CN106389407B - 茜草活性成分及其组合物、应用 - Google Patents
茜草活性成分及其组合物、应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106389407B CN106389407B CN201610786530.2A CN201610786530A CN106389407B CN 106389407 B CN106389407 B CN 106389407B CN 201610786530 A CN201610786530 A CN 201610786530A CN 106389407 B CN106389407 B CN 106389407B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- madder
- rubimaillin
- purpurin
- active ingredient
- ingredient compositions
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
- A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及中药技术领域,特别涉及茜草活性成分及其组合物、应用。本发明提供了一种具有解热抗炎作用的茜草活性成分及组合物,本发明采用乙醇提取,乙酸乙酯萃取,硅胶柱分离,得到茜草活性成分组合物。本发明还提供了上述的具有解热抗炎活性的药物组合物在作为制备治疗发热、炎症的药物中的应用。本发明提供的茜草活性成分及组合物具有解热抗炎作用的茜草活性成分组合物的组分之间具有良好的协同解热抗炎作用,能产生比单体成分更好的药效,具有良好的临床用药开发前景。
Description
技术领域
本发明涉及中药技术领域,特别涉及茜草活性成分及其组合物、应用。
背景技术
目前,临床上的解热药物主要包括非甾体类抗炎药和类固醇解热药。前者包括如水杨酸类、苯胺类、P比哩酮类以及其他抗炎有机酸类,这些药物共同的作用机制是通过抑制环氧化酶,减少前列腺素(prostaglandin,PG)合成,使体温调节中枢的SP恢复正常而产生解热作用,但是这些药物同时抑制了胃粘膜PG的合成,增加了胃酸分泌,削弱了屏障作用,导致胃肠道的不良反应,甚至引起胃粘膜损伤严重出现胃、十二指肠出血和溃病。传统中药由于其成分多,可能涉及多作用靶点发挥解热作用,且研究表明其降温作用稳定而持久。临床上,中药的解热抗炎药物大多为复方,由于其成分复杂,很难阐明其物质基础及作用机制,所以,从具有解热药效的单一药材入手,阐明其发挥作用的部位,进而寻找有效的成分,为开发成分明确、质量可控、安全有效的解热抗炎药物具有重要的意义,为临床用药提供更广泛的选择。
茜草为茜草科植物茜草(Rubia cordifolia L.)的干燥根和根茎。茜草多年生攀援草本,根数条至数十条丛生,外皮紫红色或橙红色,叶四片轮生,具长柄,叶片形状变化较大,卵形、三角状卵形、宽卵形至窄卵形,浆果球形,红色后转为黑色,花期6-9月,果期8-10月。生于山坡路旁、沟沿、田边、灌丛及林缘,春、秋季采挖。茜草主产于安徽、江苏、山东、河南、山西等地。具有行血、止血、通经活络、止咳祛痰、抗风湿作用。
茜草的化学成分以蒽醌及其苷类化合物为主,包括羟基茜草素、大叶茜草素、茜草素、异茜草素等。此外还含有萘醌类、萜类、己肽类、多糖类等其他化学成分。
已有文献报道茜草的醇提取物具有较强的解热镇痛作用及抗炎作用活性(刘成立,许兰芝,陈维宁,高尔,张薇.茜草醇提物的解热镇痛作用[J].潍坊医学院学报,2002,24(1):4-5.),同时也有文献报道茜草总蒽醌具有抗炎抗风湿作用及抗炎免疫作用(冯秀香,许兰芝,高尔,陈维宁.茜草总蒽醌的解热镇痛作用[J].潍坊医学院学报,2002,24(1):6-7.),但是没有确定发挥作用的活性成分。
发明内容
有鉴于此,本发明提供茜草活性成分及其组合物、应用。该茜草活性成分组合物成分明确、质量可控、疗效确切。该茜草活性成分及组合物具有解热抗炎活性,可以制备制备治疗发热、炎症的药物。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了羟基茜草素和/或大叶茜草素在制备前列腺素E2(PGE2)的抑制剂中的应用。
本发明还提供了羟基茜草素和/或大叶茜草素在制备预防和/或治疗抗炎的药物中的应用。
本发明还提供了羟基茜草素和/或大叶茜草素在制备预防和/或治疗解热的药物中的应用。
在本发明的一些具体实施方案中,所述羟基茜草素和/或大叶茜草素的有效剂量为3.094~12.375μg/(0.4×105个cell/mL)。
在本发明的一些具体实施方案中,所述羟基茜草素和/或大叶茜草素的有效剂量为20~80mg/kg。
在本发明的一些具体实施方案中,所述羟基茜草素与所述大叶茜草素的质量比为1:(0.5~5)。
本发明还提供了一种茜草活性成分组合物,该组合物含有羟基茜草素和大叶茜草素,且两个活性成分质量总和>90%,该组合物中羟基茜草素和大叶茜草素的重量比值为1:(0.5~5)。
本发明还提供了所述的茜草活性成分组合物的制备方法,包括如下步骤:
步骤1:取茜草经乙醇提取获得稀浸膏;
步骤2:将步骤1制得的所述稀浸膏经有机溶剂萃取,收集萃取液,减压回收有机溶剂、干燥,获得浸膏;
步骤3:将步骤2制得的所述浸膏经柱色谱分离,以二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱,收集洗脱液,减压浓缩后,经HPLC检测,分别收集羟基茜草素和大叶茜草素流份,分别获得羟基茜草素和大叶茜草素;
步骤4:将步骤3制得的羟基茜草素和大叶茜草素混合,得茜草活性成分组合物。
作为优选,步骤1中乙醇的体积浓度为60%~95%。
作为优选,步骤2中所述有机溶剂为乙酸乙酯。
作为优选,步骤3中所述二氯甲烷和甲醇的混合溶剂中二氯甲烷和甲醇的体积比为1:(0.5~2)。
在本发明的一些具体实施方案中,所述HPLC检测色谱条件为:Zorbax Eclipseplus C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为0.2%的磷酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱:0-30min,55%-85%乙腈;30-32min,85%-100%乙腈;32-35min,100%乙腈;流速1.0ml·min-1;进样量10ul,检测波长276nm;柱温30℃。
本发明还提供了一种中药制剂,由所述的茜草活性成分组合物或所述的制备方法制得的茜草活性成分组合物与药学上可接受的载体制成。
在本发明的一些具体实施方案中,所述中药制剂的剂型包括注射剂、片剂、栓剂、软膏剂、凝胶剂、丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂和合剂。
本发明通过体外抗炎实验表明,该茜草活性成分组合物在25.00μg/ml时,对小鼠巨噬细胞的抑制率分别为96.38%,显著抑制前列腺素(prostaglandin,PGE2)的活性,显示出较强的抗炎作用。
通过体内解热实验研究表明,茜草活性成分组合物在40mg/kg时,对内毒素致发热家兔有一定的解热作用,茜草活性成分组合物可以显著降低内毒素致发热家兔生物体温,显示出较强的解热作用。
该茜草活性成分组合物成分明确、质量可控、疗效确切。该茜草活性成分及组合物具有解热抗炎活性,可以制备治疗发热、炎症的药物。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示本发明实施例5中羟基茜草素标准品HPLC检测图谱;
图2示本发明实施例5中羟基茜草素含量测定的的HPLC检测图谱;
图3示本发明实施例5中大叶茜草素标准品HPLC检测图谱;
图4示本发明实施例5中大叶茜草素含量测定的HPLC检测图谱;
图5示本发明实施例6中羟基茜草素含量测定的的HPLC检测图谱;
图6示为本发明实施例6中大叶茜草素含量测定的HPLC检测图谱;
图7示本发明实施例7中羟基茜草素含量测定的的HPLC检测图谱;
图8示本发明实施例7中大叶茜草素含量测定的HPLC检测图谱;
具体实施方式
本发明公开了茜草活性成分及其组合物、应用,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
本发明提供一种茜草活性成分组合物,该组合物含有羟基茜草素和大叶茜草素,且两个活性成分重量总含大于90%,该组合物中羟基茜草素和大叶茜草素的重量比值为1:0.5-5。
本发明还提供上述茜草活性成分组合物的制备方法,包括下列步骤:
步骤a:将茜草用乙醇提取得稀浸膏。
步骤b:将步骤a得到的稀浸膏用第一有机溶剂萃取,合并萃取液,减压回收有机溶剂,干燥,即得浸膏;
步骤c:步骤b中得到的浸膏进行柱色谱分离,以二氯甲烷、甲醇混合溶剂进行洗脱,收集洗脱液,减压浓缩后,经HPLC检测,合并流份得羟基茜草素和大叶茜草素;
步骤d:将步骤c制得的羟基茜草素和大叶茜草素按照一定重量比混合,得茜草活性成分组合物。本发明还提供了茜草活性成分组合物在制备治疗抗炎解热的药物中的应用。
本发明还提供了茜草活性成分组合物在制备治疗抗炎解热的药物中的应用。
本发明还提供了一种中药制剂,由所述茜草活性成分组合物与药学上可接受的辅料制成。
本发明以茜草药材为原料,所述茜草药材可以为本领域技术人员公知的茜草药材,本发明对其来源并无特殊限制。
本发明首先用乙醇对茜草药材进行加热回流提取,过滤后滤液浓缩回收乙醇得稀浸膏。本发明中,所述乙醇优选为60%-90%乙醇(体积分数),更优选为70%-85%乙醇;所述茜草药材重量与乙醇体积的比例,以g/mL计,优选为1:(5-10),更优选为1:(7-9)所述回流提取优选进行2~3次。
本发明对上述浓缩的方法并无特殊限定,可以为本领域公知的浓缩方法,本发明优选采用减压的方法进行浓缩,除去溶剂得到稀浸膏。
得到稀浸膏后,然后用乙酸乙酯萃取,回收乙酸乙酯得浸膏;本发明中,所述稀浸膏重量与乙酸乙酯的体积比,以g/mL计,优选为1:(5-15),所述萃取的次数优选为3~4次。
然后,将得到的浸膏进行柱色谱分离,本发明优选采用硅胶柱,以二氯甲烷、甲醇混合溶剂进行洗脱,所述二氯甲烷、甲醇的体积比为1:(0.5-2),收集洗脱液。
优选的,所述步骤d中所述重量比为1:0.5~5。
通过本发明实施例可知,本发明所述的组合物具有抗炎解热活性。
本发明还提供了一种中药制剂,由所述茜草活性成分组合物与药学上可接受的载体制成。
优选的,所述中药制剂的剂型包括注射剂、片剂、栓剂、软膏剂、凝胶剂、丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂和合剂。
在本发明中,所述药学上可接受的载体可根据药剂学领域的常用辅料,根据剂型和实际情况进行恰当选择,例如常用的辅料有淀粉、低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、硬脂酸镁、淀粉浆、蔗糖、糊精、羧甲基淀粉钠、滑石粉、聚山梨酯、聚乙二醇、注射用大豆磷脂和注射用甘油等。
本发明通过体外抗炎实验表明,该茜草活性成分组合物在25.00μg/ml时,对小鼠巨噬细胞的抑制率分别为96.38%,显著抑制前列腺素(prostaglandin,PGE2)的活性,显示出较强的抗炎作用。
通过体内解热实验研究表明,茜草活性成分组合物在40mg/kg时,对内毒素致发热家兔有一定的解热作用,茜草活性成分组合物可以显著降低内毒素致发热家兔生物体温,显示出较强的解热作用。
本发明提供的茜草活性成分及其组合物、应用中所用原料及试剂均可由市场购得。
下面结合实施例,进一步阐述本发明:
实施例1提取物浸膏的制备
取茜草科植物茜草的干燥根或根茎5kg,加5倍量的85%乙醇加热回流提取3次,每次2h。合并乙醇回流提取液,过滤后滤液浓缩回收乙醇得到浸膏625.3g。
实施例2提取物浸膏的制备
取茜草科植物茜草的干燥根或根茎5kg,加7倍量的70%乙醇加热回流提取2次,每次2h。合并乙醇回流提取液,过滤后滤液浓缩回收乙醇得到浸膏611.4g。
实施例3提取物浸膏的制备
取茜草科植物茜草的干燥根或根茎5kg,加9倍量的90%乙醇加热回流提取3次,每次2h。合并乙醇回流提取液,过滤后滤液浓缩回收乙醇得到浸膏619.7g。
实施例4提取物浸膏的制备
取茜草科植物茜草的干燥根或根茎5kg,加10倍量的60%乙醇加热回流提取3次,每次2h。合并乙醇回流提取液,过滤后滤液浓缩回收乙醇得到浸膏613.3g。
实施例5羟基茜草素和大叶茜草素的制备
称取实施例1浸膏100g,加10倍量的乙酸乙酯振摇萃取4次,合并萃取液,回收乙酸乙酯得浸膏28.91g,上硅胶柱(50g)以二氯甲烷-甲醇(1:1)洗脱,100ml为一个流份,以HPLC检测,收集第45~96号流份,减压回收洗脱剂,得红色粉末1.217g,鉴定为羟基茜草素,纯度为95.18%(图1-2);以HPLC检测,收集第108-164号流份,减压回收洗脱剂,得淡黄色结晶0.941g,鉴定为大叶茜草素,纯度为98.26%(图3-4)。
实施例6羟基茜草素和大叶茜草素的制备
称取实施例2浸膏100g,加5倍量的乙酸乙酯振摇萃取3次,合并萃取液,回收乙酸乙酯得浸膏29.54g,上硅胶柱(50g)以二氯甲烷-甲醇(1:2)洗脱,100ml为一个流份,以HPLC检测,收集第34~75号流份,减压回收洗脱剂,得红色粉末1.185g,按照下述纯度测定方法,鉴定为羟基茜草素,纯度为95.72%(图5,标准品谱图见图1);以HPLC检测,收集第94~149号流份,减压回收洗脱剂,得淡黄色结晶1.045g,按照下述纯度测定方法,鉴定为大叶茜草素,纯度为98.30%(图6,标准品谱图见图2)。
实施例7大叶茜草素和羟基茜草素的制备
称取实施例2浸膏100g,加15倍量的乙酸乙酯振摇萃取3次,合并萃取液,回收乙酸乙酯得浸膏29.54g,上硅胶柱(50g)以二氯甲烷-甲醇(1:0.5)洗脱,100ml为一个流份,以HPLC检测,收集第58~97号流份,减压回收洗脱剂,得红色粉末1.247g,按照下述纯度测定方法,鉴定为羟基茜草素,纯度为96.81%(图7,标准品谱图见图1);以HPLC检测,收集第94~149号流份,减压回收洗脱剂,得淡黄色结晶1.124g,按照下述纯度测定方法,鉴定为大叶茜草素,纯度为98.18%(图8,标准品谱图见图2)。
实施例8茜草活性成分组合物制备
将实施例5制得的获得的大叶茜草素和羟基茜草素按照1:1混合,得到茜草提取组合物,大叶茜草素和羟基茜草素质量总和为96.31%。
实施例9茜草活性成分组合物制备
将实施例5制得的获得的大叶茜草素和羟基茜草素按照1:0.5混合,得到茜草提取组合物,大叶茜草素和羟基茜草素质量总和为96.61%。
实施例10茜草活性成分组合物制备
将实施例6制得的获得的大叶茜草素和羟基茜草素按照1:3混合,得到茜草提取组合物,大叶茜草素和羟基茜草素质量总和为95.87%。。
实施例11茜草活性成分组合物制备
将实施例7制得的获得的大叶茜草素和羟基茜草素按照1:5混合,得到茜草提取组合物,大叶茜草素和羟基茜草素质量总和为96.83%。。
实施例12本发明的纯度测定研究方法
1.仪器与试剂
Agilent1100HPLC,美国安捷伦公司,包括在线脱气机,四元泵,高性能自动进样器,柱温箱,二极管阵列检测器;METTLER XS205微量分析天平(南京皓海科学仪器仪表有限公司);甲醇,磷酸均为色谱纯,重蒸水自制。
2.色谱条件
Zorbax Eclipse plus C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为0.2%的磷酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱:0-30min,55%-85%乙腈;30-32min,85%-100%乙腈;32-35min,100%乙腈;流速1.0ml·min-1;进样量10ul,检测波长276nm;柱温30℃。
3.供试品溶液的制备
取待测成分适量,精密称定,加甲醇制成每ml含2mg的溶液。
4.纯度测定方法
采用HPLC面积归一化法测定待测成分的纯度:在上述测定条件下,精密吸取供试品溶液10ul,注入液相色谱仪,记录色谱图。测量待测成分色谱峰面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积,计算待测成分色谱峰面积占总峰面积的百分率。
实施例13片剂
取实施例5制备的茜草活性成分组合物12.2g,研成细粉,加入10%淀粉糊约8g,药用淀粉7g,微粉硅胶0.8g,混合,14目筛制粒,于80℃干燥,整粒,加入硬脂酸镁0.05g,混匀,压制成100片,即得。每片重0.2g,口服,每次1片,一日三次。
实施例14硬胶囊
取实施例6制备的茜草活性成分组合物16g,研成细粉,药用淀粉3.5g,硬脂酸镁0.01g,混合均匀,过筛,装入胶囊,制成100粒,即得。每粒内容物重0.2g,口服,每次1粒,一日两次。
实施例15软胶囊
取实施例7制备的茜草活性成分组合物12.2g,加入丙二醇0.2g,卵磷脂0.9g,大豆油18g,振动磨超微20分钟,使混匀,制成软胶囊100粒,即得。每粒内容物重0.3g,口服,每次1粒,一日三次。
实施例16颗粒剂
取实施例8制备的茜草活性成分组合物13.8g,研成细粉,加入糊精25g,乳糖458g,混合均匀,制粒,于80℃干燥,整粒,分装,制100包,即得。每包重5g,口服,每次1包,一日两次。
实施例17缓释片
取实施例5制备的茜草活性成分组合物24.4g,研成细粉,过100目筛,HPMC10.3g,乳糖16g,十二烷基硫酸钠1g,过100目筛,混合均匀,加入2%聚维酮(95%乙醇)黏合剂制软材,过20目筛制粒,于50℃干燥,过18目筛整粒,干颗粒采用外加法加入2%硬脂酸镁,混匀,压片,制成缓释片100片,即得。每片重0.5g。口服,每次1片,一日一次。
实施例18滴丸
取实施例6制备的茜草活性成分组合物12.2g,研成细粉,另取24.8g聚乙二醇4000加热熔融,加入水翁花提取物,振动磨超微20分钟,使混合均匀,滴制成滴丸,即得。每丸重0.35g,口服,每次1粒,一日三次。
实施例19注射剂
取实施例7制备的茜草活性成分组合物12.2g,研成细粉,加入β环糊精4.5g,蔗糖500g,纯水适量(约390g)搅拌加热溶解,煮沸10分钟,稍冷后加入10%(W/V)尼泊金乙酯乙醇溶液搅匀,用水调整至100ml,过滤,分装,灭菌,即得。每支10ml。口服,每次1支,一日三次。
实施例20药效实验部分
实验一:茜草活性成分组合物体外抗炎活性
1.实验材料
羟基茜草素和大叶茜草素(根据实施例5的方法制备)
茜草活性成分组合物(根据实施例8的方法制备)
细胞株:小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,来源于中医科学院,由委托方江苏康缘药业股份有限公司提供。
DMEM/HIGH GLUCOSE细胞培养基,HyClone,批号:NAH1441
胎牛血清,GEMINI,批号:A79E00G
二甲基亚砜,阿拉丁,批号:40399
胰酶细胞消化液(0.25%Trypsin-EDTA),Gibco,批号:1697785
前列腺素E2(PGE2)ELISA检测试剂盒,Enzo Life Sciences,批号:06241415D
2、实验仪器:
Thermo Scientific BB15型CO2细胞培养箱,美国热电
Nikon TS100型倒置显微镜
超净工作台,AIRTECH,型号:A10051560
ZW—A型微量振荡器,常州国华仪器有限公司
Therom VarioSkan Flash多功能读数仪
移液器,Therom公司
离心机,湘仪,型号:L530
3、试验方法
用Hank’s液将实施例5制备的羟基茜草素、大叶茜草素;实施例8制备的茜草活性成分组合物配制成浓度分别为25.00ug/ml的药液。将细胞以0.25%胰酶(含0.02%EDTA)消化,含10%FBS的DMEM培养基调整细胞密度为1×105个/ml,均匀接种至24孔板,每孔400μl,种板后放入培养箱培养24小时。在96孔细胞培养板的小鼠巨噬细胞系RAW 264.7单层细胞中,分别加入不同质量浓度的复方金莲花提取物,置37℃、5%CO2培养箱中培养96h,观察细胞病变。培养24小时后,取出24孔板,吸去上清液,加入无血清的DMEM培养基配制的含药培养基,分为以下几组:
1组:空白对照组:每孔加入495μl无血清的DMEM培养基;
2组:溶媒组:每孔加入495μl含千分之一DMSO的无血清DMEM培养基;
3组:模型组:每孔加入495μl无血清的DMEM培养基;
4组:羟基茜草素组:每孔加495μl含6.25ug/ml、12.50ug/ml、25ug/ml羟基茜草素的培养基;
5组:大叶茜草素组:每孔加495μl含6.25ug/ml、12.50ug/ml、25ug/ml大叶茜草素的培养基;
6组:茜草活性成分组合物:每孔加495μl含6.25ug/ml、12.50ug/ml、25ug/ml组合物的培养基;
同时设6个复孔,加药完毕后将24孔板放入CO2细胞培养箱培养1小时。1小时后,除空白对照和溶剂对照组外,其余每孔加入5μl的100μg/ml的LPS(终浓度为1μg/ml),溶剂对照组每孔加入5μl的无血清的DMEM培养基,加药完毕后将24孔板放入CO2细胞培养箱继续培养18小时。18小时后收集细胞培养液,按试剂盒说明,用ELISA法检测细胞上清中PGE2的含量。
3、实验结果
所有计量资料采用x±s表示,采用下列公式计算抑制率:
表1茜草活性成分及组合物对小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞上清PGE2的影响(x±s,n=6)
各组细胞病变如表1所示,结果表明,实施例5制备的羟基茜草素、大叶茜草素以及实施例8制备的茜草活性成分组合物分别在25.00μg/ml时,对小鼠巨噬细胞的抑制率分别为82.33%、74.81%及96.38%,茜草活性成分组合物的作用强于单个化合物,茜草活性成分组合物可以显著抑制PGE2的活性,显示出较强的抗炎作用。
取实施例6至7制备的羟基茜草素、大叶茜草素进行上述实验,实验结果与实施例5制备的羟基茜草素、大叶茜草素的结果相近,与实施例5制备的羟基茜草素、大叶茜草素的结果无显著差异(P>0.05)。
取实施例9~11制备的茜草活性成分组合物进行上述实验,实验结果分别与以及实施例8制备的茜草活性成分组合物的结果相近,与实施例8制备的茜草活性成分组合物的结果无显著差异(P>0.05)。
实验二 茜草活性成分组合物体内解热实验研究
1、实验材料
羟基茜草素和大叶茜草素(根据实施例5的方法制备)
茜草活性组合物(根据实施例8的方法制备)
对乙酰氨基酚片,由昆明振业制药厂有限公司提供,批号:20140901
内毒素:10mg/瓶,由sigma公司提供,批号:044M4004V。
健康新西兰白兔,50只,雄性,体重2.0±0.2kg,清洁级,江苏省南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供,合格证号:201511853。
2、实验仪器
智能热原仪,ZRY-2D,天津市天大天发科技有限公司。
3、实验方法
取健康新西兰家兔50只,每日适应性测肛温1次,连续2天,于第3天进行实验,先进行预选兔,持续监测每只家兔体温变化,15min测一次,连续测四次,取平均体温作为基础体温,选取体温在38.0-39.5℃之间的家兔,且体温波动在0.4℃之内的家兔进行正式试验,选取体温合格的家兔,耳缘静脉注射0.25ug/ml的内毒素生理盐水溶液,注射体积1ml/kg;注射后持续监测家兔体温,注射内毒素90min内,体温上升超过基础体温1.0℃的家兔,即为造模成功。
所有家兔均按上述方法造模,将成模家兔按体温变化随机分成5组,即模型组(1组)、对乙酰氨基酚组(2组,70mg/kg)、羟基茜草素组(3组)低、中、高剂量组(20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg)、大叶茜草素组(4组)低、中、高剂量组(20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg),茜草活性成分组合物(5组)低、中、高剂量组(20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg),每组8只。分组后立即灌胃给药,模型组给予等容积的蒸馏水,2组给予70mg/kg对乙酰氨基酚混悬液,3组、4组、5组的低、中、高剂量组分别给予药物20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg。。各组给药容积为10ml/kg。给药后测定30min、60min、120min、180min、240min、300min、360min时间点的家兔体温。
4、实验结果
表2茜草活性成分及组合物对内毒素致家兔发热模型体温的影响(x±s,n=8)
与模型组比较P*<0.05,P**<0.01.
家兔体温变化如表2所示,结果表明,羟基茜草素、大叶茜草素、茜草活性成分组合物分别在40mg/kg时,对内毒素致发热家兔有一定的解热作用,茜草活性成分组合物的作用强于单个化合物,茜草活性成分组合物可以显著降低内毒素致发热家兔生物体温,显示出较强的解热作用。
取实施例6至7制备的羟基茜草素、大叶茜草素进行上述实验,实验结果与实施例5制备的羟基茜草素、大叶茜草素的结果相近,与实施例5制备的羟基茜草素、大叶茜草素的结果无显著差异(P>0.05)。
取实施例9~11制备的茜草活性成分组合物进行上述实验,实验结果分别与以及实施例8制备的茜草活性成分组合物的结果相近,与实施例8制备的茜草活性成分组合物的结果无显著差异(P>0.05)。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.羟基茜草素和大叶茜草素在制备抗炎的药物中的应用;所述大叶茜草素与所述羟基茜草素的质量比为1:1、1:0.5、1:3或1:5。
2.羟基茜草素和大叶茜草素在制备解热的药物中的应用;所述大叶茜草素与所述羟基茜草素的质量比为1:1、1:0.5、1:3或1:5。
3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述羟基茜草素和大叶茜草素的有效剂量为20~80mg/kg。
4.一种茜草活性成分组合物,其特征在于,该组合物含有羟基茜草素和大叶茜草素,且两个活性成分质量总和>90%,该组合物中所述大叶茜草素与所述羟基茜草素的质量比为1:1、1:0.5、1:3或1:5。
5.根据权利要求4所述的茜草活性成分组合物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤1:取茜草经乙醇提取获得稀浸膏;
步骤2:将步骤1制得的所述稀浸膏经有机溶剂萃取,收集萃取液,减压回收有机溶剂、干燥,获得浸膏;
步骤3:将步骤2制得的所述浸膏经柱色谱分离,以二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱,收集洗脱液,减压浓缩后,经HPLC检测,分别收集羟基茜草素和大叶茜草素流份,分别获得羟基茜草素和大叶茜草素;
步骤4:将步骤3制得的羟基茜草素和大叶茜草素混合,得茜草活性成分组合物。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,步骤1中乙醇的体积浓度为60%~90%;
步骤2中所述有机溶剂为乙酸乙酯;
步骤3中所述二氯甲烷和甲醇的混合溶剂中二氯甲烷和甲醇的体积比为1:(0.5~2)。
7.一种中药制剂,由权利要求4所述的茜草活性成分组合物或如权利要求5或6所述的制备方法制得的茜草活性成分组合物与药学上可接受的载体制成。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610786530.2A CN106389407B (zh) | 2016-08-29 | 2016-08-29 | 茜草活性成分及其组合物、应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610786530.2A CN106389407B (zh) | 2016-08-29 | 2016-08-29 | 茜草活性成分及其组合物、应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106389407A CN106389407A (zh) | 2017-02-15 |
CN106389407B true CN106389407B (zh) | 2019-07-12 |
Family
ID=58001692
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610786530.2A Active CN106389407B (zh) | 2016-08-29 | 2016-08-29 | 茜草活性成分及其组合物、应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106389407B (zh) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109223739B (zh) * | 2018-11-12 | 2020-11-10 | 长春理工大学 | 一种组合物及其制备方法和应用 |
CN110964341A (zh) * | 2019-11-29 | 2020-04-07 | 安徽捷融数据科技有限公司 | 一种用于棉制品的高水洗牢度天然染料的制备方法 |
CN115068530B (zh) * | 2022-07-01 | 2023-09-15 | 东营北方铭峰医疗器械有限公司 | 一种外敷用茜草根液及其制备方法 |
CN115141172B (zh) * | 2022-07-27 | 2024-02-23 | 江阴天江药业有限公司 | 一种从茜草中制备活性单体大叶茜草素的方法 |
-
2016
- 2016-08-29 CN CN201610786530.2A patent/CN106389407B/zh active Active
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
Gil-Saeng Jeong等.Neuroprotective and anti-inflammatory effects of mollugin via up-regulation of heme oxygenase-1 in mouse hippocampal and microglial cells.《European Journal of Pharmacology》.2011,226-234. * |
In vitro inhibition of cyclooxygenase-2 catalyzed prostaglandin E2 production by plant-derived quinone compounds;Landa 等;《Planta Medica》;20090820;1059 * |
Landa P等.In vitro inhibition of cyclooxygenase-2 catalyzed prostaglandin E2 production by plant-derived quinone compounds.《Planta Medica》.2009,1059. * |
Neuroprotective and anti-inflammatory effects of mollugin via up-regulation of heme oxygenase-1 in mouse hippocampal and microglial cells;Gil-Saeng Jeong等;《European Journal of Pharmacology》;20110113;226-234 * |
中药茜草乙酸乙酯萃取组分的分离与鉴定及其生物活性研究;肖烽;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20140415;3-7,16-19 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106389407A (zh) | 2017-02-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106389407B (zh) | 茜草活性成分及其组合物、应用 | |
CN104274520B (zh) | 一种中药组合物及其制剂 | |
CN101721488A (zh) | 一种治疗肝病的药物组合物及其制备方法 | |
CN103599144B (zh) | 蜘蛛香环氧环烯醚萜酯有效部位的制备方法 | |
CN104622865A (zh) | 巨大戟二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
CN101274035B (zh) | 具有活血破瘀、通经消癥的组合物及制法和检测方法 | |
CN102357180B (zh) | 一种治疗癌症的中药组合物及其制备方法和用途 | |
CN103550237B (zh) | 一种茜草活性成分组合物及其在医药上的应用 | |
CN108159160B (zh) | 一种治疗结直肠癌的联合用药物 | |
CN101721434B (zh) | 一种阿里红有效组分及其制备方法和用途 | |
CN101933996A (zh) | 一种具有清热泻火解毒作用的中药组合物及其制备方法和检测方法 | |
CN101152234B (zh) | 杜仲木脂素及其提取物在抗心血管重塑上的应用 | |
CN104383547B (zh) | 天山雪莲提取物磷脂复合物、口腔崩解片及其制备方法 | |
CN103446280A (zh) | 一种三七提取物、川芎提取物、红花提取物、葛根提取物与山楂提取物的组合药物及其制剂、应用 | |
CN106176698B (zh) | 水翁花提取物及其制备方法、应用 | |
CN101974011A (zh) | 一种具有药用活性的新化合物灯盏细辛酸甲酯 | |
CN101284030B (zh) | 毛冬青药材、提取物或毛冬青制剂的质量控制方法 | |
CN104189346A (zh) | 一种新型促胃肠动力的药物组合物及其制备方法 | |
CN103505462A (zh) | 20(s)-原人参二醇的新用途 | |
CN104758333B (zh) | 徐长卿c21甾体提取物及其制备方法和用途 | |
CN103694248B (zh) | 从藤黄中提取的抗肿瘤化合物及其制备方法与用途 | |
CN113876791B (zh) | 一种预防或治疗心肌损伤的药物组合物 | |
CN114404487B (zh) | 黄根或其提取物在制备用于治疗胶质瘤的药物中的应用 | |
CN106619608B (zh) | 治疗系统性红斑狼疮的药物组合物 | |
CN102600175A (zh) | 熊果酸在治疗肿瘤疾病药物中的用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |