9(C-17),42.4(C-18),42.4(C-19),31.5(C-20),34.7(C-21),33.7(C-22),27.0(C-23),17.4(C-24),15.9(C-25),17.9(C-26),26.7(C-27),180.7(C-28),33.6(C-29),24.1(C-30),107.2(C-1′),75.1(C-2′),86.7(C-3′),71.4(C-4′),78.6(C-5′),171.2(C-6′),106.6(C-1″),75.1(C-2″),75.7(C-3″),70.05(C-4″),67.9(C-5″)。

齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)的结构鉴定数据为：

齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)，白色粉末，C₄₂H₆₆O₁₃,ESI-MS:801[M+Na]⁺；¹H NMR(600MHz,CD₃COCD₃)δ:5.23(1H,brs,H-12),4.49(1H，d，J＝7.50Hz,H-1′)，4.53(1H，d，J＝7.2Hz,H-1″)，3.71(3H,s,H-OCH₃),3.29(1H,m，H-3),1.28(3H，s，H-23)，1.18(3H，s，H-29)，1.05(3H，s，H-26)，0.96(3H，s，H-24)，0.95(3H，s，H-30)，0.94(3H，s，H-27)，0.78(3H，s，H-25)。¹³C NMR(150MHz,CD₃COCD₃)δ:37.5(C-1)，26.7 (C-2)，89.6(C-3)，39.2(C-4)，56.4(C-5)，18.9(C-6)，33.4(C-7)，40.1(C-8)，48.5(C-9)，37.5(C-10)，23.7(C-11)，123.0(C-12)，144.9(C-13)，42.5(C-14)，28.2(C-15)，23.9(C-16)，46.8(C-17)，42.2(C-18)，42.2(C-19)，30.4(C-20)，34.5(C-21)，33.5(C-22)，28.4(C-23)，16.9(C-24)，15.8(C-25)，17.6(C-26)，26.3(C-27)，178.9(C-28)，31.40(C-29)，24.1(C-30)，106.4(C-1′)，73.9(C-2′)，87.6(C-3′)，71.3(C-4′)，77.3(C-5′)，169.8(C-6′)，52.4(C-1″′),105.8(C-1″)，74.6(C-2″)，75.9(C-3″)，70.6(C-4″)，66.8(C-5″)。

实施例2：

本发明光叶子花三萜皂苷化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)对链脲佐菌素(STZ)诱导的小鼠二型糖尿病高血糖具有治疗作用。实验原理、方法和结果如下：

实验原理：链脲佐菌素(STZ)对小鼠的胰岛β细胞有选择性破坏作用,使其产生糖尿病.小鼠高热量饲料饲养一定时间并禁食12h,按100mg/kg体重腹腔注射STZ,可制备Ⅱ型糖尿病动物模型,且按该法制备出的模型具有超重、糖耐量减低、血脂升高、血清胰岛素升高及胰岛素受体结合力降低伴胰岛素抵抗的特点,类似于Ⅱ型糖尿病病人的临床特征。STZ诱导的小鼠糖尿病因其周期较短，方法简便，是研究人类II型糖尿病治疗新药的理想模型。

实验方法：取6～8周龄，25-30g的ICR雄性小鼠，高糖高脂饲料喂养4周，禁食12h,用1mL一次性无菌注射器按100mg/kg(溶剂为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，PH-4.5)体重腹腔注射STZ，3天后检测隔夜禁食空腹血糖值，血糖值大于等于11.1mmol/ml则为造模成功小鼠。自造模当日起，每天按照50mg/kg体重口服灌胃给药一次，持续十天，直至实验结束。造模当天测量小鼠空腹血糖、空腹体重。实验结束后，检测隔夜禁食小鼠空腹血糖值以及体重。

实验结果：齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)均能降低STZ诱导的糖尿病小鼠的空腹血糖，减轻体重(表1)。

表1.化合物(1)、(2)和(3)对STZ诱导的高血糖小鼠的降血糖作用

实验结果表明，齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)均能降低STZ诱导的糖尿病小鼠的空腹血糖，证明化合物(1)、(2)、(3)能成为治疗二型糖尿病的一种降糖药物。

实施例3：

实施例1所得化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)，加入4％的硫酸乙醇溶液，PH＝4，过滤，干燥，制成硫酸盐化合物1-3。

实施例4：

实施例1所得化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)，加入4％的盐酸溶液，PH＝4，过滤，干燥，制成盐酸盐化合物1-3。

实施例5：

实施例1所得化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D- 吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)，加入4％的酒石酸溶液，PH＝4，过滤，干燥，制成酒石酸盐化合物1-3。

实施例6：

实施例1所得化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)，加入4％的柠檬酸溶液，PH＝4，过滤，干燥，制成柠檬酸盐化合物1-3。

实施例7：

片剂：将实施例1所得化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)或实施例4-7所得的盐10mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸镁5mg、乳糖和淀粉混和，用水均匀湿润、把湿润后的混合物过筛并干燥，再过筛，加入硬脂酸镁，然后将混合物压片，每片重250mg，化合物含量为10mg。

实施例8：

安瓿剂：将实施例1所得化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)或实施例4-7所得的盐2mg，氯化钠10mg，溶解于适量的注射用水中，过滤所得溶液，在无菌条件下装入安瓿瓶中。

实施例9：

注射用冻干剂：实施例1所得化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)或实施例4-7所得的盐10mg，碳酸氢钠2mg，甘露醇252mg。

制备方法：将碳酸氢钠、甘露醇，加注射用水溶解，加活性碳吸附30min除热原，过滤除去活性碳，在滤液中加入化合物或其盐，超声处理使溶解，用1N盐酸调节PH为5.0-7.0，微孔滤膜滤过，加注射用水，分装，冷冻干燥，上塞，轧盖，即得。

实施例10：

胶囊剂：实施例1所得化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)或实施例4-7所得的盐10mg，乳糖187mg，硬脂酸镁3mg；制备方法：将化合物或其盐与助溶剂混和，过筛，均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊，每个胶囊重200mg，活性成分含量为10mg。

Claims

1.光叶子花三萜皂苷类化合物，为骨架含有一个齐墩果酸，齐墩果酸3位与一个β-D-吡喃葡萄糖醛酸的1’位通过氧原子相连接的三萜皂苷和其他两个同骨架结构的衍生物。

2.如权利要求1中所述的光叶子花三萜皂苷类化合物，为具有下述结构式的化合物：齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)，

式中，R₁＝氢或甲基；R₂＝氢或β-D-吡喃木糖，

3.制备权利要求1中所述的光叶子花三萜皂苷化合物的方法，取光叶子花植物的枝叶，经干燥、粉碎后，用90％甲醇室温冷浸充分提取；将甲醇浸膏加水混悬后，依次用乙酸乙酯和正丁醇充分萃取；正丁醇部分反复用硅胶、Sephadex LH-20、RP-18各种层析柱分离纯化，再结合三萜皂苷的TLC检测方法得光叶子花三萜皂苷化合物。

4.制备如下结构式所示的光叶子花三萜皂苷化合物齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(1)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)的方法，取光叶子花枝叶，经干燥、粉粹后，用90％甲醇室温冷浸提取3次，时间分别为每次7、3、3天，提取液经减压浓缩得甲醇浸膏；将甲醇浸膏加水混悬后，依次用乙酸乙酯和正丁醇充分萃取，等体积各萃取三次，回收溶剂得到乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水部分；将正丁醇部分经硅胶柱层析，用100:0，20:1，10:1，8:1，6:1，2:1，0:100的氯仿/甲醇梯度洗脱，薄层层析，结合三萜皂苷TLC检测方法合并其中的10:1，8:1和6:1含有三萜皂苷的部分；以下的每一步骤都须结合三萜皂苷TLC检测方法来进行分离纯化；合并后的浸膏再次经硅胶柱层析，先用20:1的氯仿/甲醇等度洗脱去除非三萜皂苷部分，再以90:10:1的氯仿/甲醇/甲酸等度洗脱，根据三萜皂苷点的不同合并为三个组分Fr.1-Fr.3；Fr.1组分经Sephadex LH-20凝胶柱层析，1:1的氯仿/甲醇洗脱，合并得到三个亚组分Fr.1-1–Fr.1-3；Fr.1-2再经反相RP-18柱层析，先以50:50的甲醇/水洗脱去除杂质，再以100:0的甲醇/水洗脱得到化合物齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(1)；Fr.2组分经Sephadex LH-20凝胶柱层析，用1:1氯仿/甲醇为洗脱剂除去色素；富集得到的光叶子花三萜皂苷再经反相RP-18柱层析，先以50:50的甲醇/水洗脱去除杂质；所得三萜皂苷最后经硅胶柱层析，以90:10:1的氯仿/甲醇/甲酸等度洗脱，经TLC检测合并为Fr.2-1和Fr.2-2，减压蒸干后得到化合物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)，

式中，R₁＝氢或甲基；R₂＝氢或β-D-吡喃木糖。

5.药物组合物，其中含有治疗有效量的如下结构式所示的光叶子花三萜皂苷化合物齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(1)，齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)或其药理学上容许的盐和药学上可接受的载体，

式中，R₁＝氢或甲基；R₂＝氢或β-D-吡喃木糖，

6.以权利要求1中所述的光叶子花三萜皂苷类化合物或其药理学上容许的盐为有效成分的降血糖药物。

7.以权利要求2中所述的化合物齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(1)，齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)或其药理学上容许的盐为有效成分的降血糖药物。

8.权利要求1中所述的光叶子花三萜皂苷类化合物或其药理学上容许的盐在制备降血糖药物中的应用。

9.权利要求2中所述的化合物齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(1)，齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)在制备降血糖药物中的应用。

10.权利要求2中所述的化合物齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(1)，齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(2)和齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃木糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(3)用作为降血糖药物。