CN114380885B

CN114380885B - 小花清风藤中2种三萜类化合物及其制备方法

Info

Publication number: CN114380885B
Application number: CN202210095382.5A
Authority: CN
Inventors: 朱仝飞; 闫志慧
Original assignee: Chongqing Medical and Pharmaceutical College
Current assignee: Chongqing Medical and Pharmaceutical College
Priority date: 2022-01-26
Filing date: 2022-01-26
Publication date: 2023-01-06
Anticipated expiration: 2042-01-26
Also published as: CN114380885A

Abstract

本发明公开了小花清风藤中2种三萜类化合物及其制备方法，通过提取小花清风藤的干燥茎和叶中的化学成分；采用环己烷、乙酸乙酯依次对其进行萃取得到三萜类化合物的粗制总样品；将三萜类化合物的粗制总样品分离纯化，将洗脱出的S2‑1、S2‑4分别反复重结晶得到3β‑羟基‑11,13(18)‑齐墩果二烯、3β‑羟基‑9(11),12‑齐墩果二烯，为首次从该属植物中得到的天然产物，本方法操作简单，收率较高。

Description

小花清风藤中2种三萜类化合物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及小花清风藤中2种三萜类化合物及其制备方法。

背景技术

小花清风藤，中药名。为清风藤科植物小花清风藤Sabia parviflora Wall. exRoxb.的茎和叶。国内主要分布于贵州西南部、云南东南部至西南部、广西西部及西南部；在贵州西南地区，苗族、布依族用小花清风藤的茎藤治疗风湿关节痛，跌打损伤痛，以及肝炎等疾病。现代研究表明，小花清风藤含有黄酮类、生物碱类、三萜类、皂苷类等成分。其中三萜类化合物是自然界中一类重要的化合物，具有广泛的生理活性，而小花清风藤中的三萜类化合物研究鲜有报道，限制了对小花清风藤药材及其制剂的开发和质量控制。

发明内容

针对上述的不足，本发明的目的在于，对小花清风藤深入研究，提供小花清风藤中2种三萜类化合物及其制备方法，通过对小花清风藤的地上部分进行超声提取、分离、纯化等过程提取出2种三萜类化合物，有利于对小花清风藤药材及其制剂的开发和质量控制。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

小花清风藤中2种三萜类化合物的制备方法，所述2种三萜类化合物分别为3β-羟基-11, 13(18)-齐墩果二烯、3β-羟基-9(11),12-齐墩果二烯，所述3β-羟基-11, 13(18)-齐墩果二烯的结构式如式Ⅰ所示，所述3β-羟基-9(11),12-齐墩果二烯的结构式如式Ⅱ所示：

；

所述小花清风藤中2种三萜类化合物的制备方法，具体包括有以下步骤：

1）提取：

取小花清风藤的干燥茎和叶，粉碎，加入5倍重量的95%乙醇超声提取3次，每次4小时，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至总提取体积的十分之一，得到浓缩液Ⅰ；

向浓缩液中加入等体积量的纯化水，并搅拌均匀，得到制备液，并常温条件下放置过夜，将放置过夜的制备液抽滤，收集滤液，将滤液浓缩至无醇味，得到浓缩液Ⅱ；

2）萃取：

将步骤1）中的浓缩液Ⅱ加入其体积2倍量的纯化水稀释，得到稀释液；

先用等体积的环己烷对稀释液进行萃取，得到萃取液Ⅰ，再使用等体积的乙酸乙酯对萃取液Ⅰ进行萃取，得到萃取液Ⅱ，将萃取液Ⅱ浓缩，得到浸膏；

将浸膏其重量2倍量的丙酮溶解，过滤，滤去不溶物后，得到溶解液，并将溶解液在7℃的条件下放置过夜；

将放置过夜的溶解液抽滤，收集滤液，将滤液浓缩至干，即得到三萜类化合物的粗制总样品；

3）分离纯化：

将步骤2）中的三萜类化合物的粗制总样品加入其重量1.5倍量的混合溶剂Ⅰ溶解，然后加入与粗制总样品重量相等的柱色谱硅胶，搅拌均匀，并挥去混合溶剂Ⅰ，得到纯化样品Ⅰ，取纯化样品重量30倍量的柱色谱硅胶，湿法装柱，以混合溶剂Ⅱ为起始溶剂进行等度洗脱，每8个柱色谱保留体积收集1段，共收集2段样品，分别命名为S1、S2；

将S2用其体积1.5倍量的二氯甲烷溶解，然后加入与S2重量相等的柱色谱硅胶，搅拌均匀，并挥去二氯甲烷溶剂，得到纯化样品Ⅱ，取纯化样品Ⅱ重量20倍量的柱色谱硅胶，湿法装柱，以混合溶剂Ⅲ为起始溶剂进行等度洗脱，每4个柱色谱保留体积收集1段，共收集4段样品，分别命名为S2-1、S2-2、S2-3、S2-4；

将S2-1反复重结晶得到式Ⅰ，将S2-4反复重结晶得到式Ⅱ；

所述混合溶剂Ⅰ为二氯甲烷：丙酮=1:1的混合液，所述混合溶剂Ⅱ为二氯甲烷:丙酮=15:1的混合液，所述混合溶剂Ⅲ为二氯甲烷:丙酮=10:1的混合液。

进一步地，所述式Ⅰ为3β-羟基-11, 13(18)-齐墩果二烯，所述式Ⅱ化合物2为3β-羟基-9(11),12-齐墩果二烯。

进一步地，所述柱色谱硅胶的规格为100-300目。

进一步地，所述超声提取的温度为60℃。

采用以上方案，本发明具有如下优点：

1、本发明中以小花清风藤的地上部分为原材料，通过提取、萃取、分离纯化等步骤首次从小花清风藤中获得2种三萜类化合物，经过鉴定2种三萜类化合物分别为3β-羟基-11, 13(18)-齐墩果二烯和3β-羟基-9(11),12-齐墩果二烯，有利于对小花清风藤药材及其制剂的开发和质量控制，并为小花清风藤药材综合开发及天然植物药理活性研究提供了化学依据和物质参考。

2、本发明中从小花清风藤中获得的2种三萜类化合物，由于极性差异较小，易产生混合结晶而难以分离，本法摸索出了较为实用的分离条件，使分离此两种三萜类化合物的提取分离方法操作简单、成本低廉、所使用的试剂温和对人体伤害性小、获得的化合物纯度高、杂质少。

本发明的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本发明的实践中得到教导。本发明的目标和其他优点可以通过下面的说明书和权利要求书来实现和获得。

附图说明

图1为本发明S1薄层色谱图；

图2为本发明S2薄层色谱图；

图3为本发明S2-1合并前样品和S2-4合并前样品薄层色谱图；

图4为本发明3β-羟基-11, 13(18)-齐墩果二烯的碳谱图；

图5为本发明3β-羟基-9(11),12-齐墩果二烯的碳谱图；

图6为本发明3β-羟基-11, 13(18)-齐墩果二烯、3β-羟基-9(11),12-齐墩果二烯的结晶图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明的进行详细的描述，但实施例并不对本发明作任何形式的限定，除非特别说明，本发明所涉及的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

实施例1：小花清风藤中2种三萜类化合物的制备

1、实验方法

1）提取：

取小花清风藤的干燥茎和叶，粉碎，加入5倍重量的95%乙醇，在60℃的温度条件下超声提取3次，每次4小时，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至总提取体积的十分之一，得到浓缩液Ⅰ；

向浓缩液中加入等体积量的纯化水，并搅拌均匀，得到制备液，并常温条件下放置过夜，将放置过夜的制备液用布氏漏斗进行抽滤，收集滤液，将滤液浓缩至无醇味，得到浓缩液Ⅱ；

2）萃取：

将放置过夜的溶解液用布氏漏斗进行抽滤，收集滤液，将滤液浓缩至干，即得到三萜类化合物的粗制总样品；

3）分离纯化：

将步骤2）中的三萜类化合物的粗制总样品加入其重量1.5倍量的二氯甲烷：丙酮=1:1的混合溶剂混合溶剂Ⅰ溶解，然后加入与粗制总样品重量相等的柱色谱硅胶(100-300目)，搅拌均匀，并挥去二氯甲烷：丙酮=1:1的混合溶剂Ⅰ，得到纯化样品Ⅰ，取纯化样品重量30倍量的柱色谱硅胶(100-300目)，湿法装柱，以二氯甲烷:丙酮=15:1的混合溶剂Ⅱ为起始溶剂进行等度洗脱，每8个柱色谱保留体积收集1段，共收集2段样品，分别命名为S1、S2；

将S2用其体积1.5倍量的二氯甲烷溶解，然后加入与S2重量相等的柱色谱硅胶(100-300目)，搅拌均匀，并挥去二氯甲烷溶剂，得到纯化样品Ⅱ，取纯化样品Ⅱ重量20倍量的柱色谱硅胶，湿法装柱，以二氯甲烷:丙酮=10:1的混合溶剂Ⅲ为起始溶剂进行等度洗脱，每4个柱色谱保留体积收集1段，共收集4段样品，分别命名为S2-1、S2-2、S2-3、S2-4；

将S2-1反复重结晶得到化合物1，结晶效果如图6中T1-6所示，将S2-4反复重结晶得到化合物2，结晶效果如图6中E12所示。

2、实验结果

化合物1的收率约为1.3%；化合物2的收率约为0.8%。

实施例2：筛选实验

1、实验方法

1.1将S1、S2分别进行薄层色谱，采用二氯甲烷：环己烷=3:1的条件进行展开，使用香草醛浓硫酸喷雾显色。

1.2将S2-1、S2-2、S2-3、S2-4合并前样品分别进行薄层色谱，采用环己烷：二氯甲烷：甲醇 =6:2:0.6的条件进行展开，使用香草醛浓硫酸喷雾显色。

2、实验结果

2.1如图1和图2所示，S1混合杂质较多，且紫红色斑点少，而将S2在Rf值在0.2-0.4范围出现紫红色斑点，且此部分样品结晶性较强，但纯度较低，需要进一步硅胶柱色谱分离，因此选择S2进行下一步纯化。

2.2如图3所示，在Rf值在0.45处出现一系列紫红色斑点，Rf值在0.41处也出现一系列紫红色斑点。将相同斑点合并，从而形成S2-1样品和S2-4样品。同时由于S2-2、S2-3部分样品为两种物质的混合物，因此不适合重结晶。

实施例3：结构鉴定

1、实验方法

利用核磁共振碳谱分别对化合物1、化合物2进行结构鉴定。

2、实验结果

如图4所示，化合物1：白色结晶(三氯甲烷)。¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃ ) δ:38.03 (C-1), 27.23 (C-2),79.06 (C-3), 40.25 (C-4), 54.24 (C-5), 18.45 (C-6),32.48 (C-7), 38.9 (C-8), 54.88 (C-9), 36.71 (C-10), 125.29 (C-11), 125.77 (C-12), 138.1 (C-13), 42.36 (C-14), 24.45 (C-15),35.31 (C-16), 34.68 (C-17),133.38 (C-18), 36.71 (C-19),33.09 (C-20), 36.17 (C-21), 38.03 (C-22), 27.9(C-23),15.09 (C-24), 16.6 (C-25), 17.96 (C-26), 20.25 (C-27), 25.42 (C-28),32.48 (C-29), 24.14 (C-30)。以上数据与文献报道一致，故鉴定化合物1为 3β-羟基-11,13(18)-齐墩果二烯；

如图5所示，化合物2：白色结晶(三氯甲烷)。¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃ ) δ：37.15(C-1)，28.27 (C-2)，78.73 (C-3)，38.94 (C-4)，51.16 (C-5)，18.37 (C-6)，31.14 (C-7)，38.77 (C-8)，154.33 (C-9)，40.86 (C-10)，115.75 (C-11)，120.71 (C-12)，147.13(C-13)，42.78 (C-14)，25.66 (C-15)，27.24 (C-16)，32.16 (C-17)，45.59 (C-18)，46.91(C-19)，29.74 (C-20)，34.62 (C-21)，37.07 (C-22)，28.74 (C-23)，15.70 (C-24)，20.09(C-25)，20.98 (C-26)，25.31 (C-27)，28.74 (C-28)，23.73 (C-29)，33.22 (C-30)。以上数据与文献报道一致，故化合物2鉴定为 3β-羟基-9(11), 12-齐墩果二烯。

最后用说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行同等替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、同等替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.小花清风藤中2种三萜类化合物的制备方法，其特征在于，所述2种三萜类化合物分别为3β-羟基-11, 13(18)-齐墩果二烯、3β-羟基-9(11),12-齐墩果二烯，所述3β-羟基-11,13(18)-齐墩果二烯的结构式如式Ⅰ所示，所述3β-羟基-9(11),12-齐墩果二烯的结构式如式Ⅱ所示：

；

1）提取：

2）萃取：

3）分离纯化：

将S2-1反复重结晶得到式Ⅰ，将S2-4反复重结晶得到式Ⅱ；

2.根据权利要求1所述的小花清风藤中2种三萜类化合物的制备方法，其特征在于，所述式Ⅰ为3β-羟基-11, 13(18)-齐墩果二烯，所述式Ⅱ化合物2为3β-羟基-9(11),12-齐墩果二烯。

3.根据权利要求2所述的小花清风藤中2种三萜类化合物的制备方法，其特征在于，所述柱色谱硅胶的规格为100-300目。

4.根据权利要求3所述的小花清风藤中2种三萜类化合物的制备方法，其特征在于，所述超声提取的温度为60℃。