CN100431566C - 一种中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用的中药组合物及其制备方法。本发明公开的中药组合物是以中药云芝、三七、丹参、苦参和芍药为原料提取获得的有效成份提取物，其中各药材的重量比为：云芝∶三七∶丹参∶苦参∶芍药＝1∶0.2-5∶0.5-10∶0.5-10∶0.2-5。本发明还公开了该中药组合物的制备方法。本发明中药组合物特别适用于治疗乙肝以及由于病毒感染、药物、饮酒等原因引起的肝纤维化或肝硬化等疾病。

Description

一种中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及中药制药技术领域，具体涉及一种具有抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用的中药组合物及其制备方法。

背景技术

肝纤维化是指肝脏纤维结缔组织的过度沉积，是纤维增生和纤维分解不平衡的结果。纤维增生是机体对于损伤的一种修复反应，各种病因所致反复或持续的慢性肝实质炎症、坏死可导致肝脏持续不断的纤维增生而形成肝纤维化，从许多慢性肝病，特别是慢性病毒性肝炎的临床及病理演变来看，肝纤维化和肝硬化是连续的发展过程，二者难以截然分开。近年研究表明：病理证实的轻度慢性肝炎中62.6％有肝纤维化，中度、重度慢性肝炎及肝硬化则100％有肝纤维化。抗纤维化的治疗旨在减轻纤维化的程度、延缓其发展，乃至逆转其病理进程。为此抗纤维化的治疗应包括：①针对致病因子，治疗原发病。如抗肝炎病毒，治疗血吸虫病，防治酒精中毒等；②对抗肝纤维化发生发展的治疗；③如已发展至肝硬化，则需对其合并症进行防治；④对症及恢复肝功能的治疗。目前正在研究的防治肝纤维化的药物有以下几种：

1.抑制胶原合成：干扰素、肾上腺皮质激素

2.作用于前胶原mRNA转译后的环节：秋水仙碱(Colchicine)

3.促进胶原降解的治疗：不饱和卵磷脂(PUL)

4.中医中药的治疗：强肝软坚汤、葫芦素B、齐墩果酸、甘草甜素与甘草次酸、丹参、虫草菌丝、桃仁、田三七、氧化苦参碱等。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于根据中医药理论，采用现代制药工艺，提供一种具有显著抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用的中药组合物。

本发明公开的具有显著抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用的中药组合物是以中药云芝、三七、丹参、苦参和芍药为原料提取获得的有效成份提取物，其中各药材的重量比为：云芝∶三七∶丹参∶苦参∶芍药＝1∶0.2-5∶0.5-10∶0.5-10∶0.2-5，优选的重量比为：云芝∶三七∶丹参∶苦参∶芍药＝1∶1∶1.5∶1.5∶1。

所述的有效成份提取物含各中药的有效部位包括云芝糖肽、三七总皂苷、丹参总酚酸、苦参总生物碱和黄酮以及芍药总苷，其中多糖、肽、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱和芍药苷等可定量的有效成分重量百分含量之和≥50％。

本发明中药组合物可与各种药用辅料配制成医学上可接受的不同给药途径的药物制剂，尤其适于制备成口服制剂，包括各种片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂和口服液。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述具有抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用的中药组合物的制备方法。

本发明公开的上述中药组合物的制备方法包括：

1、合并提取法：

按配比取云芝菌丝体或子实体，热水提取，浓缩，乙醇沉淀，固液分离，干燥，粉碎，即得到云芝糖肽提取物，其中糖肽的百分含量之和≥50％；按配比取除云芝外其他药材，粉碎，用甲醇、乙醇和水中的一种或一种以上溶剂进行浸泡、回流、渗漉或其他动态提取方法提取，浓缩提取液，浓缩液加水稀释，过滤或离心除去不溶物，上大孔吸附树脂吸附，纯水洗脱杂质，低分子有机醇水溶液洗脱有效部位，浓缩、干燥，即得其他药材有效部位提取物(含丹参总酚酸、苦参总生物碱及总黄酮、三七总皂苷和芍药总苷)；将两种提取物合并即为本发明中药组合物；

或

2、分步提取法：

(1)云芝糖肽提取：按配比取云芝菌丝体或子实体，热水提取，浓缩，乙醇沉淀，固液分离，干燥，粉碎，即得到云芝糖肽提取物，其中糖肽的百分含量之和≥50％；

(2)丹参总酚酸提取：按配比取丹参药材粉碎，热水提取，明胶沉淀鞣酸，过滤，浓缩，醇沉，浓缩，调节pH1-3，乙酸乙酯萃取或大孔吸附树脂提取，萃取液减压浓缩，干燥粉碎，得丹参总酚酸；

(3)苦参总生物碱和总黄酮提取：按配比取苦参药材粉碎，酸水渗漉，渗漉液过阳离子交换树脂，纯水洗去杂质，树脂氨化，有机溶剂洗脱，洗脱液减压浓缩，干燥粉碎，得苦参总生物碱；过阳离子交换树脂后的渗漉液，再由大孔吸附树脂吸附，纯水洗除杂质，低分子有机醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩，干燥粉碎即得苦参总黄酮；

(4)三七总皂苷和芍药总苷的提取：按配比取三七粉、芍药粉，分别用乙醇渗漉或回流提取，提取液浓缩去醇后加水稀释，过滤，滤液上大孔吸附树脂吸附，纯水洗除杂质，乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥粉碎即得三七总皂苷和芍药总苷；

(5)合并步骤(1)至(4)的提取物，即得本发明中药组合物。

本发明优选的中药组合物中各有效部位的制备方法为：

(1)云芝糖肽的制备：取云芝菌丝体或子实体粉，6-12倍量热水煎煮2-4次，每次1-4小时，水煎液合并，减压浓缩至相当于药材1-3g/ml，加2-6倍量95％乙醇沉淀，静置过夜，过滤，取沉淀干燥、粉碎，得云芝糖肽。

(2)三七、丹参、苦参和芍药有效部位制备：按配比取三七、丹参、苦参和芍药药材，粉碎，用8-15倍量50-80％乙醇渗漉提取，渗漉液浓缩至无醇味，加水稀释，过滤，滤液上大孔吸附树脂吸附，树脂用量为药材量的0.5-3倍，2-4倍树脂体积的纯水洗脱杂质，3-6倍树脂体积的30-95％乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥粉碎即得。

(3)丹参总酚酸的制备：丹参粉加6-15倍量水，60-100℃提取2-4次，每次0.5-2小时，水煎液合并，加5％明胶沉淀鞣酸，过滤，滤液减压浓缩至相当于药材0.5-2g/mL，加2-5倍量95％乙醇沉淀，上清液浓缩至无醇味，用盐酸调节pH1-3，乙酸乙酯萃取2-5次或大孔树脂吸附提取(树脂用量为药材量的0.5-3倍)，提取液减压浓缩，干燥粉碎，得丹参总酚酸。

(4)苦参总生物碱和总黄酮的制备：苦参粉用8-15倍量0.05-1％酸水渗漉提取，渗漉液过阳离子交换树脂，纯水洗去杂质，树脂氨化，乙醇、氯仿等溶剂洗脱，洗脱液减压浓缩，干燥粉碎，得苦参总生物碱。过阳离子交换树脂后的渗漉液，再由大孔吸附树脂吸附，树脂用量为药材量的0.5-3倍，用2-4倍体积纯水洗除杂质，3-6倍30-95％乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥粉碎即得苦参总黄酮。

(5)三七总皂苷和芍药总苷的制备：取三七粉、芍药粉，分别用8-15倍50-95％乙醇渗漉或回流提取。提取液浓缩至无醇味，加水稀释，过滤，滤液上已处理好的大孔吸附树脂吸附，树脂用量为药材量的0.5-3倍，2-4倍体积纯水洗除杂质，3-6倍30-95％乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥粉碎即得三七总皂苷和芍药总苷。

本发明中药组合物制备过程中所用的大孔吸附树脂选自常规使用的大孔树脂，包括非极性、弱极性的D101、HPD100以及中等极性的HPD400、AB-8、ALS-5等大孔树脂。用以洗脱有效部位的低分子有机醇水溶液选自甲醇、乙醇或丙醇等小分子有机溶剂和水组成的混合溶液。

本发明制备方法中所述的阳离子交换树脂是指732型阳离子交换树脂。

本发明制备方法中所述的浓度，除标明外均为体积浓度。

本中药组合物采用紫外分光光度法测定多糖、肽，HPLC法测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱和芍药苷，结果以上可定量有效成分的重量百分含量之和≥50％。

本发明所要解决的再一技术问题在于公开所述中药组合物在制备抗乙肝病毒和防治肝纤维化药物中的应用。特别是本发明中药组合物可用于治疗乙肝以及由于病毒感染、药物、饮酒等原因引起的肝纤维化或肝硬化等疾病。

本中药组合物在综合考虑慢性肝病正虚邪实的病理过程基础上，选用云芝、三七作为君药补益正气、增强免疫功能，苦参、丹参、芍药为臣药清热解毒、活血化瘀，君臣药协同作用以达到扶正驱邪、抗肝纤维化形成和抑制HBV病毒复制，最终起到改善肝功能、保肝护肝的治疗效果。

本发明中药组合物可作为抗乙肝病毒和防治肝纤维化药物的活性成份，与适量药用辅料按常规方法配制成各种医学上可接受的中药复方制剂，包括口服制剂和注射剂，尤其常用的为口服制剂，含各种片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂或粉剂。

用本发明中药组合物进行相关的毒性试验，结果显示在有效治疗剂量下安全无毒。

急性毒性实验研究表明，小鼠经口给予本中药组合物的半数致死量为2.4g·kg^-1。

长期毒性实验研究表明，大鼠经口给药本中药组合物160mg(10倍于人临床用量)、320mg(20倍于人临床用量)、640mg(40倍于人临床用量)，未见明显毒性反应，心电图、组织病理学等检查未见明显异常。

用本发明中药组合物进行相关的药效学试验，结果显示：

本发明中药组合物具有显著的抗乙肝病毒作用，对HbsAg、HbeAg的抑制作用明显高于对照组(同浓度阿西洛韦)，P＜0.01。

本发明中药组合物具有显著的抗肝纤维化作用，使肝细胞脂肪变性、混浊肿胀较轻，部分肝组织脂变仅局限于肝小叶外周部分肝细胞，纤维结缔组织增生明显轻于模型组(H.E染色)。绝大多数动物仅见汇管区胶原染色(丽春红胶原染色)增宽或略向小叶内伸展，极个别有不完全间隔形成，与模型组相比均有统计学差异，P＜0.01。

本发明中药组合物对小鼠化学性肝损伤具有预防和治疗作用，能预防和治疗四氯化碳所致急性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶的升高。

本发明中药组合物具有促进体重恢复作用，大鼠体重增长速度明显加快，实验结束时的体重与模型组比较有显著差异，P＜0.05。

下面结合实施例对本发明作进一步的描述。

附图说明

图1实施例1中药组合物中苦参生物碱的HPLC图谱

其中A为Oxymatrine氧化苦参碱，B为Sophoridine槐定碱，C为Matrine苦参碱。

图2实施例1中药组合物中苷类成分的HPLC图谱

其中A为Paeoniflorin芍药苷，B为人参皂苷Rg1，C为人参皂苷Rb1。

具体实施方式

实施例1

取云芝糖肽菌丝体10kg，切碎，热水煎煮3次，第一次100L水煎煮3小时，第二次80kg水煎煮2小时，第三次60L水煎煮1小时，煎液合并，减压浓缩至5L，加20L95％乙醇沉淀，静置过夜，过滤，沉淀干燥，粉碎过100目，得云芝糖肽783.0g，得率为7.83％。

取三七、丹参、苦参和芍药粉碎成粗粉，按处方量取三七粉10kg、丹参粉15kg、苦参粉15kg和芍药粉10kg，600L 70％乙醇渗漉提取，渗漉液浓缩至无醇味，加水40L溶解，过滤，沉淀再加水10L溶解，过滤，滤液合并后上50L已处理好的HPD100型大孔吸附树脂吸附，用150L纯水洗除杂质，200L 70％乙醇洗脱有效成分，洗脱液浓缩，干燥，粉碎过100目，即得三七、丹参、苦参和芍药提取物2120.0g，得率为4.24％。

取上述云芝糖肽与三七、丹参、苦参和芍药提取物混合均匀，即得中药组合物2903g。经HPLC法、酚-硫酸法、Lowry法和铁氰化钾-三氯化铁比色法分别测定本组合物中苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、芍药苷以及云芝多糖肽和丹参总酚酸的含量，结果以上有效成分含量之和为56.7％。

实施例2

取云芝糖肽子实体10kg，切碎，热水煎煮2次，第一次120L水煎煮4小时，第二次100kg水煎煮3小时，煎液合并，减压浓缩至4L，加12L95％乙醇沉淀，静置过夜，过滤，沉淀干燥，粉碎过100目，得云芝糖肽576g，得率为5.76％。

取三七、丹参、苦参和芍药粉碎成粗粉，按处方量取三七粉5kg、丹参粉20kg、苦参粉10kg和芍药粉15kg，500L 50％乙醇渗漉提取，渗漉液浓缩至无醇味，加水40L溶解，过滤，沉淀再加水10L溶解，过滤，滤液合并后上40L已处理好的AB8型大孔吸附树脂吸附，用100L纯水洗除杂质，200L 50％乙醇洗脱有效成分，洗脱液浓缩，干燥，粉碎过100目，即得三七、丹参、苦参和芍药提取物1986g，得率为3.97％。

取上述云芝糖肽与三七、丹参、苦参和芍药提取物混合均匀，即得中药组合物2562g。经HPLC法、酚-硫酸法、Lowry法和铁氰化钾-三氯化铁比色法分别测定本组合物中苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、芍药苷以及云芝多糖肽和丹参总酚酸的含量，结果以上有效成分含量之和为51.6％。

实施例3

取云芝糖肽菌丝体10kg，切碎，热水煎煮3次，第一次80L水煎煮3小时，第二次60kg水煎煮2小时，第三次60L水煎煮1小时，煎液合并，减压浓缩至6L，加30L95％乙醇沉淀，静置过夜，过滤，沉淀干燥，粉碎过100目，得云芝糖肽691g，得率为6.91％。

取三七、丹参、苦参和芍药粉碎成粗粉，按处方量取三七粉15kg、丹参粉10kg、苦参粉20kg和芍药粉5kg，700L 60％乙醇渗漉提取，渗漉液浓缩至无醇味，加水40L溶解，过滤，沉淀再加水10L溶解，过滤，滤液合并后上75L已处理好的HPD400型大孔吸附树脂吸附，用150L纯水洗除杂质，250L 80％乙醇洗脱有效成分，洗脱液浓缩，干燥，粉碎过100目，即得三七、丹参和苦参提取物2430.3g，得率为4.86％。

取上述云芝糖肽与三七、丹参和苦参提取物混合均匀，即得中药组合物3121g。经HPLC法、酚-硫酸法、Lowry法和铁氰化钾-三氯化铁比色法分别测定本组合物中苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、芍药苷以及云芝多糖肽和丹参总酚酸的含量，结果以上有效成分含量之和为53.7％。

实施例4

取云芝糖肽菌丝体10kg，切碎，热水煎煮3次，第一次100L水煎煮3小时，第二次80kg水煎煮2小时，第三次60L水煎煮1小时，煎液合并，减压浓缩至5L，加20L95％乙醇沉淀，静置过夜，过滤，沉淀干燥，粉碎过100目，得云芝糖肽783.0g，得率为7.83％。

丹参粗粉15kg水煎三次，第一次150L水煎煮1小时，第二次120L水煎煮1小时，第三次90L水煎煮0.5小时，水煎液合并，加入750g溶胀好的明胶溶液，过滤，滤液减压浓缩至15L，加20升95％乙醇沉淀，上清液浓缩至3L，用盐酸调节pH2，分别加乙酸乙酯3L、3L、2L萃取3次，萃取液减压浓缩，干燥，粉碎过100目，得丹参总酚酸505.6g，得率3.37％。

苦参粗粉15kg用180L 0.1％的盐酸水溶液渗漉提取，渗漉液过10升处理好的732型阳离子交换树脂柱(上柱液收集备用)，30L纯水洗去杂质，树脂沥干，重新装柱，加300mL氨水碱化，50L75％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩至2000mL，加入NaCO₃调节pH10，分别加2000mL、2000mL、1000mL氯仿萃取3次，萃取液回收氯仿，浓缩干燥粉碎，得稠膏状苦参总碱363.2g，得率1.82％。

取过离子交换树脂柱的苦参提取液，调节PH7，离心除去沉淀，上清液用10L已处理好的HPD400型大孔吸附树脂吸附，采用20L纯水洗除杂质，40L70％乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥粉碎即得苦参总黄酮提取物278.3g，得率为1.85％。

取三七和芍药粗粉各10kg，混匀，用240升70％乙醇渗漉提取。提取液浓缩至无醇味，加水稀释至40升，过滤，滤液进15L HPD400型大孔吸附树脂吸附，吸附完全后采用90L纯水洗除杂质，120L 70％乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥粉碎即得三七总皂苷和芍药总苷提取物1137.3g，得率为5.69％。

取云芝胞内糖肽与苦参总碱混匀，真空干燥，粉碎过100目，再与三七、丹参和芍药提取物以及苦参总黄酮混合均匀，即得中药组合物3067.4g。经HPLC法、酚-硫酸法、Lowry法和铁氰化钾-三氯化铁比色法分别测定本组合物中苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、芍药苷以及云芝多糖肽和丹参总酚酸的含量，结果以上有效成分含量之和为54.8％。

实施例5

取云芝糖肽菌丝体10kg，切碎，热水煎煮3次，第一次80L水煎煮3小时，第二次60kg水煎煮2小时，第三次60L水煎煮1小时，煎液合并，减压浓缩至6L，加30L95％乙醇沉淀，静置过夜，过滤，沉淀干燥，粉碎过100目，得云芝糖肽691g，得率为6.91％。

丹参粗粉15kg水煎三次，第一次120L水煎煮1小时，第二次120L水煎煮1小时，第三次90L水煎煮0.5小时，水煎液合并，加入500g溶胀好的明胶溶液，过滤，滤液减压浓缩至10L，加20升95％乙醇沉淀，上清液浓缩至无醇味，加水至15L，过滤，滤液上15升AB8型大孔吸附树脂吸附，吸附完全后采用30L纯水洗除杂质，60L70％乙醇洗脱，萃取液减压浓缩，干燥，粉碎过100目，得丹参总酚酸374.1g，得率2.49％。

苦参粗粉15kg用180L0.1％的盐酸水溶液渗漉提取，渗漉液过10升处理好的732型阳离子交换树脂柱(上柱液收集备用)，50L纯水洗去杂质，树脂沥干，重新装柱，加300mL氨水碱化，50L75％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩至2000mL，加入NaCO₃调节pH10，分别加2000mL、2000mL、1000mL氯仿萃取3次，萃取液回收氯仿，浓缩干燥粉碎，得稠膏状苦参总碱363.2g，得率1.82％。

取过离子交换树脂柱的苦参提取液，调节PH7，离心除去沉淀，上清液用15L已处理好的AB8型大孔吸附树脂吸附，采用45L纯水洗除杂质，60L70％乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥粉碎即得苦参总黄酮提取物238.3g g，得率为1.59％。

取三七和芍药粗粉各10kg，分别用120升70％乙醇渗漉提取，提取液浓缩至无醇味，加水稀释至20升，过滤，滤液上10升AB8型大孔吸附树脂吸附，吸附完全后采用20L纯水洗除杂质，40L70％乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥粉碎即分别得三七总皂苷800.2g、芍药总苷330.4g，得率分别为8.0％和3.3％。

取云芝糖肽与苦参总碱混匀，真空干燥，粉碎过100目，再与三七、丹参、苦参和芍药提取物混合均匀，即得中药组合物2797g。经HPLC法、酚-硫酸法、Lowry法和铁氰化钾-三氯化铁比色法分别测定本组合物中苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、芍药苷以及云芝多糖肽和丹参总酚酸的含量，结果以上有效成分含量之和为57.4％。

实施例6

取实例1中药组合物29kg，加入15％淀粉浆，混匀制成软材，湿法制成20目左右的软颗粒，60℃下干燥，通过18目整粒，加适量硬脂酸镁、滑石粉，总混，分装胶囊，得规格为300mg的中药组合物的胶囊100000粒。

实施例7

取实例4中药组合物27.7kg，加入20％淀粉浆，混匀制成软材，湿法制成20目左右的软颗粒，60℃下干燥，通过18目整粒，然后加入适量硬脂酸镁、滑石粉，总混，压片，得规格为300mg的中药组合物的片剂100000片。

实施例8

取实例5中药组合物29kg，加入15％淀粉浆，混匀制成软材，湿法制成14目左右的软颗粒，60℃下干燥，通过16目整粒，加适量硬脂酸镁、滑石粉，总混，分装，得规格为1000mg的中药组合物颗粒剂30000包。

实施例9药效试验

本发明中药组合物(芝参正肝胶囊)体外抗乙肝病毒实验研究结果表明，采用MTT法测定样品对细胞的毒性，其最大无毒浓度为100μg/ml，在HepG22.2.1.5体外细胞模型上采用ELISA法检测样品对HbsAg和HbeAg抑制作用，本中药组合物在100μg/ml时具有显著的抗病毒作用，对HbsAg抑制率为31.2％、对HbeAg抑制率为34.9％，结果见表1。

表1芝参正肝胶囊和阿西洛韦抗乙肝病毒实验研究结果

急性药效学研究表明，小鼠每日口服本中药组合物120mg/kg、240mg/kg、480mg/kg，连续给药四天，对四氯化碳所致急性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)的升高有一定的降低作用，结果见表2。

表2芝参正肝胶囊对四氯化碳急性肝损伤的影响

慢性药效学研究表明，本中药组合物可预防四氯化碳所致慢性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)的升高，可显著减轻肝纤维化程度，减缓小鼠体重的减少。对肝组织形态学影响研究结果表明，本中药组合物可显著减轻肝纤维化程度。H.E染色观察，正常组大鼠肝细胞束排列整齐，未见肝细胞变性、坏死，无纤维结缔组织增生。模型组大鼠可见大片肝细胞脂肪变性、混浊肿胀，纤维结缔组织向肝小叶内广泛伸展，部分已形成完全或不完全间隔。本组合物160mg/kg、320mg/kg和联苯双酯组肝细胞脂肪变性、混浊肿胀较轻，部分肝组织脂变仅局限于肝小叶外周部分肝细胞，纤维结缔组织增生明显轻于模型组。本组合物80mg/kg和秋水仙碱组肝细胞变性程度轻于模型组，但纤维组织增生仍较明显。

丽春红胶原染色观察，按参考文献制定胶原纤维增生程度半定量标准如下：

0级：正常肝脏。

1级：胶原纤维增生，中央静脉和门脉区有少量星状胶原纤维束扩散，但无间隔形成。

2级：胶原纤维增生，中央静脉和门脉区结缔组织变厚，由此向四周伸出纤维束，形成不完全间隔。

3级：胶原纤维大量增生，有个别菲薄的完全间隔形成；或较厚的不完全间隔即将形成假小叶。

4级：完全间隔较厚，假小叶大量形成。

结果，正常组：胶原染色仅见于汇管区及中央静脉壁。模型组：胶原由汇管区向肝小叶内广泛伸展，较多的假小叶形成。本组合物80mg/kg组和秋水仙碱组胶原增生程度略轻于模型组，但半定量分级无统计学差异(P＞0.05)，160mg/kg、320mg/kg组和联苯双酯组绝大多数动物仅见汇管区胶原染色增宽或略向小叶内伸展，极个别有不完全间隔形成，与模型组相比均有统计学差异，详见表3、附图1。

表3本组合物对CCl4慢性肝损伤大鼠肝组织胶原增生的影响

注：与模型组相比^*P＜0.05，^**P＜0.01

对CCl4慢性肝损伤大鼠体重增长影响研究结果表明，在各组动物的体重无明显差异情况下给于CCl₄，大鼠体重增长较正常组动物明显减缓，至实验结束时，模型组大鼠的体重明显轻于正常组，给予不同剂量的组合物后大鼠体重增长速度改善，160mg/kg、320mg/kg组大鼠体重增长速度则明显加快，实验结束时的体重与模型组比较有显著差异。秋水仙碱及联苯双酯对照组动物的体重与模型组比较有非常显著差异，结果见表4。

表4组合物对CCl4慢性肝损伤大鼠体重增长的影响

注：与模型组比较，^*P＜0.05；^**P＜0.01

对CCl4慢性肝损伤大鼠血清肝酶活性的影响研究结果表明，模型组大鼠与正常组大鼠比较，血清AST及ALT活性明显增加，给予不同剂量的组合物后血清AST及ALT活性虽有减小的趋势，但作用并不显著。而秋水仙碱组动物的AST活性则明显下降。联苯双酯组动物血清的AST，ALT活性均明显下降，结果见表5。

表5组合物对CCl4慢性肝损伤大鼠血清AST、ALT的影响

注：与模型组比较，^*P＜0.05；^**P＜0.01

对CCl4慢性肝损伤大鼠血清白蛋白、球胆白的影响研究结果表明，模型组大鼠与正常组大鼠比较，血清TP，ALB，GLB均明显下降，但A/G比值下降不明显，组合物各剂量组及秋水仙碱、联苯双酯对照组虽有升高ALB及A/G比值的趋势，但作用并不显著，结果见表6。

表6组合物对CCl4慢性肝损伤大鼠血清TP、ALB、A/G的影响

注：与模型组比较，^*P＜0.05

对CCl4慢性肝损伤大鼠肝组织羟脯氨酸含量的研究结果表明，模型组动物肝组织羟脯氨酸含量较正常组明显增加；秋水仙碱可降低模型动物肝组织羟脯氨酸含量；联苯双酯组肝组织羟脯氨酸含量降低，但作用尚不显著；组合物各剂量组对肝组织羟脯氨酸含量变化影响不显著，结果见表7。

表7组合物对慢性肝损伤大鼠肝组织羟脯氨酸含量的影响

与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01

Claims (11)

1、一种具有抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用的中药组合物，其特征在于该中药组合物是以中药云芝、三七、丹参、苦参和芍药为原料药提取获得的有效成份提取物，其中各原料药的重量比为：云芝∶三七∶丹参∶苦参∶芍药＝1∶0.2-5∶0.5-10∶0.5-10∶0.2-5。

2、根据权利要求1所述的具有抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用的中药组合物，其特征在于其中所述的各原料药的重量比为：云芝∶三七∶丹参∶苦参∶芍药＝1∶1∶1.5∶1.5∶1。

3、根据权利要求1所述的具有抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用的中药组合物，其特征在于所述的组合物中多糖、肽、丹参酚酸、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱和芍药苷的重量百分含量之和≥50％。

4、权利要求1所述的具有抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用的中药组合物的制备方法，其特征在于：

按配比取云芝菌丝体或子实体，热水提取，浓缩，乙醇沉淀，固液分离，取沉淀干燥，粉碎，即得到云芝糖肽提取物；按配比取三七、丹参、苦参、芍药药材，粉碎，用甲醇、乙醇和水中的一种或一种以上溶剂进行浸泡、回流、渗漉或其他动态提取方法提取，浓缩提取液，浓缩液加水稀释，过滤或离心除去不溶物，上大孔吸附树脂吸附，纯水洗脱杂质，低分子有机醇水溶液洗脱有效部位，浓缩、干燥，即得含丹参总酚酸、苦参总生物碱、苦参总黄酮、三七总皂苷和芍药总苷的提取物；将两种提取物合并即得。

5、根据权利要求4所述的具有抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用的中药组合物的制备方法，其特征在于其中所述的云芝糖肽提取物的制备方法为：取云芝菌丝体或子实体粉，6-12倍量热水煎煮2-4次，每次1-4小时，水煎液合并，减压浓缩至相当于药材1-3g/ml，加2-6倍量95％乙醇沉淀，静置过夜，过滤，取沉淀干燥、粉碎，得云芝糖肽；

所述的含丹参总酚酸、苦参总生物碱、苦参总黄酮、三七总皂苷和芍药总苷的提取物的制备方法为：按配比取三七、丹参、苦参和芍药药材，粉碎，用8-15倍量50-80％乙醇渗漉提取，渗漉液浓缩至无醇味，加水稀释，过滤，滤液上大孔吸附树脂吸附，树脂用量为药材量的0.5-3倍，2-4倍树脂体积的纯水洗脱杂质，3-6倍树脂体积的30-95％乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥粉碎即得。

6、权利要求1所述的具有抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用的中药组合物的制备方法，其特征在于：

(1)云芝糖肽提取：按配比取云芝菌丝体或子实体，热水提取，浓缩，乙醇沉淀，固液分离，取沉淀干燥，粉碎，即得到云芝糖肽提取物；

(2)丹参总酚酸提取：按配比取丹参药材粉碎，热水提取，明胶沉淀鞣酸，过滤，浓缩，醇沉，浓缩，调节pH1-3，乙酸乙酯萃取或大孔吸附树脂提取，萃取液减压浓缩，干燥粉碎，得丹参总酚酸；

(3)苦参总生物碱和总黄酮提取：按配比取苦参药材粉碎，酸水渗漉，渗漉液过732型阳离子交换树脂，纯水洗去杂质，树脂氨化，有机溶剂洗脱，洗脱液减压浓缩，干燥粉碎，得苦参总生物碱；过阳离子交换树脂后的渗漉液，再由大孔吸附树脂吸附，纯水洗除杂质，醇洗，洗脱液浓缩，干燥粉碎即得苦参总黄酮；

(4)三七总皂苷和芍药总苷的提取：按配比取三七粉、芍药粉，分别用乙醇渗漉或回流提取，提取液浓缩去醇后加水稀释，过滤，滤液上大孔吸附树脂吸附，纯水洗除杂质，乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥粉碎即得三七总皂苷和芍药总苷；

(5)合并步骤(1)至(4)的提取物，即得。

7、根据权利要求6所述的具有抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用的中药组合物的制备方法，其特征在于：

(1)云芝糖肽的制备方法为：取云芝菌丝体或子实体粉，6-12倍量热水煎煮2-4次，每次1-4小时，水煎液合并，减压浓缩至相当于药材1-3g/ml，加2-6倍量95％乙醇沉淀，静置过夜，过滤，取沉淀干燥、粉碎，得云芝糖肽；

(2)丹参总酚酸的制备方法为：丹参粉加6-15倍量水，60-100℃提取2-4次，每次0.5-2小时，水煎液合并，加5％明胶沉淀鞣酸，过滤，滤液减压浓缩至相当于药材0.5-2g/mL，加2-5倍量95％乙醇沉淀，上清液浓缩至无醇味，用盐酸调节pH1-3，乙酸乙酯萃取2-5次或大孔树脂吸附提取，树脂用量为药材量的0.5-3倍，提取液减压浓缩，干燥粉碎，得丹参总酚酸；

(3)苦参总生物碱和总黄酮的制备方法为：苦参粉用8-15倍量0.05-1％酸水渗漉提取，渗漉液过732型阳离子交换树脂，纯水洗去杂质，树脂氨化，乙醇、氯仿等溶剂洗脱，洗脱液减压浓缩，干燥粉碎，得苦参总生物碱；过阳离子交换树脂后的渗漉液，再由大孔吸附树脂吸附，树脂用量为药材量的0.5-3倍，用2-4倍体积纯水洗除杂质，3-6倍30-95％乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥粉碎即得苦参总黄酮；

(4)三七总皂苷和芍药总苷的制备方法为：取三七粉、芍药粉，分别用8-15倍50-95％乙醇渗漉或回流提取，提取液浓缩至无醇味，加水稀释，过滤，滤液上已处理好的大孔吸附树脂吸附，树脂用量为药材量的0.5-3倍，2-4倍体积纯水洗除杂质，3-6倍30-95％乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥粉碎即得三七总皂苷和芍药总苷。

8、根据权利要求4-7中任一项所述的具有抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用的中药组合物的制备方法，其特征在于其中所述的大孔吸附树脂选自D101、HPD100、HPD400、AB-8或ALS-5大孔树脂。

9、权利要求1所述中药组合物在制备抗乙肝病毒和防治肝纤维化药物中的应用。

10、权利要求1所述中药组合物制成的药物制剂。

11、根据权利要求10所述的药物制剂，其特征在于其中所述的制剂为片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、粉剂或注射剂。

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