CN101011452A - 一种具有降压作用的植物提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

一种具有降压作用的植物提取物及其制备方法和应用，含有的有效成分是木脂素，提取物中的木脂素成分重量占提取物重量的30％－90％。可用于制备治疗或预防高血压及其并发症的药物或食品或保健品。本发明制备方法简单实用，通过本发明提取制备得到的提取物具有良好降压应用效果。

Description

一种具有降压作用的植物提取物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种植物提取物及制备方法和用途，该提取物从杜仲科杜仲属植物杜仲中提取分离，用于治疗或预防高血压及其并发症。

背景技术

杜仲(Duzhong，Eucommia ulmoides Oliv)属杜仲科杜仲属植物，是中国特有的一种名贵药材，以皮入药，具有补肝肾、强筋骨和安胎的功效，临床可用于高血压的治疗。一直以来人们期望找到杜仲中发挥主要降压作用的物质，以开发出疗效更好、不良反应更少的新药。到目前为止已从杜仲中分离提取了70余种单体，主要有木脂素类、苯丙素类、环烯醚萜类、黄酮类等。木脂素是植物体中由双分子苯丙素聚合而成的化合物，按其结构特点木脂素类包括双环氧林脂素类，单环氧木脂素类、环木脂素类、新木脂素类等及甙类。通过药理试验证明其中松脂醇二葡萄苷(Pinoresinol Diglucoside，PDG)和京尼平苷酸(Geniposidic Acid，GPA)具有良好的降压活性，静脉注射30mg·kg^-1的PDG和GPA分别可使高血压大鼠血压降低20～35mmHg和20～40mmHg。并且由于两者在杜仲中含量相对于其它单体含量较高，被认为是杜仲的主要降压成分。而两种单体中PDG属木脂素类，GPA属环烯萜类。但由于两者在杜仲药材中实际含量不超过0.3％，临床正常给药量(生药材6g)根本达不到他们的效应剂量(按正常成人60公斤推算，均需达到300mg·kg^-1)。若是将杜仲的木脂素类、环烯醚萜类分别提取出来，是否都具有良好的降压作用，还是都不具有降压作用，现有技术并没的相关情况的研究及说明。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种具有降压作用的植物提取物用于制备治疗或预防高血压及其并发症的药物或食品或保健品。

本发明的目的之二旨在提供一种具有降压作用的植物提取物的制备方法。

本发明的目的之三旨在提供具有良好降压作用药剂。

一种具有降压作用的植物提取物，含有的有效成分是木脂素，提取物中的木脂素成分重量占提取物重量的30％-90％。

其中木脂素类有效成分松脂醇二葡萄糖苷的含量提取物重量的1-15％，优选为3-7.5％。

一种药剂，含有活性成分具有降压作用的植物提取物及其可接受的辅料组成，所述的植物提取物含有的有效成分是木脂素，提取物中的木脂素成分重量占提取物重量的30％-90％，其中木脂素类有效成分松脂醇二葡萄糖苷的含量占提取物重量的1-15％。

所述的具有降压作用的植物提取物可以通过采用选自粉碎、压榨、煅烧、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、水沉、醇沉、酯提、酮提、层析、过滤等方法得到。以该提取物为活性物质可制成药物制剂，所述提取物可以是浸膏形式的物质，可以是干浸膏也可以是流浸膏，可以是粉末状物质，根据制剂的不同需要制成不同的状态。

本发明还提供本发明的具有降压作用的植物提取物经过加工制备的适合服用的任何单位剂量形式的药物制剂，这些药物制剂选自以下剂型：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂，需要时可以制成缓释制剂、肠溶制剂。

本发明的含有具有降压作用的植物提取物制剂，在制备成药物制剂时可加入药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：抗氧剂、鳌合剂表面活性剂填充剂崩解剂润湿剂分散剂润滑剂溶剂缓释材料肠溶材料pH调节剂、矫味剂、色素等，常用的载体如：甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、氯化钠、硅衍生物、纤维素及纤维素衍生物、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

本发明的具有降压作用的植物提取物的药物制剂，是通过将杜仲原料经过提取或其他方式加工，制成药物活性物质，随后，以该活性物质为原料，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成药物制剂。

本发明的制剂是单位剂量形式，每一制剂单位中可含有具有降压作用的植物提取物30～300mg，优选100mg，其余为药物可接受的载体，所述每一制剂单位，是指每粒胶囊，或每片片机、每袋颗粒、每丸丸剂、每一安瓿口服液、每瓶注射剂等。也可治每次服用剂量。

本发明还提供具有降压作用的植物提取物制备方法，该方法包括以下步骤：

1.取中药杜仲皮，用含水乙醇回流提取，提取液过滤，药液浓缩；

2.将浓缩的药液通过大孔树脂柱，依次用水、醇溶液洗脱。

3.收集醇洗脱液，浓缩，干燥，得到提取物粉末。

本发明提供具有降压作用的植物提取物的优选的制备方法：

1.中药杜仲皮去外皮后，切成3-5cm的小段。用含水乙醇溶液加热回流提取2次，每次1-2h，提取液减压浓缩至0.5-1.5倍药材量体积；

2.将浓缩的药液通过大孔吸附树脂柱进行有效成分富集，依次用水，15-25％甲醇或乙醇，45-55％甲醇或乙醇溶液洗脱。

3.收集45-55％甲醇或乙醇洗脱液，浓缩，干燥得提取物粉末，即为具降压作用的植物提取物。

另外，收集水洗脱液，浓缩，干燥，粉碎，粉末用甲醇溶解，弃去不溶物，回收甲醇并干燥得环烯醚萜类部位。

在步骤1中的提取溶剂为含水乙醇，优选为40-95％的乙醇。

在步骤2中大孔吸附树脂柱为HP系列、D101、AB-8等弱极性树脂。

在步骤3中的浓缩液采用的干燥技术可以是多种，如真空干燥、喷雾干燥、冻干，优选冻干技术。

通过本发明制备方法得到的提取物具有良好降压应用效果。

本发明提供具有降压作用的植物提取物中木脂素成分和松脂醇二葡萄糖苷的含量测定方法：

木脂素成分含量测定：

对照品溶液的制备：精密称取松脂醇二葡萄糖苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：取本品适量，加入适量甲醇溶解，即得。

测定法：取上述对照品溶液和供试品溶液，以甲醇溶液为空白，按照分光光度法，在277nm的波长处分别测定吸光度，用空白溶液的吸收度分别减去对照品与供试品的吸收度，计算，即得。

松脂醇二葡萄糖苷含量测定：

对照品溶液的制备：精密称取松脂醇二葡萄糖苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：取本品适量，加入适量甲醇溶解，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明的具有降压作用的植物提取物，由于其成分确定，所得提取物通过有效地含量测定方式准确地确定其含量，其药效则可发挥地更好，可以很好地用于制备治疗或预防高血压及其并发症的药物或食品或保健品。为了更好地理解本发明的应用实质，以下就本发明提取物的药效学情况予以说明。

本发明提供该提取物的药效学试验结果：

(为描述简便“具有降压作用的植物提取物”在以下内容中用“木质素类提取物”或“木质素”代替)

1、静脉给药试验

1.1试验材料

木脂素类提取物与环烯醚萜类提取物通过前述方法提取而来。

戊巴比妥钠(上海化学试剂公司)，试验前用双蒸水配成2％浓度。肝素钠注射液(12500U，江苏万邦生化医药股份有限公司)，试验前用生理盐水稀释成250U/ml。

SD大鼠(中南大学实验动物学部)，雄性，72只，体重251±23g。试验前适应环境1周。

1.2试验方法

测压方法：用2％戊巴比妥钠溶液按50mg·kg^-1腹腔注射，麻醉起效后，将大鼠固定于大鼠固定板上。沿腹中线在颈部做一1.5cm左右的切口，分离右颈总动脉，然后插入一充满肝素的塑料导管，导管连于生理压力换能器，换能器接于泰盟410生理记录仪，实时记录平均动脉压(MAP)变化。右股静脉插入一塑料导管，导管接一1ml注射器，用于注射药物。

分组：72只SHR大鼠随机分为9组，每组8只：生理盐水(阴性对照)、木脂素提取物15mg·kg^-1、木脂素提取物30mg·kg^-1、木脂素提取物60mg·kg^-1、环烯醚萜提取物15mg·kg^-1、环烯醚萜提取物30mg·kg^-1、环烯醚萜提取物60mg·kg^-1、木脂素30mg·kg^-1+环烯醚萜12.5mg·kg^-1(按相同生药量配比)、木脂素60mg·kg^-1+环烯醚萜25mg·kg^-1(按相同生药量配比)。

1.3结果

木脂素类提取物对SD大鼠血压的影响见图1。统计分析显示，30mg·kg^-1及60mg·kg^-1剂量组与阴性对照组之间、三个剂量组之间均存在显著性差异(P＜0.05)。表明静脉注射木脂素类提取物可对正常SD大鼠产生剂量依赖性的降压作用。

杜仲环烯醚萜类提取物对SD大鼠血压的影响见图2。统计分析表明试验组与对照组之间以及三个剂量组之间均不存在显著性差异(P＞0.05)。表明静脉注射杜仲环烯醚萜类提取物对SD大鼠无降压作用。

合用木脂素类与环烯醚萜类提取物对SD大鼠血压的影响见图3、图4。统计分析显示合用组与相同木脂素量组之间不存在显著性差异(P＞0.05)。表明合用木脂素类与环烯醚萜类提取物与单用木脂素类提取物的降压作用无差别，提示杜仲的降压作用可能主要由木脂素类化合物发挥。

1.4结论

静脉注射木脂素类提取物可对正常SD大鼠产生剂量依赖性降压作用，环烯醚萜类提取物无降压作用，两者合用无协同作用。提示木脂素类是杜仲产生降压作用的主要部位。

2、口服给药试验

2.1单次给药试验

2.1.1试验材料

木脂素类提取物与环烯醚萜类提取物通过前述方法提取而来。

卡托普利，每天试验前用蒸馏水配成5％浓度。

SHR大鼠(上海实验动物中心)，雄性，14周龄，每5只放在金属饲养笼中。饲养条件：室温23±1℃，人工照明12h/d(7:00-19:00)，自由饮食及饮水。试验前适应环境及尾动脉测压操作1周。

2.1.2试验方法

测压方法：测压前将大鼠放入36±1℃电热恒温箱内加热，10min后用RBP-1型大鼠电脑血压仪(中日友好院临床医学研究所研制)间接测定大鼠尾动脉收缩压(SBP)。记录大鼠安静状态下，较为稳定的3次结果，然后取平均值。测压环境温度：23±1℃。

实验分组及过程：25只SHR随机分为5组，每组5只：蒸馏水、卡托普利(50mg·kg^-1·d^-1)、木脂素(150mg·kg^-1·d^-1)、木脂素(300mg·kg^-1·d^-1)、木脂素(600mg·kg^-1·d^-1)。给药时间为9:00-10:00，给药前及给药后2、4、6、8、10、12、24小时测量血压一次。

2.1.3试验结果

不同剂量木脂素类提取物对SHR大鼠血压的影响见图5。统计分析表明卡托普利(50mg·kg^-1·d^-1)、木脂素(300mg·kg^-1·d^-1)、木脂素(600mg·kg^-1·d^-1)与阴性对照组间以及不同剂量组之间存在显著性差异(P＜0.05)。

2.1.4结论

单次灌胃给予木脂素类提取物可对SHR大鼠产生剂量依赖性降压作用。

2.2多次给药试验

2.2.1试验材料

木脂素类提取物与环烯醚萜类提取物通过前述方法提取而来。

卡托普利，每天试验前用蒸馏水配成5％浓度。

SHR大鼠(上海实验动物中心)，雄性，11周龄，每5只放在金属饲养笼中。饲养条件：室温23±1℃，人工照明12h/d(7:00-19:00)，自由饮食及饮水。试验前适应环境及尾动脉测压操作1周。

2.2.2试验方法

测压方法：测压前将大鼠放入36±1℃电热恒温箱内加热，10min后用RBP-1型大鼠电脑血压仪(中日友好院临床医学研究所研制)间接测定大鼠尾动脉收缩压(SBP)。记录大鼠安静状态下，较为稳定的3次结果，然后取平均值。测压环境温度：23±1℃。

实验分组及过程：30只SHR(体重：)随机分为5组，每组6只：蒸馏水(阴性对照)、卡托普利(50mg·kg^-1·d^-1)、木脂素(300mg·kg^-1·d^-1)、环烯醚萜(125mg·kg^-1·d^-1)、木脂素300mg·kg^-1·d^-1+环烯醚萜125mg·kg^-1·d^-1(按相同生药量配比)组。一天给药一次，给药时间为19:00左右，血压测量时间为给药前1-2小时。第一次给药前及给药后每2天测量血压一次，连续14天。

2.2.3试验结果

不同杜仲提取物对SHR大鼠血压的影响见图6。统计分析表明，卡托普利(50mg·kg^-1·d^-1)、木脂素(300mg·kg^-1·d^-1)、合用组与阴性对照组间存在显著性差异(P＜0.05)，环烯醚萜(125mg·kg^-1·d^-1)与阴性对照组间以及木脂素组与合用组间不存在统计学差异(P＞0.05)。表明灌胃给予300mg·kg^-1·d^-1的杜仲木脂素类可对SHR大鼠产生降压作用，给予相同生药量的环烯醚萜类提取物无降压作用，两者合用与单用木脂素类提取物降压作用无差别。

2.2.4结论

多次灌胃给予木脂素类提取物可对SHR大鼠血压产生降低作用，环烯醚萜类提取物没有降压作用，两者合用无协同作用。证明木脂素类是杜仲产生降压作用的主要部位。

附图说明

图1.静脉注射不同剂量木脂素类提取物对正常SD大鼠血压的影响。

图2.静脉注射不同剂量杜仲环烯醚萜类提取物对正常SD大鼠血压的影响。

图3.合用木脂素类与环烯醚萜类提取物与单用木脂素类提取物降压作用的比较(相当于木脂素类提取物15mg·kg^-1)。

图4.合用木脂素类与环烯醚萜类提取物与单用木脂素类提取物降压作用的比较(相当于木脂素类提取物30mg·kg^-1)。

图5.单次灌胃给予木脂素类提取物对SHR大鼠血压的影响。

图6.多次灌胃给予杜仲提取物对SHR大鼠血压的影响。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

取杜仲树皮(去外皮)2Kg，用8L 65％乙醇回流提取两次，每次1h，过滤，合并两次提取液浓缩至800ml。用D101大孔树脂拌样上样(大孔树脂柱体积3L)，水洗3倍柱体积，1％氨水继续洗3倍柱体积，再水洗至中性。用20％乙醇洗脱2倍柱体积，用45％乙醇洗2.5倍柱体积。45％乙醇洗脱液浓缩至600ml。洗脱液浓缩后干燥成粉末。用松脂醇二葡萄糖苷作为对照，提取物经紫外检测木脂素成分含量为85％，经HPLC检测松脂醇二葡萄糖苷含量为12.5％。

实施例2

取杜仲树皮(去外皮)20kg，先后加入8倍量和6倍量80％乙醇回流提取1.5h和1h，合并提取液，过滤，药液浓缩约至20L，通过HPD100大孔吸附树脂柱，水洗1倍柱体积，收集水洗液，浓缩；用20％乙醇洗脱，浓缩；再用50％的乙醇洗脱3倍柱体积，收集50％的乙醇洗脱液，浓缩，冻干，得到提取物粉末。用松脂醇二葡萄糖苷作为对照，提取物经紫外检测木脂素成分含量为69％，经HPLC检测松脂醇二葡萄糖苷含量为7.5％。

实施例3

杜仲皮(去外皮)粉碎后，加60％乙醇9L回流提取1h，过滤，滤渣再加60％乙醇7L提取1h，过滤，合并两次提取液，浓缩至无醇味，得浓缩液约3L。浓缩液经AB-8大孔吸附树脂柱，先用5L水洗脱，再用7L 60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，浓缩至150ml，缓慢加到450ml水中，过滤，浓缩，得干燥固体粉末。用松脂醇二葡萄糖苷作为对照，提汉物经紫外检测木脂素成分含量为51％，经HPLC检测松脂醇二葡萄糖苷含量为3.5％。

实施例4

杜仲树皮(去外皮)切碎后，用65％的乙醇回流提取1h，过滤，提取液浓缩。经过HPD100大孔树脂吸附后，水洗3倍柱体积，20％乙醇洗2倍柱体积，45％乙醇洗2倍柱体积，45％乙醇洗脱液收集并浓缩，冻干，得到提取物粉末。取粉末609，加入微晶纤维素230g，PVP10g，混匀，加入乙醇适量制软材，制粒，烘干，整粒，加少量硬脂酸镁，压片，制成1000片。

本发明的实施例4制成药品减少相应的剂量便可以制成保健品，起到一定的保健作用。另外在食物中加入少量的本发明灶仲木脂素提取物，也可以很好地起到降压作用。

Claims (10)

1、一种具有降压作用的植物提取物，其特征在于：含有的有效成分是木脂素，提取物中的木脂素成分重量占提取物重量的30％-90％。

2、根据权利要求1所述的一种具有降压作用的植物提取物，其特征在于：其中木脂索类有效成分松脂醇二葡萄糖苷的含量占提取物重量的1-15％。

3、根据权利要求2所述的一种具有降压作用的植物提取物，其特征在于：其中木脂素类有效成分松脂醇二葡萄糖苷的含量占提取物重量的为3-7.5％。

4、权利要求1或2或3所述的一种具有降压作用的植物提取物，其特征在于：该提取物从杜仲科杜仲属植物杜仲中提取分离。

5、权利要求1或2或3的一种具有降压作用的植物提取物，用于制备治疗或预防高血压及其并发症的药物或食品或保健品。

6、权利要求1或2或3中所述一种具有降压作用的植物提取物，制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)中药杜仲皮，用含水乙醇回流提取，提取液过滤，药液浓缩；

b)将浓缩的药液通过大孔树脂柱，依次用水、醇溶液洗脱；

c)收集醇洗脱液，浓缩，干燥，得到粉末。

7、根据权利要求6的一种具有降压作用的植物提取物，制备方法，其特征在于：

步骤a是将中药杜仲皮，切成3-5cm的小段，用含水乙醇加热回流提取2次，每次1-2h，提取液减压浓缩至相当于0.5-1倍药材量体积；

步骤b是用大孔吸附树脂柱进行有效成分富集，依次用水，15-25％甲醇或乙醇，45-55％甲醇或乙醇洗脱；

步骤c收集的是45-55％甲醇或乙醇洗脱液，浓缩，干燥得粉末。

8、根据权利要求6所述一种具有降压作用的植物提取物，制备方法，其特征在于：大孔吸附树脂柱为HP系列、D101、AB-8弱极性树脂；干燥为真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥。

9、一种药剂，其特征在于：含有活性成分具有降压作用的植物提取物及其可接受的辅料组成，所述的植物提取物含有的有效成分是木脂素，提取物中的木脂素成分重量占提取物重量的30％-90％，其中木脂素类有效成分松脂醇二葡萄糖苷的含量占提取物重量的1-15％。

10、根据权利要求9的所述的药剂，其特征在于：为片剂、胶囊剂、分散片、泡腾片、糖浆剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂或混悬剂。

Images