CN1320891C - 一种田基黄提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种田基黄提取物及其制备方法和在制备治疗肝炎药物中的应用。该提取物中含有下列五种化合物的总量不低于50%wt：紫杉叶素-7-鼠李糖苷、异槲皮苷、槲皮苷、白前苷和槲皮素；其中紫杉叶素-7-鼠李糖苷的含量为16.50%wt±3.30%，异槲皮苷含量为9.60%wt±1.92%，槲皮苷的含量为27.60%wt±5.52%，白前苷含量为1.74%wt±0.35%，槲皮素含量为0.74%wt±0.15%。该提取物的制备方法是：取中药材田基黄，加水或各种浓度乙醇提取，提取液浓缩，将浓缩液加入到聚酰胺柱或大孔树脂柱上，将加样后的柱子先用水洗脱，再以浓度大于10%的乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得田基黄提取物。本发明的田基黄提取物具有治疗肝炎的作用，可用于制备治疗肝炎的药物。
Description
技术领域
本发明涉及一种田基黄提取物及其制备方法，以及该提取物在制备治疗肝炎药物中的应用。
背景技术
肝炎是临床常见的疾病，发病率高，危害大。从中药材中开发治疗肝炎的药物，是新药研究的策略之一。
田基黄为藤黄科金丝桃属植物地耳草(Hypercum japonicum Thunb.)的全草，为我国南方地区常用草药，味苦、辛，性平。具有清热利湿、消肿解毒的功能。用于急慢性肝炎，泄泻，痢疾，毒蛇咬伤，疮疖痈肿，跌打损伤。
发明内容
本发明的目的是提供一种田基黄提取物及其制备方法。该提取物具有治疗肝炎的作用，可用于制备治疗肝炎的药物。
本发明的田基黄提取物中含有下列五种化合物的总量不低于50％wt：紫杉叶素-7-鼠李糖苷、异槲皮苷、槲皮苷、白前苷和槲皮素。
通常，该提取物中紫杉叶素-7-鼠李糖苷的含量为16.50％wt±3.30％，异槲皮苷含量为9.60％wt±1.92％，槲皮苷的含量为27.60％wt±5.52％，白前苷含量为1.74％wt±0.35％，槲皮素含量为0.74％wt±0.15％。
本发明的田基黄提取物可通过以下方法制备：
取中药材田基黄，加水或任意浓度(通常为30％～80％)的乙醇提取一至数次，合并提取液；当用水提取时，直接将提取液浓缩至含田基黄以生药量计为0.5～1.5g/ml的溶液，当用乙醇提取时，先将提取液浓缩至无醇味再加水使成为含田基黄以生药量计为0.5～1.5g/ml的溶液，然后加入到聚酰胺柱或大孔树脂柱上；将加样后的柱子先用水洗至水洗脱液呈澄明的淡黄色，弃去水洗脱液，再以浓度大于10％的乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得所需的田基黄提取物。
上述方法所用的田基黄药材提取前最好先把药材粉碎或切成饮片；提取过程可以采用在室温～100℃条件下或/和超声波条件下进行；提取次数一般为一至三次(次数增多不限)；提取所用的水或乙醇的量为至少能没过药材，用量过多不限；提取时间一般为0.1-24小时，时间延长不限。加温或/和超声波条件下提取可缩短提取时间。
上述方法方法中的柱分离洗脱所用的乙醇为包括浓度为10-100％(V/V)的各种浓度的乙醇。
上述本发明方法提取分离得到的田基黄提取物含有下列五种化合物的总量不得低于50％wt：紫杉叶素-7-鼠李糖苷(Taxifolin-7-rhamnoside)、异槲皮苷(Isoquercitrin)、槲皮苷(Quercitrin)、白前苷(Vincetoxicoside B)、槲皮素(Quercetin)。
本发明通过药效学实验证实，本发明的田基黄提取物具有良好的保肝护肝、降低转氨酶、退黄效果。
我们对田基黄提取物进行D-Gal所致大鼠急性肝损伤实验研究，以24小时血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量作为评价指标，结果表明，提取物提取物在低剂量时即能明显降低D-Gal导致的大鼠肝脏血清转氨酶升高，三个剂量组的转氨酶活力与造模组比较均有显著差异。
田基黄提取物对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致小鼠急性黄疸保护作用试验表明，田基黄提取物对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致小鼠急性血清总胆红素升高具有明显抑制作用，说明田基黄提取物具有良好的退黄作用。
因此，本发明的田基黄提取物具有治疗肝炎的作用，可用于制备治疗肝炎的药物。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明。
各实施例中所涉及的固体混合物中之固体，液体中之液体，以及液体中之固体的百分比分别是以wt/wt，v/v，wt/v计算，除非另有说明。
实施例1.田基黄提取物的制备
田基黄药材切段，分别以12倍、10倍、8倍量水煎煮三次，每次1小时，滤过，滤液合并，减压浓缩至含田基黄药材0.5g/ml；加入到预先准备好的聚酰胺柱上，首先以蒸馏水洗脱至洗脱液颜色色淡，再加60％乙醇洗脱至盐酸-镁粉反应呈阴性止，收集醇洗液，浓缩至相对密度为1.08～1.10(60℃)的浓缩液，在进风温度为100～200℃，出风温度为50～150℃的条件下，喷雾干燥即得田基黄提取物。
实施例2.田基黄提取物的制备
田基黄药材切段，分别以12倍、10倍、8倍量水煎煮三次，每次1小时，滤过，滤液合并，减压浓缩至含田基黄药材1.5g/ml；加入到预先准备好的大孔树脂柱上，首先以蒸馏水洗脱至洗脱液颜色色淡，再加20％乙醇洗脱至盐酸-镁粉反应呈阴性止，收集醇洗液，浓缩至相对密度为1.08～1.10(60℃)的浓缩液，在进风温度为100～200℃，出风温度为50～150℃的条件下，喷雾干燥即得田基黄提取物。
实施例3.田基黄提取物的制备
田基黄药材切段，分别以12倍、10倍、8倍量50％乙醇回流提取三次，每次1小时，滤过，滤液合并，浓缩至无醇味再加水使成为含田基黄药材0.5g/ml；加入到预先准备好的聚酰胺柱上，首先以蒸馏水洗脱至洗脱液颜色色淡，再加60％乙醇洗脱至盐酸-镁粉反应呈阴性止，收集醇洗液，浓缩至相对密度为1.08～1.10(60℃)的浓缩液，在进风温度为100～200℃，出风温度为50～150℃的条件下，喷雾干燥即得田基黄提取物。
实施例4.田基黄提取物的制备
田基黄药材切段，分别以12倍、10倍、8倍量60％乙醇回流提取三次，每次1小时，滤过，滤液合并，减压浓缩至无醇味后加水至含田基黄药材1.0g/ml；加入到预先准备好的大孔树脂柱上，首先以蒸馏水洗脱至洗脱液颜色色淡，再加20％乙醇洗脱至盐酸-镁粉反应呈阴性止，收集醇洗液，浓缩至相对密度为1.08～1.10(60℃)的浓缩液，在进风温度为100～200℃，出风温度为50～150℃的条件下，喷雾干燥即得田基黄提取物。
实施例5.田基黄提取物成分检测
分别取实施例1～4所得的田基黄提取物，以水溶解，配制成含田基黄药材1g/ml溶液，同时10％氢氧化钠溶液调节pH值为7.5～8.0，0.45μm微孔滤膜滤过，得供试品溶液。采用高效液相色谱分别进样测定，结果表明田基黄提取物中含有下列五种成分的总量不低于50％：紫杉叶素-7-鼠李糖苷(Taxifolin-7-rhamnoside)、异槲皮苷(Isoquercitrin)、槲皮苷(Quercitrin)、白前苷(Vincetoxicoside B)、槲皮素(Quercetin)。田基黄提取物中紫杉叶素-7-鼠李糖苷含量为16.50％±3.30％，异槲皮苷含量为9.60％±1.92％，槲皮苷含量为27.60％±5.52％，白前苷含量为1.74％±0.35％，槲皮素含量为0.74％±0.15％；。
实施例6.田基黄提取物对D-氨基半乳糖(D-Gal)所致大鼠急性肝损伤的保护作用
1、实验动物：SD大鼠60只，雌雄各半，实验条件下预养2天，按性别和体重随机平均分为6组：正常对照组、D-Gal造模组(简称造模组)、甘利欣注射液组、田基黄提取物低剂量组、田基黄提取物中剂量组、田基黄提取物高剂量组。
2、给药方法：正常组、造模组分别腹腔注射0.9％生理盐水5ml/kg体重；甘利欣注射液组腹腔注射甘利欣注射液5ml/kg(每ml含甘草酸二铵5mg)；田基黄提取物低剂量组、中剂量组、高剂量组分别腹腔注射田基黄提取物按生药量计0.1875、0.375、0.75g/kg体重。各组药物均以0.9％生理盐水稀释至相同体积后注射。正常组、造模组分别腹腔注射等容0.9％生理盐水。连续给药7天。
3、造模方法：末次给药后1h，除正常组外，其余5组动物于腹腔注射10％D-Gal生理盐水溶液(pH7.0)400mg/kg体重；空白组于相同部位注射等容生理盐水。
4、取材方法：各组动物造模后禁食不禁水，于造模后24h眼眶取血，分离血清，备用。
5、检测项目：血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)。
6、结果：见表1。结果表明，田基黄提取物在低剂量时即能明显降低D-Gal导致的大鼠肝脏血清转氨酶升高，三个剂量组的转氨酶活力与造模组比较均有显著差异。
表1 D-Gal所致大鼠急性肝损伤实验结果
| 组别 | 24h血清ALT活性(IU/L) | 24h血清AST活性(IU/L) |
| 正常对照组造模组甘利欣注射液组田基黄提取物低剂量组田基黄提取物中剂量组田基黄提取物高剂量组 | 28.65±5.56635.58±148.19125.92±59.90*171.48±96.05*117.09±39.22*153.33±45.60* | 259.38±57.461329.01±466.50792.30±219.35*715.69±127.01*599.30±90.88*616.49±81.07* |
注：*与造模组比较，p＜0.05。
实施例7.田基黄提取物对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致小鼠急性黄疸保护作用
l、动物分组：昆明种小鼠，雌雄各半，实验条件下预养2天，按性别和体重随机分为6组，每组10只：空白对照组，ANIT造模组，阳性对照组、田基黄提取物低、中、高剂量组。
2、田基黄提取物给药量的设定：设定田基黄提取物低、中、高剂量组，按生药量计分别为32、64、128mg/kg三组。
3、阳性对照药物：茵栀黄注射液，给药2.5ml/kg。
4、给药及造模方法：空白对照组、ANIT造模组分别腹腔注射0.9％生理盐水20ml/kg体重：其余各组均按20ml/kg体重的剂量将各药液稀释至适当浓度进行腹腔注射。连续给药5d，末次给药后1h以100mg/kg的ANIT灌胃造模，再继续给药，于48h眼眶取血，分离血清，测定血清总胆红素(T.Bil)。
5、检测项目及方法：咖啡因法(J-G法)检测血清总胆红素(T.Bil)。
6、结果：结果见表2。结果表明，田基黄提取物对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致小鼠急性血清总胆红素升高具有明显抑制作用，说明田基黄提取物具有良好的退黄作用。
表2 48h小鼠血清T.Bil含量比较
| 组别 | 48h血清T.Bil含量(umol/L) | 抑制率[(造模组—剂量组)/造模组] |
| 空白对照组ANIT造模组阳性对照组TJH低剂量组TJH中剂量组TJH高剂量组 | 4.56±1.6566.30±23.1332.36±10.24*41.53±19.62*32.04±12.46*18.99±9.45** | --51.19％37.36％51.67％71.36％ |
注：与造模组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
Claims (3)
1.一种田基黄提取物，其特征在于该提取物中含有下列五种化合物的总量不低于50％wt：紫杉叶素-7-鼠李糖苷、异槲皮苷、槲皮苷、白前苷和槲皮素；所述田基黄提取物是由以下方法制备的：取中药材田基黄，加水或任意浓度的乙醇提取一至数次，合并提取液；当用水提取时，直接将提取液浓缩至含田基黄以生药量计为0.5～1.5g/ml的溶液，当用乙醇提取时，先将提取液浓缩至无醇味再加水使成为含田基黄以生药量计为0.5～1.5g/ml的溶液，然后加入到聚酰胺柱或大孔树脂柱上；将加样后的柱子先用水洗至水洗脱液呈澄明的淡黄色，弃去水洗脱液，再以浓度大于10％的乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得所需的田基黄提取物。
2.根据权利要求1所述的田基黄提取物，其特征在于该提取物中紫杉叶素-7-鼠李糖苷的含量为16.50％wt±3.30％，异槲皮苷含量为9.60％wt±1.92％，槲皮苷的含量为27.60％wt±5.52％，白前苷含量为1.74％wt±0.35％，槲皮素含量为0.74％wt±0.15％。
3.权利要求1或2所述的田基黄提取物在制备治疗肝炎药物中的应用。
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