CN101274035B - 具有活血破瘀、通经消癥的组合物及制法和检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有活血破瘀，通经消癥作用的药物组合物及制备方法和质量控制方法。本发明的药物组合物原料药组成为：熟大黄、土鳖虫(炒)、水蛭(制)、蛴螬(炒)、干漆(煅)、红花、苦杏仁(炒)、黄芩、地黄、白芍组成，制备方法为：以上各味，粉碎成细粉，过筛，混匀；每100重量份粉末用炼蜜30～45重量份加适量的水泛丸，干燥，制成水蜜丸，即得。本发明采用高效液相色谱法对大黄素进行含量测定。本发明药物组合物具有很好活血破瘀，通经消癥作用。

Description

具有活血破瘀、通经消癥的组合物及制法和检测方法

技术领域

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和检测方法，特别是涉及一种具有活血破瘀、通经消癥作用的中药组合物及其制备方法和检测方法。

背景技术

中医妇科是运用中医学的理论研究妇女生理、病理特点和防治妇女特有疾病的一门临床学科。人体脏腑经络气血的活动规律，男女基本相同。但妇女在脏器方面有胞宫，在生理上有月经、胎孕、产育和哺乳等特有的功能，必然在病理上就会发生经、带、胎、产、杂等特有的疾病。中医妇科学传统研究的具体疾病范围，包括月经不调、崩漏、带下、子嗣、妊娠、临产、产后、乳疾、癥瘕、前阴诸疾及杂病等项。对于一些西医学无法解析的病症，治疗效果尤其明显。本发明解决了上述妇女疾病的中药组合物，具有活血破瘀，通经消癥的作用。

发明内容

本发明目的在于提供一种具有活血破瘀，通经消癥作用的中药组合物；

本发明目的还在于提供一种具有活血破瘀，通经消癥作用的中药组合物制备方法；

本发明目的还在于提供一种具有活血破瘀，通经消癥作用的中药组合物的检测方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明所述的一种具有活血破瘀，通经消癥作用的中药组合物是由如下重量比的原料药制成的：

熟大黄  200-500重量份  土鳖虫(炒)  20-50重量份

水蛭(制)    30-90重量份     蛴螬(炒) 30-90重量份

干漆(煅)    15-60重量份     红花     60-260重量份

苦杏仁(炒)  60-260重量份    黄芩     30-100重量份

地黄        200-500重量份   白芍     60-260重量份

本发明所述的一种具有活血破瘀，通经消癥作用的中药组合物可由如下重量比的原料药制成的：

熟大黄    200-500重量份 土鳖虫(炒)       20-50重量份

水蛭(制)  30-90重量份   虻虫(去翅足，炒) 30-90重量份

蛴螬(炒)  30-90重量份   干漆(煅)         15-60重量份

桃仁      60-260重量份  苦杏仁(炒)       60-260重量份

黄芩      30-100重量份  地黄             200-500重量份

白芍      60-260重量份  甘草             60-150重量份

上述原料优选配比为：

熟大黄     400-500重量份        土鳖虫(炒)       40-50重量份

水蛭(制)   30-50重量份          虻虫(去翅足，炒) 60-90重量份

蛴螬(炒)   30-40重量份          干漆(煅)         40-60重量份

桃仁       180-240重量份        苦杏仁(炒)       60-100重量份

黄芩       30-50重量份          地黄             200-270重量份

白芍       60-100重量份         甘草             100-150重量份；

本发明所述的中药组合物丹剂的制备方法为：

选取原料药：

熟大黄      200-500重量份     土鳖虫(炒)     20-50重量份

水蛭(制)    30-90重量份       蛴螬(炒)       30-90重量份

干漆(煅)    15-60重量份       红花           60-260重量份

苦杏仁(炒)  60-260重量份      黄芩           30-100重量份

地黄        200-500重量份     白芍           60-260重量份

以上各味，粉碎成细粉，过筛，混匀；每100重量份粉末用炼蜜30～45重量份加适量的水泛丸，干燥，制成水蜜丸，即得。

本发明所述的组合物可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、滴丸、喷雾剂、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。

本发明药物组合物检测方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

鉴别：

(1)取本发明组合物丸剂2.5g，研细，加乙醇30-50ml，超声处理20-40分钟，滤过，取1/2的滤液，蒸干，残渣加水8-15ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热水解25-35分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取2-3次，每次10-20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材50mg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酯乙酯-甲酸(13-18∶3-9∶1-2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点；

(2)取本发明组合物丸剂2.5g，研细，加乙醇35-50ml，超声处理25-40分钟，滤过，取1/2的滤液，蒸干，残渣加水40ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2-4次，每次14-25ml，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1.5-2.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以含3-5％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4-6∶2-5∶1-2∶1-2)为展开剂，展开，取出，吹干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑；

(3)取本发明组合物丸剂1.2g，研细，加稀乙醇70-90ml，超声处理25-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水和乙醚各20-40ml使溶解，移至分液漏斗中，静置分层，弃去乙醚液，水液再用乙醚提取2-4次，每次20-40ml，弃去乙醚液，水液加水饱和的正丁醇提取2-4次，每次20-40ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干；残渣加水5ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1cm，柱高12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用30-50％乙醇40-60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加丙酮1ml使溶解，取上清夜作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液(7-9∶1-2∶3-5∶1-3)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取本发明组合物丸剂10克，研细，加水30-50毫升，醋酸乙酯30-50ml，超声振荡20-40分钟，离心分层，吸取上层液，蒸干，残渣加无水乙醇2毫升使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1克，加水20ml，乙酸乙酯20毫升，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-冰醋酸(6-8∶1-2∶1-2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸(80-90∶10-20∶0.04-0.07)为流动相；检测波长为289nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品10mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含大黄素8μg)；

供试品溶液的制备：取本发明组合物丸剂约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，称定重量，加热回流0.5-1.5小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足碱失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，置锥形瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理(功率250W，频率33kHz)8-20分钟，置水浴中加热1-2小时，立即冷却，移置分液漏斗中，加乙醚提取2-4次，每次25ml，合并乙醚液，用水15ml洗涤，弃去水液，乙醚液通过铺有适量无水硫酸钠的漏斗滤过，用少量乙醚洗涤容器与滤器，滤液低温回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明药物组合物检测方法优选如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

鉴别：

(1)取本发明组合物丸剂2.5g，研细，加乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，取1/2的滤液，蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热水解30分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次15ml，合并乙醚液，挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材50mg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酯乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点；

(2)取本发明组合物丸剂2.5g，研细，加乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，取1/2的滤液，蒸干，残渣加水40ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，吹干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑；

(3)取本发明组合物丸剂1.2g，研细，加稀乙醇80ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水和乙醚各30ml使溶解，移至分液漏斗中，静置分层，弃去乙醚液，水液再用乙醚提取3次，每次30ml，弃去乙醚液，水液加水饱和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干；残渣加水5ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1cm，柱高12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加丙酮1ml使溶解，取上清夜作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液(8∶1∶4∶1)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取本发明组合物丸剂10克，研细，加水40毫升，醋酸乙酯40ml，超声振荡30分钟，离心分层，吸取上层液，蒸干，残渣加无水乙醇2毫升使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1克，加水20ml，乙酸乙酯20毫升，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-冰醋酸(7∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定

照高效液相色谱法：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸(85∶15∶0.05)为流动相；检测波长为289nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品10mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含大黄素8μg)；

供试品溶液的制备：取本发明组合物丸剂约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足碱失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，置锥形瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理(功率250W，频率33kHz)10分钟，置水浴中加热1小时，立即冷却，移置分液漏斗中，加乙醚提取3次，每次25ml，合并乙醚液，用水15ml洗涤，弃去水液，乙醚液通过铺有适量无水硫酸钠的漏斗滤过，用少量乙醚洗涤容器与滤器，滤液低温回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明组合物具有很好的药效，相比现有制剂  表现出很好的药理效果，具有更好的活血破瘀，通经消癥作用；并且本发明所述的范围在可以实现本发明的药理效果同时，经过筛选，意外的发现，在组合物的某些范围内，有着更为突出的药理效果。

本发明所提供的中药组合物的检测方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定方法中通过对样品、供试品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行检测，并且用该方法测定的产品要相比其他方法测定的产品在药理效果上表现的更为稳定。

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

试验例1 活血化瘀作用实验

按照药物组I、药物组II与对照组的处方比例称取原料药材，按照实施例1工艺制备，与对照组比较活血化瘀作用

组方I

熟大黄          420g         土鳖虫(炒)  42g       水蛭(制)  35g

虻虫(去翅足，炒)70g          蛴螬(炒)    32g       干漆(煅)  45g

桃仁            200g         苦杏仁(炒)  70g       黄芩      35g

地黄            220g         白芍        70g       甘草      110g；

组方II

熟大黄          450g         土鳖虫(炒)    50g         水蛭(制)     50g

虻虫(去翅足，炒)80g          蛴螬(炒)      35g         干漆(煅)     50g

桃仁            200g         苦杏仁(炒)    90g         黄芩         40g

地黄            260g         白芍          90g         甘草         120g

对照组：

熟大黄          300g         土鳖虫(炒)    30g          水蛭(制)     60g

虻虫(去翅足，炒)45g          蛴螬(炒)      45g          干漆(煅)     30g

桃仁            120g         苦杏仁(炒)    120g         黄芩         60g

地黄            300g         白芍          120g         甘草         90g

(1)对血瘀大鼠血液流变学指标的影响

取Wistar大鼠80只，随机分为8组：生理盐水(N·S)对照组、模型组、本发明药物I、II的高、低剂量组及对照组前2组每日灌胃生理盐水10ml/kg，本发明药物I、II组及对照组分别10ml/kg、20ml/kg灌胃给药，每日1次，连续7天。第5天，除生理盐水组，其余各组大鼠以0.1％肾上腺素0.2ml皮下注射，共2次，间隔6小时，其间进行一次冰水冷浴刺激5分钟，造成冷凝型血瘀模型。末次给药后1小时，股静脉取血5ml，抗凝，将部分全血置于压积管中以3000rpm离心30分钟，测红细胞压积，取上层血浆测定血浆粘度，用毛细管法测全血粘度、测纤维蛋白原含量，采用细胞电泳仪测定细胞电泳时间。结果见下表：

对大鼠血液流变学指标的影响

注：*N·S组比较P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较△P＜0.05，△△P＜0.01

#对照组与药物组I、II相比P＜0.01。

结果表明：本发明药物组合物I、II与对照药物组的临床用量均可显著改善血瘀大鼠的红细胞压积、血浆粘度、全血粘度、纤维蛋白原量及红细胞电泳时间，并呈量效关系。本发明药物组合物I、II与对照药物组相比有显著差异(P＜0.01)，且药物II组优于药物I组。

(2)对大鼠体外血栓形成及血小板粘附率的影响

取大鼠70只，随机分成生理盐水组、本发明药物I、II的高、低剂量组及阳性对照组，前2组每日灌胃生理盐水10ml/kg，本发明药物I、II组，对照组分别10ml/kg、20ml/kg灌胃给药，每日1次，连续7天。末次给药后1小时，股静脉取血1.8ml注入硅化胶管内，于体外血栓形成仪的旋转盘上以17rpm旋转15分钟，取下胶管，倾倒出血液及血栓于滤纸上，测定血栓长度及湿重，再置64℃干燥箱内，干燥20分钟后称干重.另将1ml血液注入粘附球瓶内，同上旋转，室温37℃下测旋转前后血小板数，计算粘附率(旋转前血小板数旋转后血小板数/旋转前血小板数)。结果见下表：

对大鼠体外血栓形成及血小板粘附率的影响

注：*N·S组比较P＜0.05，**P＜0.01；对照组与药物组I、II相比#P＜0.05，##P＜0.01。

结果表明：本发明药物组合物I、II与对照药物组的临床用量均能够减轻大鼠体外血栓湿重、干重，使血栓长度缩短，抑制血小板粘附，并呈量效关系。本发明药物组合物I、II与对照药物组相比有显著差异(P＜0.01)，且药物II组优于药物I组。

(3)本发明药物对正常大鼠血清中雌激素(E2)和孕酮(P)含量的影响

取健康未成年雌性SD大鼠70只，按体质量随机分为7组，每组10只。空白对照组：以等量生理盐水灌胃；本发明药物I、II及对照药物组分别给予低、高剂量10g/kg、20g/kg的剂量；对照组及本发明药物各组连续灌胃给药14天。于第14天给药1小时后，眼眶后静脉丛取血，3000r/min离心15min取血清，测定血清中雌二醇(E2)和孕酮(P)的含量。结果见下表：

对正常大鼠血清中雌激素和孕酮含量的影响

组别	剂量g.kg-1	E2(pg.mL-1)	P(ng.mL-1)
				N·S组	-	15.00±2.51	14.45±11.0
对照组	10	17.9±3.10*	21.53±12.5**
				对照组	20	19.8±2.87**	22.42±13.2**
本发明药物I组	10	19.7±2.80**#	22.10±10.1**#
				本发明药物I组	20	21.2±5.53**#	28.26±10.2*##
本发明药物II组	10	24.3±4.65**##	23.52±11.3**#
				本发明药物II组	20	27.2±5.60**##	30.15±13.6**##

注：*N·S组比较P＜0.05，**P＜0.01；对照组与药物组I、II相比#P＜0.05，##P＜0.01。

结果表明：本发明药物I、II及对照药物组高、低剂量组均能提高大鼠血清中的雌二醇及血清中孕酮含量，其中本发明药物I、II组与对照组相同剂量组比较有显著性差异(P＜0.01)；且本发明药物II相同剂量组优于本发明药物I组。提示本发明药物I、II组及对照组能增强垂体一肾上腺皮质一卵巢功能轴系统活性，具有一定的改善神经内分泌的作用。

(4)本发明药物对小鼠子宫平滑肌兴奋性的影响

取健康无孕雌性昆明小白鼠70只，体质量25-30g，随机分为7组，每组10只。空白组：给予等体积的生理盐水；对照组及本发明药物I、II组的低、高剂量组分别给予10g/kg、20g/kg剂量；对照组及本发明药物各剂量组连续灌胃给药7天，于实验前连续2天，每天腹腔注射1次苯甲酸雌二醇0.2mL/只，用戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉，在下腹部切1cm左右的切口，打开腹腔，找出一侧子宫角，轻轻剥离周围组织，在其中点用连有棉线的蛙心夹轻轻夹住，连在张力换能器上，用台式平衡记录仪描记曲线，待曲线稳定后，在子宫上滴加缩宫素1ml，观察药物对子宫平滑肌的影响。结果见下表：

对小鼠催产素致子宫平滑肌收缩的作用

组别	剂量g.kg-1	收缩幅度/g	收缩增加率(％)
				N·S组	-	0.50±0.18	-
对照组	10	0.73±0.14*	43.64
				对照组	20	0.78±0.22*	49.25
本发明药物I组	10	0.81±0.23**	51.21
				本发明药物I组	20	0.85±0.25**#	54.13
本发明药物II组	10	0.91±0.31**##	57.26
				本发明药物II组	20	0.99±0.31**##	60.26

注：*N·S组比较P＜0.05，**P＜0.01；对照组与药物组I、II相比#P＜0.05，##P＜0.01。

结果表明：本发明药物I、II组及对照组的高、低剂量组均可增加子宫平滑肌收缩幅度，与缩宫素有协同作用，提示本发明药物具有促进子宫平滑肌收缩的功效，且与空白组比较有显著性差异；本发明药物I、II组与相同剂量的对照组相比有显著性差异，且相同剂量的本发明药物II组优于本发明药物I组。

实验例3 鉴别筛选实验

1、本发明药物制剂中对熟大黄的薄层鉴别

(1)上述鉴别方法中熟大黄的薄层鉴别展开剂配比的优选：

标准品来源：大黄  购于中国药品生物制品检定所  批号：120984-200301

分别吸取供试品溶液、对照品溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以不同比例的石油醚(30～60℃)-甲酯乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏。观察薄层板上供试品主斑点展开的效果，结果见下表：

大黄的鉴别方法中展开剂配比优选实验结果表

从上表可以看出展开剂配比为15∶5∶1时，在薄层板上展开效果好，主斑点清晰，无拖尾、与对照品的主斑点位置及颜色相同，适合试验要求。

(2)上述大黄鉴别方法中样品溶液点样量的优选：

吸取供试品溶液0.5μl、1μl、1.5μl、2μl分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酯乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏。观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：

大黄的鉴别方法中样品溶液点样量优选实验结果表

从上表可以看出供试品点样量在1～2μl时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。

(3)阴性对照试验

取缺大黄的阴性样品，照上述大黄鉴别方法中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。

2、本发明药物制剂中对黄芩的薄层鉴别

(1)上述鉴别方法中黄芩的薄层鉴别展开剂配比的优选：

标准品来源：黄芩苷  购于中国药品生物制品检定所  批号：715-200211

分别吸取供试品溶液、对照品溶液各6μl，分别点于同一以含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以不同比例的醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水的溶液为展开剂，展开，取出，吹干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。观察薄层板上供试品主斑点展开的效果，结果见下表：

黄芩的鉴别方法中展开剂配比优选实验结果表

从上表可以看出展开剂配比为5∶3∶1∶1时，在薄层板上展开效果好，主斑点清晰，无拖尾、与对照品的主斑点位置及颜色相同，适合试验要求。

(2)上述黄芩的鉴别方法中样品溶液点样量的优选：

吸取供试品溶液2μl、4μl、6μl、8μl分别点于分别点于同一以含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，吹干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：

黄芩的鉴别方法中样品溶液点样量优选实验结果表

从上表可以看出供试品点样量在6μl时，在薄层板上显色效果最好好，适合试验要求。

(3)阴性对照试验

取缺黄芩的阴性样品，照上述黄芩鉴别方法中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。

3、本发明药物制剂中对白芍的薄层鉴别

(1)上述鉴别方法中白芍的薄层鉴别展开剂配比的优选：

标准品来源：芍药苷  购于中国药品生物制品检定所  批号：736-200217

分别吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以不同比例的氯仿-甲醇-冰醋酸沉沦为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。观察薄层板上供试品主斑点展开的效果，结果见下表：

白芍的鉴别方法中展开剂配比优选实验结果表

从上表可以看出展开剂配比为8∶1∶4∶1时，在薄层板上展开效果好，主斑点清晰，无拖尾、与对照品的主斑点位置及颜色相同，适合试验要求。

(2)上述白芍的鉴别方法中样品溶液点样量的优选：

吸取供试品溶液4、6、8、10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液(8∶1∶4∶1)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：

白芍的鉴别方法中样品溶液点样量优选实验结果表

从上表可以看出供试品点样量在10μl时，在薄层板上显色效果最好好，适合试验要求。

(3)阴性对照试验

取缺白芍的阴性样品，照上述白芍鉴别方法中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。

4、本发明药物制剂中对甘草的薄层鉴别

(1)上述鉴别方法中甘草的薄层鉴别展开剂配比的优选：

标准品来源：甘草  购于中国药品生物制品检定所  批号：0904-200108

分别吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以不同比例的氯仿-甲醇-冰醋酸溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。观察薄层板上供试品主斑点展开的效果，结果见下表：

甘草的鉴别方法中展开剂配比优选实验结果表

从上表可以看出展开剂配比为7∶1∶1时，在薄层板上展开效果好，主斑点清晰，无拖尾、与对照品的主斑点位置及颜色相同，适合试验要求。

(2)上述甘草的鉴别方法中样品溶液点样量的优选：

吸取供试品溶液5μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液(8∶1∶4∶1)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：

甘草的鉴别方法中样品溶液点样量优选实验结果表

从上表可以看出供试品点样量在5μl时，在薄层板上显色效果最好好，适合试验要求。

(3)阴性对照试验

取缺甘草的阴性样品，照上述甘草鉴别方法中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。

实验例4 含量测定实验

检测仪器：岛津公司SPD-10Avp型高效液相色谱仪

色 谱 柱：迪玛公司(Zorbax C18 4.6×150mm，5μm)

流 动 相：甲醇-水-磷酸(85∶15∶0.05)

检测波长：289nm    流速：1.000ml/min    柱温：室温

对 照 品：大黄素  购于中国药品生物制品检定所  批号：756-200211

测定方法：按[含量测定]项下供试品溶液的制备方法制备样品液；用微孔滤膜(0.45μm)过滤。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

1.含量测定方法考察：

(1)稳定性试验  对照品溶液，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，依法测定，结果表明，其在24小时内基本稳定，结果见下表：

(2)线性关系考察  取对照品溶液(8.32μg/ml)摇匀，分别精密吸取1、3、5、7、9、11μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，结果见下表，并绘制标准曲线，表明黄芩苷在0.0956μg-1.0516μg间呈线性关系，其回归方程为：

Area＝2.77394E-07*Amt-90275.86(r＝0.999998)

(3)精密度试验  精密吸取供试品溶液，(批号：05040101)10μl，重复进样5次，求得相对标准偏差＜2％，结果见下表：

(4)重现性试验  按含量测定方法，取同一批号(批号：05040202)

样品进行测定，求得相对标准偏差＜2％，结果见下表：

(5)回收率试验  精密称取已知含量的同一批号(批号：05040202)的样品1.0g，置100ml量瓶中，加10ml大黄素对照品溶液(41.6ug/ml)，按正文供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算其回收率，测定结果见下表：

由以上方法学考查结果可以看出，本发明药物所采用的含量测定方法其线性关系、稳定性、精密度、重现性等均良好，能够有效控制本发明药物质量。

从以上质量检测方法的研究结果可以看出，本发明药物制剂所采用的质量检测方法科学、合理、具有独创性，能够有效控制本发明药物制剂质量。

具体实施方式

下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果

实施例1：口服液

熟大黄      300g        土鳖虫(炒)  40g      水蛭(制)  90g

蛴螬(炒)    50g         干漆(煅)    30g      红花      240g

苦杏仁(炒)  160g        黄芩        60g      地黄      300g

白芍       240g

制法：桃仁、苦杏仁提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；其余十味加水煎煮2次，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.05～1.25的清膏，加入上述挥发油，混匀，加水，调节PH值至5.5～6.5，静置，滤过，灌装，灭菌，即得。

实施例2：软胶囊

熟大黄           420g    土鳖虫(炒)   42g  水蛭(制)   35g

虻虫(去翅足，炒) 70g     蛴螬(炒)     32g  干漆(煅)   45g

桃仁             200g    苦杏仁(炒)   70g  黄芩       35g

地黄             220g    白芍         70g  甘草       110g；

制法：桃仁、苦杏仁提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；其余十味加水煎煮2次，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15～1.35的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉，加入植物油及上述挥发油，混匀，制成软胶囊，即得。

实施例3：泡腾剂

熟大黄             460g    土鳖虫(炒)    40g  水蛭(制)   50g

虻虫(去翅足，炒)   85g     蛴螬(炒)      35g  干漆(煅)   50g

桃仁               230g    苦杏仁(炒)    90g  黄芩       40g

地黄               260g    白芍          90g  甘草       120g

制法：桃仁、苦杏仁提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；其余十味加水煎煮2次，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15～1.35的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉，加入泡腾崩解剂，制粒，喷入挥发油，加入适量矫味剂、着色剂制成颗粒或压片，即得。

实施例4：颗粒剂

熟大黄           450g    土鳖虫(炒)    50g  水蛭(制)   50g

虻虫(去翅足，炒) 80g     蛴螬(炒)      35g  干漆(煅)   50g

桃仁             200g    苦杏仁(炒)    90g  黄芩       40g

地黄             260g    白芍          90g  甘草       120g

本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成颗粒剂。

实施例5：胶囊剂

熟大黄          420g    土鳖虫(炒)  42g  水蛭(制)     35g

虻虫(去翅足，炒)70g     蛴螬(炒)    32g  干漆(煅)     45g

桃仁            200g    苦杏仁(炒)  70g  黄芩         35g

地黄            220g    白芍        70g  甘草         110g；

本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成胶囊剂。

实施例6：

熟大黄          300g  土鳖虫(炒)  30g   水蛭(制)    60g

虻虫(去翅足，炒)45g   蛴螬(炒)    45g   干漆(煅)    30g

桃仁            120g  苦杏仁(炒)  120g  黄芩        60g

地黄            300g  白芍        120g  甘草        90g

以上十二味，粉碎成细粉，过筛，混匀；每100g粉末用炼蜜30～45g加适量的水泛丸，干燥，制成水蜜丸，即得。

鉴别

(1)取本品2.5g，研细，加乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，取1/2的滤液，蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热水解30分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次15ml，合并乙醚液，挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材50mg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酯乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点；

(2)取本品2.5g，研细，加乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，取1/2的滤液，蒸干，残渣加水40ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，吹干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑；

(3)取本品1.2g，研细，加稀乙醇80ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水和乙醚各30ml使溶解，移至分液漏斗中，静置分层，弃去乙醚液，水液再用乙醚提取3次，每次30ml，弃去乙醚液，水液加水饱和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干；残渣加水5ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1cm，柱高12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加丙酮1ml使溶解，取上清夜作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液(8∶1∶4∶1)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取本品10克，研细，加水40毫升，醋酸乙酯40ml，超声振荡30分钟，离心分层，吸取上层液，蒸干，残渣加无水乙醇2毫升使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1克，加水20ml，乙酸乙酯20毫升，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-冰醋酸(7∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定，照高效液相色谱法：

色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸(85∶15∶0.05)为流动相；检测波长为289nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品10mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含大黄素8μg)；

供试品溶液的制备：取本品约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足碱失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，置锥形瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理(功率250W，频率33kHz)10分钟，置水浴中加热1小时，立即冷却，移置分液漏斗中，加乙醚提取3次，每次25ml，合并乙醚液，用水15ml洗涤，弃去水液，乙醚液通过铺有适量无水硫酸钠的漏斗滤过，用少量乙醚洗涤容器与滤器，滤液低温回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品含大黄以大黄素(C₁₅H₁₀O₅)计，每1g不得少于0.40mg。

实施例7：

熟大黄          300g       土鳖虫(炒)     30g   水蛭(制)    60g

虻虫(去翅足，炒)45g        蛴螬(炒)       45g   干漆(煅)    30g

桃仁            120g       苦杏仁(炒)     120g  黄芩        60g

地黄            300g       白芍           120g  甘草        90g

以上十二味，粉碎成细粉，过筛，混匀；每100g粉末用炼蜜30～45g加适量的水泛丸，干燥，制成水蜜丸，即得。

鉴别

(1)取本品，置显微镜下观察：草酸钙簇晶大，直径60～140μm；草酸钙簇晶直径18～32μm，存在于薄壁细胞中，常排列成行，或一个细胞中含数个簇晶；薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物；纤维淡黄色，梭形，壁厚，孔沟细；纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；体壁碎片黄色或棕红色，有圆形毛窝，直径8～24靘，有的具长短不一的刚毛；体壁碎片金黄色或棕色，毛窝双圈状，有时表面可见疣状或针尖状突起；体壁碎片淡黄色，毛窝边缘为重叠圈状；

(2)取本品2.5g，研细，加乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，取1/2的滤液，蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热水解30分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次15ml，合并乙醚液，挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材50mg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酯乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点；

(3)取[鉴别](2)项下的剩余滤液，蒸干，残渣加水40ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，吹干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑；

(4)取本品1.2g，研细，加稀乙醇80ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水和乙醚各30ml使溶解，移至分液漏斗中，静置分层，弃去乙醚液，水液再用乙醚提取3次，每次30ml，弃去乙醚液，水液加水饱和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干；残渣加水5ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1cm，柱高12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加丙酮1ml使溶解，取上清夜作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(附录VIB)试验，取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液(8∶1∶4∶1)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(5)取本品10克，研细，加水40毫升，醋酸乙酯40ml，超声振荡30分钟，离心分层，吸取上层液，蒸干，残渣加无水乙醇2毫升使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1克，加水20ml，乙酸乙酯20毫升，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-冰醋酸(7∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定，照高效液相色谱法：

色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸(85∶15∶0.05)为流动相；检测波长为289nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品10mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含大黄素8μg)；

供试品溶液的制备：取本品约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足碱失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，置锥形瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理(功率250W，频率33kHz)10分钟，置水浴中加热1小时，立即冷却，移置分液漏斗中，加乙醚提取3次，每次25ml，合并乙醚液，用水15ml洗涤，弃去水液，乙醚液通过铺有适量无水硫酸钠的漏斗滤过，用少量乙醚洗涤容器与滤器，滤液低温回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品含大黄以大黄素(C₁₅H₁₀O₅)计，每1g不得少于0.40mg。

功能与主治：活血破瘀，通经消癥。用于瘀血内停所致的癥瘕、闭经，症见腹部肿块、肌肤甲错、面色黯黑、潮热羸瘦、经闭不行。

用法与用量：口服，一次3g，一日1～2次。

规格：每60丸重3g

Claims (6)

1.一种具有活血破瘀，通经消癥作用的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

熟大黄    400-500重量份   炒土鳖虫    40-50重量份

制水蛭    30-50重量份     虻虫去翅足，炒60-90重量份

炒蛴螬    30-40重量份     煅干漆      40-60重量份

桃仁      180-240重量份   炒苦杏仁    60-100重量份

黄芩      30-50重量份     地黄        200-270重量份

白芍      60-100重量份    甘草        100-150重量份。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

熟大黄    420重量份   炒土鳖虫    42重量份

制水蛭    35重量份    虻虫去翅足，炒70重量份

炒蛴螬    32重量份    煅干漆      45重量份

桃仁      200重量份   炒苦杏仁    70重量份

黄芩      35重量份    地黄        220重量份

白芍      70重量份    甘草        110重量份。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

熟大黄    450重量份   炒土鳖虫    50重量份

制水蛭    50重量份    虻虫去翅足，炒80重量份

炒蛴螬    35重量份    煅干漆      50重量份

桃仁      200重量份   炒苦杏仁    90重量份

黄芩      40重量份    地黄        260重量份

白芍      90重量份    甘草        120重量份。

4.如权利要求1-3所述的任一药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

将所述原料药粉碎成细粉，过筛，混匀；每100重量份粉末用炼蜜30～45重量份加适量的水泛丸，干燥，制成水蜜丸，即得。

5.如权利要求1-3所述的任一药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

(1)取所述药物组合物的丸剂2.5g，研细，加乙醇30-50ml，超声处理20-40分钟，滤过，取1/2的滤液，蒸干，残渣加水8-15ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热水解25-35分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取2-3次，每次10-20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材50mg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以13-18∶3-9∶1-2的30～60℃石油醚-甲酯乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点；

(2)取所述药物组合物的丸剂2.5g，研细，加乙醇35-50ml，超声处理25-40分钟，滤过，取1/2的滤液，蒸干，残渣加水40ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2-4次，每次14-25ml，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1.5-2.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以含3-5％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以4-6∶2-5∶1-2∶1-2的醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，吹干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑；

(3)取所述药物组合物的丸剂1.2g，研细，加稀乙醇70-90ml，超声处理25-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水和乙醚各20-40ml使溶解，移至分液漏斗中，静置分层，弃去乙醚液，水液再用乙醚提取2-4次，每次20-40ml，弃去乙醚液，水液加水饱和的正丁醇提取2-4次，每次20-40ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干；残渣加水5ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱，内径1cm，柱高12cm，以水50ml洗脱，弃去水液，再用30-50％乙醇40-60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加丙酮1ml使溶解，取上清夜作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7-9∶1-2∶3-5∶1-3的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，凉干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取所述药物组合物的丸剂10克，研细，加水30-50毫升，醋酸乙酯30-50ml，超声振荡20-40分钟，离心分层，吸取上层液，蒸干，残渣加无水乙醇2毫升使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1克，加水20ml，乙酸乙酯20毫升，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6-8∶1-2∶1-2的氯仿-甲醇-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以80-90∶10-20∶0.04-0.07的甲醇-水-磷酸为流动相；检测波长为289nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品10mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含大黄素8μg；

供试品溶液的制备：取所述药物组合物的丸剂约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，称定重量，加热回流0.5-1.5小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足碱失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，置锥形瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理，功率250W，频率33kHz，8-20分钟，置水浴中加热1-2小时，立即冷却，移置分液漏斗中，加乙醚提取2-4次，每次25ml，合并乙醚液，用水15ml洗涤，弃去水液，乙醚液通过铺有适量无水硫酸钠的漏斗滤过，用少量乙醚洗涤容器与滤器，滤液低温回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

6.如权利要求5所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该检测方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

鉴别：

(1)取所述药物组合物的丸剂2.5g，研细，加乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，取1/2的滤液，蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热水解30分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次15ml，合并乙醚液，挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材50mg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以15∶5∶1的30～60℃石油醚-甲酯乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点；

(2)取所述药物组合物的丸剂2.5g，研细，加乙醇40ml，超声处理30分钟，滤过，取1/2的滤液，蒸干，残渣加水40ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以5∶3∶1∶1的醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，吹干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑；

(3)取所述药物组合物的丸剂1.2g，研细，加稀乙醇80ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水和乙醚各30ml使溶解，移至分液漏斗中，静置分层，弃去乙醚液，水液再用乙醚提取3次，每次30ml，弃去乙醚液，水液加水饱和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干；残渣加水5ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱，内径1cm，柱高12cm，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加丙酮1ml使溶解，取上清夜作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以8∶1∶4∶1的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，凉干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取所述药物组合物的丸剂10克，研细，加水40毫升，醋酸乙酯40ml，超声振荡30分钟，离心分层，吸取上层液，蒸干，残渣加无水乙醇2毫升使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1克，加水20ml，乙酸乙酯20毫升，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶1∶1的氯仿-甲醇-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法：色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以85∶15∶0.05的甲醇-水-磷酸为流动相；检测波长为289nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品10mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含大黄素8μg；

供试品溶液的制备：取所述药物组合物的丸剂约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足碱失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，置锥形瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理功率250W，频率33kHz10分钟，置水浴中加热1小时，立即冷却，移置分液漏斗中，加乙醚提取3次，每次25ml，合并乙醚液，用水15ml洗涤，弃去水液，乙醚液通过铺有适量无水硫酸钠的漏斗滤过，用少量乙醚洗涤容器与滤器，滤液低温回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。