CN111821325A - 光叶子花提取物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了光叶子花提取物的应用，属于医药技术领域。本发明的光叶子花提取物从光叶子花的花和/或苞片和/或枝和/或叶中提取得到，主要开发光叶子花新鲜枝叶部位，成本低，具有显著的社会价值和应用价值。光叶子花的提取物能提高乙醛脱氢酶活性，抑制酒精引起的谷丙转氨酶、谷草转氨酶异常升高，具有解酒保肝的功效；同时，本发明具有能降低II型糖尿病小鼠血糖，降血脂，改善口服糖耐量，明显降低胰岛素抵抗等，可用于制备降血糖型、降血脂型、缓解胰岛素抵抗型保健食品，对II型糖尿病的高血糖、高血脂、胰岛素抵抗患者等人群有降糖降脂之保健作用。该保健食品毒副作用小，质量稳定。
Description
技术领域
本发明属于医药保健品或食品领域，具体涉及一种能提高乙醛脱氢酶活性，抑制酒精引起的谷丙转氨酶、谷草转氨酶异常升高，具有降血糖，降血脂，改善葡萄糖耐量，降低胰岛素抵抗的作用，可用于制备解酒保肝型、降血糖型、降血脂型、降低胰岛素抵抗型保健食品。
背景技术
中国是酒生产消费大国，每年消费酒类饮料达余万吨，嗜酒或酒精依赖人群亿左右，急慢性酒精中毒率日益增高。
酒精中毒主要是由酒中的主要成分乙醇及其代谢絮乱引起的。肝脏是乙醇代谢的主要场所。乙醇进入肝脏后，首先由乙醇脱氢酶代谢生成乙醛，继而由乙醛脱氢酶代谢成为乙酸，最后分解为二氧化碳和水。在乙醛的代谢过程中，乙醛脱氢酶起着很重要的作用，但在人体中具有氧化作用的只有ALDH1和ALDH2两种同工酶，其中ALDH2是ALDH中生理活性最强的一种同工酶。据资料显示，50％中国人缺乏ALDH2，饮酒后极易造成乙醛浓度增高及蓄积，使肝细胞膜抗原发生改变、肝细胞代谢紊乱，产生自由基和脂质过氧化物等。体内不能产生正常的乙醛脱氢酶是引起中国人急性酒精中毒和酒精性肝病的主要原因之一。
目前，市场上的解酒药按功效主要可以分为三类。
第一类是酒精吸收抑制剂，以乙醇脱氢酶为主要成分，将酒精在胃肠道内代谢掉。如中国专利申请CN104984156A公开了中药解酒制剂，由山楂、荷叶、桑叶、蒲公英、淡竹叶、浮萍、橘叶构成，可以有效的加快酒精代谢，能明显减低大量饮酒后血中的酒精浓度，达到解酒醒酒的目的，并还能够养护人们的肾脏、肝脏等脏器，大大减少酒精对人体的伤害。但是这类解酒药的特点是在酒前服用以减少进入血液内的酒精量，酒后服用则不能清除乙醇及其代谢产物乙醛。
第二类为保肝类药物，如中国专利申请公开号为CN106806844A的专利文件公开了一种解酒药，白术10份、陈皮15份、绿茶6份，生姜6份、金银花8份和西洋参9份共六种中药组成。采用纯天然原料，安全可靠，无毒副作用，在解酒的同时，保肝护肾，对身体健康有益。但是其主要是针对肝脏系统有保护作用，而对其他系统，如心血管系统，没有明显的保护作用。
第三类是兴奋剂型，如中国专利申请公开号为CN106924687A的专利文件公开了解酒口服中药本发明的一种解酒口服中药，能够促进体内酒精代谢，使酒精代谢产生的乙醛较快的被进一步代谢成乙酸，从而减轻头痛、头晕、烦躁、心悸等醉酒症状；还能减轻酒精对中枢神经系统产生的抑制作用，防止循环系统、呼吸系统、消化系统的功能紊乱；原料平价易得，无毒副作用，适合大多数嗜酒人群。该药进入机体产生类皮质激素应激效应，中和酒精对中枢神经的抑制作用，达到醒酒的目的，但这类解酒药仅治标不治本，长期使用还会对人体中枢神经造成伤害。
此外，这三种解酒药都没有治疗酒精过敏的功效。
同时，我国糖尿病已成为非传染性慢性疾病中第3位主要疾病(心血管疾病、肿瘤、糖尿病)，是严重威胁我国人民健康的常见病多发病，给患者带来了巨大的经济及心理负担，严重影响了患者的生活质量，同时也给国家经济带来沉重负担，严重影响社会经济的发展。其发病增长之速，并发症之多，涉及人群之广，消耗卫生资源之大，造成残疾、死亡之多已达触目惊心的地步。因此，预防和控制糖尿病的发展是我国乃至全世界急需解决的重大卫生问题。
糖尿病在中国传统医学里被称为消渴症，临床表征主要为多饮、多尿、多食及消瘦、疲乏、尿甜，病变部位在胰、胃和肾。现代学者多认为消渴症的基本机理为阴津亏耗、燥热偏盛。并认为，消渴症日久，病情失控，则阴损及阳、热灼亏血淤，而致气阴两伤，阴阳俱虚，络脉瘀阻，经脉失养，气血逆乱，脏腑器官受损而出现痈、眩晕、胸痹、耳聋、目盲、肢体麻疼、下肢坏疽、肾衰水肿、中风昏迷等兼症。
糖尿病病程缓慢，目前尚无治愈糖尿病的特效药物，尽量毒副作用小的天然植物控制血糖水平是治疗糖尿病的关键。
如中国专利申请CN102935186B公开了一种预防糖尿病的保健茶，由蒲公英15-25克，天冬10-20克，麦冬10-20克，玉米须5-15克，天花粉15-25克，败酱草10-20克和荆芥3-6克共7种药材组成。
又如中国专利申请CN103157013B公开了一种治疗糖尿病的药茶，该药茶由马兰5～10，车前5～10，建兰15～20，盘龙参10～15，笔仔草20～25，瓜蒌10～15，番石榴干20～25共7种种中药组成。
上述公开的保健茶均有较好治疗糖尿病的疗效，但均存在如下缺点：一是上述保健茶组成成分复杂，质量控制困难，制备程序冗长，不利于产品质量及疗效的稳定性；二是上述保健茶均没有涉及对药效的深层次的科学诠释。
再如中国专利申请CN104910240A公开了从光叶子花中经醇提取获得了新型植物来源的治疗糖尿病的药物，即三萜皂苷化合物1-3。但其提取步骤繁杂、水溶性差不利于以保健茶的形式的使用。
因此，有必要提供一种疗效确切，组分简单，成本低廉，解酒保肝与降糖降脂效果显著的保健茶。同时，研制一种符合中国人体质特点的、作用全面的、副作用少的解酒护肝降糖降脂药也具有重要的社会意义和经济价值。
发明内容
1.要解决的问题
本发明旨在提供光叶子花提取物的应用，解决现有光叶子花应用开发不全面，现有制备程序冗长，不利于产品质量及疗效的稳定性，以及均没有涉及对药效的深层次的科学诠释的问题。本发明采用高温水煎和超低温冷冻干燥技术制备得到光叶子花提取物，其能够更全面、更好地利用药材中各种水溶性功效成分，使其更易被人体利用、吸收，充分发挥其保健功效，且其成分简单，制造工艺简便，卫生指标易于控制，便于广泛地推广和应用。
2.技术方案
为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：
光叶子花提取物在制备具有保肝作用和/或解酒作用的组合物中的应用，所述的光叶子花提取物是从光叶子花的花和/或苞片和/或枝和/或叶中提取得到。
进一步地，所述提取物的提取溶剂可以是水、醇、含水醇，或任何其他已知用于生产光叶子花提取物或植物提取物的溶剂。
光叶子花提取物在制备具有提高乙醇脱氢酶和/或乙醛脱氢酶活性作用的组合物中的应用。
光叶子花提取物在制备具有抑制谷丙转氨酶和/或谷草转氨酶升高作用的组合物中的应用。
光叶子花提取物在制备具有降糖降脂作用的组合物中的应用，所述的光叶子花提取物是从光叶子花的花和/或苞片和/或枝和/或叶中提取得到。
光叶子花的花和/或苞片和/或枝和/或叶在制备具有解酒保肝和/或降糖降脂作用的组合物中的应用。
进一步地，所述的组合物包括药物组合物，食品组合物，保健品组合物、茶制品组合物或含有光叶子花提取物的产品。还包括蔗糖，加入蔗糖，使制剂中蔗糖含量为10％～20％(g/mL)。
进一步地，还包括芳香剂和防腐剂，芳香剂的质量含量为0.2％～1％，防腐剂的质量含量为0.01％～0.5％，其中芳香剂包括杏仁香精、草莓香精、甜橙香精、荔枝香精、苹果香精、牛奶香精、芒果香精、柠檬香精、巧克力香精，桔子香精中的一种或几种，防腐剂包括山梨酸、山梨酸钾、脱氢乙酸钠、乳酸钠、羟苯甲酸乙酯、柠檬酸钠中的一种或几种。
进一步地，还包括甜味剂，质量含量为0.2％～25％，甜味剂为常用的可食用添加剂，包括高倍甜味剂和低倍甜味剂，高倍甜味剂为阿斯巴甜、甜菊糖苷、安赛蜜、甜蜜素、三氯蔗糖中的一种或几种；低倍甜味剂为山梨醇、木糖醇、果糖、蜂蜜、麦芽糖、淀粉糖、乳糖、蔗糖中的一种或几种。
进一步地，所述的组合物的组成包括光叶子花提取物和可接受的载体，其中光叶子花提取物为活性成分，其在组合物中占重量百分比为1～99％。
进一步地，所述的光叶子花提取物是将光叶子花的花和/或苞片和/或枝和/或叶经水煮沸提取，然后冻干成粉末得到。
进一步地，光叶子花枝叶提取物的提取方法，包括以下步骤：将光叶子花的花和/或苞片和/或枝和/或叶进行水煮沸和/或甲醇溶液浸泡，然后过滤，冻干，粉碎成粒径在1mm及以下的粉末。
进一步地，所述的光叶子花枝叶提取物的提取方法，在水煮沸提取之前先对花和/或苞片和/或枝和/或叶进行萎凋处理。
一种具有解酒作用和/或保肝作用的组合物，其有效成分为光叶子花提取物。
进一步地，光叶子花提取物的应用形式为与辅料制成片剂、滴丸、胶囊或注射剂。
水提物或以药粉入药，均是中药传统使用方式，水提后，由于水的溶解范围广，能够将大部分有效成分溶出，使药物更容易被人体吸收，起效更快，例如汤剂等给药形式；以粉末入药，粉末的表面积较大，也有利于药材中有效成分在体内的吸收。药材未经提取，有效成分仍需在体内溶出再吸收，其起效相对水提物较慢，但也同时削弱了药材中有害成分对人体造成的毒副反应，适合于长期服用，如将原粉制备成丸剂等给药形式。目前在制药过程中，乙醇作为溶剂对药物进行提取，也是最为常见的提取方式之一，乙醇为中等极性溶剂，溶解性能界于极性与非极性溶剂之间，可以溶解水溶性的某些成分，也能溶解非极性溶剂溶解的一些成分，通常用乙醇提取代替水煎，从而避免大量无效成分的溶出，提高有效成分的浓度和提取效率，不过乙醇的价格较水贵，在现代制药工业大生产中，为了节省生产成本，通常还是以水煎为主。为了适应各种生产和使用时的需求，可以任选水提、原粉、醇提或它们的组合方法来制备具体的剂型。
本发明可以采用本领域常规的制剂技术手段或制药方法，将本发明化合物制备成适当的药剂形式，包含：片剂，注射剂，酊剂，栓剂，胶囊剂，膏剂(软膏剂、乳膏剂)，丸剂，植入剂，糖浆剂，雾剂(气雾剂、粉雾剂、喷雾剂)，膜剂，颗粒剂，口服溶液剂(口服混悬剂、口服乳剂)，散剂，洗剂(冲洗剂、灌肠剂)，搽剂(涂剂、涂膜剂)，凝胶剂，贴剂等；优选为片剂，胶囊剂，眼用制剂。其中，所述片剂选自含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片、肠溶片等；所述注射剂选自针剂、输液、冻干粉针、乳液、植入体、微球制剂、微丸制剂等；所述胶囊剂选自硬胶囊、软胶囊、缓释胶囊、控释胶囊和肠溶胶囊等；所述丸剂选自滴丸、糖丸等；所述颗粒剂选自混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒、控释颗粒等。
本发明所述可接受的载体，在药学上，是指除活性成分以外包含在剂型中的物质，包括但不仅限于填充剂(稀释剂)、润滑剂(助流剂或抗粘着剂)、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物(如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基纤维素等)、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐(如硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙等)、山梨醇或甘氨酸等；润滑剂包含微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇等；崩解剂包含淀粉及其衍生物(如羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉等)、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素等；湿润剂包含十二烷基硫酸钠、水或醇等；抗氧剂包含亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；抑菌剂包含0.5％苯酚、0.3％甲酚、0.5％三氯叔丁醇等；调节剂包含盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)枸橼酸钠及缓冲剂(包括磷酸二氧钠和磷酸氢二钠)等；乳化剂包含聚山梨酯-80、脂肪酸山梨坦、普流罗尼克F-68，卵磷酯、豆磷脂等；增溶剂包含吐温-80、胆汁、甘油等。
所述可接受的载体成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述化合物或衍生物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性可接受的载体成分与本发明化合物配合使用，仍然应属于本发明保护的范围。
本发明所述光叶子花的枝和叶可选自开花前或开花后的枝和叶。
本发明所述提取物还可以作为添加剂，添加到各种饮料和食品中，制成具有降糖降脂、解酒保肝作用的饮品、食品或者保健品。
3.有益效果
相比于现有技术，本发明的有益效果为：
(1)本发明提取物由光叶子花的花、苞片、枝和或叶提取成分制成，成分简单，解酒保肝降糖降脂效果显著，且其组成成分简单，质量易控制，制备工艺简单，保证了产品质量的稳定性，同时对人体无毒害作用，无抗药性，可长期服用；
(2)本发明采用高温水煎法和超低温冷冻干燥技术制备得到光叶子花提取物，能够更全面、更好地利用药材中各种水溶性功效成分，使其更容易被人体利用、吸收，充分发挥其保健功效；
(3)本发明制备光叶子花提取物的步骤中采用了萎凋这一方法，目的是为了适当地蒸发水分，使叶质柔软，便于揉捻，伴随着水分的散发叶细胞浓缩、酶活性加强，促进内含物质的变化，为形成金单丛品质特征创造条件；
(4)本发明制备的光叶子花提取物也可以治疗酒精过敏，酒精过敏是体内缺少乙醛转化酶导致的一种外在皮肤过敏症状反应，本发明可以提高乙醛脱氢酶的活性，帮助过敏体质体内酒精转化的乙醛分解为乙酸，排到体外，避免乙醛中毒及过敏症状；
(5)本发明开发光叶子花的花和/或新鲜枝叶，成本低，具有很好的社会价值和市场价值，具有良好的开发应用前景；
(6)依据《辅助降血糖功能评价方法试验项目、试验原则及结果判定》和《辅助降血脂功能评价方法试验项目、试验原则及结果判定》进行设计，符合CFDA保健食品评价申报要求，参考解酒保肝研究文献对其进行合理评价。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以下实施例所做的任何简单修饰或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。
实施例1
本发明光叶子花提取物的制备方法
一、光叶子花的枝和叶的提取
1.水提冻干物制备：
原叶采摘，挑选：选取色泽嫩绿、无病斑、无虫害的叶芽或嫩叶，洗净，除去叶表灰尘及微生物，沥干水分，在通风干燥处均匀摊开；
萎凋：自然萎凋3h，中间可上下翻动1次，至叶片已萎软、失水率为8％即可；
煮沸：将萎凋的光叶子花叶片与纯净水按照物料比1:20煮沸2h，收集提取液，再次以物料比1:15煮沸2h，收集提取液；过滤：将收集后的提取液用12层无菌纱布进行过滤，收集滤液；
抽滤：将过滤后收集得到的滤液用抽滤装置进行抽滤，收集滤液；
旋蒸：将收集得到的提取液转移至旋转蒸发瓶中，在65℃条件下150rpm蒸发浓缩至浸膏状；
冻干：将抽滤后收集得到的滤液分装并放入-80℃冰箱预冻4h，转入冷冻干燥机内冻干，直到水分完全消失，取出冻干品；
粉碎：将冻干品进行超微粉碎，制成颗粒直径在1mm以下的超微粉末。
2.水提浸膏物制备：
原叶采摘，挑选：选取色泽嫩绿、无病斑、无虫害的叶芽或嫩叶，洗净，除去叶表灰尘及微生物，沥干水分，在通风干燥处均匀摊开；
萎凋：自然萎凋3h，中间可上下翻动1次，至叶片已萎软、失水率为8％即可；
煮沸：将萎凋的光叶子花叶片与纯净水按照物料比1:20煮沸2h，收集提取液，再次以物料比1:15煮沸2h，收集提取液；过滤：将收集后的提取液用12层无菌纱布进行过滤，收集滤液；
抽滤：将过滤后收集得到的滤液用抽滤装置进行抽滤，收集滤液；
旋蒸：将收集得到的提取液转移至旋转蒸发瓶中，在65℃条件下150rpm蒸发浓缩至浸膏状。
3.常温提取物制备：
原叶采摘，选取色泽嫩绿、无病斑、无虫害的叶芽或嫩叶，洗净，除去叶表灰尘及微生物，沥干水分，在通风干燥处均匀摊开；自然萎凋3h，中间可上下翻动1次，至叶片已萎软、失水率为8％即可；将萎凋的光叶子花叶片与纯净水按照物料比1:20室温浸泡48h，收集提取液，再次以物料比1:15室温浸泡24h，收集提取液；纱布过滤；抽滤；室温减压旋蒸至浸膏状，冻干后制成浸膏粉。
4.茶提物制备：
原叶采摘，选取色泽嫩绿、无病斑、无虫害的叶芽或嫩叶，洗净，除去叶表灰尘及微生物，沥干水分，在通风干燥处均匀摊开；自然萎凋3h，中间可上下翻动1次，至叶片已萎软、失水率为8％即可；将萎凋的光叶子花叶片烘焙，杀青，用纯净开水按照物料比1:20室温浸泡30min，收集提取液，再次以物料比1:15开水冲泡30min，收集提取液；纱布过滤；抽滤；室温减压旋蒸至浸膏状。
5.醇提冻干物制备：
原叶采摘，选取色泽嫩绿、无病斑、无虫害的叶芽或嫩叶，洗净，除去叶表灰尘及微生物，沥干水分，在通风干燥处均匀摊开；自然萎凋3h，中间可上下翻动1次，至叶片已萎软、失水率为8％即可；将萎凋的光叶子花叶片与95％甲醇按照物料比1:20室温浸泡48h，收集提取液，再次以物料比1:15室温浸泡24h，收集提取液；纱布过滤；抽滤；室温减压旋蒸至浸膏状，冻干后制成浸膏粉。
二、光叶子花苞片和花提取
1.水提浸膏物制备：
选取色泽光鲜、无病斑、无虫害的苞片或花，洗净，除去外表灰尘及微生物，沥干水分，在通风干燥处均匀摊开；自然萎凋3h，中间可上下翻动1次，至叶片已萎软、失水率为8％即可；将萎凋的苞片和花与纯净水按照物料比1:20煮沸2h，收集提取液，再次以物料比1:15煮沸2h，收集提取液；过滤：将收集后的提取液用12层无菌纱布进行过滤，收集滤液；将过滤后收集得到的滤液用抽滤装置进行抽滤，收集滤液；将收集得到的提取液转移至旋转蒸发瓶中，在65℃条件下150rpm蒸发浓缩至浸膏状。
2.水提冻干物制备：
选取色泽光鲜、无病斑、无虫害的苞片或花，洗净，除去外表灰尘及微生物，沥干水分，在通风干燥处均匀摊开；自然萎凋3h，中间可上下翻动1次，至叶片已萎软、失水率为8％即可；将萎凋的苞片和花与纯净水按照物料比1:20煮沸2h，收集提取液，再次以物料比1:15煮沸2h，收集提取液；过滤：将收集后的提取液用12层无菌纱布进行过滤，收集滤液；将过滤后收集得到的滤液用抽滤装置进行抽滤，收集滤液；将收集得到的提取液转移至旋转蒸发瓶中，在65℃条件下150rpm蒸发浓缩至浸膏状，冻干制成浸膏粉。
3.醇提冻干物制备：
选取色泽光鲜、无病斑、无虫害的苞片或花，洗净，除去外表灰尘及微生物，沥干水分，在通风干燥处均匀摊开；自然萎凋3h，中间可上下翻动1次，至叶片已萎软、失水率为8％即可；将萎凋的苞片和花与95％甲醇按照物料比1:20浸泡48h，收集提取液，再次以物料比1:15浸泡24h，收集提取液；过滤：将收集后的提取液用12层无菌纱布进行过滤，收集滤液；将过滤后收集得到的滤液用抽滤装置进行抽滤，收集滤液；将收集得到的提取液转移至旋转蒸发瓶中，在40℃条件下150rpm蒸发浓缩至浸膏状，冻干制成浸膏粉。
实施例2
本发明光叶子花提取物的解酒保肝作用研究
一、材料
1.实验动物
SPF级雄性昆明小鼠，体质量18～20g，由扬州大学比较医学中心提供，合格证号：SCXK(苏)2017-0007。
2.药物与试剂
光叶子花枝叶水提冻干物：(详细制备见实施例1)。实验时用生理盐水配制成相应浓度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花枝叶水提浸膏物：(详细制备见实施例1)。实验时用生理盐水配制成相应浓度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花枝叶常温提取物：(详细制备见实施例1)。实验时用生理盐水配制成相应浓度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于的70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花枝叶茶提取物：(详细制备见实施例1)。实验时用生理盐水配制成相应浓度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于的70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花枝叶醇提取物：(详细制备见实施例1)。实验时用生理盐水配制成相应浓度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于的70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花苞片和花水提浸膏物：(详细制备见实施例1)。实验时用生理盐水配制成相应浓度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于的70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花苞片和花水提冻干物：(详细制备见实施例1)。实验时用生理盐水配制成相应浓度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于的70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花苞片和花醇提冻干物：(详细制备见实施例1)。实验时用生理盐水配制成相应浓度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于的70kg成年人5.71g生药量/天。
阳性对照(Pepp清醒咀嚼片)：购自山德士公司。取清醒咀嚼片，碾碎，用生理盐水配制成相应浓度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠给药剂量为8320mg/kg，按体表面积换算，相当于成年人64g/天，相当于临床等效剂量的8倍。
56度牛栏山大二锅头(牛栏山酒厂)；无水乙醇(上海泰坦科技股份有限公司)；乙醛(成都科龙化工试剂厂)；丁酮(天津市百世化工有限公司)；乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶试剂盒(南京建成生物工程有限公司)；谷丙转氨酶试剂盒和谷草转氨酶试剂盒(南京建成生物工程有限公司)；生理盐水(安徽双鹤药业有限责任公司)。
3.主要仪器
气相色谱仪：Varian CP-3800；工作站：CTC Analytic；色谱柱：CP-Wax52CB、Cpsil5CB-2毛细管柱；检测器：FID检测器；北京UV-1普析通用紫外分光光度计。
二、方法
取SPF级正常KM小鼠随机分为11组，即正常对照组、模型对照组、阳性对照组以及光叶子花枝叶水提冻干物组、水提浸膏物组、常温提取组、茶提取物组、醇提冻干物组和光叶子花苞片和花水提冻干物组、水提浸膏物组、醇提冻干物组，每组10只。各组动物灌胃给药，正常对照组、模型对照组给等体积蒸馏水，1次/d。每次给药1h后，除正常对照组外的其余各组小鼠按0.12mL/10g灌胃给予56度牛栏山二锅头造成急性酒精性肝损伤模，连续给药和造模6d。最后一次造模1.5h后，各组摘眼球取血0.5～1mL，3000rpm离心10min分离血清，采用气相色谱仪测定血清中乙醇和乙醛的浓度，按照试剂盒操作方法测定血清AST和ALT活性。摘眼球取血后，立即颈椎脱臼处死小鼠，取新鲜肝脏0.5g加入预冷的生理盐水溶液制成10％肝组织匀浆，3000rpm离心10min，取上清测定ADH和ALDH活性。
统计学处理方法采用统计软件，数据以“均数±标准差”表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较用LSD检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
三、结果
1.本发明光叶子花提取物对小鼠血清中乙醇和乙醛浓度的影响
由表1可见，与正常对照组比较，模型对照组的小鼠血清中乙醇和乙醛浓度显著升高，差异具有统计学意义(p＜0.01)，说明本造模方法能成功引起小鼠血清中乙醇和乙醛浓度显著升高。
与模型对照组比较，本发明光叶子花枝叶水提冻干组、水提浸膏组、茶提取组的小鼠血清中乙醇和乙醛浓度显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物能显著抑制乙醇的吸收或促进乙醇的代谢、减少乙醛的蓄积。与模型对照组比较，本发明光叶子花枝叶常温提取组和阳性对照组的小鼠血清中乙醇和乙醛浓度显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)，说明本发明光叶子花枝叶常温提取物和阳性对照能显著抑制乙醇的吸收或促进乙醇的代谢、减少乙醛的蓄积。与模型对照组比较，本发明光叶子花苞片和花水提冻干组、水提浸膏组的小鼠血清中乙醇和乙醛浓度显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明光叶子花苞片和花水提冻干物、水提浸膏物能显著抑制乙醇的吸收或促进乙醇的代谢、减少乙醛的蓄积，而光叶子花枝叶醇提冻干组与苞片和花醇提冻干物组的小鼠血清中乙醇和乙醛浓度没有显著降低，差异不具有统计学意义(P＞0.05)，说明光叶子花枝叶醇提冻干物与苞片和花醇提冻干物不能显著抑制乙醇的吸收或促进乙醇的代谢、减少乙醛的蓄积。
表1小鼠血清中乙醇、乙醛含量
注：与正常对照组相比，**p＜0.01；与模型对照组相比，##p<0.01；与本发明光叶子花枝叶水提冻干组相比，※※p<0.01。
与本发明光叶子花枝叶水提冻干组比较，光叶子花枝叶醇提冻干组与苞片和花醇提冻干物组的小鼠血清中乙醇和乙醛浓度显著较高，差异具有统计学意义(P＜0.05)或(P＜0.01)，阳性对照组的小鼠血清中乙醇和乙醛浓度与本发明提取物组差异不显著，并且本发明光叶子花枝叶水提冻干物在抑制乙醇吸收或促进乙醇代谢、减少乙醛的蓄积方面，要优于光叶子花苞片和花水提冻干物、水提浸膏物，与阳性对照、光叶子花水提浸膏、茶提取物、常温提取物相当。
2.本发明光叶子花提取物对小鼠血清AST(谷草转氨酶)和ALT(谷丙转氨酶)活性的影响
由表2可见，与正常对照组比较，模型对照组的小鼠血清AST和ALT活性显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.01)，说明本造模方法能成功造成小鼠肝功能损害。
与模型对照组比较，本发明光叶子花枝叶水提冻干组、水提浸膏组、茶提取组的小鼠血清中AST和ALT活性显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物能显著抑制酒精引起的肝功能损害。与模型对照组比较，本发明光叶子花枝叶常温提取组和阳性对照组的小鼠血清中AST和ALT活性显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)，说明本发明光叶子花枝叶常温提取物和阳性对照能显著抑制酒精引起的肝功能损害。与模型对照组比较，本发明光叶子花苞片和花水提冻干组、水提浸膏组的小鼠血清中AST和ALT活性显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明光叶子花苞片和花水提冻干物、水提浸膏物能显著抑制酒精引起的肝功能损害，而光叶子花枝叶醇提冻干组与苞片和花醇提冻干物组的小鼠血清中AST和ALT活性没有显著降低，差异不具有统计学意义(P＞0.05)，说明光叶子花枝叶醇提冻干物与苞片和花醇提冻干物不能显著抑制酒精引起的肝功能损害。
表2小鼠血清中AST和ALT活性
注：与正常对照组相比，**p＜0.01；与模型对照组相比，##p<0.01；与本发明光叶子花枝叶水提冻干组相比※p＜0.05，※※p<0.01。
与本发明光叶子花枝叶水提冻干组比较，光叶子花枝叶醇提冻干组与光叶子花苞片和花醇提冻干组、阳性对照组的小鼠血清中AST和ALT活性显著较高，差异具有统计学意义(P＜0.05)或(P＜0.01)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物在抑制酒精引起的肝功能损害方面，要优于光叶子花苞片和花醇提冻干物与光叶子花枝叶醇提冻干物、阳性对照。
3.本发明光叶子花提取物对小鼠肝脏中ADH(乙醇脱氢酶)和ALDH(乙醛脱氢酶)活性的影响
由表3可见，与正常对照组比较，模型对照组的小鼠肝脏中ADH和ALDH活性显著下降，差异具有统计学意义，说明本造模方法能成功造成小鼠肝脏对乙醇和乙醛的代谢能力下降。
表3小鼠肝组织中ADH和ALDH活性
注：与正常对照组相比，**p＜0.01；与模型对照组相比，#p<0.01，##p<0.01；与本发明光叶子花水提冻干组相比，※※p<0.01。
与模型对照组比较，本发明光叶子花枝叶水提冻干组、水提浸膏组、茶提取组的小鼠肝脏中ADH和ALDH活性显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.01)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物能显著提高肝脏中ADH和ALDH活性，显著促进肝脏对乙醇和乙醛的代谢。与模型对照组比较，本发明光叶子花苞片和花水提冻干组、水提浸膏组与光叶子花枝叶常温提取组的小鼠肝脏中ADH和ALDH活性显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明本发明光叶子花苞片和花水提冻干物、水提浸膏物能与光叶子花枝叶常温提取物显著提高肝脏中ADH和ALDH活性，显著促进肝脏对乙醇和乙醛的代谢。而光叶子花枝叶醇提冻干组、阳性对照组和光叶子花苞片和花醇提冻干组小鼠肝脏中ADH和ALDH活性与模型对照组差异不显著，不具有统计学意义(P＞0.05)，说明光叶子花枝叶醇提冻干物、阳性对照和光叶子花苞片和花醇提冻干物不能显著提高肝脏中ADH和ALDH活性，不能显著促进肝脏对乙醇和乙醛的代谢。
与本发明光叶子花枝叶水提冻干组比较，光叶子花枝叶常温提取组、醇提冻干组、阳性对照组和光叶子花苞片和花醇提冻干组的小鼠肝脏中和活性明显较低，差异具有统计学意义(P＜0.01)或(P＜0.05)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物在提高肝脏中ADH和ALDH活性，促进肝脏对乙醇和乙醛的代谢方面要优于光叶子花枝叶常温提取物、醇提冻干物、阳性对照和光叶子花苞片和花醇提冻干物。
四、总结
在本实施例中，本发明光叶子花枝叶、苞片和花水提取物能显著抑制乙醇的吸收或促进乙醇的代谢、减少乙醛的蓄积，且本发明光叶子花枝叶、苞片和花水提取物在抑制乙醇吸收或促进乙醇代谢、减少乙醛的蓄积方面，要优于光叶子花枝叶、苞片和花的醇提取物、菊花提取物和常温提取物组，与阳性对照相当。本发明光叶子花枝叶、苞片和花水提取物能显著抑制酒精引起的肝功能损害，且本发明提取物在抑制酒精引起的肝功能损害方面，要优于光叶子花枝叶、苞片和花醇提取物和阳性对照。本发明光叶子花枝叶、苞片和花水提取物能显著提高肝脏ADH和ALDH活性，促进肝脏对乙醇和乙醛的代谢，且本发明光叶子花枝叶、苞片和花水提取物在提高肝脏中ADH和ALDH活性、促进肝脏对乙醇和乙醛的代谢方面，要优于光叶子花枝叶、苞片和花醇提取物和阳性对照。
实施例3
本发明提取物降糖降脂活性的研究
一、试验方法：
动物饲养
取8只雄性C57BL/6小鼠作为正常对照组，取若干7-8周龄dbdb雄性小鼠适应性饲养一周，禁食12h，剪尾取血，血糖仪测空腹血糖，选择空腹血糖≥11.1mmol/L的dbdb小鼠为II型糖尿病小鼠。
二、动物分组给药
将已成模dbdb小鼠分成10组：模型对照组，阳性对照组(盐酸吡格列酮片，江苏德源药业股份有限公司)，本发明光叶子花枝叶水提冻干组(150mg/kg)，本发明光叶子花枝叶水提浸膏组(150mg/kg)，本发明光叶子花枝叶常温提取组(150mg/kg)，本发明光叶子花枝叶茶提取组(150mg/kg)，本发明光叶子花枝叶醇提冻干组(150mg/kg)，本发明光叶子花苞片和花水提冻干组(150mg/kg)，本发明光叶子花苞片和花水提浸膏组(150mg/kg)，本发明光叶子花苞片和花醇提冻干组(150mg/kg)，每组8只。各组动物灌胃给药，每天一次，喂食普通饲料。连续给药7周。正常对照组给与相同生理盐水，正常喂养。每天检测各组小鼠体重，各组在第七周初测试小鼠口服糖耐量，各组第七周末眼眶采血，血糖仪测定血糖，并将全血离心取血清，小鼠糖化血清白蛋白ELISA试剂盒测定各组小鼠的糖化血清白蛋白(GA)值，小鼠胰岛素ELISA试剂盒测定各组小鼠的胰岛素值，将血清送至江苏省中西医结合医院测量血脂相关指标。采血后，将各组小鼠颈部脱臼处死，解剖取肝脏、肾脏、脾脏、胰腺，称重。
三、统计方法
各项指标以均数±标准差(x±s)表示，两组均数间差异的显著性检验采用t检验法。
自发性II型糖尿病dbdb小鼠动物模型，分别灌胃模型小鼠阳性药(盐酸吡格列酮片)、光叶子花常温提取物和不同剂量光叶子花提取物，统计正常小鼠和各给药组小鼠空腹血糖变化、脂代谢指标、胰岛素和糖化血清白蛋白，结果如表4～表7所示，正常对照组比较，#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001；与模型对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001。
四、实验结果
1.本发明水提取物对II型糖尿病小鼠血糖水平的影响
如表4在空腹血糖测量中，与正常对照组比较，模型对照组的小鼠血糖显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.001)，说明dbdb小鼠II型糖尿病高血糖模型成功。与模型对照组相比，给药49天阳性对照组空腹血糖显著下降，差异具有统计学意义(p＜0.01)，给药49天本发明光叶子花枝叶水提冻干组、水提浸膏组、茶提取组、醇提冻干组空腹血糖显著下降，差异具有统计学意义(p＜0.05)，光叶子花枝叶常温提取组和光叶子花苞片和花水提冻干组、水提浸膏组、醇提冻干组稍有下降但差异不显著，没有统计学意义(p＞0.05)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物、醇提冻干物以及阳性对照均能显著降低II型糖尿病小鼠血糖水平，而光叶子花枝叶常温提取物和光叶子花苞片和花水提冻干物、水提浸膏物、醇提冻干物不能显著降低II型糖尿病小鼠血糖水平。
2.本发明水提取物对II型糖尿病小鼠糖耐量的影响
如表4在糖耐量测量中，与正常对照组比较，模型对照组的小鼠糖耐量曲线下面积(AUC)显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.001)，说明dbdb小鼠II型糖尿病高血糖模型成功。与模型对照组相比，阳性对照组AUC显著降低，差异具有统计学意义(p＜0.001)，本发明光叶子花枝叶水提冻干组、水提浸膏组、茶提取组、醇提冻干组AUC显著降低，差异具有统计学意义(p＜0.01)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、醇提冻干物与阳性对照均能显著缓解II型糖尿病小鼠葡萄糖耐受，进而改善II型糖尿病小鼠糖尿病症状；光叶子花枝叶常温提取组AUC显著降低，差异具有统计学意义(p＜0.05)，说明光叶子花枝叶常温提取物亦能显著缓解II型糖尿病小鼠葡萄糖耐受，进而改善II型糖尿病小鼠糖尿病症状；光叶子花苞片和花水提冻干组、水提浸膏组、醇提冻干组AUC没有显著降低，差异不具有统计学意义(p＞0.05)，说明光叶子花苞片和花水提冻干物、水提浸膏物、醇提冻干物不能显著缓解II型糖尿病小鼠葡萄糖耐受；与本发明光叶子花枝叶水提冻干组相比，光叶子花枝叶常温提取组AUC显著升高，差异具有统计意义(p＜0.05)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物缓解糖尿病小鼠血清中葡萄糖耐受的作用要优于光叶子花枝叶常温提取物。
表4给药第七周时II型糖尿病小鼠血糖值及糖耐量
与模型对照组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001,与正常对照组相比，#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001
3.本发明水提取物对II型糖尿病小鼠高血脂的影响
如表5在血清甘油三酯(TG)、血清总胆固醇(TCHO)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)测量中，与正常对照组相比，模型对照组小鼠血清中TG、TCHO和LDL-C均显著升高，差异均具有统计学意义(p＜0.001)，说明小鼠II型糖尿病模型高血脂模型成功。与模型对照组相比，阳性对照组小鼠血清中TG与TCHO显著降低，差异具有统计学意义(p＜0.001)，说明阳性对照能够显著改善II型糖尿病小鼠的高血脂病症；本发明光叶子花枝叶水提冻干组、水提浸膏组、茶提取组、醇提冻干组小鼠血清中TG、TCHO与LDL-C均显著降低，差异具有统计学意义(p＜0.001)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物、醇提冻干物能够显著改善II型糖尿病小鼠高血脂症状；本发明光叶子花苞片和花水提冻干组、水提浸膏组、醇提冻干组小鼠血清中TG、TCHO与LDL-C均未显著降低，差异不具有统计学意义(p＞0.05)，说明本发明光叶子花苞片和花水提冻干物、水提浸膏物、醇提冻干物不能够显著改善II型糖尿病小鼠高血脂症状；而光叶子花枝叶常温提取组小鼠TG和LDL-C显著降低，差异具有统计学意义(p＜0.01或p＜0.05)，TCHO没有显著性差异，说明光叶子花枝叶常温提取物也具有明显的降血脂功效。但与本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物相比，常温提取物只有TG与LDL-C有显著性降低，因此本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物在降血脂方面要优于光叶子花枝叶常温提取物。
表5给药第七周时II型糖尿病小鼠血清中TG、TCHO、HDL和LDL的含量
与模型对照组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001,与正常对照组相比，#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001
4.本发明提取物对II型糖尿病小鼠血清中糖化血清白蛋白的影响
如表6在糖化血清白蛋白测量中，与正常对照组相比，模型对照组小鼠血清中GA含量显著升高，差异具有统计学意义(p＜0.01)，说明II型糖尿病小鼠模型成功。与模型对照组相比，阳性对照组小鼠血清中GA显著降低，差异具有统计学意义(p＜0.01)，本发明光叶子花枝叶水提冻干组、水提浸膏组、茶提取组、醇提冻干组小鼠血清中GA显著降低，差异具有统计学意义(p＜0.01)，常温提取组组GA下降，差异具有统计学意义(p＜0.05)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物、醇提冻干物和常温提取物均能显著降低II型糖尿病小鼠的糖化血清白蛋白水平，改善小鼠II型糖尿病症状；而光叶子花苞片和花水提冻干组、水提浸膏组、醇提冻干组小鼠血清中GA没有显著降低，差异不具有统计学意义(p＞0.05)，说明光叶子花苞片和花水提冻干物、水提浸膏物、醇提冻干物不具有改善小鼠II型糖尿病症状的作用。
表6给药第七周时II型糖尿病小鼠血清中GA、INS和HOMA-IR的含量
与模型对照组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与正常对照组相比，#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001
5.本发明提取物对II型糖尿病小鼠血清中胰岛素及胰岛素抵抗的影响
如表6在血清胰岛素(INS)及胰岛素指数(HOMA-IR)测量中，与正常对照组相比，模型对照组INS和胰岛素指数显著升高，差异具有统计学意义(p＜0.01或p＜0.001)，说明II型糖尿病小鼠模型成功。与模型对照组相比，阳性对照组INS和HOMA-IR显著下降，差异具有统计学意义(p＜0.05)，说明阳性对照能够显著降低II型糖尿病小鼠血清中胰岛素水平，改善II型糖尿病小鼠胰岛素抵抗。本发明光叶子花枝叶水提冻干组、水提浸膏组、茶提取组、醇提冻干组与常温提取组小鼠血清中INS及HOMA-IR均显著下降，差异具有统计学意义(p＜0.05)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物、醇提冻干物与常温提取物均能显著降低II型糖尿病小鼠血清中胰岛素水平以及改善II型糖尿病小鼠胰岛素抵抗。而光叶子花苞片和花水提冻干组、水提浸膏组、醇提冻干组小鼠血清中INS及HOMA-IR均未显著下降，差异不具有统计学意义(p＞0.05)，说明本发明光叶子花苞片和花水提冻干物、水提浸膏物、醇提冻干物不能显著降低II型糖尿病小鼠血清中胰岛素水平以及改善II型糖尿病小鼠胰岛素抵抗。注：胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)＝(胰岛素浓度*最后一次空腹血糖值)/22.5。
6.本发明提取物对II型糖尿病小鼠肝脏、肾脏、脾脏脏器指数的影响
表7给药第七周时II型糖尿病小鼠体重及肝脏、脾、肾脏指数
与模型对照组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与正常对照组相比，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001
在肝脏、肾脏、脾脏指数测量中(见表7)，与模型组相比，各给药组II型糖尿病小鼠的肝脏、肾脏、脾脏指数没有显著变化，差异不具统计学意义(p＞0.05)，说明本发明中提取物、阳性对照不会对II型糖尿病小鼠的肝脏、肾脏、脾脏产生显著性副作用。
五、总结
本实施例结果显示，本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物均能显著降低II型糖尿病小鼠空腹血糖、血清中糖化血清白蛋白水平，改善II型糖尿病小鼠口服葡萄糖耐受，同时本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物还可以显著降低胰岛素水平，缓解II型糖尿病小鼠的胰岛素抵抗症状，最后本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物还能显著降低II型糖尿病小鼠血清中甘油三酯、总胆固醇及低密度脂蛋白含量，对II型糖尿病小鼠具有显著的降血脂效果。且本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物在降糖降脂方面上的效果优于光叶子花枝叶常温提取物，提示本发明提取物对糖脂代谢具有一定调节作用，降糖降脂效果显著。
实施例4
本发明提取物预防四氯化碳所致肝损伤的研究
一、材料
1.实验动物
SPF级SD大鼠，体质量150～180g，由扬州大学比较医学中心提供，合格证号：SCXK(苏)2017-0010。
2.药物与试剂
光叶子花枝叶水提冻干物：(详细制备见实施例1)。实验时用纯水配制成相应浓度的溶液供大鼠灌胃使用。大鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花枝叶水提浸膏物：(详细制备见实施例1)。实验时用纯水配制成相应浓度的溶液供大鼠灌胃使用。大鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花枝叶常温提取物：(详细制备见实施例1)。实验时用纯水配制成相应浓度的溶液供大鼠灌胃使用。大鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于的70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花枝叶茶提取物：(详细制备见实施例1)。实验时用纯水配制成相应浓度的溶液供大鼠灌胃使用。大鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于的70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花枝叶醇提取物：(详细制备见实施例1)。实验时用纯水配制成相应浓度的溶液供大鼠灌胃使用。大鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于的70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花苞片和花水提浸膏物：(详细制备见实施例1)。实验时用纯水配制成相应浓度的溶液供大鼠灌胃使用。大鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于的70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花苞片和花水提冻干物：(详细制备见实施例1)。实验时用纯水配制成相应浓度的溶液供大鼠灌胃使用。大鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于的70kg成年人5.71g生药量/天。
光叶子花苞片和花醇提冻干物：(详细制备见实施例1)。实验时用纯水配制成相应浓度的溶液供大鼠灌胃使用。大鼠给药剂量为750mg生药量/kg，按体表面积换算，相当于的70kg成年人5.71g生药量/天。
40％CCl4的配制：准确量取40mL的四氯化碳将其溶解在60mL的橄榄油中，配置成浓度为40％的四氯化碳溶液，备用。
二、方法
取SPF级SD大鼠随机分为11组，即正常对照组、模型对照组(CCl4处理组)、阳性对照组(300mg/kg·bw水飞蓟素(Silymarin)处理组)以及光叶子花枝叶水提冻干物组、水提浸膏物组、常温提取组、茶提取物组、醇提冻干物组和光叶子花苞片和花水提冻干物组、水提浸膏物组、醇提冻干物组，每组12只。
SD大鼠适应饲养一周后，按0.1mL/100g体重的量，每周固定时间给SD大鼠腹腔注射二次40％CCl4，连续注射8周；
从腹腔注射CCl4的第一天开始，按每组的设计浓度，各组动物灌胃给药，空白对照组和CCl4处理组灌胃相同体积的纯水，其他各组分别灌胃对应的药物溶液，1次/天，连续处理8周，处死老鼠，收集肝脏。
收集各组SD大鼠的肝脏组织并制作石蜡切片，H&E染色观察肝脏组织的病理损伤情况。将石蜡切片脱蜡并经天狼猩红染液染色，用苏木素浅染细胞核后，显微观察胶原蛋白在肝脏组织中的分布情况。
试剂盒法检测肝脏中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的含量，试剂盒法检测血清中ALT、AST的含量根据实施例2处理的SD大鼠，收集各组SD大鼠的血液，室温自然凝固20min后，1000rpm离心10min，收集上层血清，分别检测血清中ALT和AST的含量。收集各组实验动物的肝脏，研磨制备成匀浆液后，检测肝脏组织MDA、SOD和GSH的含量。
收集各组实验动物的血液，室温自然凝固20min后，1000rpm离心10min，收集上层血清，ELISA法检测各组老鼠血清中TNF-α、TGF-β1和IL-17的表达水平。
统计学处理方法采用统计软件，数据以“均数±标准差”表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较用LSD检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
三、结果
1.本发明提取物对大鼠肝脏指数影响
由表8可见，与正常对照组比较，CCl4处理组的大鼠肝脏指数显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.01)，说明本造模方法能成功造成大鼠肝功能损害。
与模型对照组比较，本发明光叶子花枝叶水提冻干组、水提浸膏组、茶提取组的大鼠肝指数显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物能显著抑制四氯化碳引起的肝功能损害。与模型对照组比较，本发明光叶子花枝叶常温提取组和阳性对照组的小鼠肝指数显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明本发明光叶子花枝叶常温提取物和阳性对照能显著抑制四氯化碳引起的肝功能损害。而光叶子花苞片和花水提冻干组、水提浸膏组、醇提冻干物组与光叶子花枝叶醇提冻干组的大鼠肝指数没有显著降低，差异不具有统计学意义(P＞0.05)，说明光叶子花枝叶醇提冻干物与苞片和花水提冻干组、水提浸膏组、醇提冻干物不能显著抑制四氯化碳引起的肝功能损害。
表8大鼠肝指数
注：与正常对照组相比，**p＜0.01；与模型对照组相比，##p<0.01；与本发明光叶子花水提冻干组相比※p＜0.05，※※p<0.01。
2.本发明提取物对大鼠血清AST和ALT活性的影响
由表9可见，与正常对照组比较，模型对照组的大鼠血清AST和ALT活性显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.01)，说明本造模方法能成功造成大鼠肝功能损害。
与模型对照组比较，本发明光叶子花枝叶水提冻干组、水提浸膏组、茶提取组、常温提取组的大鼠血清中AST和ALT活性显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物、常温提取物能显著抑制四氯化碳引起的肝功能损害。与模型对照组比较，本发明阳性对照组的大鼠血清中AST和ALT活性显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)，说明本发明阳性对照能显著抑制四氯化碳引起的肝功能损害。与模型对照组比较，本发明光叶子花苞片和花水提冻干组、水提浸膏组的大鼠血清中AST和ALT活性显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明光叶子花苞片和花水提冻干物、水提浸膏物能显著抑制四氯化碳引起的肝功能损害，而光叶子花枝叶醇提冻干组与苞片和花醇提冻干物组的小鼠血清中AST和ALT活性没有显著降低，差异不具有统计学意义(P＞0.05)，说明光叶子花枝叶醇提冻干物与苞片和花醇提冻干物不能显著抑制四氯化碳引起的肝功能损害。
与本发明光叶子花枝叶水提冻干组比较，光叶子花枝叶常温提取组、醇提冻干组与光叶子花苞片和花醇提冻干组、阳性对照组的大鼠血清中AST和ALT活性显著较高，差异具有统计学意义(P＜0.05)或(P＜0.01)，说明本发明光叶子花枝叶水提冻干物在抑制四氯化碳引起的肝功能损害方面，要优于光叶子花苞片和花醇提冻干物与光叶子花枝叶常温提取物、醇提冻干物、阳性对照。
表9大鼠血清中AST和ALT活性
注：与正常对照组相比，**p＜0.01；与模型对照组相比，##p<0.01；与本发明光叶子花水提冻干组相比※p＜0.05，※※p<0.01。
3.本发明提取物对大鼠血清中MDA、SOD和GSH的表达水平的影响
如表10所示，与正常对照组对比，模型对照组大鼠血清中MDA的表达水平显著增加，SOD和GSH的表达水平显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)或(P＜0.05)。说明CCl4可诱导大鼠产生炎症导致机体脂质过氧化，对机体造成损害。
与CCl4处理组比较，本发明光叶子花枝叶水提冻干组、水提浸膏组、茶提取组的血清中MDA的水平显著降低，SOD和GSH的水平显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.01)。而其他组别与CCl4处理组对比无显著性差异(P＞0.05)。MDA的含量反映了机体脂质过氧化的程度及对机体的损伤程度；SOD是生物体中清除活性氧的重要酶类，是生物抗氧化系统的第一道防线；GSH除了可以清除自由基外，还能够阻断由脂质过氧化引发的自由基二级反应，从而减少脂质过氧化物对生物体的损害，保护细胞膜受到过氧化作用的损伤。因此，本实施例证明，光叶子花枝叶水提冻干物、水提浸膏物、茶提取物通过降低MDA、SOD和GSH的水平，减轻CCl4处理后导致的自由基和脂质过氧化所带来的伤害，预防肝损伤。
表10大鼠肝组织中SOD、MDA、GSH的活性
注：与正常对照组相比，**p＜0.01；与模型对照组相比，#p<0.05，##p<0.01；与本发明光叶子花水提冻干组相比，※※p<0.01。
四、总结
在本实施例中，本发明光叶子花枝叶水提取物能显著抑制四氯化碳引起的肝功能损害，且本发明提取物在抑制四氯化碳引起的肝功能损害方面，要优于光叶子花枝叶、苞片和花醇提取物。本发明光叶子花枝叶水提取物能显著降低四氯化碳所致肝损伤大鼠的肝指数、血清中ALT和AST活性，降低肝组织中MDA水平，提高肝组织中GSH和SOD水平，减轻脂质体过氧化损造成的肝损伤，且本发明光叶子花枝叶、苞片和花水提取物在改善四氯化碳引起的肝损伤方面，要优于光叶子花枝叶、苞片和花醇提取物。
实施例5
本发明提取物的急性毒性试验
取体重18～25gSPF级正常KM小鼠雌、雄各50只，按性别、体重分别随机分成各5组，每组10只，分别口服灌胃实施例1中的水提冻干物3600、3240、2916、2624、2361mg生药量/kg，相邻两剂量组剂距为0.9，灌胃体积均为0.1ml/10g体重，观察给药后一周内小鼠的毒性反应、死亡分布和死亡动物数，并按Bliss法计算LD50(半数致死量)及其95％可信限。结果表明，高剂量口服灌胃提取物后小鼠2min左右出现自主活动减少，静卧，呼吸急促，继而出现行为失调，惊厥，10～20min左右死亡。未死动物在40min后呼吸逐渐恢复正常，1h后行为等均恢复正常，以后7日内均不再出现死亡。死亡小鼠肉眼尸检心、肺、肝等主要脏器未见异常。雌性小鼠LD50为2425.72(2354.31～2584.39)mg生药量/kg；雄性小鼠LD50为2543.56(2414.38～2691.37)mg生药量/kg，雌雄动物LD50近似，无明显差异。
实施例6
片剂制备
分别取本发明实施例1中的水提冻干物40g，与淀粉210g、糊精9g混匀，加入12％淀粉浆制软材，用10目尼龙筛网制粒，65±1℃通风干燥，12目筛整粒，加硬脂酸镁3.0g、羧甲基纤维素钠11g，混匀，压制成2000片，包衣，即得，每片含25mg。给药剂量和次数根据临床有效性而定。
实施例7
胶囊制备
分别取本发明实施例1中的水提冻干物40g，与淀粉250g、硬脂酸镁5g混匀，直接用全自动胶囊填充机填充成2000粒，抛光，即得，每粒含25mg。给药剂量和次数根据临床有效性而定。
实施例8
滴丸制备
取本发明实施例1中的水提冻干物23g，投入65g加热熔融的聚乙二醇中，搅拌至溶解，转移至贮液瓶中，密闭并保温在75±3℃，调节滴丸机液滴定量阀门，由上往下滴入15～20℃的液状石蜡中，共制2000粒，将形成的滴丸沥干并擦除液状石蜡，干燥即得，每粒含14mg。给药剂量和次数根据临床有效性而定。
实施例9
口服液制备
分别取本发明实施例1中的水提冻干物30g，与蜂蜜500g、蔗糖160g、苯甲酸钠12g及蒸馏水3000ml混合，加热至90℃，搅拌使溶解，保温40min，滤过，滤液加水稀释至14000ml，灌封(每支12ml)，灭菌，即得。
实施例10
颗粒剂制备
分别取本发明实施例1中的水提冻干物6g、糊精24g、蔗糖粉450g及乙醇适量，混匀，过12目筛制成颗粒，子65℃干燥，整粒，分装，即得，每包重2.0g。
实施例11
注射液制备
分别取本发明实施例1中的水提冻干物40g，加注射用水适量使溶解，加配制量的0.02％活性炭搅拌10～20分钟，滤过，滤液稀释至8L左右，加氯化钠调节渗透压至等渗，调pH7.7～8.1，滤过，灌封成800支(10ml/支)，灭菌，即得。可供静脉注射给药。给药剂量和次数根据临床有效性而定。
实施例12
复方胶囊制备
分别取本发明实施例1中的水提冻干物25g，与三七皂苷25g、淀粉185g及适量乙醇混匀，过12目筛，干燥，整粒，加入硬脂酸镁2.5g，混匀，用全自动胶囊填充机填充成1000粒，抛光，即得。每粒含及三七皂苷各25mg。可口服用于各种缺血性心脑血管疾病的防治。给药剂量和次数根据临床有效性而定。
实施例13
光叶子花水提冻干物的食品制剂
干酵母10g、温水180ml、水少许、面粉300g、实施例1中的水提冻干物10mg，植物油20g、低钠盐少许；
饼干做法：把酵母撒在温水里搅拌倒溶化，加入实施例1中的光叶子花枝叶冻干粉末100g。加入面粉搅拌，再加入植物油，揉成光滑的面团；面团制成0.3cm厚的薄片；压出造型，刺洞，表面撒上水，撒上一点低钠盐，室温发酵15min；烤箱预热130℃，放在上层，烤约12min，得含光叶子花水提冻干物的食品。
实施例14
保健冲剂的制备
分别取实施例1中的水提冻干物300g，与适量果汁粉剂、糖等辅剂混合，过10目筛，65℃烘干，封装成袋，制成具有解酒保肝、降糖降脂作用的各种冲剂，每袋含实施例1中的光叶子花枝叶冻干粉末150mg。给药剂量和次数根据临床有效性而定。
实施例15
茶制品的制备
分别取实施例1中的水提冻干物5g，添加复合甜味剂63kg，调匀后装入专用纸质泡袋，外套铝塑复合袋，封口，每袋6～10g，制成具有解酒保肝、降糖降脂作用的袋泡光叶子花保健茶。给药剂量和次数根据临床有效性而定。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (11)
1.光叶子花提取物在制备具有保肝作用和/或解酒作用的组合物中的应用，所述的光叶子花提取物是从光叶子花的花和/或苞片和/或枝和/或叶中提取得到。
2.光叶子花提取物在制备具有抑制谷丙转氨酶和/或谷草转氨酶升高作用的组合物中的应用。
3.光叶子花提取物在制备具有提高乙醇脱氢酶和/或乙醛脱氢酶活性作用的组合物中的应用。
4.光叶子花提取物在制备具有降糖降脂作用的组合物中的应用，所述的光叶子花提取物是从光叶子花的花和/或苞片和/或枝和/或叶中提取得到。
5.根据权利要求1或2或3或4所述的应用，其特征在于：所述的组合物包括药物组合物，食品组合物，保健品组合物或者茶制品组合物或含有光叶子花提取物的产品。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述组合物的组成包括光叶子花提取物和可接受的载体，其中光叶子花提取物为活性成分，其在组合物中占重量百分比为1～99％。
7.根据权利要求1或2或3或4或5或6所述的应用，其特征在于：光叶子花提取物是将光叶子花的花和/或苞片和/或枝和/或叶经水煮沸和/或醇提取，然后冻干成粉末得到。
8.光叶子花提取物的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：将光叶子花的花和/或苞片和/或枝和/或叶进行水煮沸和/或甲醇溶液浸泡，然后过滤，冻干，粉碎成粒径在1mm及以下的粉末。
9.根据权利要求8所述的光叶子花提取物的提取方法，其特征在于：在水煮沸提取或醇提取之前先对花和/或苞片和/或枝和/或叶进行萎凋处理。
10.一种具有解酒作用和/或保肝作用的组合物，其特征在于：其有效成分为光叶子花提取物。
11.根据权利要求10所述的一种具有解酒作用和/或保肝作用的组合物，其特征在于：光叶子花提取物的应用形式为与辅料制成片剂、滴丸、胶囊、冲剂、颗粒剂或口服液。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN111821326A (zh) * | 2019-04-22 | 2020-10-27 | 安徽德馨华海生物科技有限公司 | 光叶子花的应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104910240A (zh) * | 2015-04-29 | 2015-09-16 | 中国科学院西双版纳热带植物园 | 光叶子花中三萜皂苷,以其为活性成分的降血糖药物,及其制备方法和应用 |
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2019
- 2019-04-22 CN CN201910323501.6A patent/CN111821325A/zh active Pending
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