CN101152234B - 杜仲木脂素及其提取物在抗心血管重塑上的应用 - Google Patents

Abstract

杜仲木脂素及其提取物在抗心血管重塑上的应用，所述的杜仲木脂素及其提取物是以杜仲为原料提取制备而成，用于制备抗心血管重塑的药物。还可用于制备抑制肾素-血管紧张素系统的药物。具有抗氧化、直接抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的药理作用。可以较好地逆转由高血压等引起的心血管重塑。

Description

杜仲木脂素及其提取物在抗心血管重塑上的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域中将杜仲木脂素及其提取物在抗心血管重塑上的应用。

背景技术

原发性高血压(essential hypertension，EH)是最常见的心血管疾病，据2004年10月卫生部发布的“中国居民营养与健康现状”报告，我国成人EH患病率为18.8％，患者超过1.5亿。随着新型降压药物的开发和广泛使用，患者的血压控制已不再成为难题，然而由心血管重塑所引起的心、脑、肾等靶器官损害未得到同步控制，心血管事件发生率、死亡率逐年增加，严重危害着患者的健康。因此，抑制心血管重塑已经成为高血压病防治的重要目标。

高血压时的压力、流量等血流动力学改变是心血管重塑的直接原因。一方面通过机械刺激，更重要的是通过激活肾素-血管紧张素系统(RAS)引起心血管重塑。RAS激活后，血管紧张素II(Ang II)升高，通过NAD(P)H氧化酶、一氧化氮合酶、黄嘌呤氧化酶和线粒体等途径促使过量生成活性氧族(Reactive Oxygen Species，ROS)；生成的ROS激活氧化应激敏感性酶，活化细胞内信号传导通路，激活核转录因子(NF-κB、AP-1)，促进血管炎症反应；同时，AngII还可以作为生长因子促进剂，激活肽类生长因子(如TGF-β1)的表达，引起心血管重塑，表现为：①心肌细胞肥大；②间质纤维细胞分化和胶原合成；③血管平滑肌细胞(VSMC)迁移增殖。临床证实，作用于RAS的血管紧张素转化酶抑制药(ACEI)和血管紧张素II受体拮抗药(ARB)是逆转心血管重塑最有效的降压药物，二者分别是通过抑制Ang II的合成和阻断Ang II与受体的结合发挥作用。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种杜仲木脂素及其提取物的应用，可以较好地逆转由高血压等引起的心血管重塑。

本发明将杜仲木脂素及其提取物用于制备抗心血管重塑的药物，所述的杜仲木脂素提取物是由杜仲提取制备而成。

本发明还将杜仲木脂素及其提取物用于制备抑制肾素-血管紧张素系统的药物。

杜仲(Duzhong，Eucommia ulmoides Oliv)属杜仲科杜仲属植物，是中国特有的一种名贵药材，以皮入药，具有补肝肾、强筋骨和安胎的功效。到目前为止已从杜仲中分离提取了70余种单体，主要有木脂素类、苯丙素类、环烯醚萜类、黄酮类等。木脂素是植物体中由双分子苯丙素聚合而成的化合物，按其结构特点木脂素类包括双环氧林脂素类，单环氧木脂素类、环木脂素类、新木脂素类等及甙类。

杜仲木脂素提取物是一种混合物，研究表明杜仲木脂素提取物具有较强的降血压作用，但其在降压的同时是否可以逆转心血管重塑尚见报道。我们研究首次发现，杜仲木脂素及其提取物可以抗高血压心血管重塑，其机理与抑制RAS有关。同时我们还发现杜仲木脂素及其提取物通过抑制高血压状态下的氧化应激以及血管平滑肌细胞(VSMC)增殖等发挥抗高血压心血管重塑的作用。

杜仲木脂素提取物中的木脂素成分优选占提取物重量的30％-90％。

杜仲木脂素提取物中木脂素类有效成分松脂醇二葡萄糖苷的含量优选占提取物重量的1-15％，最优选为3-7.5％。

所述的杜仲木脂素及其提取物可以通过采用选自粉碎、压榨、煅烧、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、水沉、醇沉、酯提、酮提、层析、过滤等方法得到。以该提取物为活性物质可制成药物制剂，所述提取物可以是浸膏形式的物质，可以是干浸膏也可以是流浸膏，可以是粉末状物质，根据制剂的不同需要制成不同的状态。

本发明还提杜仲木脂素及其提取物经过加工制备的适合服用的任何单位剂量形式的药物制剂，这些药物制剂选自以下剂型：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂，需要时可以制成缓释制剂、肠溶制剂。

本发明的杜仲木脂素及其提取物，在制备成药物制剂时可加入药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：抗氧剂、鳌合剂表面活性剂填充剂崩解剂润湿剂分散剂润滑剂溶剂缓释材料肠溶材料pH调节剂、矫味剂、色素等，常用的载体如：甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、氯化钠、硅衍生物、纤维素及纤维素衍生物、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

本发明的杜仲木脂素及其提取物的药物制剂，是通过将杜仲原料经过提取或其他方式加工，制成药物活性物质，随后，以该活性物质为原料，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成药物制剂。

本发明还提供以下的杜仲木脂素提取物制备方法，该方法包括以下步骤：

1.取中药杜仲皮，用含水乙醇回流提取，提取液过滤，药液浓缩；

2.将浓缩的药液通过大孔树脂柱，依次用水、醇溶液洗脱。

3.收集醇洗脱液，浓缩，干燥，得到提取物粉末。

本发明还提供以下的杜仲木脂素提取物的优选的制备方法：

1.中药杜仲皮去外皮后，切成3-5cm的小段。用含水乙醇溶液加热回流提取2次，每次1-2h，提取液减压浓缩至0.5-1.5倍药材量体积；

2.将浓缩的药液通过大孔吸附树脂柱进行有效成分富集，依次用水，15-25％甲醇或乙醇，45-55％甲醇或乙醇溶液洗脱。

3.收集45-55％甲醇或乙醇洗脱液，浓缩，干燥得提取物粉末，即为具降压作用的植物提取物。

另外，收集水洗脱液，浓缩，干燥，粉碎，粉末用甲醇溶解，弃去不溶物，回收甲醇并干燥得环烯醚萜类部位。

在步骤1中的提取溶剂为含水乙醇，优选为40-95％的乙醇。

在步骤2中大孔吸附树脂柱为HP系列、D101、AB-8等弱极性树脂。

在步骤3中的浓缩液采用的干燥技术可以是多种，如真空干燥、喷雾干燥、冻干，优选冻干技术。

附图说明

图1：血浆肾素浓度比较。注：#表示与正常对照组比较P＜0.05；*表示与阴性对照组比较P＜0.05。

图2：血浆Ang II浓度比较。注：#表示与正常对照组比较P＜0.05；*表示与阴性对照组比较P＜0.05。

图3：杜仲木脂素对血浆MDA的影响。注：#表示与正常对照组比较P＜0.05；*表示与阴性对照组比较P＜0.05。

图4：杜仲木脂素对血浆SOD的影响。注：#表示与正常对照组比较P＜0.05。

图5：杜仲木脂素对左心室心肌肥厚指数的影响。注：#表示与正常对照组比较P＜0.05；*表示与阴性对照组比较P＜0.05。

图6：杜仲木脂素对心肌细胞横径的影响。注：#表示与正常对照组比较P＜0.05；*表示与阴性对照组比较P＜0.05。

图7：杜仲木脂素对中层面积/内径比值的影响。注：#表示与正常对照组比较P＜0.05；*表示与阴性对照组比较P＜0.05。

图8：杜仲木脂素对血管平滑肌细胞增殖的影响。

具体实施方式

实施例1

杜仲木脂素抗高血压心血管重塑的实验研究

1.整体实验

1.1实验方法

高血压(SHR)大鼠，及WKY大鼠直接购买。

分组：10周龄WKY正常大鼠8只作为正常对照，SHR 18只随机分为3组，每组6只：蒸馏水(阴性对照)、卡托普利(50mg·kg^-1·d^-1)、木脂素(300mg·kg^-1·d^-1)。

给药方法：灌胃给药，1天2次，连续8周。

18周龄大鼠血浆活性物质测定：RA、Ang II、MDA、SOD测定(按照试剂盒说明操作)。

18周龄大鼠心血管重塑指标：

(1)左心室心肌肥厚指数(LVMI)：以左心室湿重与体重的比值(LVW/BW，mg/g)代表左心室心肌肥厚指数。

(2)心肌、主动脉病理切片观察：

①取材：切取左心室游离壁中部约4mm心室心肌；剪取约2cm胸主动脉。

②固定、脱水、透明、包埋、切片、HE染色：

③测量心肌细胞横径(TDM)：每张切片随机选核居中的20个心肌细胞测量，取平均数；

计算中层面积/管腔直径(内径)比值：动脉切片后光镜下用计算机图像分析系统测量测量血管壁厚度、管腔直径及中层厚度(每个血管环周向相互垂直位置取4处包含血管壁各层的测量区)。

1.2实验结果

1.2.1杜仲木脂素对肾素-血管紧张素系统的影响

①血浆肾素活性

SHR血浆RA活性较WKY大鼠(正常组)明显升高(P＜0.05)；卡托普利可使SHR大鼠RA活性降低(P＜0.05)；给予杜仲木脂素可使SHR大鼠RA活性较阴性对照组降低(P＜0.05)。(见图1)

②血浆Ang II浓度

SHR血浆Ang II活性较WKY大鼠(正常组)升高(P＜0.05)；卡托普利可使SHR大鼠Ang II活性降低(P＜0.05)；给予杜仲木脂素可使SHR大鼠Ang II活性降低(P＜0.05)(见图2)。

1.2.2杜仲木脂素对MDA、SOD的影响

①对MDA的影响

SHR(阴性对照组)血浆MDA活性较WKY大鼠(正常组)升高(P＜0.05)；木脂素可使SHR大鼠MDA活性降低(P＜0.05)；与正常组比较差异无统计学意义(P＞0.05)(见图3)。

②对SOD的影响

SHR(阴性对照组)血浆SOD活性较WKY大鼠(正常组)降低(P＜0.05)；木脂素不能使SHR大鼠SOD活性升高(P＞0.05)(见图4)。

1.2.3杜仲木脂素对心血管重塑指标的影响

①左心室心肌肥厚指数(LVMI)

SHR LVMI较WKY大鼠(正常组)明显升高(P＜0.05)；卡托普利可使SHR大鼠LVMI降低(P＜0.05)；给予杜仲木脂素可使SHR大鼠LVMI降低，与SHR+卡托普利组差异无统计学意义(P＞0.05)。(见图5)

②心肌细胞横径(TDM)

SHR TDM较WKY大鼠(正常组)明显升高(P＜0.05)；卡托普利可使SHR大鼠TDM降低(P＜0.05)；给予杜仲木脂素可使SHR大鼠TDM降低，与SHR+卡托普利组差异无统计学意义(P＞0.05)。(见图6)

③中层面积/内径比值

SHR中层面积/内径较WKY大鼠(正常组)明显升高(P＜0.05)；卡托普利可使SHR大鼠中层面积/内径降低(P＜0.05)；给予杜仲木脂素可使SHR大鼠中层面积/内径降低，与SHR+卡托普利组差异无统计学意义(P＞0.05)。(见图7)

2.细胞实验

2.1实验方法

用Ang II诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)，然后加入不同浓度的杜仲木脂素提取物，培养3天后进行细胞计数。

2.2实验结果

Ang II可诱导VSMC增殖，杜仲木脂素提取物可明显抑制这一增殖作用，且具有剂量依赖性(图)，各组间细胞数具有统计学差异(P＜0.05)。(见图8)

3.结论

①杜仲木脂素可以抗心血管重塑，其效果与卡托普利相当。

②杜仲木脂素可以通过抑制肾素-血管紧张素系统(RAS系统)抗心血管重塑。

③杜仲木脂素具有抗氧化、直接抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的药理作用，并且可以通过这些作用抗心血管重塑。

实施例2

取杜仲树皮(去外皮)2Kg，用8L 65％乙醇回流提取两次，每次1h，过滤，合并两次提取液浓缩至800ml。用D101大孔树脂拌样上样(大孔树脂柱体积3L)，水洗3倍柱体积，1％氨水继续洗3倍柱体积，再水洗至中性。用20％乙醇洗脱2倍柱体积，用45％乙醇洗2.5倍柱体积。45％乙醇洗脱液浓缩至600ml。洗脱液浓缩后干燥成粉末。用松脂醇二葡萄糖苷作为对照，提取物经紫外检测木脂素成分含量为85％，经HPLC检测松脂醇二葡萄糖苷含量为12.5％。

实施例3

杜仲皮(去外皮)粉碎后，加60％乙醇9L回流提取1h，过滤，滤渣再加60％乙醇7L提取1h，过滤，合并两次提取液，浓缩至无醇味，得浓缩液约3L。浓缩液经AB-8大孔吸附树脂柱，先用5L水洗脱，再用7L 60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，浓缩至150ml，缓慢加到450ml水中，过滤，浓缩，得干燥固体粉末。用松脂醇二葡萄糖苷作为对照，提取物经紫外检测木脂素成分含量为51％，经HPLC检测松脂醇二葡萄糖苷含量为3.5％。

实施例2和实施例3所得到的杜仲木脂素提取物分别用于抗心血管重塑的试验，得出它们都可以通过抑制肾素-血管紧张素系统(RAS系统)抗心血管重塑。杜仲木脂素提取物具有抗氧化、直接抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的药理作用，并且可以通过这些作用抗心血管重塑。

实施例4

杜仲树皮(去外皮)切碎后，用65％的乙醇回流提取1h，过滤，提取液浓缩。经过HPD100大孔树脂吸附后，水洗3倍柱体积，20％乙醇洗2倍柱体积，45％乙醇洗2倍柱体积，45％乙醇洗脱液收集并浓缩，冻干，得到提取物粉末。取粉末60g，加入微晶纤维素230g，PVP10g，混匀，加入乙醇适量制软材，制粒，烘干，整粒，加少量硬脂酸镁，压片，制成1000片。

Claims (1)

1.杜仲木脂素提取物在制备抗心血管重塑药物上的应用，其特征在于：所述的杜仲木脂素提取物是以杜仲为原料提取制备而成，用于制备抗心血管重塑的药物；所述的杜仲木脂素提取物是由以下方法制备得到：1)中药杜仲皮去外皮后，切成3-5cm的小段；用40-95％的含水乙醇溶液加热回流提取2次，每次1-2h，提取液减压浓缩至0.5-1.5倍药材量体积；2)将浓缩的药液通过大孔吸附树脂柱进行有效成分富集，依次用水，15-25％甲醇或乙醇，45-55％甲醇或乙醇溶液洗脱；3)收集45-55％甲醇或乙醇洗脱液，浓缩，干燥即得。

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