CN100546634C - 一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物，该组合物是由如下原料药制成的：丹参 5-50重量份; 醋炙鳖甲 5-50重量份;生黄芪 5-30重量份; 全 当 归 5-30重量份;虫草菌丝 3-30重量份; 党参 5-30重量份;三七末 0.5-10重量份; 莪术 3-30重量份;酒大黄 3-30重量份; 川牛膝 5-30重量份。该组合物用于治疗慢性肾间质纤维化及慢性肾脏疾病肾功能不全。
Description
发明领域
本发明涉及一种药物组合物及其制备方法和制药新用途，特别涉及一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物及其制备方法和制药新用途。
背景技术
对含马兜铃酸(aristolochic acid，AA)成分的中草药导致的马兜铃酸肾病(aristolochicacidnephropathy，AAN)现已被确认，并日益受到重视。但是，至今AAN的发病机制仍不十分清楚，也无良好的治疗方法。而近年来关于关木通等含马兜铃酸成分中药引起的慢性马兜铃酸肾病(chronicaristolochic acid nephropathy，CAAN)的报道也很广泛，该病临床以进行性肾功能减退、病理以寡细胞性肾间质纤维化为主要特点，不仅病情发展较快，而且危害很大，常可造成不可逆性终末期肾衰竭，至今尚无成熟的治疗方案。
发明内容
本发明的一个目的在于公开一种药物组合物；本发明的另一个目的在于公开一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物；本发明的第三个目的在于该药物组合物的制备方法；本发明的第四个目的在于公开该药物组合物的制药新用途。
本药物组合物的原料药按重量份组成及配比如下：
丹 参5-50重量份 醋炙鳖甲5-50重量份
生 黄 芪5-30重量份 全 当 归5-30重量份
虫草菌丝3-30重量份 党 参5-30重量份
三 七 末0.5-10重量份 莪 术3-30重量份
酒 大 黄3-30重量份 川 牛 膝5-30重量份。
本药物组合物的原料药按重量份优选组成及配比如下：
丹 参25重量份 醋炙鳖甲25重量份
生 黄 芪15重量份 全 当 归15重量份
虫草菌丝10重量份 党 参15重量份
三七末3重量份 莪 术12重量份
酒大黄10重量份 川牛膝15重量份。
本药物组合物的原料药按重量份优选组成及配比如下：
丹 参10重量份 醋炙鳖甲40重量份
生 黄 芪10重量份 全 当 归20重量份
虫草菌丝5重量份 党 参25重量份
三 七 末1重量份 莪 术25重量份
酒 大 黄3重量份 川 牛 膝20重量份。
本药物组合物的原料药按重量份优选组成及配比如下：
丹 参40重量份 醋炙鳖甲10重量份
生 黄 芪20重量份 全 当 归10重量份
虫草菌丝25重量份 党 参5重量份
三 七 末9重量份 莪 术6重量份
酒 大 黄20重量份 川 牛 膝10重量份。
取上述组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的合剂、浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂等。
本药物组合物制备方法如下：
取原料药，其中三七末另包后入药；其余原料药加入5-15倍体积水，浸泡2-6小时，加热至微沸，煎煮1-3小时，回收提取液，同法再煮提取一次，两次提取液合并；加入三七末搅拌，浓缩，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的合剂、浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂或口服液体制剂。
本药物组合物优选制备方法如下：
取原料药，其中三七末另包后入药；其余原料药加入9倍体积水，浸泡4小时，加热至微沸，煎煮2小时，回收提取液，同法再煮提取一次，两次提取液合并；加入三七末搅拌，浓缩，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的合剂、浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂或口服液体制剂。
本发明药物组合物用于治疗肾间质纤维化、各种慢性肾脏疾病肾功能不全。
本发明药物组合物(水煎剂)经临床研究证实，具有很好的逆转或减轻肾间质纤维化，改善肾功能的功效，可拮抗马兜铃酸对人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts，hRIFs)作用所致CAAN；可拮抗马兜铃酸对人近端肾小管上皮细胞株(HKC)细胞作用所致AAN；可治疗慢性肾间质纤维化所致肾功能不全。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1益肾软坚散含药血清拮抗马兜铃酸对人肾间质成纤维细胞的作用
雄性SD大鼠2月龄，体重270-290g，禁食不禁水16h、，不麻醉，以益肾软坚散水煎剂灌胃(每次灌胃量为11ml/kg体重，此药量相当于60kg体重人的10倍)，分别于单次灌胃后1h及第二次灌胃(间隔2h)后0.5h，1h和1.5h从大鼠内眦静脉采血(每个时间点取6只大鼠)，离心后留取血清，将6只大鼠血清混合，过滤除菌，56℃灭活30min，此为实验用含药血清。同法取大鼠正常血清。高效液相色谱法(high performance liquidchromatography，HPLC)测定各个时间点的大鼠血清丹参素含量。按实验要求分别于-30℃和-80℃保存含药血清。
(1)大鼠含药血清或(和)AA-Na对hRIFs细胞增殖和毒性作用的检测
LDH释放实验结果表1显示，AA-Na 40μg/ml与10％大鼠含药血清共同孵育hRIFs 48h后(每个浓度6孔)，与对照组(不加AA-Na和大鼠血清)比较差异无显著性[LDH释放率(％)为：14.50±2.48、13.10±0.74(P＞0.05)]，说明本实验含量的AA-Na和大鼠含药血清共同孵育对hRIFs无细胞毒性作用。
表1大鼠含药血清和AA-Na对hRIFs的增殖作用和毒性效应(x±s)
(2)大鼠含药血清对AA-Na刺激的hRIFs基因和蛋白质表达的作用
分别将实验分组的1组(对照组：不加AA-Na及大鼠血清)与2组(AA-Na40μg/ml组)比较，3组(10％大鼠正常血清组)与4组(10％大鼠正常血清组+AA-Na 40μg/ml组)比较，发现加入AA-Na 40μg/ml均能显著上调hRIFs对TGF-β1、CTGF、PAI-1、TIMP-1和Col I mRNA和蛋白质的表达(P＜0.05)。4组与5组(10％大鼠含药血清加AA-Na 40μg/ml)比较，结果显示10％大鼠含药血清显著下调AA-Na(40μg/ml)所致hRIFs对TGF-β1、CTGF、PAI-1、TIMP-1及Col I mRNA和蛋白质的高表达(P＜0.05)。
表2AA-Na、大鼠含药血清对hRIFs基因表达的影响(x±s)
注：表内数值为目的基因相对表达量：与1组比较，*P＜0.05；与4组比较：ΔP＜0.05
表3AA-Na、大鼠含药血清对hRIFs合成蛋白质的作用(x±s)
注：与1组比较，*P＜0.05；与4组比较：ΔP＜0.05
以上研究结果表明：益肾软坚散含药血清可拮抗马兜铃酸对人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts，hRIFs)作用所致CAAN。
实验例2益肾软坚散含药血清拮抗马兜铃酸对人近端肾小管上皮细胞的作用
(1)大鼠血清及AA-Na对HKC细胞增殖和毒性作用的检测
LDH释放实验结果显示，当大鼠含药血清含量在5％和10％时对HKC细胞无明显毒性作用(P＞0.05)，而20％含量时大鼠含药血清对HKC有杀伤作用(P＜0.05)，故以下实验大鼠含药血清所选含量为10％；AA-Na在10，20，40mg·L-1对HKC无明显毒性作用(P＞0.05)，而80mg·L-1时AA-Na对HKC有杀伤(P＜0.05)，故以下刺激实验AA-Na所选含量为40mg·L-1。为此又对10％大鼠含药血清加AA-Na40mg·L-1再次进行了细胞毒性检测，LDH释放率与对照组比较仍无显著性差异(P＞0.05)(表1)。以上结果说明，本实验含量的AA-Na和大鼠含药血清共同孵育对HKC无细胞毒性作用。
表4不同含量益肾软坚散含药血清和AA-Na对HKC细胞毒性效应(x±s，n＝6)
注：与对照组比较1)P＜0.05
表5不同含量大鼠正常血清和益肾软坚散含血清对HKC细胞的增殖作用
注：与对照组比较1)P＜0.05；与同含量的正常血清比较2)P＞0.05；
(2)大鼠含药血清对AA-Na刺激的HKC表达TGF-β1，CTGF、PAl-1和TIMP-1的作用
分别将实验分组的对照组与AA-Na组比较，大鼠血清组与大鼠血清+AA-Na组比较，发现在普通培养(对照组与AA-Na组)和10％大鼠正常血清培养(大鼠血清组与大鼠血清+AA-Na40mg·L-1均能显著上调HKC对TGF-β1，CTGF、PAl-1和TIMP-1 mRNA和蛋白质的表达(P＜0.05)。将大鼠血清+AA-Na组与含药血清+AA-Na组比较，发现10％大鼠含药血清显著下调了AA-Na40mg·L-1导致的HKC对蛋白质的高表达(P＜0.05)。
表6益肾软坚散含药血清对AA-Na刺激HKC基因表达的影响(x±s，n＝3)
注：表内数值为目的基因相对表达量；与对照组比较1)P＜0.05；与大鼠血清+AA-Na组比较2)P＜0.05；
表7益肾软坚散含药血清对AA-Na刺激HKC合成蛋白质的作用(x±s，n＝3)
注：与对照组比较1)P＜0.05；与大鼠血清+AA-Na组比较2)P＜0.05；
以上研究结果表明，益肾软坚散含药血清可拮抗马兜铃酸对人近端肾小管上皮细胞株(HKC)细胞作用所致AAN。
实验例3益肾软坚散对慢性马兜铃酸肾病大鼠模型肾间质纤维化的保护作用
雄性SD大鼠18只，分为3组，每组大鼠6只。对照组：用自来水每日清晨灌胃；模型组：用关木通浸膏水溶液清晨灌胃，方法与文献相同；中药组：在模型组基础上，同步以益肾软坚散水煎剂1ml/100g体重每日下午灌胃；共灌16周。
(1)各组大鼠不同时间点体重比较
实验前各组大鼠体重差异无显著性(数据略)，模型组及中药组大鼠给药后各周体重均显著低于对照组；中药组大鼠与模型组比较各周体重差异无显著性。
表8各组大鼠不同时间点体重变化比较(g，x±s)
注：与对照组比较，*P＜0.01
(2)各组大鼠不同时间点尿蛋白定量比较
实验前各组大鼠尿蛋白定量差异无显著性(P＞0.05).模型组及中药组大鼠给药后各周尿蛋白定量均显著高于对照组(P＜0.01).中药组大鼠自用药第4周开始尿蛋白定量低于模型组，但两组比较差异无显著性(P＞0.05)。
表9各组大鼠不同时间点尿蛋白定量比较(mg/24h，x±s)
注：与对照组比较，*P＜0.01
(3)各组大鼠不同时间点尿β2微球蛋白比较
实验结果显示：1周时，模型组及中药组均比对照组显著升高(P＜0.01)，4、8周有所回落，但差异仍有显著性(P＜0.05)，16周时中药组比模型组减低，且差异有显著性(P＜0.05)。
表10各组大鼠不同时间点尿β2微球蛋白变化比较(ng/24h，x±s)
注：与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较：ΔP＜0.05
(4)各组大鼠不同时间点SCr值比较
协方差分析结果显示实验前各组大鼠的SCr值差异无显著性(P＞0.05).模型组大鼠给药后各时间点SCr值均高于对照组，除第4周外差异均有显著性(P＜0.05，P＜0.01)。中药组大鼠SCr变化趋势与模型组同，但在用药后第12、16周其值低于模型组(P＜0.05)。
表11各组大鼠不同时间点SCr值比较(μmol/L，x±s)
注：与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较：ΔP＜0.05
(5)各组大鼠肾组织病理检查结果比较
实验结果显示：16周时肾间质纤维化相对面积(％)：模型组(3.964±0.739)及中药组(1.021±0.469)显著高于对照组(0.158±0.059)，差异均有显著性(P＜0.01)，而中药组大鼠肾间质纤维化相对面积显著低于模型组(P＜0.01)。
表12大鼠肾组织病理改变的半定量结果
注：与对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，ΔP＜0.01
(6)各组大鼠肾组织各指标的mRNA表达
实验结果显示：16周时模型组及中药组各指标mRNA表达较对照组显著升高(P＜0.01)，但中药组上述指标较模型组显著下降(P＜0.01)。
表13各组大鼠肾组织各指标的mRNA表达(x±s)
注：与对照组比较，*P＜0.01，与模型组比较，ΔP＜0.01；表内数值为目的基因相对表达量
(7)各组大鼠肾组织各指标的蛋白质表达
实验结果显示：16周时各指标的蛋白质表达结果与mRNA表达结果一致。
表14各组大鼠肾组织各指标的蛋白质表达(％，x±s)
注：与对照组比较，*P＜0.01，与模型组比较，ΔP＜0.01；表内数值为阳性表达相对面积量。
以上研究结果表明，益肾软坚散含药血清可治疗慢性肾间质纤维化所致肾功能不全。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
实施例1：
丹 参25kg 醋炙鳖甲25kg 生黄芪15kg
全当归15kg 虫草菌丝10kg 党 参15kg
三七末3kg 莪 术12kg 酒大黄10kg
川牛膝15kg
本药物组合物通过常规工艺制成口服液。
实施例2：
丹 参10kg 醋炙鳖甲40kg 生黄芪10kg
全当归20kg 虫草菌丝5kg 党 参25kg
三七末1kg 莪 术25kg 酒大黄3kg
川牛膝20kg
本药物组合物通过常规工艺制成冻干粉针剂。
实施例3：
丹 参40kg 醋炙鳖甲10kg 生黄芪20kg
全当归10kg 虫草菌丝25kg 党 参5kg
三七末9kg 莪 术6kg 酒大黄20kg
川牛膝10kg
本药物组合物通过常规工艺制成软胶囊剂。
实施例4：
丹 参25kg 醋炙鳖甲25kg 生黄芪15kg
全当归15kg 虫草菌丝10kg 党 参15kg
三七末3kg 莪 术12kg 酒大黄10kg
川牛膝15kg
以上生药加入9倍体积水，浸泡4小时(三七末另包后入药)，加热至微沸，文火煎煮2小时，回收提取液，同法再煮提取一次，两次提取液合并，加入三七末搅拌并浓缩为含生药2g/ml的合剂。
实施例5：
丹 参10kg 醋炙鳖甲40kg 生黄芪10kg
全当归20kg 虫草菌丝5kg 党 参25kg
三七末1kg 莪 术25kg 酒大黄3kg
川牛膝20kg
以上生药加入15倍体积水，浸泡2小时，其中三七末另包后入药，加热至微沸，文火煎煮3小时，回收提取液，同法再煮提取一次，两次提取液合并，加入三七末搅拌并浓缩为含生药1g/ml的糖浆剂。
实施例6：
丹 参40kg 醋炙鳖甲10kg 生黄芪20kg
全当归10kg 虫草菌丝25kg 党 参5g
三七末9kg 莪 术6kg 酒大黄20kg
川牛膝10kg
以上生药加入5倍体积水，浸泡6小时，其中三七末另包后入药，加热至微沸，文火煎煮1小时，回收提取液，同法再煮提取一次，两次提取液合并，加入三七末搅拌并浓缩为含生药3g/ml的合剂。
Claims (12)
1、一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物，其特征在于该组合物是由如下原料药制成的：
丹参5-50重量份 醋炙鳖甲5-50重量份
生黄芪5-30重量份 全当归5-30重量份
虫草菌丝3-30重量份 党参5-30重量份
三七末0.5-10重量份 莪术3-30重量份
酒大黄3-30重量份 川牛膝5-30重量份。
2、如权利要求1所述的一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物，其特征在于该组合物是由如下原料药制成的：
丹参25重量份 醋炙鳖甲25重量份
生黄芪15重量份 全当归15重量份
虫草菌丝10重量份 党参15重量份
三七末3重量份 莪术12重量份
酒大黄10重量份 川牛膝15重量份。
3、如权利要求1所述的一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物，其特征在于该组合物是由如下原料药制成的：
丹参10重量份 醋炙鳖甲40重量份
生黄芪10重量份 全当归20重量份
虫草菌丝5重量份 党参25重量份
三七末1重量份 莪术25重量份
酒大黄3重量份 川牛膝20重量份。
4、如权利要求1所述的一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物，其特征在于该组合物是由如下原料药制成的：
丹参40重量份 醋炙鳖甲10重量份
生黄芪20重量份 全当归10重量份
虫草菌丝25重量份 党参5重量份
三七末9重量份 莪术6重量份
酒大黄20重量份 川牛膝10重量份。
5、如权利要求1～4任一所述的一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物，其特征在于该组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成浓缩丸剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。
6、如权利要求1～4任一所述的一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物，其特征在于该组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成合剂、滴丸剂或软胶囊剂。
7、如权利要求1～4任一所述的一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
取原料药，其中三七末另包后入药；其余原料药加入5-15倍体积水，浸泡2-6小时，加热至微沸，煎煮1-3小时，回收提取液，同法再煮提取一次，两次提取液合并；加入三七末搅拌，浓缩，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的浓缩丸剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂或口服液体制剂。
8、如权利要求7所述的一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
取原料药，其中三七末另包后入药；其余原料药加入9倍体积水，浸泡4小时，加热至微沸，煎煮2小时，回收提取液，同法再煮提取一次，两次提取液合并，加入三七末搅拌，浓缩，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的浓缩丸剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂或口服液体制剂。
9、如权利要求1～4任一所述的一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
取原料药，其中三七末另包后入药；其余原料药加入5-15倍体积水，浸泡2-6小时，加热至微沸，煎煮1-3小时，回收提取液，同法再煮提取一次，两次提取液合并；加入三七末搅拌，浓缩，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的合剂、滴丸剂或软胶囊剂。
10、如权利要求7所述的一种治疗慢性肾间质纤维化的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
取原料药，其中三七末另包后入药；其余原料药加入9倍体积水，浸泡4小时，加热至微沸，煎煮2小时，回收提取液，同法再煮提取一次，两次提取液合并，加入三七末搅拌，浓缩，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的合剂、滴丸剂或软胶囊剂。
11、如权利要求1～4任一所述的药物组合物在制备治疗肾间质纤维化的药物中的应用。
12、如权利要求1～4任一所述的药物组合物在制备治疗慢性肾脏疾病肾功能不全的药物中的应用。
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| 复方鳖甲软肝片防治大鼠腺嘌呤性慢性肾衰竭作用的实验研究. 赵宗江，魏晨，杨美娟，牛建昭.中国中西医结合肾病杂志，第6卷第12期. 2005 |
| 复方鳖甲软肝片防治大鼠腺嘌呤性慢性肾衰竭作用的实验研究. 赵宗江，魏晨，杨美娟，牛建昭.中国中西医结合肾病杂志，第6卷第12期. 2005 * |
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| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20091007 Termination date: 20120113 |