CN110950922A - 一种金盏菊苷e的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种金盏菊苷E的制备方法，该方法以兴安虫实为原料，经提取、分离、纯化后制得金盏菊苷E；具体的提取方法为：取兴安虫实的干燥全草，以每克生药加入8‑12mL乙醇溶液的比例加入体积百分比为85％的乙醇溶液，回流提取；具体的分离、纯化方法包括：正丁醇萃取、硅胶柱层析和制备液相柱分离等。该制备方法具有原料易得、操作简便、得率高，制得的成品杂质少、纯度高等优点，为兴安虫实的开发利用拓宽了途径。

Description

一种金盏菊苷E的制备方法

技术领域

本发明涉及药品技术领域，特别涉及一种金盏菊苷E的制备方法。

背景技术

金盏花苷E(Calenduloside E)，又名去葡萄糖竹节参皂苷等，CAS号26020-14-4，分子式C₃₆H₅₆O₉，结构式如下：

现代研究表明，金盏花苷E具有多种药理活性。如期刊文献《The proteomicprofiling of calenduloside E targets in HUVEC:design,synthesis andapplication of biotinylated probe BCEA》(Yu Tian,Shan Wang,Hai Shang,Min Wang,Guibo Sun,Xudong Xu,Xiaobo Sun,RSC Advances,2017,7,6259)中就披露了金盏花苷E具有很强的抗细胞氧化、抗细胞凋亡的作用。因此，金盏花苷E具有广阔的临床应用前景。但现有技术中尚未有制备金盏花苷E的方法披露，又因金盏花苷E结构较复杂，全合成具有一定的难度，因此从天然产物中提取金盏花苷E是一个不错的技术选择。

兴安虫实(Corispermum chinganicum Iljin)为藜科虫实属植物。植株高10-50厘米，茎直立，圆柱形，直径约2.5毫米，绿色或紫红色；由基部分枝，下部分枝较长，上升，上部分枝较短，斜展。叶条形，长2-5厘米，宽约2毫米，先端渐尖具小尖头，基部渐狭，1脉。穗状花序顶生和侧生，细圆柱形，稍紧密，长(1.5)-4-5厘米，直径3-8毫米，通常约5毫米；苞片由披针形(少数花序基部的)至卵形和卵圆形，先端渐尖或骤尖，(1)-3脉，具较宽的膜质边缘。花被片3，近轴花被片1，宽椭圆形，顶端具不规则细齿，远轴2，小，近三角形，稀不存在；雄蕊5，稍超过花被片。果实矩圆状倒卵形或宽椭圆形，长2-4毫米，宽1.5-2毫米，顶端圆形，基部心形，背面凸起中央稍微压扁，腹面扁平，无毛；果核椭圆形，黄绿色或米黄色，光亮，有时具少数深褐色斑点；喙尖为喙长的1/3-1/4，粗短；果翅明显，浅黄色，不透明，全缘。花果期6-8月。产黑龙江、吉林、辽宁、河北、内蒙古、宁夏、甘肃。生于湖边沙丘，半固定沙丘或草原。

据《沙漠地区药用植物》记载，兴安虫草的全草可以作为中药虫实入药，具有清湿热、利小便的功效。但作为一个地方用药，虫实在临床上并未得到普遍使用，现有技术中更不存在任何关于该植物化学成分或现代药理活性的文献报道。

兴安虫实在黑龙江和内蒙地区有着广泛的分布，资源很丰富。但在畜牧业上，虫实常常会被当作杂草而废弃，造成资源的浪费。因此，对兴安虫实进行开发利用是个亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种从兴安虫实中提取金盏花苷E的方法，该方法原料易得、操作简便、得率高，制得的成品杂质少、纯度高。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种金盏菊苷E的制备方法，其特征在于所述的方法为：以兴安虫实为原料，经提取、分离、纯化后即得。

优选的，所述的提取方法为：取兴安虫实的干燥全草，以每克生药加入8-12mL乙醇溶液的比例加入体积百分比为85％的乙醇溶液，回流提取，滤过，取药液，减压回收乙醇至尽，得乙醇提取液。

优选的，所述回流提取的次数为2次，每次1.5小时。

优选的，所述分离、纯化的方法为：取乙醇提取液，加入水饱和正丁醇萃取，取正丁醇层，回收溶剂至干，将固体添加到硅胶层析柱上，以甲醇-氯仿混合溶剂洗脱，该混合溶剂中甲醇与氯仿的体积比为2:1，洗脱液按柱体积分份收集，合并第5-8份柱体积的洗脱液，减压回收溶剂至干，得粗品，采用制备液相进行分离，收集目标馏分，合并，减压回收溶剂、干燥即得。

优选的，所述乙醇提取液与水饱和正丁醇的体积比为1:6-10；所述萃取的次数为6-10次。

优选的，所述采用制备液相进行分离的方法如下：

色谱条件：以规格为10μm，19mm×300mm的μBondapark C18柱为色谱柱；以体积比为85:15的甲醇-1％冰醋酸为流动相，流速为15mL/min，柱温为30℃；

取前步所得粗品，用流动相溶解，滤过，注入制备液相色谱仪，收集出峰时间为11-14min之间的馏分。

本发明通过研究，首次在虫实属植物尤其是兴安虫实中发现了金盏菊苷E成分，从而披露了以兴安虫实作为原料制备金盏菊苷E的方法，该方法具有原料易得、操作简便、得率高，制得的成品杂质少、纯度高等技术效果。

采用本发明方法所制得的产物，通过如下方法确证为金盏菊苷E。

1.薄层色谱

1.1试样

供试品：采用本发明方法制得的产物，按实施例1-3制备；

对照品：金盏菊苷E，外购，纯度≥95.0％。

1.2薄层色谱条件

采用硅胶板；展开剂为体积比为85:15的甲醇-1％冰醋酸溶液；显色剂为硫酸乙醇溶液。

1.3结果

各供试品与对照品在薄层色谱上具有相同的Rf值。

2.波谱数据

¹HNMR(CD₃OD,600Hz):δppm5.21(1H,t,J＝7.2Hz,H-12),4.32(1H,d,J＝7.7Hz,GluA-1),3.78(1H,d,J＝9Hz,GluA-5),3.47(1H,t,J＝9Hz,GluA-4),3.38(1H,t,J＝9Hz,GluA-3),3.20(1H,t,J＝7.9Hz,GluA-2),3.18(1H,dd,J＝12,4.2Hz,H-3),2.91(1H,dd,H-18),1.16,1.03,O.94,O.93,O.89,O.84,0.80(3H,s,7*CH3),0.77-0.79(1H,brd,J＝12.2Hz,H-5)。

¹³CNMR(CD₃0D,600Hz)：δppm39.75(C-1),26.94(C-2),91.16(C-3)，40.16(C-4),56.97(C-5),19.35(C-6),33.83(C-7),40.56(C-8),48.98(C-9),37.92(C-10),24.53(C-11),123.68(C-12),145.17(C-13),42.79(C-14),28.82(C-15),24.09(C-16),47.65(C-17),42.75(C-18),47.24(C-19),31.58(C-20),34.92(C-21),34.03(C-22),28.50(C-23),16.95(C-24),15.92(C-25),17.74(C-26),26.37(C-27),181.82(C-28),33.56(C-29),23.97(C-30),107.01(GluA-1),75.32(GluA-2),77.71(GluA-3),73.20(GluA-4),76.54(GluA-5),172.68(GluA-6)。

上述主要波谱数据与文献报道几乎一致。

为了更好的阐述技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明，但本发明所要求的保护范围不限于下列实施例。

具体实施方式

实施例1

取兴安虫实的干燥全草10Kg，以每克生药加入8mL乙醇溶液的比例加入体积百分比为85％的乙醇溶液，回流提取2次，每次1.5小时，滤过，取药液，减压回收乙醇至尽，得乙醇提取液。

取乙醇提取液，以1:6(乙醇提取液:水饱和正丁醇)的体积比加入水饱和正丁醇，萃取10次，取正丁醇层，回收溶剂至干，将固体添加到硅胶层析柱上，以甲醇-氯仿混合溶剂洗脱，该混合溶剂中甲醇与氯仿的体积比为2:1，洗脱液按柱体积分份收集，合并第5-8份柱体积的洗脱液，减压回收溶剂至干，得粗品。

采用制备液相对粗品进一步的纯化和精制，方法如下：

色谱条件：以规格为10μm，19mm×300mm的μBondapark C18柱为色谱柱；以体积比为85:15的甲醇-1％冰醋酸为流动相，流速为15mL/min，柱温为30℃；

取前步所得粗品，用流动相溶解，滤过，注入制备液相色谱仪，收集出峰时间为11-14min之间的馏分，合并，减压回收溶剂、干燥即得类白色粉末2.35g，经HPLC检测(采用面积归一法)，纯度为92.4％。

实施例2

取兴安虫实的干燥全草10Kg，以每克生药加入12mL乙醇溶液的比例加入体积百分比为85％的乙醇溶液，回流提取2次，每次1.5小时，滤过，取药液，减压回收乙醇至尽，得乙醇提取液。

取乙醇提取液，以1:10(乙醇提取液:水饱和正丁醇)的体积比加入水饱和正丁醇，萃取6次，取正丁醇层，回收溶剂至干，将固体添加到硅胶层析柱上，以甲醇-氯仿混合溶剂洗脱，该混合溶剂中甲醇与氯仿的体积比为2:1，洗脱液按柱体积分份收集，合并第5-8份柱体积的洗脱液，减压回收溶剂至干，得粗品。

采用制备液相对粗品进一步的纯化和精制，方法如下：

色谱条件：以规格为10μm，19mm×300mm的μBondapark C18柱为色谱柱；以体积比为85:15的甲醇-1％冰醋酸为流动相，流速为15mL/min，柱温为30℃；

取前步所得粗品，用流动相溶解，滤过，注入制备液相色谱仪，收集出峰时间为11-14min之间的馏分，合并，减压回收溶剂、干燥即得类白色粉末2.55g，经HPLC检测(采用面积归一法)，纯度为91.5％。

实施例3

取兴安虫实的干燥全草10Kg，以每克生药加入10mL乙醇溶液的比例加入体积百分比为85％的乙醇溶液，回流提取2次，每次1.5小时，滤过，取药液，减压回收乙醇至尽，得乙醇提取液。

取乙醇提取液，以1:8(乙醇提取液:水饱和正丁醇)的体积比加入水饱和正丁醇，萃取8次，取正丁醇层，回收溶剂至干，将固体添加到硅胶层析柱上，以甲醇-氯仿混合溶剂洗脱，该混合溶剂中甲醇与氯仿的体积比为2:1，洗脱液按柱体积分份收集，合并第5-8份柱体积的洗脱液，减压回收溶剂至干，得粗品。

采用制备液相对粗品进一步的纯化和精制，方法如下：

色谱条件：以规格为10μm，19mm×300mm的μBondapark C18柱为色谱柱；以体积比为85:15的甲醇-1％冰醋酸为流动相，流速为15mL/min，柱温为30℃；

取前步所得粗品，用流动相溶解，滤过，注入制备液相色谱仪，收集出峰时间为11-14min之间的馏分，合并，减压回收溶剂、干燥即得类白色粉末2.43g，经HPLC检测(采用面积归一法)，纯度为93.9％。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种金盏菊苷E的制备方法，其特征在于所述的方法为：以兴安虫实为原料，经提取、分离、纯化后即得。

2.根据权利要求1所述一种金盏菊苷E的制备方法，其特征在于所述的提取方法为：取兴安虫实的干燥全草，以每克生药加入8-12mL乙醇溶液的比例加入体积百分比为85％的乙醇溶液，回流提取，滤过，取药液，减压回收乙醇至尽，得乙醇提取液。

3.根据权利要求2所述一种金盏菊苷E的制备方法，其特征在于所述回流提取的次数为2次，每次1.5小时。

4.根据权利要求3所述一种金盏菊苷E的制备方法，其特征在于所述分离、纯化的方法为：取乙醇提取液，加入水饱和正丁醇萃取，取正丁醇层，回收溶剂至干，将固体添加到硅胶层析柱上，以甲醇-氯仿混合溶剂洗脱，该混合溶剂中甲醇与氯仿的体积比为2:1，洗脱液按柱体积分份收集，合并第5-8份柱体积的洗脱液，减压回收溶剂至干，得粗品，采用制备液相进行分离，收集目标馏分，合并，减压回收溶剂、干燥即得。

5.根据权利要求4所述一种金盏菊苷E的制备方法，其特征在于所述乙醇提取液与水饱和正丁醇的体积比为1:6-10；所述萃取的次数为6-10次。

6.根据权利要求4所述一种金盏菊苷E的制备方法，其特征在于所述采用制备液相进行分离的方法如下：

色谱条件：以规格为10μm，19mm×300mm的μBondapark C18柱为色谱柱；以体积比为85:15的甲醇-1％冰醋酸为流动相，流速为15mL/min，柱温为30℃；

取前步所得粗品，用流动相溶解，滤过，注入制备液相色谱仪，收集出峰时间为11-14min之间的馏分。