CN112107639B - 一种蔓荆子提取物在制备抗抑郁药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及中药领域，具体涉及一种蔓荆子提取物在制备抗抑郁药物中的应用。其中蔓荆子提取物采用乙醇回流提取，然后依次进行二氯甲烷萃取、乙酸乙酯萃取后作为蔓荆子乙酸乙酯提取部位使用。也可进一步采用硅胶柱分离以乙酸乙酯、甲醇溶液梯度洗脱，收集洗脱液，除去溶剂作为蔓荆子乙酸乙酯提取部位的精制产物使用。该提取物及活性成分对抑郁症症状具有缓解作用，经口给药未见明显不良作用。

Description

一种蔓荆子提取物在制备抗抑郁药物中的应用
技术领域
本发明属于中药领域，具体涉及一种蔓荆子提取物在制备抗抑郁药物中的应用。
背景技术
蔓荆子是马鞭草科植物单叶蔓荆Vitex trifolia L. var. simplicifoliaCham. 或蔓荆Vitex trifolia L.的干燥成熟果实，直径4～6mm。表面灰黑色或黑褐色。蔓荆子入药有清炒、酒蒸等炮制方法。其药性苦寒，但具有清扬上行的特点，善于疏散风热，清利头目，善治正头痛、偏头痛、齿痛、赤眼、目睛内痛等。蔓荆子的中成药包括清热解表、散风止痛用于外感风邪引起的恶风身热、偏正头痛、鼻流清涕、牙疼喉痛的芎菊上清丸；平肝熄风、活血化瘀用于肝风夹瘀证偏头痛的天菊脑安胶囊。除镇痛作用外，现在研究显示还有抗肿瘤等多种生物活性。
CN201410525623.0、CN201610118792.1、CN201610719573.9等专利则利用蔓荆子疏散风热、清利头目及止痛功效将其加入到治疗抑郁症的中药复方中。为方便中药配制，目前已制备出蔓荆子配方颗粒，即按照传统炮制方法加工后采用水提取工艺提取与传统功效相关的成分，以保持蔓荆子入药时的传统药效。而水提取工艺则导致其他脂溶性成分的损失，和相应活性的丧失。对蔓荆子不同提取部位其他药理作用的研究目前还比较少。
抑郁症是一种中枢神经系统疾病，主要表现为持续情绪低落、思维迟缓、意志活动消退、认知功能减退等。作为一种中枢神经系统疾病， 其治疗药物需要能够到达中枢神经系统，常见的抗抑郁药物包括三环类抗抑郁药、单氨氧化酶抑制剂、四环类抗抑郁药物等，种类繁多，但仍以5-HT再摄取抑制剂为主。西药抗抑郁药物的作用在于兴奋中枢。而中医对于抑郁症的治疗则采用了多种途径，通常使用疏肝、理气、活血类药材，如柴胡、石菖蒲、罗布麻等，通过疏肝解郁、理气散郁等方法缓解抑郁症。
发明内容
针对上述现有技术，本发明的目的包括
（1）提供一种蔓荆子提取物，以克服水提取成分损失导致的部分活性损失。
（2）提供一种蔓荆子提取物的活性和应用，具体来说是抗抑郁活性和在制备抗抑郁药物中的应用。
本发明提供了一种与现有蔓荆子配方颗粒制备方法不同、作用不同的蔓荆子提取物。该种提取物采用乙醇回流提取去除不溶于乙醇的杂质，后经二氯甲烷萃取去除二氯甲烷可溶性成分，然后采用乙酸乙酯萃取，保留余相中的乙酸乙酯可溶性成分。制备工艺如下：
干燥蔓荆子粉碎过30目～100目筛，加入乙醇水溶液浸泡4～12小时，回流法提取，过滤除去沉淀物，保留乙醇提取液备用；
取乙醇提取液蒸发除去乙醇，保留乙醇提取物浸膏备用；
取乙醇提取物浸膏加水分散，加入二氯甲烷萃取，分离二氯甲烷相，保留余相作为二氯甲烷萃取产物备用；
取二氯甲烷萃取产物加入乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相回收乙酸乙酯作为乙酸乙酯提取部位。
本提取物为蔓荆子粗提物，具有一定的抗抑郁作用。为提高抗抑郁作用可进行进一步的精制。精制步骤如下：
取蔓荆子乙酸乙酯提取部位蒸干，粉碎过100～200目筛得蔓荆子乙酸乙酯提取部位粉末，加入甲醇溶解上硅胶柱，依次采用体积比为50:1、30:1、10:1、2:1的乙酸乙酯/甲醇溶液进行梯度洗脱，收集所得洗脱液，蒸发去除溶剂即得蔓荆子乙酸乙酯提取部位的精制产物。
在上述制备工艺中，乙醇回流提取工艺中蔓荆子粉碎后优选为过60目～80目筛，以80目筛为佳；加入的乙醇水溶液优选为体积分数为60%～90%的乙醇水溶液，以85%为佳；回流提取中加入乙醇按照料液比计算优选为1:（7～12），以1:8为佳，其中料液比是药材或药渣、滤渣的重量与乙醇体积的比值；回流提取温度优选为70℃～80℃，以80℃为佳；每次回流提取时间优选为2～4小时，以4小时为佳；回流提取次数优选为2～4次，以4次为佳，合并滤液作为乙醇提取液。
二氯甲烷萃取步骤中，乙醇提取物浸膏采用水进行分散，每1g乙醇提取物浸膏加入1ml～10 ml水，以每1g乙醇提取物浸膏加入8 ml水为佳；二氯甲烷的体积优选为水体积的1～2倍，进一步优选为2倍；二氯甲烷萃取次数优选为2～4次，以3次为佳；乙酸乙酯萃取步骤中，乙酸乙酯体积优选为二氯甲烷萃取产物体积的1～2倍，进一步优选为2倍；乙酸乙酯萃取次数优选为2～4次，以3次为佳。
本研究对蔓荆子乙醇提取物及不同萃取部位的抗抑郁作用进行了考察，结果显示，蔓荆子乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位及其乙酸乙酯/甲醇洗脱相具有不同程度的抗抑郁作用。
具体实施方式
以下是本发明的几种蔓荆子提取物的制备例及活性研究例。
实施例1 蔓荆子乙酸乙酯提取部位的制备
以下是本发明的蔓荆子粗提物的一种制备工艺：
1.取干燥蔓荆子粉碎过80目筛；另取体积分数为85%的乙醇水溶液，按照料液比1:8的比例向蔓荆子粉中加入乙醇水溶液。浸泡4小时后，80℃下回流提取4小时，过滤收集首次回流提取液。
2.取第1步过滤所得滤渣按照料液比1:8的比例加入体积分数为85%的乙醇水溶液80℃下再次回流提取4小时，过滤收集第2次回流提取液；
3. 取第2步过滤所得滤渣按照料液比1:8的比例加入体积分数为85%的乙醇水溶液80℃下再次回流提取4小时，过滤收集第3次回流提取液。
4.取第3步所得滤渣按照料液比1:8的比例加入体积分数为85%的乙醇水溶液80℃下再次回流提取4小时，过滤收集第4次回流提取液。
5.合并第1～4步所得回流提取液作为乙醇提取液。蒸发除去乙醇制备乙醇提取物浸膏。
6.按照8ml水/g浸膏的比例将步骤5所得浸膏加水分散，向分散液中加入水体积2倍体积的二氯甲烷，混匀后静置24小时萃取，去除二氯甲烷相。
7.将步骤6所得余相再次加入水体积2倍体积的二氯甲烷，混匀后静置24小时萃取，去除二氯甲烷相。如此再次萃取1次去除二氯甲烷相。
8.向步骤7所得余相中加入2倍体积的乙酸乙酯，混匀后静置24小时萃取，收集乙酸乙酯相；余相再次加入2倍体积的乙酸乙酯，混匀后静置24小时萃取，收集乙酸乙酯相。如此再次萃取1次，保留乙酸乙酯相。
9.将步骤8所得乙酸乙酯相合并，回收乙酸乙酯得蔓荆子乙酸乙酯提取部位即蔓荆子粗提物。
实施例2 蔓荆子乙酸乙酯提取部位的制备
以下是本发明的蔓荆子粗提物的另一种制备工艺：
1.取干燥蔓荆子粉碎过30目筛；另取体积分数为70%的乙醇水溶液，按照料液比1:10的比例向蔓荆子粉中加入乙醇水溶液。浸泡8小时后，70℃下回流提取3小时，过滤收集首次回流提取液。
2.取第1步过滤所得滤渣按照料液比1:10的比例加入体积分数70%的乙醇水溶液70℃下再次回流提取3小时，过滤收集第2次回流提取液；
3. 取第2步过滤所得滤渣按照料液比1:10的比例加入体积分数为70%的乙醇水溶液70℃下再次回流提取3小时，过滤收集第3次回流提取液。
4.合并第1～3步所得提取液作为乙醇提取液。蒸发除去乙醇制备乙醇提取物浸膏。
5.按照10ml水/g浸膏的比例将步骤4所得浸膏加水分散，向分散液中加入水体积1.5倍体积的二氯甲烷，混匀后静置24小时萃取，去除二氯甲烷相。
6.将步骤5所得余相再次加入水体积1.5倍体积的二氯甲烷，混匀后静置24小时萃取，去除二氯甲烷相。如此再次萃取2次去除二氯甲烷相。
7.向步骤6所得余相中加入1倍体积的乙酸乙酯，混匀后静置24小时萃取，收集乙酸乙酯相；余相再次加入1倍体积的乙酸乙酯，混匀后静置24小时萃取，收集乙酸乙酯相。如此再次萃取2次，收集乙酸乙酯相。
8.将步骤7所得乙酸乙酯相合并，回收乙酸乙酯得蔓荆子乙酸乙酯提取部位即蔓荆子粗提物。
实施例3蔓荆子乙酸乙酯提取部位的精制
以下是本发明的蔓荆子精提物的一种制备工艺：
将实施例1的蔓荆子乙酸乙酯提取部位即蔓荆子粗提物蒸干，粉碎过100目筛。所得粉末用甲醇溶解，上硅胶柱，依次采用体积比为50：1、30:1、10:1、2:1的乙酸乙酯/甲醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，蒸发去除溶剂即得蔓荆子乙酸乙酯提取部位的精制产物。
实施例4 蔓荆子乙醇回流提取物浸膏的抗抑郁作用研究
取按照实施例1步骤1-5制备乙醇提取物浸膏作为实验药物。
1.动物：健康雄性昆明小鼠，体重18～22 g。
2.小鼠悬尾实验
取健康雄性昆明小鼠24只，随机分为4组，即：溶剂对照组（生理盐水0.6ml/10g/日）、蔓荆子乙醇提取物浸膏低、中、高剂量组（2.8、4.2、5.6g/kg/日），每组6只。各组小鼠灌胃给药，每日3次连续给药7日。末次给药后2小时进行小鼠悬尾实验。将小鼠尾尖部位用胶布固定悬挂在挂钩上，小鼠头部距离实验台面25～30cm。悬挂6分钟，记录小鼠后4分钟内的不动时间。
3 小鼠强迫游泳实验
取健康雄性昆明小鼠24只，随机分为4组，即：溶剂对照组（生理盐水0.6ml/10g/日）、蔓荆子乙醇提取物浸膏低、中、高剂量组（2.8、4.2、5.6g/kg/日），每组6只。各组小鼠灌胃给药，每日3次连续给药7日。末次给药后2小时进行小鼠强迫游泳实验。圆形玻璃缸高30cm、直径20cm，加水至水深10cm后将玻璃缸置水浴锅维持25℃-28℃。观察6分钟，记录小鼠后4分钟内的不动时间。
4 实验结果
表1 不同剂量蔓荆子乙醇提取物浸膏对抑郁模型的影响
Figure 964834DEST_PATH_IMAGE001
5.结论
蔓荆子乙醇提取物浸膏在5.6g/kg以下时，对小鼠悬尾抑郁模型及强迫游泳抑郁模型不动时间的影响，与溶剂对照组的差异在统计学上不显著。
实施例5 蔓荆子二氯甲烷萃取部位的抗抑郁作用研究
按照实施例1步骤1-7 的方法制备，取二氯甲烷相，旋蒸除去二氯甲烷，作为蔓荆子二氯甲烷萃取部位。
1动物：健康雄性昆明小鼠，体重18~22 g。
2小鼠悬尾实验
取健康雄性昆明小鼠24只，随机分为4组，即：溶剂对照组（生理盐水0.6ml/10g/日）、蔓荆子二氯甲烷萃取部位低、中、高剂量组（0.2、0.3、0.4g/kg/日），每组6只。各组小鼠灌胃给药，每日3次连续给药7日。末次给药后2小时进行小鼠悬尾实验。将小鼠尾尖部位用胶布固定悬挂在挂钩上，小鼠头部距离实验台面25～30cm。悬挂6分钟，记录小鼠后4分钟内的不动时间。
3 小鼠强迫游泳实验
取健康雄性昆明小鼠24只，随机分为4组，即：溶剂对照组（生理盐水0.6ml/10g/日）、蔓荆子二氯甲烷萃取部位低、中、高剂量组（0.2、0.3、0.4g/kg/日），每组6只。各组小鼠灌胃给药，每日3次连续给药7日。末次给药后2小时进行小鼠强迫游泳实验。圆形玻璃缸高30cm、直径20cm，加水至水深10cm后将玻璃缸置水浴锅维持25℃-28℃。观察6分钟，记录小鼠后4分钟内的不动时间。
4 实验结果
表2 不同剂量蔓荆子乙醇提取物的二氯甲烷萃取部位对抑郁模型的影响
Figure 422360DEST_PATH_IMAGE002
*表示与溶剂对照组相比P<0.05或P<0.01。
5.结论
蔓荆子二氯甲烷提取部位在0.3g/kg剂量以上时，对小鼠悬尾实验模型的不动时间增加显著，在0.4g/kg剂量以上时，对小鼠强迫游泳抑郁模型的不动时间增加显著。这种中枢抑制作用可能对疼痛等的改善有益。
实施例6 蔓荆子乙酸乙酯提取部位的抗抑郁作用研究
按照实施例1的工艺制备蔓荆子乙酸乙酯提取部位即蔓荆子粗提物作为实验药物。
1动物：健康雄性昆明小鼠，体重18～22 g。
2小鼠悬尾实验
取健康雄性昆明小鼠24只，随机分为4组，即：溶剂对照组（生理盐水0.6ml/10g/日）、蔓荆子粗提物低、中、高剂量组（120、240、360mg/kg/日），每组6只。各组小鼠灌胃给药，每日3次连续给药7日。末次给药后2小时进行小鼠悬尾实验。将小鼠尾尖部位用胶布固定悬挂在挂钩上，小鼠头部距离实验台面25～30cm。悬挂6分钟，记录小鼠后4分钟内的不动时间。
3 小鼠强迫游泳实验
取健康雄性昆明小鼠24只，随机分为4组，即：溶剂对照组（生理盐水0.6ml/10g/日）、蔓荆子粗提物低、中、高剂量组（120、240、360mg/kg/日），每组6只。各组小鼠灌胃给药，每日3次连续给药7日。末次给药后2小时进行小鼠强迫游泳实验。圆形玻璃缸高30cm、直径20cm，加水至水深10cm后将玻璃缸置水浴锅维持25℃-28℃。观察6分钟，记录小鼠后4分钟内的不动时间。
4 实验结果
表3 不同剂量蔓荆子乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位对抑郁模型的影响
Figure 236732DEST_PATH_IMAGE003
*表示与溶剂对照组相比P<0.05或P<0.01。
5.结论
蔓荆子乙酸乙酯提取部位即蔓荆子粗提物灌胃给药在240mg/kg剂量以上时对小鼠悬尾实验及强迫游泳抑郁模型的不动时间具有显著缩短作用，且呈一定的剂量依赖性关系。
实施例7 蔓荆子乙酸乙酯提取部位精制产物的抗抑郁作用研究
按照实施例3的工艺制备蔓荆子乙酸乙酯提取部位的精制产物作为实验药物。
1动物：健康雄性昆明小鼠，体重18~22 g。
2小鼠悬尾实验
取健康雄性昆明小鼠24只，随机分为4组，即：溶剂对照组（生理盐水0.6ml/10g/日）、蔓荆子精制产物低、中、高剂量组（80、160、240mg/kg/日），每组6只。各组小鼠灌胃给药，每日3次连续给药7日。末次给药后2小时进行小鼠悬尾实验。将小鼠尾尖部位用胶布固定悬挂在挂钩上，小鼠头部距离实验台面25～30cm。悬挂6分钟，记录小鼠后4分钟内的不动时间。
3 小鼠强迫游泳实验
取健康雄性昆明小鼠24只，随机分为4组，即：溶剂对照组（生理盐水0.6ml/10g/日）、蔓荆子精制产物低、中、高剂量组（80、160、240mg/kg/日），每组6只。各组小鼠灌胃给药，每日3次连续给药7日。末次给药后2小时进行小鼠强迫游泳实验。圆形玻璃缸高30cm、直径20cm，加水至水深10cm后将玻璃缸置水浴锅维持25℃-28℃。观察6分钟，记录小鼠后4分钟内的不动时间。
4 实验结果
表4 不同剂量蔓荆子乙酸乙酯萃取部位精制产物对抑郁模型的影响
Figure 59194DEST_PATH_IMAGE004
*表示与溶剂对照组相比P<0.05或P<0.01。
5.结论
蔓荆子乙酸乙酯提取部位的精制产物灌胃给药在160mg/kg剂量以上时对小鼠悬尾抑郁模型的不动时间具有显著缩短作用；在80mg/kg剂量以上时对小鼠强迫游泳抑郁模型的不动时间具有显著缩短作用。

Claims (2)

1.一种蔓荆子提取物在制备抗抑郁药物中的应用，其特征在于，所述蔓荆子提取物为蔓荆子乙酸乙酯提取部位的精制产物，所述蔓荆子提取物采用如下方法制备：
S1：取干燥蔓荆子粉碎过30目～100目筛，加入乙醇水溶液浸泡4～12小时，采用回流法提取，过滤除去沉淀物得乙醇提取液；
S2：取S1的乙醇提取液蒸发除去乙醇得乙醇提取物浸膏；
S3：取S2的乙醇提取物浸膏加水分散，加入二氯甲烷萃取，分离二氯甲烷相，余相作为二氯甲烷萃取产物；
S4：取S3的二氯甲烷萃取产物加入乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相，除去乙酸乙酯得蔓荆子乙酸乙酯提取部位；
S5：取S4所得蔓荆子乙酸乙酯提取部位蒸干，粉碎过100～200目筛得蔓荆子乙酸乙酯提取部位粉末；
S6：取S5所得蔓荆子乙酸乙酯提取部位粉末加入甲醇溶解上硅胶柱，依次采用体积比为50：1、30:1、10:1、2:1的乙酸乙酯/甲醇溶液进行梯度洗脱，收集所得洗脱液，蒸发去除溶剂得蔓荆子乙酸乙酯提取部位的精制产物；
所述步骤S3中，乙醇提取物浸膏的加水量为每1g乙醇提取物浸膏加入1ml～10 ml水分散，加入的二氯甲烷体积与加入的水体积之比为2:（1～2），二氯甲烷萃取次数为2～4次；所述骤S4中加入的乙酸乙酯体积与二氯甲烷萃取产物的体积之比为2:（1～2），乙酸乙酯萃取次数为2～4次。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤S1中所用乙醇水溶液的体积分数60%～90%，加入乙醇水溶液的料液比为1:（7～12），回流提取温度为70℃～80℃，回流提取时间为每次2～4小时，回流提取次数为2～4次。
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