CN109223739B - 一种组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种组合物及其制备方法和应用。该技术方案以茜草根为原料，经乙醇回流提取后利用乙酸乙酯抽提，抽提物采用碳酸钠溶液萃取，萃取液经酸化并过滤收集滤渣，再通过氯仿‑甲醇溶解后用Sephadex LH 20分离，分别得到茜草素、异茜草素、羟基茜草素。本发明将茜草素、异茜草素、羟基茜草素三者以5:3:2的重量比混合，得到成分确切的抗过敏组合物。体外实验表明，本发明组合物能有效抑制细胞分泌IgE，从而实现免疫调节作用；体内实验证明，口服该组合物能确切降低IgE表达水平，进而实现抗过敏作用，效果全面优于茜草素天然提取物以及各单方。本发明可用于制备治疗食物过敏的食品或药物，与激素类药物、抗组胺药物相比，其毒性低，安全可靠。
Description
技术领域
本发明涉及抗过敏药物技术领域，进一步涉及植物功效性成分的提取技术，具体涉及一种组合物及其制备方法和应用。
背景技术
食物过敏是由于某种食物或食品添加剂等引起的IgE介导和非IgE介导的免疫反应，进而导致消化系统内或全身性的变态反应。近年来食物过敏症呈多发趋势，且以儿童为主。由于缺乏有效的脱敏疗法，现有技术中主要采用远离过敏源的方法进行治疗，在一定程度上影响了患者的生活质量；能有效控制食物过敏症状的药品非常有限，医生大多采用抗组胺类药物，用来缓解过敏症状。除了化学药物中的抗组胺类药物，目前医院采用的中药抗过敏疗法大多是中药复方，煎煮成汤药的形式服用，很多患者，尤其是儿童难以接受。在这种情况下，有效挖掘天然药物中的有效成分，是改善剂型并进一步提升疗效水平的重要基础。
茜草(Rubia cordifolia L.)为多年生草质攀援藤木，分布于中国东北、华北、西北和四川及西藏等地；为我国传统常用中药之一，茜草以根入药，性寒、味苦，具有凉血、祛瘀、止血、通经的作用。近年来，随着对茜草中醌类、环己肽类、多糖类等化学成分的不断发现，其药理作用也在逐渐拓展，包括止血化瘀、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节等活性。文献报道的茜草的免疫调节作用主要为其提取物，成分不明，美国的Xiumin Li教授研究中药降IgE作用，发现山东一方制药提供的茜草提取物有抑制IgE分泌的作用，但有效成分尚不明确。茜草的化学成分以蒽醌及其苷类化合物为主，还含有萘醌类、萜类、己肽类、多糖类等成分。
发明内容
本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种组合物及其制备方法和应用，以解决现有技术中，常规药物对食物过敏症疗效有待提高的技术问题。
本发明要解决的另一技术问题是提供一种新的、成分明确的食物过敏症治疗药物。
为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：
一种组合物，该组合物由以下重量份的成分组成：异茜草素5份，茜草素3份，羟基茜草素2份。
本发明进一步提供了一种上述组合物的制备方法，包括以下步骤：
1)将茜草根与浓度为95％的乙醇按1kg:8L的比例混合，加热回流提取3次，分别过滤后合并滤液，减压回收乙醇，干燥，得到乙醇提取物；
2)取步骤1)所得的乙醇提取物，与乙酸乙酯按1g:5mL的比例混合，超声提取，过滤，得到乙酸乙酯抽提液；
3)重复以上步骤2)，合并乙酸乙酯抽提液，加10％浓度的Na2CO3溶液萃取；
4)向步骤3)所得的萃取液中加入浓盐酸酸化，静置，过滤，得到滤渣；
5)取氯仿-甲醇等体积混合液，与步骤4)所得滤渣按4mL:1g的比例混合溶解，而后利用Sephadex LH 20色谱柱分离，再用氯仿-甲醇等体积混合液洗脱，收集流出液；
6)采用标准品对照的方式用薄层色谱的方法检测流出物，分别合并含有异茜草素、茜草素、羟基茜草素的流出液；
7)减压除去溶剂，分别得到异茜草素、茜草素、羟基茜草素；
8)将所述异茜草素、茜草素、羟基茜草素三者按5:3:2的重量比混合，即得到所述组合物。
作为优选，步骤1)中每次加热回流提取的时间为2h。
作为优选，步骤2)中所述超声提取的时间为10min。
作为优选，步骤3)中Na2CO3溶液的加入体积与步骤2)中乙酸乙酯的加入体积相等。
作为优选，步骤5)中所述Sephadex LH 20色谱柱的直径为2cm，高度为40cm。
本发明进一步提供了上述组合物用于制备过敏症治疗药物的应用。
作为优选，所述过敏症是食物过敏症。
本发明进一步提供了上述组合物用于制备抑制IgE分泌药物的应用。
作为优选，所述药物的剂型是口服剂。
在以上技术方案中，所述异茜草素(Purpuroxanthin)的分子式为：C14H8O4，结构式如以下式(1)所示：
所述茜草素(Alizarin)的分子式为：C14H8O4，结构式如以下式(2)所示：
所述羟基茜草素(Purpurin)的分子式为：C14H8O5，结构式如以下式(3)所示：
本发明提供了一种组合物及其制备方法和应用。该技术方案以茜草根为原料，经乙醇回流提取后利用乙酸乙酯抽提，抽提物采用碳酸钠溶液萃取，萃取液经酸化并过滤收集滤渣，再通过氯仿-甲醇溶解后用Sephadex LH 20分离，分别得到茜草素、异茜草素、羟基茜草素。本发明将茜草素、异茜草素、羟基茜草素三者以5:3:2的重量比混合，得到成分确切的抗过敏组合物。体外实验表明，本发明组合物能有效抑制细胞分泌IgE，从而实现免疫调节作用；体内实验证明，口服该组合物能确切降低IgE表达水平，进而实现抗过敏作用，效果全面优于茜草素天然提取物以及各单方。
本发明可用于制备治疗食物过敏的食品或药物，与激素类药物、抗组胺药物相比，其毒性低，安全可靠，而且茜草资源非常丰富，易于栽培，提取分离工艺简单。可与常规的赋形剂或辅料制成胶囊、颗粒剂、口服液、注射剂、外用制剂等剂型。
具体实施方式
以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
实施例1
一种组合物，该组合物由以下重量份的成分组成：异茜草素5份，茜草素3份，羟基茜草素2份。
该组合物是通过以下方法制备的：
(1)茜草根1kg，加8L 95％乙醇加热回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，干燥，得到乙醇提取物82.1g；
(2)取乙醇提取物20g，加乙酸乙酯100mL超声提取10min，过滤，得到乙酸乙酯抽提液；
(3)重复步骤(2)，合并乙酸乙酯抽提液，加10％Na2CO3溶液100mL萃取；
(4)加浓盐酸酸化Na2CO3萃取液，静置，过滤，得到滤渣2.3g；
(5)取滤渣0.5g，用氯仿-甲醇(1:1)2mL溶解，用Sephadex LH 20分离(柱的直径2cm，高度40cm)，用氯仿-甲醇(1:1)洗脱，10mL每瓶收集流出液；
(6)采用标准品对照的方式用薄层色谱的方法检测流出物，分别合并含有异茜草素、茜草素、羟基茜草素的流出液；
(7)减压除去溶剂，分别得到异茜草素、茜草素、羟基茜草素；
(8)将所述异茜草素、茜草素、羟基茜草素三者按5:3:2的重量比混合，即得到所述组合物。
实施例2
体外免疫调节作用：
取生长状态良好的U266细胞，接种于24孔板中，每孔接种1mL(细胞数为2×105)，按浓度梯度加入实施例1所制备的组合物，使其终浓度分别为0、5、10、20、40、80g/mL，置于5％的CO2环境中，37℃培养箱中孵育6天后用IgE试剂盒检测各孔中培养液内的IgE的含量，计算IC50值为9.64g/mL。以上实验结果表明，实施例1所提供的组合物能在体外环境下有效抑制U266细胞分泌IgE。
实施例3
对食物过敏动物模型的体内免疫调节作用：
BALB/C小鼠(20±2g)，80只，雌性，随机分成A、B、C、D、E、F、G、和H共计8组。A组正常喂食，B-H三组灌胃过敏原进行致敏(20g小鼠每次灌胃：卵清蛋白15mg+霍乱毒素佐剂200μg)，连续灌胃4周，每周灌胃3次。在第0、15、22、28这4天对小鼠进行下颌静脉丛取血，每次取3-4滴，测定血清中IgE的含量，进行IgE监控。
造模成功后(B-H组的小鼠血清中的IgE比A组高20倍以上)，B组为对照组灌胃生理盐水，C和D组分别灌胃高(1.5mg/kg)、低(3mg/kg)浓度的实施例1组合物，E-H组分别灌胃茜草提取物(50mg/kg)、异茜草素(1.5mg/kg)、茜草素(1.5mg/kg)、羟基茜草素(1.5mg/kg)。4周后进行小鼠体内血清中IgE的量，与对照组比，各组物质对小鼠血清中IgE的抑制率如表1所示。
实施例1组合物高剂量C组小鼠血清中的IgE平均下降了95.5％，显著高于茜草提取物，而且服用量不到茜草提取物的1/30；和本发明组方中的各个单一成分相比，效果显著，说明经过本发明的组方配比，三种物质在体内环境中对IgE的抑制效果具有协同作用。
表1各组分对食物过敏小鼠模型体内IgE的抑制率
实施例4
毒副作用研究：
取实施例1组合物进行急性毒性试验，给予小鼠日剂量0.3g/kg时，连续5天，10只小鼠未出现死亡和明显的中毒现象，是上述药效学试验中的剂量3mg/kg的200倍，所以该组方是安全可靠的。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种组合物，其特征在于该组合物由以下重量份的成分组成：异茜草素5份，茜草素3份，羟基茜草素2份。
2.一种权利要求1所述组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)将茜草根与浓度为95％的乙醇按1kg:8L的比例混合，加热回流提取3次，分别过滤后合并滤液，减压回收乙醇，干燥，得到乙醇提取物；
2)取步骤1)所得的乙醇提取物，与乙酸乙酯按1g:5mL的比例混合，超声提取，过滤，得到乙酸乙酯抽提液；
3)重复以上步骤2)，合并乙酸乙酯抽提液，加10％浓度的Na2CO3溶液萃取；
4)向步骤3)所得的萃取液中加入浓盐酸酸化，静置，过滤，得到滤渣；
5)取氯仿-甲醇等体积混合液，与步骤4)所得滤渣按4mL:1g的比例混合溶解，而后利用Sephadex LH 20色谱柱分离，再用氯仿-甲醇等体积混合液洗脱，收集流出液；
6)采用标准品对照的方式用薄层色谱的方法检测流出物，分别合并含有异茜草素、茜草素、羟基茜草素的流出液；
7)减压除去溶剂，分别得到异茜草素、茜草素、羟基茜草素；
8)将所述异茜草素、茜草素、羟基茜草素三者按5:3:2的重量比混合，即得到所述组合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤1)中每次加热回流提取的时间为2h。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤2)中所述超声提取的时间为10min。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤3)中Na2CO3溶液的加入体积与步骤2)中乙酸乙酯的加入体积相等。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤5)中所述Sephadex LH20色谱柱的直径为2cm，高度为40cm。
7.权利要求1所述组合物用于制备过敏症治疗药物的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述过敏症是食物过敏症。
9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于所述药物的剂型是口服剂。
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